CN105200064A - OsFBH1转录因子在调控抽穗期方面的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种OsFBH1转录因子在调控抽穗期方面的应用。其中OsFBH1转录因子的核苷酸序列，为SEQ？ID？No.1所示，OsFBH1编码一个399个氨基酸的蛋白质序列为SEQ？ID？No？2所示。本发明利用反向遗传学方法对水稻<i>OsFBH1</i>的功能进行了研究，结果表明<i>OsFBH1</i>定位于细胞核中，是一个核蛋白，主要在叶片中大量表达，可以调控水稻的抽穗期早晚。水稻抽穗开花期是水稻产量的重要构成要素之一，对水稻产量有重要影响；同时水稻抽穗开花的早晚常伴随着水稻籽粒产量的变化，因此清晰的揭示水稻成花的分子调控通路，利用分子设计辅助育种，对于提高水稻产量具有广阔的应用前景。

Description

OsFBH1转录因子在调控抽穗期方面的应用

本研究得到国家自然科学基金项目 (No. 31171515)及天津市中青年骨干教师创新培养计划（No. ZX110GG017）的资助。

技术领域

本发明涉及水稻OsFBH1功能研究技术领域，更确切地说是OsFBH1转录因子在水稻抽穗期方面。

背景技术

bHLH（Basic/helix-loop-helix）转录因子是植物中的转录因子大家族，bHLH转录因子得名来源于其蛋白结构能形成bHLH结构域。该结构域一般含有60个氨基酸，按照一定顺序排列后能够形成一个碱性氨基酸区（约15个氨基酸）和一个α-螺旋-环-α-螺旋区 ( HLH 区，约40个氨基酸)。其中碱性区域位于bHLH结构域的N端，其作用主要同DNA结合区结合相关，例如，某些氨基酸能够对靶基因启动子区域的E-box(5’-CANNTG-3’) 特异性识别并与之结合；HLH区同碱性区域相连，位于bHLH结构域的C端,不同长度的连接环将两个α-螺旋连接起，形成了HLH区域。还有些转录因子之间能够形成同源或异源性二聚体，进而调控基因的表达。

bHLH广泛存在于高等植物，调控很多生理代谢过程。在植物的生长发育、胁迫应答、次生代谢及植物的开花调控中起重要作用。最近的研究发现， bHLH类型转录因子能够同光敏色素基因互作从而调控植物开花。拟南芥中，bHLH转录因子能够调控CO基因的表达，从而促进拟南芥的开花。为了进一步探究该转录因子家族在水稻抽穗开花中所起的作用以及在光周期通路中的作用机制，本发明利用反向遗传学方法对水稻OsFBH1的功能进行了研究，结果表明OsFBH1定位于细胞核中，是一个核蛋白，主要在叶片中大量表达，可以调控水稻的抽穗期早晚。水稻抽穗开花期是水稻产量的重要构成要素之一，对水稻产量有重要影响；同时水稻抽穗开花的早晚常伴随着水稻籽粒产量的变化，因此清晰的揭示水稻成花的分子调控通路，利用分子设计辅助育种，对于提高水稻产量具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供OsFBH1转录因子的核苷酸序列在制备调控水稻抽穗期提高水稻产量方面的应用。

本发明的上述目的是通过如下的方法予以实现：

OsFBH1转录因子的核苷酸序列，其特征在于OsFBH1基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，OsFBH1编码一个399个氨基酸的蛋白质序列为SEQ ID No 2所示。

本发明所述OsFBH1转录因子核苷酸序列的mRNA序列为SEQ ID No.3所示。

本发明所述OsFBH1转录因子的核苷酸序列在制备调控水稻抽穗期方面，特别是在提高水稻产量方面有明显的提高。试验研究表明：过表达OsFBH1延迟了水稻的抽穗日期，增加水稻的分蘖，从而可以提高水稻产量。

本发明所述OsHox10的基因序列如下（SEQ ID No.1所示）：

OsFBH1　基因序列：

ATGTACGGCTCGCCGGTTTCCAAGGATCTGAACCTCCCGGTGCAGCCGCCGGCGATGAGCTCGTCGGGCTTGCTGCGGTACAGATCGGCGCCGAGCACGCTGCTCGCCGAGTTCTGCGACGACTTCCTCCCGCCCGCCGCCGCGCCCCGCGCCGCCAGCCCCGACGCCGACAACGTCTTCTCCCGCTTCCTCGCCGACCACCAGATCCGTGACAAGTCTCCCCCCGCCACCGCCGCCGCCGCCGCCGCTGCCGCTCACTTCCCCGACGACCCCACCATGGCCACCCAGCACCACCACCAGCAGCAGATGATGTTCCAGCACCACCCGCAGCAGATGGCCTCTGTCGAGGGGCTCTACCGCACCGTCAGCTCCACCGGGATTGACGCCGCCACCGCCGCCGCCAACGCCGCCGGTGGCGGCGGCGGCGGGCTGCTCCGGCAGAGTAGCTCGCCCGCCGGATTCCTCAATCATTTGAACATGGACAACGGTTAGTAGTACTACTTCCTTAATTCTCTCCTTCTTTTGGTAATGGTAGTTGCACACGCCTACTACTTGCTTCGGCAGCAGCAGCAATTATTACTGTTCTTGCTCGAGTTCTTCTCGGGAACATTTCCATTTCCGGAACTGAGTCCCGCACTGTTCGGTTTCAGGGTACGGGAGCATGCTGCGGGCGGGCATGGCGGCAGCCGGCGGTGGGGTGGGGTTCAGGAACGGCGCGAACGCCGCCGCCGCGGCCGACTCCCCCGGCGGCAGCGGGGGCAGGCTGAAGGGGCAGCTCAGCTTCTCGTCGCGGCAGGGCTCGCTCATGTCGCAGATCTCGGAGATGGACAGCGAGGAGCTCGGTGGGAGCAGCCCCGAGGGCGCCGGTGGCGGCGGCGGCGGCGGTGGCCGGGGTTACCTCTCCGGGTACCCGATGAGCTCCGGGTGGGAGGAGTCGTCGCTCATGTCGGACACGAACATCTCCGGCGTGAAGCGCCAGCGCGACTCGTCGGAGCCGTCCCAGGTTCGATTCACAAAATTCCCATCGATTCCGTTGATAGATGATTTGTACAAGAAACTGACGACGACGATTTGTGGCGGTGGCGCAGAACGGCGGCGGCGGCGGCGGCCTGGCGCACCAGTTCAGCCTGCCGAAGACCTCGTCGGAGATGGCGGCCATCGAGAAGTTCCTCCAGTTCCAGGACGCGGTGCCCTGCAAGATCCGCGCCAAGCGCGGCTGCGCCACGCACCCGCGCAGCATCGCCGAGCGGGTAAAAAACAACAACAAAATTCCTCTTCACCCTCCTCACCGCACCGCACAGCACAAATTCGTTAATATCAAACGAGCAGCAGCAGCCAGCAGGTGACTGATCTGATCCCCGTGATGTTGATCTTTGCCATAGGTGAGGAGGACAAGGATCAGCGAGCGAATCAGGAAGCTGCAAGAACTCGTGCCAAACATGGACAAGGTACTGATGAGTACTACACCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTTCCCCAATAGGCAATAGAACAGTGTTTGGTTAGCAAATAGTAGCAGTAGTAGCAGCAAATCTGCAAATGTGCAGTACAAGGACCACTCCAAAATTAACCTGTCCGAAACCTGAAACGTTTCCGTTTTCCTGCAGCAAACCAACACTGCTGACATGCTGGATTTGGCTGTTGACTACATCAAGGATCTTCAGAAGCAGGTCAAGGTAAGCTGATTAGCTATAATCTCCCTTTTAATCCCGCAATTAATTAGAACGCCATCTATATCATCTGTAGCTTGTAATTAGATTAGTCAACCTATCCTGGCCACTGAGGTCCAAATCAACATGGCCGCTTTGCCCTGTGACTGAGGGTGAAGGGTACTTTTTATTGGTCTTATCCAAAGTTACGCTGCACAATCCACAGATCCAGTACTGAGATTTGACAGTTACTCATTGCAAATTGTCATCTCTGTTCATCGCAGGGATTAAACGACAGCCGAGCTAACTGCACCTGCTCAGCGAAGCATCAGCAGTACTCTGGCTAG

OsFBH1 　编码氨基酸序列（SEQ ID No.2所示）：

MYGSPVSKDLNLPVQPPAMSSSGLLRYRSAPSTLLAEFCDDFLPPAAAPRAASPDADNVFSRFLADHQIRDKSPPATAAAAAAAAHFPDDPTMATQHHHQQQMMFQHHPQQMASVEGLYRTVSSTGIDAATAAANAAGGGGGGLLRQSSSPAGFLNHLNMDNGYGSMLRAGMAAAGGGVGFRNGANAAAAADSPGGSGGRLKGQLSFSSRQGSLMSQISEMDSEELGGSSPEGAGGGGGGGGRGYLSGYPMSSGWEESSLMSDTNISGVKRQRDSSEPSQNGGGGGGLAHQFSLPKTSSEMAAIEKFLQFQDAVPCKIRAKRGCATHPRSIAERVRRTRISERIRKLQELVPNMDKQTNTADMLDLAVDYIKDLQKQVKGLNDSRANCTCSAKHQQYSG

OsFBH1 　mRNA序列（SEQ ID No.3所示）：

ATGTACGGCTCGCCGGTTTCCAAGGATCTGAACCTCCCGGTGCAGCCGCCGGCGATGAGCTCGTCGGGCTTGCTGCGGTACAGATCGGCGCCGAGCACGCTGCTCGCCGAGTTCTGCGACGACTTCCTCCCGCCCGCCGCCGCGCCCCGCGCCGCCAGCCCCGACGCCGACAACGTCTTCTCCCGCTTCCTCGCCGACCACCAGATCCGTGACAAGTCTCCCCCCGCCACCGCCGCCGCCGCCGCCGCTGCCGCTCACTTCCCCGACGACCCCACCATGGCCACCCAGCACCACCACCAGCAGCAGATGATGTTCCAGCACCACCCGCAGCAGATGGCCTCTGTCGAGGGGCTCTACCGCACCGTCAGCTCCACCGGGATTGACGCCGCCACCGCCGCCGCCAACGCCGCCGGTGGCGGCGGCGGCGGGCTGCTCCGGCAGAGTAGCTCGCCCGCCGGATTCCTCAATCATTTGAACATGGACAACGGGTACGGGAGCATGCTGCGGGCGGGCATGGCGGCAGCCGGCGGTGGGGTGGGGTTCAGGAACGGCGCGAACGCCGCCGCCGCGGCCGACTCCCCCGGCGGCAGCGGGGGCAGGCTGAAGGGGCAGCTCAGCTTCTCGTCGCGGCAGGGCTCGCTCATGTCGCAGATCTCGGAGATGGACAGCGAGGAGCTCGGTGGGAGCAGCCCCGAGGGCGCCGGTGGCGGCGGCGGCGGCGGTGGCCGGGGTTACCTCTCCGGGTACCCGATGAGCTCCGGGTGGGAGGAGTCGTCGCTCATGTCGGACACGAACATCTCCGGCGTGAAGCGCCAGCGCGACTCGTCGGAGCCGTCCCAGAACGGCGGCGGCGGCGGCGGCCTGGCGCACCAGTTCAGCCTGCCGAAGACCTCGTCGGAGATGGCGGCCATCGAGAAGTTCCTCCAGTTCCAGGACGCGGTGCCCTGCAAGATCCGCGCCAAGCGCGGCTGCGCCACGCACCCGCGCAGCATCGCCGAGCGGGTGAGGAGGACAAGGATCAGCGAGCGAATCAGGAAGCTGCAAGAACTCGTGCCAAACATGGACAAGCAAACCAACACTGCTGACATGCTGGATTTGGCTGTTGACTACATCAAGGATCTTCAGAAGCAGGTCAAGGGATTAAACGACAGCCGAGCTAACTGCACCTGCTCAGCGAAGCATCAGCAGTACTCTGGCTGA

附图说明：

图1转基因植株的获得及分子检测；其中： A：愈伤组织的继代培养； B：浸染后的愈伤组织筛选培养； C：愈伤组织的分化培养； D：幼苗的生根培养；E：T₀代过表达转基因植株PCR检测，1-18分别代表T₀代过表达转基因植株，WT：野生型，P：重组质粒，CK：ddH₂O ；

图2 OsFBH1-转基因植的表型；其中： A：过表达转基因植株的realtime-PCR分析，1-8分别过表达转基因植株WT为野生型； B：过表达转基因植株的表型分析， OsFBH1-OV1　过表达植株体系，WT：为野生型；

图3 OsFBH1 的表达模式；其中：图中A-O为转基因植株在不同组织和器官中GUS染色结果，其中N、O为转基因植株叶片的横切面图；A：根；B：茎；C：茎顶端分生组织；D：愈伤组织；E：叶片；F：叶鞘；G -J不同时期的幼穗；K-L：花器官。标尺为50μm。P：OsFBH1在不同组织中的Realtime-PCR表达分析。YM：茎顶端分生组织；　YR：幼根；YL：幼叶；MS：叶鞘；S：茎；P1：4cm长幼穗；P2：13cm长幼穗；P3：开花前幼穗；

图4 OsFBH1基因的亚细胞定位；其中：A-C：融合载体pOsFBH1::GFP在烟草表皮细胞的瞬时表达，Merged为GFP、DPAI场融合；D-F：空载体在烟草表皮细胞的瞬时表达，Bright field为明场，Merged为明场和GFP暗场的叠加；G-I：融合载体pOsFBH1::GFP在洋葱细胞表皮细胞的瞬时表达， Bright field为明场，Merged为明场和GFP暗场的叠加；J-L：为空载体在洋葱表皮细胞中的瞬时表达。

具体实施方式

下面通过具体实施例并结合附图对本发明作进一步的详细说明。以下各实施例仅仅是用于说明而不是限制本发明。需要特别说明的是实施例中所用到的试剂均由市售， OsFBH1基因序列由RT-PCR扩增获得并克隆到空载体中。

其中所用到的名词解释及来源：

实施例1

1． 意义

本发明利用反向遗传学方法对水稻OsFBH1的功能进行了研究，结果表明OsFBH1可以调控水稻的抽穗期早晚。对水稻产量有重要影响；同时水稻抽穗开花的早晚常伴随着水稻籽粒产量的变化，因此清晰的揭示水稻成花的分子调控通路，利用分子设计辅助育种，对于提高水稻产量具有广阔的应用前景。

2 材料与方法

2.1植物材料

粳稻品种日本晴及其转基因植株用于本研究。材料种植海南陵水中国水稻所南繁基地及天津市农科院试验田。

2.2方法

2.1.1 OsFBH1过表达载体的构建

总RNA从40天的水稻叶片中用Trizol 试剂(Invitrogen，USA)提取， 2μg总RNA用M-MLV反转录酶（TaKaRa，china）反转录合成cDNA。以反转录得到的cDNA为模板，用基因特异性引物FBHF:5’-TTGGGATCCTGGGTTGAGGTGGGAGAATT-3’和FBHR:5’-CAGACTAGTTCCTGCCTAATCTCCAAAAC-3’，进行PCR扩增获得目的基因的完整ORF。将获得的目的片段纯化回收后，用目的载体中相应的酶切位点连入空载体中获得最终过表达载体。PCR反应条件为1 min / 95℃; 35 cycles (30 sec / 94℃, 30 sec / 62℃, 2 min / 72℃); 5 min / 72℃。反应体系如下(总体积20μL)：

DNA　　　　　　　 10－30 ng

10×Buffer(含20 mM Mg²⁺) 2μL

dNTP（2.5mM） 　　 0.2mM

PrimerF (FBHF) 0.2μM

PrimerR (FBHR) 0.2μM

ExTaq酶（TaKaRa） 1U

ddH₂O补至　　　　　　　　　　　 20μL

2.2.3转基因植株的分子检测

基因组DNA用CTAB法从水稻叶片中提取。然后用载体中潮霉素抗性基因对获得的过表达转基因植株进行检测，所用引物为：HPTF:5‘-CTTCTGCGGGCGATTTGT -3’和HPTR:5‘-CAGCGTCTCCGACCTGAT-3’。PCR扩增程序为2 min / 95℃; 30cycles (30 sec / 94℃, 30 sec / 57℃, 30 sec / 72℃); 5 min / 72℃。

2.2.4 目的基因的表达分析

对于组织特异性表达，收集水稻根、茎、叶、叶片、叶鞘、茎和不同发育时期的穗组织，用Trizol 试剂(Invitrogen，USA)提取这些组织的总RNA，反转录后用RT-PCR方法分析目的基因在这些器官中的表达。对于转基因植株表达检测，总RNA从50天大小的植株用上述相同方法获得，反转录后用RT-PCR方法分析目的基因的表达。

所用引物为OBF：5‘-ATCAGCGAGCGAATCAGGAAGC-3’

和RHLH1R：5‘-CACTGCTCCATTGCCCTTTGCT-3’。

扩增条件为2 min / 95℃；35 cycles (30 sec / 94℃, 30 sec / 60℃, 30 sec / 72℃); 5 min / 72℃。实时定量PCR应用SYBR方法按照SYBR Green PCR 预混液(Tiangen,北京)试剂盒说明操作,并用２^{－△△ Ct}方法进行相对定量分析，重复3次。以水稻OsActin1为内参进行相对定量分析。引物为ActinF: 5‘-GACTCTGGTGATGGTGTCAGC-3’和ActinR: 5‘-GGCTGGAAGAGGACCTCAGG-3’。实时定时 PCR扩增条件为：2 min / 95℃; 40 cycles (20 sec / 95℃, 30 sec / 59℃, 30 sec / 68℃)。

2.2.5 GUS融合表达载体构建

为研究OsFHB1基因时空表达特异性，用OsFBH1基因特异引物扩增OsFBH1基因启动子，所用引物序列为：PCR反应体系如下：

FBHGUSF：5’-CCGCTGCAGCTTTGTTACCACAATATTAA-3’

和FBHGUSR：5’-ATAGAATTCGGCCGCCCACACAACCTCAA-3’。

扩增的PCR产物回收后用用相应的酶切位点和pCAMBIA1391Z空载体进行连接，然后转化大肠杆菌，通过酶切鉴定和PCR鉴定后，阳性克隆进行测序分析，确保无碱基突变后将导入农杆菌中转化水稻，产生转基因植株。扩增条件为1 min / 95℃； 30 cycles (30 sec / 94℃, 30 sec / 57℃, 2 min / 72℃); 5 min / 72℃。

2.2.6 GUS染色

（1）取检测正确的GUS报告转基因植株的幼苗极其根、叶、分生组织以及成熟的根、茎、叶、不同时期的穗、花器官等组织放入GUS染液中；于25-37℃保温1小时至过夜。

（2）叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2-3次，到阴性对照呈白色。

（3）肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为GUS表达位点。

2.2.7 GFP融合载体构建

cDAN从15天大小的水稻幼苗中通过RT-PCR方法获得，设计一对引物扩增OsFBH1基因ORF序列(去除终止密码子序列)，使基因的ORF与载体的GFP处于同一阅读框，在引物设计中引入SmaI和SalI两个酶切位点用于与载体中相应酶切位点连接。用于扩增的引物序列为：FBHGFPF: 5’-TTACCCGGGGAGAGGAGAGAAGGGGATGT-3’和FBHGFPR: 5’- GAGGTCGACGCCAGAGTACTGCTGATGCT -3’。扩增的PCR产物用SmaI和SalI双酶切后连接到用相同酶酶切的p35S-GFP载体上，连接后转化大肠杆菌，通过酶切鉴定和PCR鉴定后，阳性克隆进行测序分析，确保无碱基突变。测序正确的载体进行瞬时表达。PCR扩增条件为30sec / 98℃； 35 cycles (10 sec / 98℃, 15 sec / 63℃, 90sec / 72℃); 5 min / 72℃。

3. 结果

3.1　过表达转基因植株的获得及检测

水稻种子的成熟胚通过诱导产生愈伤组织，经继代培养后，能够分裂出更多组织细胞，将之前已经构建好的过表达载体，利用农杆菌介导的遗传转化，浸染愈伤组织中，再用含有筛选标记基因相应抗生素的培养基中进行筛选，28天后，将筛选获得的长势良好的愈伤移入分化培养基中，长出绿点并成苗后再将长势良好的幼苗切除根部后移入生根培养基，等培养至大量根产生。即可将幼苗移入大田种植（图1A-D）。

为了验证转基因植株OsFBH1是否转化成功，我们从田间收集单株叶片，利用CTAB法提取转基因植株基因组DNA，以野生型日本晴和ddH₂O做阴性对照，重组质粒做阳性对照，用标记基因HPT对转基因植株进行PCR分子检测，其中成功转化的转基因植株可以扩增出和重组质粒相同大小的目的条带，阴性对照不能扩出目的条带（图1E）。统计检测结果表明：10个独立株系118株过表达转基因植株中，92株为转基因阳性植株，阳性率为78%（图1E）。

3.2 OsFBH1过表达转基因植株的表型分析

我们对过表达转基因植株的表达进行了检测，结果表明，其中1-6号植株目的基因的表达量均有不同程度的上升，2号植株过量表达程度最高，7、8号植株目的基因表达与野生型没有明显差异（图2A），表明过表达载体正常工作。同时，我们对田间过表达植株的表型进行了观察和分析，结果表明，与野生型相比，过表达转基因植株表现为晚抽穗，分蘖多（图2B）。研究表明过表达OsFBH1延迟了水稻的抽穗日期，增加水稻的分蘖。

3.3 OFBH1组织特异性表达分析

为了揭示OFBH1基因的表达模式，我们构建了目的基因与GUS融合表达载体。将构建好的重组载体pOsFBH1::GUS利用农杆菌介导的转基因方法转入野生型水稻日本晴获得转基因植株。收集转基因植株的根、茎、叶、叶鞘、分生组织、不同时期的穗，将组织用GUS染液进行染色，经酒精脱色后，肉眼或显微镜观察染色部位。结果表明，目的基因在水稻的根、茎、愈伤组织、叶、叶鞘、茎顶端分生组织、居间分生组织及不同时期的幼穗中都有表达（图3A-M），在叶片及居间分生组织表达量较高（图3E、M及H，I，J中箭头所示）。花器官中主要在有绿色部分的内外稃中表达，而在䧳雄蕊中检测不到表达（图3G，K，L中箭头所示）。对于整个幼苗，在叶片中有较高表达，但在根中表达较低（图3M）。为了探索目的基因在叶片组织细胞中的表达，我们将叶片横切，制成石蜡切片，放入显微镜下观察。结果表明，目的基因主要在叶肉细胞中表达（图3N，O中箭头所示）。综上所述，目的基因OsFBH1主要在叶片中表达，这一点与光周期相关基因的表达吻合。

为了进一步验证GUS染色的结果，我们用realtime-PCR分析目的基因OsFBH1在不同组织器官中的表达。收集的根、茎、叶、叶鞘和不同时期幼穗，提取总RNA，反转录后进行实时定量PCR分析，结果表明OsFBH1基因在不同组织中均有表达，但是，在叶片中表达量最高，而茎、茎顶端分生组织和幼穗表达较低（图3P）。这一结果同之前的GUS染色结果相符。证明该目的基因的确主要在叶片中表达。

3.4 OsFBH1亚细胞定位

为了探索OsFBH1的亚细胞定位，我们构建了OsFBH1与GFP融合载体，将构建好的GFP融合载体pOsFBH1::GFP转入农杆菌EHA105，将含有融合载体的农杆菌注射到烟草叶片中进行瞬时表达，并用空载体pCAMBIA35S-GFP作为对照；2-3d后再用DAPI染色，将染色完成的载玻片放入激光共聚焦显微镜下成像。结果显示：作为对照的空载体没有特异性表达，在细胞中均有表达（图4D-F），而目的基因OsFBH1细胞核中特异表达 (图4A-C)；这一结果说明，转录因子OsFBH1是一个核定位蛋白。

本发明还利用基因枪将融合载体pOsFBH1::GFP导入洋葱细胞中进行瞬时表达，并以空载体pCAMBIA35S-GFP作为对照；24h后放入激光共聚焦显微镜下成像。结果同烟草细胞瞬时相同：作为对照的空载体没有特异性表达，在细胞中均有表达（图4J-L），而目的基因OsFBH1融合信号在细胞核中特异表达 (图4G-I)；这一结果说明，OsFBH1定位于细胞核中，是一个核定位蛋白。

SEQUENCE LISTING

<110> 天津师范大学

<120> OsFBH1转录因子在调控抽穗期方面的应用

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2020

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atgtacggct cgccggtttc caaggatctg aacctcccgg tgcagccgcc ggcgatgagc 60

tcgtcgggct tgctgcggta cagatcggcg ccgagcacgc tgctcgccga gttctgcgac 120

gacttcctcc cgcccgccgc cgcgccccgc gccgccagcc ccgacgccga caacgtcttc 180

tcccgcttcc tcgccgacca ccagatccgt gacaagtctc cccccgccac cgccgccgcc 240

gccgccgctg ccgctcactt ccccgacgac cccaccatgg ccacccagca ccaccaccag 300

cagcagatga tgttccagca ccacccgcag cagatggcct ctgtcgaggg gctctaccgc 360

accgtcagct ccaccgggat tgacgccgcc accgccgccg ccaacgccgc cggtggcggc 420

ggcggcgggc tgctccggca gagtagctcg cccgccggat tcctcaatca tttgaacatg 480

gacaacggtt agtagtacta cttccttaat tctctccttc ttttggtaat ggtagttgca 540

cacgcctact acttgcttcg gcagcagcag caattattac tgttcttgct cgagttcttc 600

tcgggaacat ttccatttcc ggaactgagt cccgcactgt tcggtttcag ggtacgggag 660

catgctgcgg gcgggcatgg cggcagccgg cggtggggtg gggttcagga acggcgcgaa 720

cgccgccgcc gcggccgact cccccggcgg cagcgggggc aggctgaagg ggcagctcag 780

cttctcgtcg cggcagggct cgctcatgtc gcagatctcg gagatggaca gcgaggagct 840

cggtgggagc agccccgagg gcgccggtgg cggcggcggc ggcggtggcc ggggttacct 900

ctccgggtac ccgatgagct ccgggtggga ggagtcgtcg ctcatgtcgg acacgaacat 960

ctccggcgtg aagcgccagc gcgactcgtc ggagccgtcc caggttcgat tcacaaaatt 1020

cccatcgatt ccgttgatag atgatttgta caagaaactg acgacgacga tttgtggcgg 1080

tggcgcagaa cggcggcggc ggcggcggcc tggcgcacca gttcagcctg ccgaagacct 1140

cgtcggagat ggcggccatc gagaagttcc tccagttcca ggacgcggtg ccctgcaaga 1200

tccgcgccaa gcgcggctgc gccacgcacc cgcgcagcat cgccgagcgg gtaaaaaaca 1260

acaacaaaat tcctcttcac cctcctcacc gcaccgcaca gcacaaattc gttaatatca 1320

aacgagcagc agcagccagc aggtgactga tctgatcccc gtgatgttga tctttgccat 1380

aggtgaggag gacaaggatc agcgagcgaa tcaggaagct gcaagaactc gtgccaaaca 1440

tggacaaggt actgatgagt actacacctc tctctctctc tctctctctc tctctcttcc 1500

ccaataggca atagaacagt gtttggttag caaatagtag cagtagtagc agcaaatctg 1560

caaatgtgca gtacaaggac cactccaaaa ttaacctgtc cgaaacctga aacgtttccg 1620

ttttcctgca gcaaaccaac actgctgaca tgctggattt ggctgttgac tacatcaagg 1680

atcttcagaa gcaggtcaag gtaagctgat tagctataat ctccctttta atcccgcaat 1740

taattagaac gccatctata tcatctgtag cttgtaatta gattagtcaa cctatcctgg 1800

ccactgaggt ccaaatcaac atggccgctt tgccctgtga ctgagggtga agggtacttt 1860

ttattggtct tatccaaagt tacgctgcac aatccacaga tccagtactg agatttgaca 1920

gttactcatt gcaaattgtc atctctgttc atcgcaggga ttaaacgaca gccgagctaa 1980

ctgcacctgc tcagcgaagc atcagcagta ctctggctag 2020

<210> 2

<211> 399

<212> PRT

<213> OsFBH1的编码氨基酸序列

<400> 2

Met Tyr Gly Ser Pro Val Ser Lys Asp Leu Asn Leu Pro Val Gln Pro

1 5 10 15

Pro Ala Met Ser Ser Ser Gly Leu Leu Arg Tyr Arg Ser Ala Pro Ser

20 25 30

Thr Leu Leu Ala Glu Phe Cys Asp Asp Phe Leu Pro Pro Ala Ala Ala

35 40 45

Pro Arg Ala Ala Ser Pro Asp Ala Asp Asn Val Phe Ser Arg Phe Leu

50 55 60

Ala Asp His Gln Ile Arg Asp Lys Ser Pro Pro Ala Thr Ala Ala Ala

65 70 75 80

Ala Ala Ala Ala Ala His Phe Pro Asp Asp Pro Thr Met Ala Thr Gln

85 90 95

His His His Gln Gln Gln Met Met Phe Gln His His Pro Gln Gln Met

100 105 110

Ala Ser Val Glu Gly Leu Tyr Arg Thr Val Ser Ser Thr Gly Ile Asp

115 120 125

Ala Ala Thr Ala Ala Ala Asn Ala Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Leu

130 135 140

Leu Arg Gln Ser Ser Ser Pro Ala Gly Phe Leu Asn His Leu Asn Met

145 150 155 160

Asp Asn Gly Tyr Gly Ser Met Leu Arg Ala Gly Met Ala Ala Ala Gly

165 170 175

Gly Gly Val Gly Phe Arg Asn Gly Ala Asn Ala Ala Ala Ala Ala Asp

180 185 190

Ser Pro Gly Gly Ser Gly Gly Arg Leu Lys Gly Gln Leu Ser Phe Ser

195 200 205

Ser Arg Gln Gly Ser Leu Met Ser Gln Ile Ser Glu Met Asp Ser Glu

210 215 220

Glu Leu Gly Gly Ser Ser Pro Glu Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly

225 230 235 240

Gly Gly Arg Gly Tyr Leu Ser Gly Tyr Pro Met Ser Ser Gly Trp Glu

245 250 255

Glu Ser Ser Leu Met Ser Asp Thr Asn Ile Ser Gly Val Lys Arg Gln

260 265 270

Arg Asp Ser Ser Glu Pro Ser Gln Asn Gly Gly Gly Gly Gly Gly Leu

275 280 285

Ala His Gln Phe Ser Leu Pro Lys Thr Ser Ser Glu Met Ala Ala Ile

290 295 300

Glu Lys Phe Leu Gln Phe Gln Asp Ala Val Pro Cys Lys Ile Arg Ala

305 310 315 320

Lys Arg Gly Cys Ala Thr His Pro Arg Ser Ile Ala Glu Arg Val Arg

Arg Thr Arg Ile Ser Glu Arg Ile Arg Lys Leu Gln Glu Leu Val Pro

340 345 350

Asn Met Asp Lys Gln Thr Asn Thr Ala Asp Met Leu Asp Leu Ala Val

355 360 365

Asp Tyr Ile Lys Asp Leu Gln Lys Gln Val Lys Gly Leu Asn Asp Ser

370 375 380

Arg Ala Asn Cys Thr Cys Ser Ala Lys His Gln Gln Tyr Ser Gly

385 390 395

<210> 3

<211> 1200

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

atgtacggct cgccggtttc caaggatctg aacctcccgg tgcagccgcc ggcgatgagc 60

tcgtcgggct tgctgcggta cagatcggcg ccgagcacgc tgctcgccga gttctgcgac 120

gacttcctcc cgcccgccgc cgcgccccgc gccgccagcc ccgacgccga caacgtcttc 180

tcccgcttcc tcgccgacca ccagatccgt gacaagtctc cccccgccac cgccgccgcc 240

gccgccgctg ccgctcactt ccccgacgac cccaccatgg ccacccagca ccaccaccag 300

cagcagatga tgttccagca ccacccgcag cagatggcct ctgtcgaggg gctctaccgc 360

accgtcagct ccaccgggat tgacgccgcc accgccgccg ccaacgccgc cggtggcggc 420

ggcggcgggc tgctccggca gagtagctcg cccgccggat tcctcaatca tttgaacatg 480

gacaacgggt acgggagcat gctgcgggcg ggcatggcgg cagccggcgg tggggtgggg 540

ttcaggaacg gcgcgaacgc cgccgccgcg gccgactccc ccggcggcag cgggggcagg 600

ctgaaggggc agctcagctt ctcgtcgcgg cagggctcgc tcatgtcgca gatctcggag 660

atggacagcg aggagctcgg tgggagcagc cccgagggcg ccggtggcgg cggcggcggc 720

ggtggccggg gttacctctc cgggtacccg atgagctccg ggtgggagga gtcgtcgctc 780

atgtcggaca cgaacatctc cggcgtgaag cgccagcgcg actcgtcgga gccgtcccag 840

aacggcggcg gcggcggcgg cctggcgcac cagttcagcc tgccgaagac ctcgtcggag 900

atggcggcca tcgagaagtt cctccagttc caggacgcgg tgccctgcaa gatccgcgcc 960

aagcgcggct gcgccacgca cccgcgcagc atcgccgagc gggtgaggag gacaaggatc 1020

agcgagcgaa tcaggaagct gcaagaactc gtgccaaaca tggacaagca aaccaacact 1080

gctgacatgc tggatttggc tgttgactac atcaaggatc ttcagaagca ggtcaaggga 1140

ttaaacgaca gccgagctaa ctgcacctgc tcagcgaagc atcagcagta ctctggctga 1200

Claims (3)

1.OsFBH1转录因子的核苷酸序列，其特征在于OsFBH1基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，OsFBH1编码一个399个氨基酸的蛋白质序列为SEQ ID No 2所示。

2.权利要求1所述OsFBH1转录因子核苷酸序列的mRNA序列为SEQ ID No.3所示。

3.权利要求1或2所述OsFBH1转录因子的核苷酸序列在制备调控水稻抽穗期、提高水稻产量方面的应用。