CN105218532B - 苯并三氮唑类化合物、制备方法和其医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种由结构式(I)表示的一种苯并三氮唑类小分子化合物或其药学上可接受的酸加成盐，以及含有此类化合物的药物组合物；本发明还公开了所述苯并三氮唑类小分子化合物或其药学上可接受的酸加成盐在制备治疗由于RAS基因突变引起的各种恶性肿瘤生长、转移和复发等疾病药物中的医药用途。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及涉及一类小分子苯并三氮唑类化合物、药学上可接受的盐及其医药用途。
技术背景
癌症长期以来威胁着人类的健康，与糖尿病、心脑血管疾病并称为人类健康的三大杀手。对于癌症，目前的主要治疗手段分为外科手术治疗、放疗和化疗。虽然，对于早期的癌症患者，可以通过手术的方法切除肿瘤，但是到中晚期之后，癌细胞就会扩散，相应的手术切除方法也不会达到很好的治疗效果。
随着人类基因组计划及测序技术的飞速发展，通过对人类肿瘤样本进行全基因组测序分析，可以准确地获取肿瘤基因组复杂的遗传信息，对肿瘤的发生发展及其遗传复杂性获得更多的认识，并为肿瘤的分子分型和患者的个性化治疗提供有利信息。肿瘤是一种基因病这一观点现已被广泛接受，肿瘤的发生是由多个相关基因(高频突变和低频突变的基因)共同突变引起的，包括癌基因的激活表达和抑癌基因的失活，这也是肿瘤细胞无限制生长的分子基础。虽然肿瘤细胞中存在大量不同类型的基因突变，但只有少数基因(15-20个)的突变才能开启肿瘤发生的进程。在人类众多的癌基因中，RAS是肿瘤中突变概率最高的基因家族之一。据统计RAS突变肿瘤约占人类所有恶性肿瘤总数的三分之一，且其频发于肺癌，结肠癌和胰腺癌中，这三类肿瘤和乳腺癌一起构成人类四大致死性癌症。可见RAS突变肿瘤危害极大。
RAS蛋白是原癌基因RAS的编码产物，为RAS超家族蛋白重要成员之一，是一类分子量为20～25kDa的单体GTP结合蛋白。RAS蛋白在正常生理状态下通常处于非活化状态，RAS蛋白的活化受到严格地调控，活化的RAS蛋白在发挥其功能后迅速恢复到非活化状态，有序地调控下游信号通路，从而维持细胞正常的生长、分化等。但RAS作为原癌基因，一旦被激活就成了具有致癌活性的癌基因。RAS基因最常见的激活方式是基因的错义突变，通常发生在12，13和61位密码子上。基因突变导致RAS蛋白空间结构的改变，使RAS处于与GTP结合的持续活化状态，不断激活下游信号通路，从而导致细胞的增殖失控，产生癌变。RAS基因家族的三个成员HRAS、NRAS和KRAS，它们在不同的肿瘤类型中突变概率不尽相同，存在着组织特异性，HRAS常见突变于皮肤(黑色素瘤)和头颈癌中，NRAS常见突变于造血系统恶性肿瘤中，而KRAS则常见突变于结直肠癌、肺癌(尤其是非小细胞肺癌)及胰腺癌中。KRAS的突变占所有RAS基因突变的86％，约占人类所有恶性肿瘤的21.6％。在结肠癌中，KRAS突变肿瘤占到45％，肺癌中有35％，而胰腺癌则高达90％。有研究报道，KRAS突变能造成某些特定的细胞表现出干细胞特性，而HRAS和NRAS却没有这种功能，这一特性也被认为是KRAS较HRAS和NRAS在人类肿瘤中有更高突变概率的可能原因，KRAS基因的突变更利于癌症的发生。
RAS基因作为重要的癌基因自发现以来已被研究了三十多年，其蛋白结构、功能、活化机制及上下游信号通路也日益明确；RAS基因，尤其是KRAS基因，在人类肿瘤中的高突变率及其在肿瘤发生发展中重要的推动作用使其成为肿瘤分子靶向治疗的一个理想的靶点，也是肿瘤细胞中主要的依赖性癌基因。然而迄今为止临床上尚无有效治疗RAS突变肿瘤的小分子抑制剂。因此针对RAS突变进行药物开发和肿瘤治疗具有重要意义。
本发明以等基因细胞系T29和KT1P(KRASV12)为筛选模型，利用协同致死模型经过对大量化合物的生物活性筛选后创新性地发现一类含有苯并三氮唑类结构骨架的小分子有机化合物及其药学上可接受的盐具有特异性抑制RAS突变肿瘤细胞存活的能力，并在此基础上设计并合成了一类特异性靶向RAS突变的抗癌小分子活性化合物，经过后续深入研究发现，本发明化合物具有很好的抑制RAS突变恶性肿瘤生长和转移活性，并且对RAS突变的肿瘤细胞也具有优异的选择性。这类化学结构新颖的活性化合物可以用于治疗由于RAS突变引起的肿瘤生长和转移，并有希望成为肿瘤治疗的一类候选药物。该类化合物或含有该类化合物的药物组合物在制备治疗靶向于RAS基因突变的肿瘤药物中的用途，以及用于制备预防和治疗各种由于RAS基因突变引发的肿瘤发生和发展，包括肿瘤生长、浸润和转移药物中的用途。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一类结构新颖的苯并三氮唑类化合物可作为预防和治疗由RAS基因突变引起的抗肿瘤先导化合物，包括其药学上可接受的盐等。
本发明合成结构如式(I)所示的一类苯并三氮唑或苯并异咪唑化合物或药学上可接受的盐：
其中：
m和p指链状亚甲基的个数，分别为0、1、2、3或者4。
n指羰基的个数，分别为0或者1个。
R1指苯环上的取代基，取自下列基团：氢、甲基、甲氧基、卤素、苄氧基、氰基、酰胺基。
R2取自下列基团：氰基、ONO2、卤素、羟基、羧基、甲氧基、环丙烷基、呋喃基、乙烯基、乙烯基羧基、三氟甲基、5-溴呋喃基、苯基、吡啶基、甲苯基、甲磺酰苯基、C1-C3烷氧基苯基、环戊氧基苯基、卤代苯基、硝基苯基、苄氧基苯基、羟基苯基。
本发明所示结构式中，当R2为取代苯基，m＝0时，其由下述结构式(II)表示：
其中：
p指链状亚甲基的个数，分别为0、1、2、3或者4。
n指羰基的个数，分别为0或者1个。
R1指苯环上的取代基，取自下列基团：氢、甲基、甲氧基、卤素、苄氧基、氰基、酰胺基。
R3取自下列基团：氢、羟基、甲基、卤素、C1-C3烷氧基、环戊氧基、三氟甲基、苄氧基、硝基、甲磺酰基。
本发明提供苯并三氮唑类化合物或其类似物或药学上可接受的盐，包括：
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-氯苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-溴苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-甲基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(3，5-二甲基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-苄氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-乙酰氨基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-氰基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-氟苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-苯基-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-苄基-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[1-(3-苯基丙基)-1H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
1-苯基羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
1-(2-吡啶基)-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
1-(2，3，4-三甲氧基苯基)-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
1-(2，4-二甲氧基苯基)-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
2-(4-碘苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-溴苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-氯苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-氟-苯基)-N-[2-(4-甲氧基-苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(2-溴苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-甲基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-甲基磺酰苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-硝基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-甲氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
4-溴-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺，
3-((2-(4-甲氧基苯基-2H-苯并三唑-5-基)氨基)-3-氧代乙酸，
2-溴-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-溴-N-[2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-氰基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-甲氧基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(2-甲氧基乙基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-羟基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
1-环丙基羧酸-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
2-(4-苄氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-羟基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-异丙氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-丙氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-环戊氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
5-(N-2-苯基乙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-3-苯基丙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-4-甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2-甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2-(4-甲氧基苯基乙基)氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2,4-二甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2,4,6-三甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-4-三氟甲基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-3-溴苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)乙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-(2-呋喃甲基)氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
1-氯-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
3-氯-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺，
3-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基氨基甲酰基]-丙烯酸，
三氟甲基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，或
硝酸2-((2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基)氨基-2-氧代乙基酯。
本发明还提出了由所述苯并三氮唑类小分子有机化合物与酸形成的酸加成盐；优选地，所述酸为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、马来酸、琥珀酸之任意的一种。
本发明还提出了一种制备所述苯并三氮唑类小分子有机化合物的方法，包括以下步骤：
方法一：
(1)由4-硝基邻苯二胺在亚硝酸钠与乙酸存在下产生固体的5-硝基苯并三氮唑；
(2)由步骤(1)得到的5-硝基苯并三氮唑与各种卤代烷烃在碱性条件下发生取代反应，经分离后得到5-硝基-2-取代基-2H-苯并三唑；
(3)由步骤(2)得到的5-硝基-2-取代基-2H-苯并三唑在铁粉(或者锌粉、镁粉)及盐酸(或者乙酸)的存在下生成取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑关键中间体；
(4)由步骤(3)得到的取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑关键中间体与各种酸、酰卤或者酸酐偶联形成所述最终产物苯并三氮唑类化合物。
方法二：
(1)由各种取代芳香胺与亚硝酸钠在酸性条件下形成重氮盐；
(2)由步骤(1)得到的生成重氮盐与间苯二胺形成偶氮中间体；
(3)由步骤(2)得到的偶氮中间体在硫酸铜、氨水以及吡啶的存在下生成取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑关键中间体；
(4)由步骤(3)得到的取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑关键中间体与各种酸、酰卤或者酸酐偶联形成所述最终产物苯并三氮唑类化合物；
所述酸为盐酸、乙酸。
本发明还提出了一种制备所述的苯并三唑类化合物的药学上可接受的盐的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将苯并三氮唑类化合物类化合物溶于相应的有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环、乙二醇二甲醚)中；
(2)将氯化氢、溴化氢、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、马来酸、琥珀酸溶于相应的有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环、乙二醇二甲醚)中；
(3)将上述两种溶液按比例充分混合，放置10分钟到8小时后，减压除去溶剂，经干燥后得相应的苯并三氮唑类化合物药学上可接受的盐。
本发明的另一目的在于提供此类苯并三氮唑类化合物及相关类似物在制备预防和治疗由RAS基因突变所引起的相关疾病药物的应用。
本发明的目的还在于寻找上述化合物或含有上述化合物的药物组合物用于制备预防和治疗由RAS基因突变所引起的各种恶性肿瘤以及相关的肿瘤的转移和复发的药物，所述恶性肿瘤包括肺癌、肠癌、胰腺癌、乳腺癌、子宫癌、多发性骨髓癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌、神经胶质瘤等。
本发明还提供一种苯并三氮唑类化合物药学上可接受的盐，由所述苯并三氮唑类化合物与酸形成的酸加成盐；其中，所述酸是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、马来酸或琥珀酸。
本发明还提供一种苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐，是所述苯并三氮唑类化合物与放射性基团、荧光基团或者生物素结合形成标记物。
本发明还提供一种药物组合物，其中含有本发明所述的苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。本发明所述药物组合物被配制成可注射流体、气雾剂、乳膏、凝胶剂、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、透皮贴剂或赋形剂。
本发明还提供苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗靶向RAS基因突变的抗肿瘤生长领域药物上的应用。
本发明还提供所述的苯并三氮唑类化合物及相关类似物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗由RAS突变引起肿瘤药物中的应用。本发明提出了所述的苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备抑制肿瘤细胞增殖、生长、迁移和浸润的药物中的应用；其中，所述肿瘤细胞包括肺癌细胞、乳腺癌细胞、结肠癌细胞、胰腺癌细胞、子宫癌细胞、多发性骨髓癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、膀胱癌细胞、前列腺癌细胞、宫颈癌细胞、神经胶质瘤细胞。
本发明还提出了所述的苯并三氮唑类化合物在制备预防和治疗恶性肿瘤的药物中的应用；其中，所述恶性肿瘤包括肺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、子宫癌、多发性骨髓癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌、神经胶质瘤。
本发明还提出了所述的苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗恶性肿瘤转移与复发的药物中的应用；其中，所述恶性肿瘤包括肺癌细胞、乳腺癌细胞、结肠癌细胞、胰腺癌细胞、子宫癌细胞、多发性骨髓癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、膀胱癌细胞、前列腺癌细胞、宫颈癌细胞、神经胶质瘤细胞。
本发明中，苯并三氮唑类化合物或药学上可接受的盐可以单独使用或与其他药物联合使用。
本发明的有益效果在于：相对于RAS野生型的T29细胞系的抑制效果，本发明化合物对RAS突变的T29KT1P细胞都具有非常优异的活性和选择性，本发明化合物对RAS突变的肿瘤细胞都具有非常明显的增殖抑制活性，并且与K-RAS野生型肿瘤细胞的抑制活性相比呈现出明显的选择性，差异具有显著性。另外，本发明化合物不仅能显著抑制K-RAS突变的肿瘤细胞克隆形成的大小，还可抑制K-RAS突变的肿瘤细胞克隆形成的数目。更为重要的是，本发明化合物能显著抑制了RAS突变的肿瘤的生长，并呈剂量依赖性的关系。本发明化合物在K-RAS突变的肿瘤上都显示出显著的治疗效果。
附图说明
图1所示为本发明化合物对RAS突变细胞(T29&T29KT1P)增殖活性的选择性抑制作用。
图2所示为本发明化合物对RAS突变肿瘤细胞增殖活性的选择性抑制作用。
图3所示为本发明化合物抑制RAS突变肿瘤细胞的克隆形成。
图4所示为本发明化合物抑制RAS突变细胞异种移植肿瘤的生长。
图5所示为本发明化合物对RAS基因修饰动物模型肿瘤的抑制作用。
具体实施方式：
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。
1H-NMR用Varian MercuryAMX300或者Bruker 500型仪测定；MS用VG ZAB-HS或VG-7070型仪测定，除注明外均为EI源(70ev)；所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得；除说明外，所有反应均是在氩气保护下进行并用波层色谱分析(TLC)跟踪，后处理时均经饱和食盐水洗和无水硫酸镁干燥过程；产品的纯化除说明外均使用硅胶(200-300目)的柱色谱法；所使用的硅胶，包括200-300目和GF254为青岛海洋化工厂或烟台缘博硅胶公司生产。
实施例一：各化合物的制备
实施例1-1、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS001)
将对甲氧基苯胺(2.48g，20.14mmol)溶解于48ml的盐酸水溶液(4M)中，在冰浴条件下加入亚硝酸钠(1.67g，24.17mmol)，反应半小时后，将氨基磺酸铵(3.16g)在0℃下缓慢加入体系中并继续搅拌半个小时。用乙酸钠将溶液的pH调至5-6，在冰浴条件下将邻苯二胺盐酸盐(3.33g，18.42mmol)加入到反应体系中，搅拌过夜。TLC进行检测反应完全后，用氢氧化钠溶液调节至pH大于14，用乙酸乙酯和水进行萃取，合并有机相，减压蒸馏，得到干燥的粗品偶氮化合物。偶氮化合物用40ml的吡啶溶解，将10g无水硫酸铜加入到60ml浓氨水/水(v/v＝1/1)混合溶液中，混合物在油浴下进行回流，直至反应完全。
将冷却的反应液加入过量的水，用乙酸乙酯和水进行萃取，合并有机相，减压蒸馏，得到的粗品苯并三氮唑胺经柱色谱进行分离，得到纯的2-(4-甲氧基苯基)-5-氨基-2H-苯并三氮唑2.52g，产率52％。
将2-(4-甲氧基苯基)-5-氨基-2H-苯并三氮唑(87mg,0.36mmol)，5-溴呋喃甲酸(80mg,0.419mmol)，HOBt(70mg,0.518mmol)，EDC.HCl(104mg,0.518mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)后，在50-60℃油浴下进行搅拌，用TLC进行检测，直至反应完全。反应液加入过量的水，用乙酸乙酯和水进行萃取，合并有机相，减压蒸馏，得到粗产物，用柱色谱进行分离，得到纯品5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺100mg，产率为67％。1H NMR(DMSO,300MHz):.10.48(s,1H),8.48(d,J＝1.2Hz,1H),8.22(d,J＝9.0Hz,2H),7.98(t,J＝4.5Hz,1H),7.75(dd,J＝1.82.1Hz,1H),7.44(d,J＝3.6Hz,1H),7.18(d,J＝9.0Hz,2H),6.87(d,J＝3.3Hz,1H),3.86(s,3H).
表1 化合物RS001到RS057的制备方法
以下实施例1-1到1-57提供了本发明化合物RS001-RS057的制备方法及产物检测结果。
实施例1-2、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-氯苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS002)的制备
将对甲氧基苯胺置换成4-氯苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS002。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.51(s,1H),8.49(s,1H),8.27(d,J＝8.7Hz,2H),8.98(dd,J＝0.3,0.3Hz,1H),7.78(t,J＝0.9Hz,1H),7.71(s,2H),7.44(d,J＝3.3Hz,1H),6.87(d,J＝3.3Hz,1H).
实施例1-3、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-溴苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS003)的制备
将对甲氧基苯胺置换成4-溴苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS003。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.46(d,1Η),8.47(d,1Η),8.19(d,J＝8.7Hz,2H),7.97(d,J＝9.0Hz,1H),7.81-7.74(m,3H),7.43(d,J＝3.3Hz,1H),6.85(d,J＝3.3Hz,1H).
实施例1-4、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-甲基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS004)的制备
将对甲氧基苯胺置换成对甲基苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS004。1HNMR(DMSO,300MHz):δ10.49(s,1H),8.48(d,J＝1.8Hz,1H),7.16(d,J＝6.6Hz,2H),7.99(d,J＝8.7Hz,1H),7.44-7.41(m,2H),7.23(d,J＝3.6Hz,1H),6.85(d,J＝3.6Hz,1H),6.78(d,J＝3.6Hz,1H),2.39(s,3H).
实施例1-5、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(3，5-二甲基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS005)的制备
将对甲氧基苯胺置换成3,5-二甲基苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS005。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.48(s,1H),8.16(s,1H),7.96(s,2H),7.91(d,J＝9.0Hz,1H),7.48(dd,J＝1.5,1.8Hz,1H),7.26-7.24(m,1H),7.09(s,1H),6.53(d,J＝3.3Hz,1H),2.44(s,6H).
实施例1-6、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-苄氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS006)的制备
将对甲氧基苯胺置换成4-苄氧基苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS006。1HNMR(DMSO,300MHz):δ10.46(s,1H),8.46(d,J＝1.2Hz,1H),8.19(d,J＝9.0Hz,2H),7.97(d,J＝9.0Hz,1H),7.73(dd,J＝1.8,1.8Hz,1H),7.49-7.22(m,8H),6.85(d,J＝3.6Hz,1H),5.19(s,2H).
实施例1-7、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-乙酰氨基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS007)的制备
将对甲氧基苯胺置换成4-乙酰氨基苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS007。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.51(s,1H),10.30(s,1H),8.48(s,1H),8.21(d,J＝9.0Hz,2H),8.00-7.95(m,2H),7.83(dd,J＝0.3,0.3Hz,2H),7.77-7.76(m,1H),7.44(d,J＝3.3Hz,1H),6.86(t,J＝1.8Hz,1H),4.20-4.19(m,3H).
实施例1-8、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-氰基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS008)的制备
将对甲氧基苯胺置换成4-氰基苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS008。1HNMR(DMSO,300MHz):δ10.55(s,1H),8.50(s,1H),8.44(dd,J＝0.6,0.3Hz,2H),8.03-7.96(m,2H),7.81-7.80(m,1H),7.47-7.46(m,1H),6.88(d,J＝1.8Hz,1H).
实施例1-9、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-氟苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS009)的制备
将对甲氧基苯胺置换成4-氟苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS009。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.51(s,1H),8.51(s,1H),8.33(s,2H),8.02(d,J＝9.3Hz,2H),7.79-7.76(d,J＝9.3Hz,1H),7.53-7.45(m,3H),6.88(s,1H).
实施例1-10、5-溴呋喃-2-羧酸[2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS010)的制备
将对甲氧基苯胺置换成3,4,5-三甲氧基苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS010。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.53(s,1H),8.51(s,1H),8.01(d,J＝9.3Hz,1H),7.77(s,1H),7.59(s,2H),7.45(d,J＝3.6Hz,1H),6.89(d,J＝3.6Hz,1H),3.94(s,6H),3.75(s,3H).
实施例1-11、5-溴呋喃-2-羧酸[2-苯基-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS011)的制备
将对甲氧基苯胺置换成苯胺，按制备化合物RS001的方法制备RS011。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.51(s,1H),8.49(s,1H),8.98(dd,J＝0.3,0.3Hz,1H),7.78(t,J＝0.9Hz,1H),7.70-7.35(m,6H),6.87(d,J＝3.3Hz,1H).
实施例1-12、5-溴呋喃-2-羧酸[2-苄基-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS012)的制备
将对甲氧基苯胺置换成苄胺，按制备化合物RS001的方法制备RS012。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.41(s,1H),8.37(d,J＝1.8Hz,1H),7.89(d,J＝9.0Hz,1H),7.67(dd,J＝1.81.5Hz,1H),7.40-7.30(m,6H),6.84(d,J＝3.6Hz,1H),5.91(s,2H).
实施例1-13、5-溴呋喃-2-羧酸[1-(3-苯基丙基)-1H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS013)的制备
将对甲氧基苯胺置换成苯丙胺，按制备化合物RS001的方法制备RS013。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.43(s,1H),8.38(t,J＝0.9Hz,1H),7.89(dd,J＝0.6,0.6Hz,1H),7.67(dd,J＝2.1,1.8Hz,1H),7.40(d,J＝3.6Hz,1H),7.30-7.14(m,5H),6.84(d,J＝3.6Hz,1H),4.68(t,J＝6.9Hz,2H),2.58(t,J＝7.5Hz,2H),2.34-2.29(m,2H).
实施例1-14、1-苯基羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS014)的制备
将2-(4-甲氧基苯基)-5-氨基-2H-苯并三氮唑(0.24g,1.00mmol)，苯甲酸(0.12g,1.00mmol)，HOBt(0.15g,1.11mmol)和EDC.HCl(0.25g,1.30mmol)溶解于DMF中，在50-60℃油浴下进行搅拌，用TLC进行检测，直至反应完全。然后加入过量的水，用乙酸乙酯和水进行萃取，合并有机相，减压蒸馏，得到粗品，用柱色谱进行分离(流动相:二氯甲烷/甲醇)，得产物1-苯基羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS014，189mg，产率55％)。1HNMR(DMSO,300MHz):δ10.41(s,1H),8.20(d,J＝2.4Hz,1H),7.99(dd,J＝1.5,1.5Hz,2H),7.98-7.91(m,3H),7.80-7.70(m,1H),7.64-7.40(m,3H),7.19-7.16(m,2H),3.98(s,3H).
实施例1-15、1-(2-吡啶基)-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS015)的制备
将苯甲酸置换成2-吡啶甲酸，按制备化合物RS014的方法制备RS015。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.96(s,1H),8.78-8.76(m,1H),8.67(s,1H),8.22-8.19(m,4H),8.12-7.93(m,3H),7.18(dd,J＝2.4,2.4Hz,2H),3.85(s,3H).
实施例1-16、1-(2，3，4-三甲氧基苯基)-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS016)的制备
将苯甲酸置换成2,3,4-三甲氧基苯甲酸，按制备化合物RS014的方法制备RS016。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.40(s,1H),8.5(s,1H),8.20(d,J＝8.7Hz,2H),7.93(d,J＝9.3Hz,1H),7.63(s,1H),7.33(d,J＝8.7Hz,1H),7.17(d,J＝9.0Hz,2H),6.94(d,J＝9.0Hz,1H),3.97(s,3H),3.85(s,3H),3.84(s,3H),3.79(s,3H).
实施例1-17、1-(2，4-二甲氧基苯基)-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS017)的制备
将苯甲酸置换成2,4-二甲氧基苯甲酸，按制备化合物RS014的方法制备RS017。1HNMR(DMSO,300MHz):δ10.56(s,1H),8.59(s,1H),8.23(s,2H),7.98(d,J＝9.0Hz,1H),7.65(d,J＝9.3Hz,1H),7.22-7.17(m,5H),3.86(s,9H).
实施例1-18、2-(4-碘苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS018)的制备
将苯甲酸置换成4-碘苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS018。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.47(s,1H),8.43(d,J＝1.2Hz,1H),8.19(d,J＝9.3Hz,2H),7.96(d,J＝9.3Hz,1H),7.50(dd,J＝1.8,2.1Hz,1H),7.42-7.38(m,2H),7.20-7.14(m,4H),3.85(s,3H),3.73(s,2H).
实施例1-19、2-(4-溴苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS019)的制备
将苯甲酸置换成4-溴苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS019。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.47(s,1H),8.42(d,J＝1.2Hz,1H),8.19(d,J＝9.3Hz,2H),7.95(d,J＝9.3Hz,1H),7.53(dd,J＝1.8,2.1Hz,1H),7.40-7.36(m,2H),7.20-7.14(m,4H),3.87(s,3H),3.70(s,2H).
实施例1-20、2-(4-氯苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS020)的制备
将苯甲酸置换成4-氯苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS020。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.47(s,1H),8.43(d,J＝1.2Hz,1H),8.19(d,J＝9.3Hz,2H),7.96(d,J＝9.3Hz,1H),7.54(dd,J＝1.8,2.1Hz,1H),7.41-7.36(m,2H),7.20-7.14(m,4H),3.86(s,3H),3.72(s,2H).
实施例1-21、2-(4-氟苯基)-N-[2-(4-甲氧基-苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS021)的制备
将苯甲酸置换成4-氟苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS021。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.47(s,1H),8.42(d,J＝0.9Hz,1H),8.19(d,J＝9.0Hz,2H),7.50(d,J＝9.3Hz,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(dd,J＝1.81.8,1H),7.20-7.14(m,4H),3.84(s,3H),3.69(s,2H).
实施例1-22、2-(2-溴苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS022)的制备
将苯甲酸置换成2-溴苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS022。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.56(s,1H),8.50-7.29(m,11H),3.95-3.85(m,5H).
实施例1-23、2-(4-甲基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS023)的制备
将苯甲酸置换成4-甲基苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS023。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.43(s,1H),8.42(s,1H),8.17(d,J＝9Hz,2H),7.93(d,J＝9.3Hz,1H),7.48(dd,J＝1.5,1.5Hz,1H),7.24(d,J＝8.1Hz,2H),7.16-7.11(m,J＝15.3Hz,4H),3.83(s,3H),3.64(s,2H),2.26(s,3H).
实施例1-24、2-(4-甲基磺酰苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS024)的制备
将苯甲酸置换成4-甲基磺酰苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS024。1HNMR(DMSO,300MHz):δ10.56(s,1H),8.42(s,1H),8.17(d,J＝9Hz,2H),7.97-7.94(m,J＝9.3Hz,1H),7.90(d,J＝5.4Hz,2H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(dd,J＝1.51.5Hz,1H),7.16(d,J＝9.0Hz,2H),5.74(s,1H),3.87(s,2H),3.83(s,3H),3.19(s,3H).
实施例1-25、2-(4-硝基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS025)的制备
将苯甲酸置换成4-硝基苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS025。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.58(s,1H),8.41(s,1H),8.19(t,J＝18.6Hz,4H),7.96(d,J＝9.3Hz,1H),7.64(d,J＝8.7Hz,2H),7.50-7.46(m,1H),7.15(d,J＝9.3Hz,2H),3.91(s,2H),3.83(s,3H).
实施例1-26、2-(4-甲氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS026)的制备
将苯甲酸置换成4-甲氧基苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS026。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.44(s,1H),8.43(s,1H),8.16(d,J＝9.0Hz,2H),7.93(d,J＝9.3Hz,1H),7.47(dd,J＝1.2,1.2Hz,1H),7.26(d,J＝8.4Hz,2H),7.14(d,J＝9.0Hz,2H),6.88(d,J＝8.7Hz,2H),3.82(s,3H),3.71(s,3H),3.62(s,2H).
实施例1-27、2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS027)的制备
将苯甲酸置换成3,4,5-三甲氧基苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS027。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.42(s,1H),9.27(s,1H),8.43(s,1H),8.18(d,J＝9.0Hz,2H),7.95-7.92(m,2H),7.48(dd,J＝1.5,1.5Hz,1H),7.15(d,J＝9.3Hz,2H),6.67(s,1Hz),3.83(s,3H),3.76(s,6H),3.62(s,3Hz).
实施例1-28、4-溴-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺(RS028)的制备
将苯甲酸置换成4-溴丁酸，按制备化合物RS014的方法制备RS028。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.26(s,1H),8.43(s,1H),8.18(d,J＝9.3Hz,1H),7.93(d,J＝9.0Hz,2H),7.46(dd,J＝1.5,1.5Hz,1H),7.16(d,J＝9.0Hz,2H),3.83(s,3H),3.77(t,J＝12.9Hz,2H),2.57-2.48(m,2H),2.06(t,J＝14.1Hz,2H).
实施例1-29、3-((2-(4-甲氧基苯基-2H-苯并三唑-5-基)氨基)-3-氧代乙酸(RS029)的制备
将苯甲酸置换成丙二酸，按制备化合物RS014的方法制备RS029。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.54(s,1H),8.47(s,1H),8.17(d,J＝9.0Hz,2H),7.96(d,J＝9.0Hz,1H),7.51(d,J＝8.7Hz,1H),7.16(d,J＝8.7Hz,2H),3.84(s,3H),3.63(s,1H),3.32(s,2H).
实施例1-30、2-溴-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS030)的制备
将苯甲酸置换成溴代乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS030。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.61(s,1H),8.43(d,J＝1.2Hz,1H),8.21(d,J＝9.0Hz,2H),7.98(d,J＝9.0Hz,1H),7.48(dd,J＝1.5,1.5Hz,1H),7.17(d,J＝9.3Hz,1H),4.34(s,2H),3.85(s,3H).
实施例1-31、2-溴-N-[2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS031)的制备
将苯甲酸置换成溴代乙酸，将2-(4-甲氧基苯基)-5-氨基-2H-苯并三氮唑置换为2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-5-氨基-2H-苯并三氮唑，按制备化合物RS014的方法制备RS031。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.63(s,1H),8.43(s,1H),7.98(d,J＝9.0Hz,1H),7.55-7.48(m,3H),4.34(s,2H),3.92(s,6H),3.74(s,3H).
实施例1-32、2-氰基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS032)的制备
将苯甲酸置换成2-氰基乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS032。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.60(s,1H),8.37(d,J＝0.9Hz,1H),8.19(dd,J＝3.93.3Hz,2H),7.98(d,J＝9.0Hz,1H),7.44(dd,J＝1.8,1.8Hz,1H),7.19-7.16(m,2H),3.99(s,2H),3.86(s,3H).
实施例1-33、2-甲氧基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS033)的制备
将苯甲酸置换成2-甲氧基乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS033。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.06(s,1H),8.46(d,J＝1.2Hz,1H),8.20(d,J＝9.0Hz,2H),7.95(d,J＝9.3Hz,1H),7.65(dd,J＝1.8,1.8Hz,1H),7.17(d,J＝9.0Hz,2H),4.08(s,2H),3.85(s,3H),3.42(s,3H).
实施例1-34、2-(2-甲氧基乙基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS034)的制备
将苯甲酸置换成2-(2-甲氧基乙基)氧代乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS034。1H NMR(DMSO,300MHz):δ9.95(s,1H),8.45(s,1H),8.20(d,J＝9.0Hz,2H),7.96(d,J＝9.3Hz,1H),7.57(dd,J＝1.5,1.5Hz,1H),7.16(d,J＝9.3Hz,2H),4.15(s,2H),3.85(s,3H),3.73-3.70(m,2H),3.57-3.54(m,2H).
实施例1-35、2-羟基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS035)的制备
将苯甲酸置换成2-羟基乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS035。1H NMR(500MHz,DMSO):δ10.01(s,1H),8.50(s,1H),8.21(d,J＝9.0Hz,2H),7.97(dd,J＝18.3,8.8Hz,2H),7.72(t,J＝7.2Hz,2H),7.55(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(t,J＝7.6Hz,1H),7.19(d,J＝9.1Hz,2H),4.08(s,2H),3.86(s,3H).
实施例1-36、1-环丙基羧酸-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺(RS036)的制备
将苯甲酸置换成环丙基乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS036。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.47(s,1H),8.40(d,J＝0.9Hz,1H),8.15(dd,J＝2.1,2.1Hz,2H),7.92(d,J＝9.9Hz,1H),7.48(dd,J＝2.12.1Hz,1H),7.15(dd,J＝2.4,2.4Hz,2H),3.84(s,3H),1.82(s,1H),0.85-0.80(m,4H).
实施例1-37、2-(4-苄氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS037)的制备
将苯甲酸置换成4-苄氧基苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS037。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.43(s,1H),9.27(s,1H),8.43(s,1H),8.18(d,J＝9.0Hz,1H),7.93(d,J＝9.0Hz,1H),7.49-7.25(m,8H),7.14(d,J＝9.0Hz,2H),6.98(d,J＝8.7Hz,2H),5.06(s,2H),3.82(s,3H),3.62(s,2H).
实施例1-38、2-(4-羟基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS038)的制备
将苯甲酸置换成4-羟基苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS038。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.40(s,1H),9.27(s,1H),8.44(s,1H),8.21(d,J＝9.0Hz,1H),7.96(d,J＝9.0Hz,1H),7.50(dd,J＝1.51.5Hz,1H),7.19-7.14(m,4H),6.73(d,J＝8.4Hz,2H),3.86(s,3H),3.58(s,2H).
实施例1-39、2-(4-异丙氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS039)的制备
将苯甲酸置换成4-异丙氧基苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS039。1HNMR(DMSO,300MHz):δ10.41(s,1H),8.43(s,1H),8.18(d,J＝9.3Hz,1H),7.94(d,J＝9.0Hz,1H),7.48(dd,J＝1.5,1.5Hz,1H),7.24(d,J＝8.4Hz,2H),7.16(d,J＝9.0Hz,2H),6.86(d,J＝8.4Hz,2H),4.77-4.73(m,1H),3.83(s,3H),3.6(s,2H),1.22(d,J＝6Hz,6H).
实施例1-40、2-(4-丙氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS040)的制备
将苯甲酸置换成4-正丙氧基苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS040。1HNMR(DMSO,300MHz):δ10.42(s,1H),8.43(s,1H),8.20(d,J＝9.3Hz,2H),7.97-7.94(m,1H),7.50(dd,,J＝1.5,1.5Hz,1H),7.27(d,J＝8.7Hz,2H),7.18(d,J＝9.0Hz,2H),6.90(d,J＝8.7Hz,2H),3.90(t,J＝13.2Hz,2H),3.85(s,3H),3.63(s,2H),1.75-1.68(m,2H),0.99-0.94(m,3H).
实施例1-41、2-(4-环戊氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS041)的制备
将苯甲酸置换成4-环戊氧基苯乙酸，按制备化合物RS014的方法制备RS041。1HNMR(DMSO,300MHz):δ10.43(s,1H),8.43(s,1H),8.18(d,J＝9.3Hz,1H),7.94(d,J＝9.0Hz,1H),7.48(dd,J＝1.5,1.5Hz,1H),7.23(d,J＝8.4Hz,2H),7.14(d,J＝8.4Hz,2H),6.84(d,J＝8.7Hz,2H),4.75(s,1H),3.83(s,3H),3.6(s,2H).
实施例1-42、5-(N-2-苯基乙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS042)的制备
将2-(4-甲氧基苯基)-5-氨基-2H-苯并三氮唑(0.42g,1.74mmol)，苯乙酸(0.24g,1.74mmol)，HOBt(0.26g，1.92mmol)和EDC.HCl(0.43g,2.24mmol)溶解于DMF(10ml)中，在50-60℃油浴下进行搅拌，用TLC进行检测，直至反应完全。加入过量的水，用乙酸乙酯和水进行萃取，合并有机相，减压蒸馏，得到粗品，用柱色谱进行分离，得到纯的N-(2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-氨基)-2-苯基乙酰胺0.57g，产率91％。然后将N-(2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-氨基)-2-苯基乙酰胺(0.57g，1.59mmol)在冰浴条件下下溶解于THF(10ml)中，分批加入氢化铝锂(0.60g，15mmol)，至没有气泡产生时，撤除冰浴，在油浴上进行回流，TLC进行检测直至反应完全。加入过量的乙酸乙酯，用乙酸乙酯和水进行萃取，合并有机相，减压蒸馏，得到粗品，用柱色谱进行分离，得到纯的5-(N-2-苯基乙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑0.32g，产率59％。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.13(d,J＝9.0Hz,2H),7.69(d,J＝9.0Hz,1H),7.32(s,3H),7.23-7.22(m,1H),7.13(m,2H),7.03(dd,J＝0.3,0.3Hz,1H),6.61(s,1H),6.33-6.32(m,1H),3.83(s,3H),3.62-3.36(m,2H),2.96-2.92(m,2H).
实施例1-43、5-(N-3-苯基丙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS043)的制备
将苯乙酸置换成苯丙酸，按制备化合物RS042的方法制备RS043。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.08(d,J＝8.7Hz,2H),7.66(d,J＝9.3Hz,1H),7.29-6.99(m,8H),6.47(s,1H),6.26(t,J＝4.8Hz,1H),3.80(s,3H),3.09-3.03(m,2H),2.70(t,J＝8.4Hz,2H),1.96-1.88(m,2H).
实施例1-44、5-(N-4-甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS044)的制备
将苯乙酸置换成4-甲氧基苯甲酸，按制备化合物RS042的方法制备RS044。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.08(d,J＝9.0Hz,2H),7.68(dd,J＝0.3,0.3Hz,1H),7.35(d,J＝9.3Hz,2H),7.15-7.12(m,3H),6.93(s,1H),6.91(s,1H),6.80-6.76(m,1H),4.27(t,J＝2.7Hz,2H),3.84(s,3H),3.74(s,3H).
实施例1-45、5-(N-2-甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS045)的制备
将苯乙酸置换成2-甲氧基苯甲酸，按制备化合物RS042的方法制备RS045。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.06(d,J＝8.7Hz,2H),7.67(d,J＝9.0Hz,1H),7.27-7.22(m,1H),7.13-7.05(m,5H),6.83-6.79(m,2H),6.45(d,J＝1.8Hz,1H),4.32-4.30(m,2H),3.81(s,3H),3.72(s,3H).
实施例1-46、5-(N-2-(4-甲氧基苯基乙基)氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS046)的制备
将苯乙酸置换成4-甲氧基苯乙酸，按制备化合物RS042的方法制备RS046。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.08(d,J＝9.0Hz,2H),7.65(d,J＝9.3Hz,1H),7.21(d,J＝8.1Hz,2H),7.11(d,J＝8.7Hz,2H),6.98(d,J＝3Hz,1H),6.85(d,J＝8.1Hz,2H),6.56(s,1H),6.27(t,J＝5.1Hz,1H),3.81(s,3H),3.70(s,3H),3.30-3.23(m,2H),3.84(t,J＝7.2Hz),2.06(s,3H).
实施例1-47、5-(N-2,4-二甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS047)的制备
将苯乙酸置换成2，4-二甲氧基苯甲酸，按制备化合物RS042的方法制备RS047。1HNMR(DMSO,300MHz):δ8.08(d,J＝9.0Hz,2H),7.68(d,J＝9.3Hz,1H),7.13-6.93(m,6H),6.69(s,1H),6.47(s,1H),4.34(d,J＝5.4Hz,2H),3.82(d,J＝3.6Hz,9H).
实施例1-48、5-(N-2,4,6-三甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS048)的制备
将苯乙酸置换成2，4，6-三甲氧基苯甲酸，按制备化合物RS042的方法制备RS048。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.09(d,J＝9.0Hz,2H),7.58(d,J＝9.0Hz,1H),7.11(d,J＝9.0Hz,2H),7.02(dd,J＝1.81.8Hz,1H),6.60(s,2H),6.25(s,2H),5.95-5.92(m,1H),4.08(d,J＝4.8Hz,2H),3.82(s,3H),3.79(s,3H),3.76(s,3H).
实施例1-49、5-(N-4-三氟甲基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS049)的制备
将苯乙酸置换成4-三氟甲基苯甲酸，按制备化合物RS042的方法制备RS049。1HNMR(DMSO,300MHz):δ8.06-8.03(m,2H),7.71-7.60(m,5H),7.11-6.96(m,4H),6.42-6.41(m,1H),4.47-4.45(m,2H),3.80(s,3H).
实施例1-50、5-(N-3-溴苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS050)的制备
将苯乙酸置换成3-溴苯甲酸，按制备化合物RS042的方法制备RS050。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.07(s,J＝9.0Hz,2H),7.70(d,J＝8.7Hz,1H),7.62(s,1H),7.45-7.28(m,3H),7.13-7.07(m,2H),6.91-6.87(m,1H),6.48(s,1H),4.38(d,J＝0.6Hz,2H),3.83(s,3H).
实施例1-51、5-(N-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)乙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS051)的制备
将苯乙酸置换成3，4,5-三甲氧基苯乙酸，按制备化合物RS042的方法制备RS051。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.11(d,J＝9.0Hz,2H),7.69(d,J＝9.3Hz,1H),7.14(d,J＝9.3Hz,2H),7.03(dd,J＝1.81.8Hz,1H),6.63(s,3H),6.32-6.28(m,1H),3.38(s,2H),3.78(s,9H),2.87-2.86(m,2H).
实施例1-52、5-(N-(2-呋喃甲基)氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑(RS052)的制备
将苯乙酸置换成2-呋喃甲酸，按制备化合物RS042的方法制备RS052。1H NMR(DMSO,300MHz):δ8.10(d,J＝8.7Hz,2H),7.68(d,J＝9.3Hz,1H),7.60(s,1H),7.13(d,J＝8.7Hz,2H),7.05(d,J＝9.0Hz,1H),6.67(s,2H),6.41(s,1H),4.33(d,J＝5.4Hz,2H)3.83(s,3H).
实施例1-53、1-氯-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS053)的制备
将2-(4-甲氧基苯基)-5-氨基-2H-苯并三氮唑(0.16g，0.67mmol)和三乙胺(0.5ml)溶解于二氯甲烷(10ml)中，在冰浴条件下滴加的氯乙酰氯(0.2ml)，用TLC进行检测直至反应完全。减压蒸馏除去溶剂，用水和乙酸乙酯进行萃取，合并有机相，减压蒸馏得到粗品，用柱色谱进行分离得到纯的产物1-氯-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(0.17g，产率75％)。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.62(s,1H),8.43(s,1H),8.20(d,J＝8.7Hz,2H),7.99-7.96(m,1H),7.48(dd,J＝1.51.5Hz,1H),7.17(d,J＝8.7Hz,2H),4.34(s,2H),3.85(s,3H).
实施例1-54、3-氯-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺(RS054)的制备
将氯乙酰氯置换成3-氯丙酰氯，按制备化合物RS053的方法制备RS054。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.27(s,1H),8.44(s,1H),8.18(d,J＝9.0Hz,2H),7.94(d,J＝9.3Hz,1H),7.47(dd,J＝1.8,1.8Hz,1H),7.17(d,J＝9Hz,2H),3.85(s,3H),3.73(t,J＝6.4Hz,2H),2.59-2.50(m,2H),2.13-2.01(m,2H).
实施例1-55、3-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基氨基甲酰基]-丙烯酸(RS055)的制备
将氯乙酰氯置换成马来酸酐，按制备化合物RS053的方法制备RS055。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.44(s,1H),8.56(s,1H),8.20(d,J＝9.0Hz,2H),7.97(d,J＝9.0Hz,1H),7.53(dd,J＝1.51.5Hz,1H),7.17(d,J＝9.0Hz,2H),6.55-6.30(m,2H),5.82(dd,J＝1.51.8Hz,1H),3.85(s,3H).
实施例1-56、三氟甲基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(RS056)的制备
将氯乙酰氯置换成三氟甲基乙酰氯，按制备化合物RS053的方法制备RS056。1HNMR(DMSO,300MHz):δ11.52(s,1H),8.40(s,1H),8.21(t,J＝7.5Hz,2H),8.04(d,J＝8.7Hz,1H),7.70(d,J＝9.0Hz,1H),7.17(t,J＝7.8Hz,2H),3.86(s,3H).
实施例1-57、硝酸2-((2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基)氨基-2-氧代乙基酯(RS057)的制备
将2-溴-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺(0.18g，0.50mmol)溶解于丙酮(10ml)中，加硝酸银(0.23g,1.35mmol)，进行搅拌，直至反应完全。减压蒸馏丙酮，用水和乙酸乙酯进行萃取，合并有机相，减压蒸馏，得到粗品，经柱色谱进行分离，得到纯的产物0.16g，产率96％。1H NMR(DMSO,300MHz):δ10.60(s,1H),8.41(d,J＝9.0Hz,1H)，8.20(d,J＝9.3Hz,2H),7.97(d,J＝9.0Hz,1H),7.47(dd,J＝1.51.5Hz,1H),7.17(d,J＝9Hz,2H),4.32(s,2H),3.84(s,3H).
实施例二：本发明化合物对RAS突变细胞增殖的抑制作用
本发明化合物首先在T29细胞系(RAS野生型)以及T29KT1P细胞系(RAS突变型)上进行活性评价。对这两株细胞的具体描述为：在人卵巢表层上原代皮细胞中转入SV40病毒的早期区段得到IOSE-29细胞系，该病毒的早期区段编码表达大T和小T抗原，能抑制p53和pRb信号通路并延长细胞周期，可以使IOSE-29在第10代还能保持着正常上皮细胞的绝大多数特性。随后，应用包含全长hTERT cDNA的逆转录病毒感染IOSE-29细胞得到永生化的T29细胞株，同时再感染包含pBabe-puro-KRASV12的病毒得到T29KT1P细胞。这两种逆转录病毒的构建是应用磷酸钙转染法在双嗜性的逆转录病毒包装细胞系Phoenix细胞中分别转入pBabe-hygro-hTERT或pBabe-puro-KRASV12的质粒得到，然后收集病毒上清，分别感染IOSE-29细胞得到相应的细胞系。病毒感染后的细胞系，经过潮霉素(100微克/毫升，7天)和嘌呤霉素(0.5微克/毫升，5天)进行筛选，得到稳定表达的永生化正常上皮细胞(T29)以及高表达KRAS蛋白(T29KT1P)上皮细胞，其中携有KRASV12质粒的T29KT1P细胞具有癌细胞特性，可在小鼠皮下成瘤。培养细胞所用的培养基是由MCDB105和M199培养基1:1混合之后加入10％灭活的胎牛血清、1％的青/链霉素，细胞置于37℃含5％CO2，95％空气饱和湿度恒温温箱中进行培养。
统计学分析：
除做特殊说明，所有结果均以平均值±标准差(mean±SD)表示。应用MicrosoftExcel或GraphPad Prism Software version 5.0.软件进行统计学检验。两样本间的比较采用“双尾非成对的Student’s T检验；多样本间的比较采用单因素方差分析(One-wayANOVA)。显著性差异以P值表示，P<0.05即认为组间具有统计学差异，P<0.05(*)，P<0.01(**)，P<0.001(***)。其他特殊的统计学分析详见相关部分说明。
本论文筛选化合物的方法为5-[3-(羧基甲氧基)苯基]-3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2-(4-磺基苯基)-2H-四唑内盐(MTS)实验方法：将T29和T29KT1P细胞铺到96孔细胞培养板上，每个孔的细胞数为4000，待细胞贴壁24小时后，用不同化合物以及同一化合物不同浓度处理两种细胞，48小时之后加入MTS测定细胞的存活率。
细胞相对存活率如表2所示：
表2 本发明化合物(RS001-RS057)对T29KT1P和T29细胞的增殖抑制结果
由表2中结果可以发现，相对于RAS野生型的T29细胞系的抑制效果，目标化合物RS001-RS057对RAS突变的T29KT1P细胞都具有非常优异的活性和选择性(表2和图1)，RAS突变T29KT1P的半数抑制率浓度为3微摩尔/升，RAS野生型T29的半数抑制率浓度为23微摩尔/升。说明这类化合物具有特异性抑制RAS突变细胞增殖活性的能力。
实施例三：本发明化合物对K-RAS突变的肿瘤细胞增殖的抑制实验
为考察本发明化合物对K-RAS突变肿瘤细胞增殖的抑制效果，我们选取了K-RAS突变的肺癌细胞、肠癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、子宫癌细胞、多发性骨髓癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、膀胱癌细胞、前列腺癌细胞、宫颈癌细胞、神经胶质瘤细胞与K-RAS野生型的肿瘤细胞(包括K-RAS野生型的肺癌细胞和结肠癌细胞等)(表3)并对化合物的抑制活性进行测试。基本测试过程如下：取对数生长期的细胞接种于96孔板中，每孔接入100微升含2,000-5,000个细胞的悬液，待细胞贴壁且处于对数生长期时(24小时后)加入不同的药物处理，每个浓度设置4-6个复孔；药物作用48小时后，应用CellTiter AQueous OneSolution细胞增殖检测试剂盒(MTS)进行细胞存活率的检测，每孔加入20微升MTS试剂，37℃孵育1-2小时后，酶标仪490纳米波长下检测各孔的吸光值。将对照组细胞存活率作为100％，其他各组吸光值与对照组吸光值相比较，计算出相应的存活率。
试验中所选用K-RAS突变肿瘤细胞系与K-RAS野生型肿瘤细胞系如表3所示：
表3 K-RAS突变肿瘤细胞系与K-RAS野生型肿瘤细胞系
由图2结果发现，本发明化合物RS001-RS003、RS009-RS012、RS018、RS019、RS024、RS026、RS029-RS031、RS038、RS048、RS051-RS057等在10微摩尔/升浓度下显著抑制了K-RAS突变的肿瘤细胞(肺癌细胞、肠癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、子宫癌细胞、多发性骨髓癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、膀胱癌细胞、前列腺癌细胞、宫颈癌细胞和神经胶质瘤细胞)的增殖活性，并且与K-RAS野生型肿瘤细胞的抑制活性相比呈现出明显的选择性，差异具有显著性。在5微摩尔/升浓度下表现出更好的选择性，本发明化合物组对K-RAS突变的肿瘤细胞(肺癌细胞、肠癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、子宫癌细胞、多发性骨髓癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、膀胱癌细胞、前列腺癌细胞、宫颈癌细胞和神经胶质瘤细胞)的相对抑制率都在50％以上，而对K-RAS野生型肿瘤细胞的抑制率在20％左右。其它化合物RS004-RS008、RS013-RS017、RS020-RS023、RS025、RS027、RS028、RS032-RS037、RS039-RS047和RS049-RS050对K-RAS突变的肿瘤细胞包括肺癌细胞、肠癌细胞、胰腺癌细胞、乳腺癌细胞、子宫癌细胞、多发性骨髓癌细胞、胃癌细胞、卵巢癌细胞、膀胱癌细胞、前列腺癌细胞、宫颈癌细胞和神经胶质瘤细胞的增殖抑制也都表现出相似的抑制效果。
实施例四：本发明化合物对RAS突变肿瘤细胞克隆形成的抑制作用
细胞存活率的检测只表示了短期的贴壁细胞的个数，但贴壁的细胞不能保证每一个都有继续增殖和形成克隆的能力；而能形成克隆的细胞必须为贴壁的且具有增殖活力的细胞，因此，克隆形成率更能反映肿瘤细胞持续生长的增殖能力以及群体依赖性。为了考察本发明化合物对RAS突变肿瘤细胞是否具有不可逆的生长抑制作用，我们应用A549 RAS突变细胞来研究药物组合对细胞2D和3D克隆形成的抑制作用。2D克隆形成实验的过程为：取对数生长期的A549细胞，用胰酶消化并吹打成单个细胞，按每孔800-1000个细胞的密度均匀接种于6孔板中，待细胞贴壁后，加入不同浓度的药物处理，每2-3天更换一次新鲜的培养基和药物，置37℃、5％ CO2及饱和湿度的环境下培养一周，可观察到6孔板中出现肉眼可见的克隆，弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加入4％的多聚甲醛固定15分钟。然后去固定液，加适量0.1％结晶紫染色10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。计数含50个细胞以上的克隆，计算细胞集落形成率。3D(软琼脂糖)克隆形成实验的过程为：将1.2％低熔点琼脂糖与2×细胞培养基以1:1的体积比混合制备0.6％的底层琼脂，6孔板中每个孔1.4毫升温室凝固，取对数期细胞，胰蛋白酶消化后吹散成单个细胞悬液，计数，并稀释细胞悬液至浓度为10000个/毫升，将0.7％低熔点琼脂糖与2×细胞培养基以1:1的体积比混合，制备0.35％的上层琼脂，每孔加1毫升上层琼脂和100微升单细胞悬液(约1000细胞每孔)，混匀，室温凝固。置于37℃，5％ CO2的细胞培养箱中培养2-3周，计数含50个细胞以上得克隆，计算细胞集落形成率。同时在显微镜下拍照，放大倍数为40×。
实验结果如图3所示，本发明化合物RS001-RS006、RS009-RS015、RS018-RS022、RS024-RS027、RS029-RS031、RS033-RS048、RS051-RS057不仅能显著抑制克隆形成的大小，还可抑制克隆形成的数目。经后续试验验证，本发明化合物在其它RAS突变的肿瘤如肠癌、胰腺癌、乳腺癌、子宫癌、多发性骨髓癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌和神经胶质瘤等细胞的克隆形成的大小和数目都有明显的抑制效果。
实施例五：本发明化合物对RAS突变实体肿瘤的抑制结果
为考察本发明化合物对RAS突变实体肿瘤的抑制效果，我们选取了RS002、RS018、RS019、RS024、RS026、RS030、RS038、RS048、RS053和RS057，考察它们对RAS突变的肿瘤的抑制效果。基本实验过程如下：处于对数生长期的A549细胞(5×106)用胰酶消化收集，1×PBS洗两次，用0.1毫升无血清的RPMI-1640培养基重悬，注射到5-6周BALB/cA无胸腺裸鼠右侧背部皮下，建立裸鼠皮下荷瘤模型，当实体肿瘤增长至150～200立方毫米左右后，平均分组(n＝8～10)给药；每两天记录一次荷瘤鼠体重并用游标卡尺测量实体瘤体积大小，肿瘤体积计算公式为：体积＝长×宽2×0.52。给药4周后处死荷瘤鼠，剥离实体肿瘤，拍照称重。
结果如图4所示，本发明化合物在1毫克/千克、2毫克/千克和4毫克/千克的剂量下都能显著抑制肿瘤的生长，本发明化合物组与对照组相比具有显著差异性。在给药30天后，肿瘤体积由对照组的约1800立方毫米分别缩小到约900、800和500立方毫米左右(图4)；剥离的肿瘤重量由对照组的1.5克左右分别减小至1.2克、1.0克和0.8克左右，说明本发明化合物能显著抑制了RAS突变的肿瘤的生长，并呈剂量依赖性的关系。经后续试验也证实，本发明化合物RS001-RS057在肠癌、胰腺癌、乳腺癌、子宫癌、多发性骨髓癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌和神经胶质瘤的生长上也表现出与肺癌上相似的抑制效果。
实施例六：本发明化合物对RAS基因修饰动物模型肿瘤的抑制作用
为了进一步考察本发明化合物对在体的RAS突变肿瘤的抑制效果，我们应用Lox-STOP-Lox-KRASG12D基因修饰动物模型，考察RS002、RS018、RS019、RS024、RS026、RS030、RS038、RS048、RS053和RS057对KRAS突变诱导的原发肿瘤的抑制效果。基本实验过程如下：通过在Lox-STOP-Lox-KRASG12D小鼠鼻腔中引入Cre酶，在肺部定点诱发突变RAS的表达而导致肿瘤的发生。待肺部肿瘤进展两个月左右(切片可观测明显的结节)时，平均分组给药。给药四周后，经Micro-CT显像，观测各组肺部肿瘤的生长情况。
如图5所示，本发明化合物RS002、RS018、RS019、RS024、RS026、RS030、RS038、RS048、RS053和RS057在2毫克/千克、4毫克/千克均能显著抑制肺部肿瘤的进展，与对照组相比，本发明化合物RS002、RS018、RS019、RS024、RS026、RS030、RS038、RS048、RS053和RS057以2毫克/千克的给药组对肿瘤体积的抑制率已高达63％，本发明化合物RS002、RS018、RS019、RS024、RS026、RS030、RS038、RS048、RS053和RS057以4毫克/千克的给药组对肿瘤体积的抑制率已高达75％。此外，经后续试验验证，本发明化合物在其它RAS突变的肿瘤如肠癌、胰腺癌、乳腺癌、子宫癌、多发性骨髓癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌和神经胶质瘤上都显示出显著的治疗效果。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。
Claims (12)
1.一类苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其由下述结构式(I)表示：
其中：
m和p指链状亚甲基的个数，m＝0、1、2、3或4；p＝0、1、2、3或4；
n指羰基的个数，n＝0或1；
R1指苯环上的取代基，取自下列基团中的一个或多个，为氢、甲基、甲氧基、卤素、苄氧基、氰基、酰胺基；
R2为氰基、ONO2、卤素、羟基、羧基、甲氧基、环丙烷基、呋喃基、乙烯基、乙烯基羧基、三氟甲基、5-溴呋喃基、苯基、吡啶基、甲苯基、甲磺酰苯基、C1-C3烷氧基苯基、环戊氧基苯基、卤代苯基、硝基苯基、苄氧基苯基或羟基苯基；
其中，当m＝0，n＝1，p＝0，R2为呋喃基、5-溴呋喃基或吡啶基时，R1不等于下列基团中的一个或多个，氟、氯、溴、氢、甲基、甲氧基；
当m＝0，n＝1，p＝0，R1为酰胺基时，R2不等于苯基、苄氧基苯基、硝基苯基、乙氧基苯基、甲苯基、碘代苯基、溴代苯基；
当m＝0，n＝0，p＝1，R2为吡啶基时，R1不等于一个或多个甲氧基。
2.一类苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其由下述结构式(II)表示：
其中：
p指链状亚甲基的个数，p＝0、1、2、3或4；
n指羰基的个数，n＝0或1；
R1指苯环上的取代基，取自下列基团中的一个或多个，为氢、甲基、甲氧基、卤素、苄氧基、氰基、酰胺基；
R3为氢、羟基、甲基、卤素、C1-C3烷氧基、环戊氧基、三氟甲基、苄氧基、硝基或甲磺酰基中的一个；
其中，当n＝1，p＝0，R1为酰胺基时，R3不等于氢、卞氧基、硝基、乙氧基、甲基、碘、氯中的一个。
3.一类苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，包括：
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(3，5-二甲基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-苄氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-乙酰氨基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-氰基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[2-苄基-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
5-溴呋喃-2-羧酸[1-(3-苯基丙基)-1H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
1-苯基羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
1-(2-吡啶基)-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
1-(2，3，4-三甲氧基苯基)-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
1-(2，4-二甲氧基苯基)-羧酸[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
2-(4-碘苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-溴苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-氯苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-氟-苯基)-N-[2-(4-甲氧基-苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(2-溴苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-甲基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-甲基磺酰苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-硝基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-甲氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
4-溴-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺，
3-(2-(4-甲氧基苯基-2H-苯并三唑-5-基)氨基)-3-氧代乙酸，
2-溴-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-溴-N-[2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-氰基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-甲氧基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(2-甲氧基乙基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-羟基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
1-环丙基羧酸-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-酰胺，
2-(4-苄氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-羟基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-异丙氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-丙氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
2-(4-环戊氧基苯基)-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
5-(N-2-苯基乙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-3-苯基丙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-4-甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2-甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2-(4-甲氧基苯基乙基)氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2,4-二甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2,4,6-三甲氧基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-4-三氟甲基苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-3-溴苄基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)乙基氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
5-(N-(2-呋喃甲基)氨基)-2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑，
1-氯-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
3-氯-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺，
3-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基氨基甲酰基]-丙烯酸，
三氟甲基-N-[2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
或硝酸2-((2-(4-甲氧基苯基)-2H-苯并三唑-5-基)氨基)-2-氧代乙基酯。
4.根据权利要求1～3之任一项所述的苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述苯并三氮唑类化合物药学上可接受的盐由所述苯并三氮唑类化合物与酸形成酸加成盐；其中，所述酸是：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、马来酸或琥珀酸。
5.一种制备如权利要求4所述的苯并三氮唑类化合物药学上可接受的盐的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将苯并三氮唑类化合物溶于第一有机溶剂中；
(2)将酸溶于第二有机溶剂中；
(3)将上述两种溶液按比例充分混合，放置10分钟到8小时后，得到所述苯并三氮唑类化合物药学上可接受的盐。
其中，所述第一有机溶剂和第二有机溶剂分别包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六环和乙二醇二甲醚中的一种或几种；
所述酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、马来酸和琥珀酸中的一种。
6.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1～3之任一项所述的苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型包括流体、气雾剂、乳膏、凝胶剂、丸剂、胶囊剂、糖浆剂、透皮贴剂或赋形剂。
8.根据权利要求1～3之任一项所述的苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗由RAS基因突变引起的疾病的药物中的用途。
9.根据权利要求1～3之任一项所述的苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗靶向RAS基因突变的抗肿瘤药物上的用途。
10.根据权利要求1～3之任一项所述的苯并三氮唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和治疗由RAS基因突变引起的肿瘤细胞的增殖、生长、迁移和浸润或肿瘤的复发药物中的用途。
11.如权利要求9或10所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为由RAS基因突变引起的诱发性或获得性耐药的肿瘤。
12.根据权利要求9或10所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为恶性肿瘤，包括肺癌、肠癌、胰腺癌、乳腺癌、子宫癌、多发性骨髓癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌、神经胶质瘤。
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