CN105188721A - 钨（vi）盐用于治疗非糖尿病哺乳动物的雌性不育症的用途 - Google Patents

Abstract

本发明包括带有药学或兽医学可接受的阳离子基团的治疗有效量的钨（VI）盐或其溶剂化物在制备用于治疗非糖尿病哺乳动物的雌性不育症的药品中的用途。

Description

钨（VI）盐用于治疗非糖尿病哺乳动物的雌性不育症的用途

技术领域

本发明涉及生育领域。具体而言，涉及钨（VI）盐用于治疗雌性不育症的用途。

背景技术

不育症可定义为在1年常规、无保护的性交后仍无法受孕的病症。具体而言，雌性不育症可以涉及无法受孕和/或无法怀孕至足月。

虽然估计不育症患病率中存在困难，但通常认为在某一生育年龄阶段，每四名女性中就有一个患有不育症。

女性不育症的主要原因包括排卵功能障碍，生殖系统病理，卵母细胞质量下降和伴随年龄增加而来的卵泡消耗。但是，仍有相当比例的女性患有原因不明的不育症，也称为特发性不育症，其可能原因之一可能涉及着床过程中的缺陷。

尤其是，在许多女性不育症的生物原因中，显著突出的原因涉及调控卵泡发育、排卵、未成熟卵细胞（卵母细胞）迁移以及后续受孕和合子在子宫壁着床的激素刺激失调。此全过程受到特定内分泌器官的激素分泌调控，例如脑下垂体、下丘脑和甲状腺。

因此，不育症的主要成因中，显著突出的是可能改变合子着床的排卵功能障碍，例如缺少排卵，以及生殖系统和子宫的解剖学和功能性障碍的相关病理原因。

已知对雌性不育症的不同疗法，包括用于治疗激素问题相关不育症（例如排卵障碍）的药品给药，以及体外受精和子宫内受精技术。

但是，上述疗法所能获得的受孕比例具有一定限制。因此，例如，据观察，通过克罗米芬柠檬酸盐（对称二苯代乙烯类药物）给药治疗女性排卵不规律或不排卵，能够高比例地恢复排卵，但受孕几率仍低，等于或小于50%。

另一方面，体外受精疗法在卵细胞受精阶段非常有效。但是，转移率（胚胎在子宫壁中着床）低，由此每个体外受精周期中进行多个胚胎转移，导致高比例多胎妊娠的高风险。

最后，已知代谢失调（例如糖尿病或肥胖症）会伴随着生育力受限。已知肥胖症或糖尿病雌性小鼠在血糖过多、胰岛素血症和/或体重方面的部分或全部康复会带来生育力的提高。

不同的药物疗法，例如二甲双胍或钨（VI）盐，甚至是生活方式改变，已被证实会改善糖尿病或胰岛素失调，例如胰岛素缺乏或胰岛素耐受性，获得了部分或完全恢复生殖功能的效果。对钨酸钠的特殊案例而言，已知以注射链脲霉素诱导胰岛素缺乏和糖尿病的大鼠，在钨酸钠长期治疗（10周）下，因糖尿病部分康复而部分恢复了血清胰岛素水平。由此，当糖尿病部分康复的上述雌性大鼠与健康雄性大鼠交配时，据观察，除糖尿病部分康复外，雌性大鼠还回复了部分生殖能力。尤其是，据观察，钨酸钠治疗后糖尿病部分康复的雌性小鼠相对于阳性刮宫数的生育百分比增加到66%，该百分比低于无糖尿病的雌性小鼠（100%）(cf.J.Ballesteret.ai,"Tungstateadministrationimprovesthesexualandreproductivefunctioninfemaleratswithstreptozotocin-induceddiabetes",HumanReproduction,2007,vol.22,pp.2128-2135)。

综上所述，虽然雌性不育症治疗已有近战，仍有目前疗法无效因而无法治愈的患者。因此，仍需探索具有更高有效性的新疗法来治疗雌性不育症。

发明内容

发明人发现，使用带有药学或兽医学可接受的阳离子基团的治疗有效量的钨（VI）盐，或其溶剂化物，可用于制备用于治疗非糖尿病哺乳动物的雌性不育症的药品的用途。

虽然已知钨酸钠可以通过令血糖水平正常化，从而部分恢复糖尿病雌性小鼠的生殖功能障碍，但现有技术并未记载或暗示钨酸钠自身具有可用于治疗雌性不育症的雌性生殖系统功能活性。

应当指出，现有技术中，钨酸钠表现出对令血糖水平正常化的有效性。尤其是，文件EP1400246公开了钨（VI）化合物的药物组合物，用于降低1型或2型糖尿病（IDDM）病人的血糖过高。

本发明的发明人展示了钨（VI）盐是用于不通过改变葡萄糖代谢或体重来恢复排卵和/或提高卵子着床的有效疗法，由此，钨（VI）盐给药是用于治疗非糖尿病雌性哺乳动物不育症的有效疗法。

该方面还可以配制为带有药学或兽医学可接受的阳离子基团的治疗有效量的钨（VI）盐，或其溶剂化物，用于制备用于治疗非糖尿病哺乳动物的雌性不育症。其还涉及用于治疗非糖尿病雌性哺乳动物不育症伴随的疾病或病症的方法，包括用带有药学或兽医学可接受的阳离子基团的治疗有效量的钨（VI）盐，或其溶剂化物，向需要所述治疗的哺乳动物给药。

下文中将描述带有药学或兽医学可接受的阳离子基团的治疗有效量的钨（VI）盐或其溶剂化物用于制备用于治疗非糖尿病哺乳动物的雌性不育症的药品的用途的优选特定实施例，以及用于治疗非糖尿病哺乳动物的雌性不育症的带有药学或兽医学可接受的阳离子基团的治疗有效量的钨（VI）盐或其溶剂化物的优选特定实施例，以及用于治疗非糖尿病雌性哺乳动物不育症伴随的疾病或病症的方法。此外，本发明还包括本申请所述优选特定实施例的所有可能组合。

本申请所称的“药学或兽医学可接受的阳离子基团”指的是能够形成治疗有效钨（VI）盐且适用于药学或兽医学疗法的任何可接受的无毒无机或有机阳离子。

钨酸根阴离子总是伴随着阳离子基团，从而形成中性戊酸盐。在本发明的一个实施例中，钨（VI）盐是包括选自碱性阳离子或碱土阳离子的阳离子基团的盐。所述盐的阳离子基团优选为选自钠、钾、镁和钙。优选地，钨（VI）盐是钨（VI）的钠盐。

本发明还包括钨（VI）盐的溶剂化物及其用于制备用于治疗非糖尿病哺乳动物的雌性不育症的药品的用途。本发明的一个实施例中，所述溶剂化物时上述钨（VI）盐的二水合物。

优选地，钨（VI）盐的溶剂化物是市售的钨酸钠二水合物。

本发明的一个实施例中，哺乳动物是人类。在一个优选实施例中，本发明的钨（VI）盐可用于制备用于治疗伴有下丘脑-垂体轴的变化的雌性不育症的药品的用途。所述伴有下丘脑-垂体轴的变化的疾病或病症包括多囊卵巢综合征，代谢综合征，高催乳素血症，子宫内膜异位症，饮食失调，肥胖症，甲状腺功能减退症，多发性硬化症，类风湿关节炎，红斑狼疮，肝硬化，乳糜泻，慢性肾功能衰竭和特发性病因等等。

在一个优选实施例中，本发明的钨（VI）盐可用于制备治疗特发性雌性不育症的药品。所述“特发性不育症”或“无表面原因的不育症”概念含义相同并可交换使用。所述概念指的是标准不育试验中无法查明不孕原因的不育症案例。

在又一优选实施例中，本发明的钨（VI）盐可用于制备治疗饮食失调引起的雌性不育症的药品。所述饮食失调伴有下丘脑-垂体轴的变化，包括神经性食欲缺乏和暴食症等等。

术语“排卵”应理解为女性的卵子释放至子宫的过程，术语“恢复排卵”应理解为重建月经周期的过程，即在不排卵（停止排卵）或排卵不规律（排卵过少）的女性中重建规律性地释放卵子至子宫的过程。这意味着，本发明的钨（VI）盐可用于制备治疗无法排卵（停止排卵）或需要提高排卵效率（排卵过少）的女性的雌性不育症的药品。

如实施例的表1中清楚显示，钨（VI）盐的给药能够在100%的接受治疗的非糖尿病雌性小鼠中迅速恢复发情周期（治疗开始后仅7天内）。本发明的钨（VI）盐给药期间恢复了排卵，而没有改变受治疗雌性小鼠的体重或血糖（参见表3和表4）。因此，本发明的一个实施例涉及使用上述钨（VI）盐或其溶剂化物，用于制备治疗雌性不育症的药品的用途，包括恢复排卵。

另一方面，如实施例的表2中的实验结果清楚显示，钨（VI）盐给药能在80%的受治疗恢复了正常发情周期的非糖尿病小鼠中得到平均5个着床胚胎或出生幼崽。因此，本发明的一个实施例涉及使用本发明的上述钨（VI）盐或其溶剂化物，用于制备治疗雌性不育症的药品的用途，包括提高子宫壁上的合子着床。

术语“提高合子着床”应理解为提高卵细胞进入子宫着床效率的过程。这意味着，本发明的钨（VI）盐可用于提高在子宫着床的卵子数量，或提高受孕成功率，而不会提高多重妊娠风险。

本发明的一个实施例涉及使用上述钨（VI）盐或其溶剂化物，用于制备用于制备治疗特发性雌性不育症的药品，包括恢复排卵和提高子宫壁的合子着床。

因此，使用钨（VI）盐可用于通过提高受孕率而治疗雌性不育症。本发明的疗法可用作排卵正常化和/或提高卵子子宫壁着床的现有疗法的替代性药物疗法，或作为子宫内受精和/或体外受精技术的关联疗法，以提高转移阶段的胚胎着床率。

本发明的一个实施例涉及使用钨（VI）盐或其溶剂化物，其中所述钨酸盐是药学或兽医学组合物的一部分，所述组合物还包含药学或兽医学可接受的赋形剂或载体。本发明的一个实施例中，所述药学或兽医学组合物是用于口服的组合物，尤其是固体口服组合物（例如片剂或胶囊）和液体口服组合物（例如口服液或口服混悬液）。

术语“药学或兽医学可接受的赋形剂或载体”指的是适用于药学或兽医学技术中制备医用组合物的赋形剂或载体。所述成分，赋形剂或载体，必须与组合物的其他成分兼容。其还必须适用于与人类或动物组织或器官接触，而无过分毒性、刺激性、过敏反应或其他免疫原性问题或并发症，具有合理的风险/收益比率。

钨（VI）盐已用于肥胖症或糖尿病的治疗。本申请所述的“治疗有效量”指的是足以治疗本申请所述的雌性不育症的钨（VI）盐给药剂量。本申请所述钨（VI）盐特定剂量决定于病例的具体条件，包括例如给药的盐、给药方案、给药的药学或兽医学组合物，以及患者特征（包括身高、体重、年龄等），以及疾病的性质和节段。例如，可以上述钨（VI）盐使用量可以在50-500mg/kg/天。

通常，在啮齿动物中，用于治疗上述雌性不育症的钨（VI）盐的治疗有效量可以在100-350mg/kg/天。优选地，该治疗有效量在150-280mg/kg/天。

本发明的实施例中，展示了用于治疗称为IRS-/-的动物模型中的非糖尿病哺乳动物中的雌性不育症的钨（VI）盐有效剂量。所述雌性小鼠是良好的非糖尿病不育症小鼠模型。此外，该动物模型还是非糖尿病不育症女性的良好模型。

本说明书和权利要求书中，术语“包括”及其变体不应理解为排除其他技术特征、添加剂、成分或步骤。此外，术语“包括”包含“由其组成”。对于本领域技术人员而言，应当理解，可以部分从本说明书且部分从本发明的实施中理解本发明的其他目的、有点和特征。以下实施例仅用于例证说明目的，并不限制本发明的任何方面。

具体实施方式

1.动物模型（IRS-/-雌性小鼠）说明

IRS2^-/-小鼠模型是敲除了Irs2基因的小鼠模型（Burkset.a/.,"IRS-2pathwaysintegratefemalereproductionandenergyhomeostasis",Nature.2000,vol.407,pp.377-382）。Irs2基因删除翻译成为与生育力和碳水化合物代谢相关的明显雌雄二型。

该模型的雄性小鼠从年幼即表现出胰岛素耐受性和严重的高血糖症。相反，雌性小鼠则保持相对正常血糖，直至稍后年龄（4-5个月）。

IRS2^-/-雌性小鼠表现出低卵泡发育和持续不排卵，伴随着大多数小鼠无发情周期。

IRS2^-/-雌性小鼠的受孕率为9%，与之相比，IRS^wt（IRS-2^+/+野生型）雌性小鼠的受孕率为100%。

2.排卵、着床及受孕研究

A.实验动物

10只6-8周龄的IRS2^-/-雌性小鼠。

6只6-8周龄的“野生型”（IRS^wt）雄性小鼠。

雄性和雌性小鼠分别在正常条件下笼养，即12小时光/暗循环，并控制湿度和温度。实验动物以标准饲喂饮食自愿进食（亦称为自由采食）。

B.试验方法

预处理阶段

适应一段时间后，以每笼4-6只小鼠分组笼养IRS2^-/-雌性小鼠。在预处理阶段（2周），给予动物无钨酸饮用水。

治疗阶段

预处理阶段（治疗第0天）后，以2mg/ml钨酸钠二水合物（购自CarloErba）的蒸馏水溶液在饮用水（自由采食）中给药4周，然后处死动物。小鼠每日消化的钨酸钠剂量为约180mg/kg体重。

交配

治疗阶段头三周后，将IRS2^-/-雌性小鼠持续与IRS^wt雄性小鼠配对笼养。

每日观察小鼠，检查受孕或生育迹象。4周后，在各笼间交换雄性小鼠，并将其留在笼中再4周。

保持雄性小鼠和雌性小鼠共同笼养的钨酸盐给药8周。该8周后，停止治疗，并将雄性小鼠和雌性小鼠再共同笼养4周。

处死

该阶段结束后，处死雌性小鼠并进行活组织切片，搜索受孕迹象。

C.实验结果

排卵实验结果

预处理阶段期间以及治疗头三周期间，第-8、-5、-2、-1、7、8、14、15、22天在随机选定的6只雌性小鼠上进行阴道涂片，以确定其所处的发情周期阶段。

用巴斯德移液枪向小鼠阴道引入1-2ml盐水溶液，用同一移液枪采集阴道流出物并置于玻片上。风干后，以巴氏（Papanicolaou）技术固定并染色。

巴氏技术包括对固定在玻片上的阴道涂片染色，步骤如下：

-在50%v/v乙醇中浸没10次；

-在Harris苏木精溶液中浸没3分钟；

-以自来水冲洗；

-在酸性乙醇（1%盐酸）中浸没10次；

-以自来水冲洗；

-在95%v/v乙醇中浸没10次；

-在OG-6溶液中浸没30秒；

-在96%v/v乙醇中浸没10次；

-在曙红溶液中浸没1分钟；

-在96%v/v乙醇中浸没10次；

-在86%v/v乙醇中浸没10次；以及

-在二甲苯中浸没10次；

由接受过训练的技术员，使用单盲法代码对制品进行分析，以消除观察者误差。

鉴定样本处于如下哪个阶段：间情期、发情前期、发情期、发情后期、不动情期或无法评估。该4个阶段以4-6天进行循环，是正常发清周期的表现，而缺乏该循环并持续停留在不动情期、间情期或发情前期则是缺乏发清周期的表现。

实验中的10只雌性小鼠中，表1总结了在所述6只IRS2^-/-雌性小鼠中的阴道涂片上得出的发清周期阶段。

表1

发情周期的各阶段为：A-不动情期；D-间情期；P-发情前期；E-发情期；以及M-发情后期。

表1中的IRS2^-/-雌性小鼠阴道涂片所表明的发情周期阶段显示，在预治疗期间，所有小鼠均处于发情前期（P）或间情期（D），即不处于发情期。

但是，开始钨酸盐给药后，观察到IRS2^-/-雌性小鼠处于发情晚期，即发情期（E）和发情后期（M），这是恢复正常发情周期的表现。

上述结果表明，钨（IV）盐给药能够迅速（治疗第七天）恢复非糖尿病不育IRS2^-/-小鼠中100%受试小鼠的发情周期。

着床及受孕实验结果

B小组中所述方法的交配时期结束后，处死雌性小鼠并进行活体切片检查以发现受孕迹象。

表2中总结了治疗时期的鼠龄、是否受孕以及每只雌性小鼠的胚胎数目。

表2

表2的实验结果表明，未治疗IRS2雌性小鼠中的受孕率为9%，同时，以钨酸盐治疗的IRS2^-/-”雌性小鼠的受孕率增加到80%。

此外，上述结果还表明，每一雌性小鼠妊娠的平均幼崽/着床胚胎数量为约5只，该数量可看做与雌性小鼠幼崽数量相仿。

因此，表1和表2的实验结果表明，钨（IV）盐是用于恢复排卵和/或提高卵细胞着床的有效疗法。因此，本发明中所述的钨（IV）盐给药对雌性生殖系统具有直接效果，因而是用于治疗非糖尿病雌性哺乳动物不育症的有效疗法。

3.血糖和体重研究

A.实验动物

6只IRS2^-/-雌性小鼠，6-8周龄。

在正常条件下笼养雌性小鼠，即12小时光/暗循环，并控制湿度和温度。实验动物以标准饲喂饮食自愿进食（亦称为自由采食）。

B.实验方法

治疗阶段

适应一段时间后，预处理阶段（治疗第0天）后，以2mg/ml钨酸钠二水合物（购自CarloErba）的蒸馏水溶液在饮用水（自由采食）中给药12天。

C.实验结果

在治疗期间的第0、2、5、7、9和12天监控体重，且在前述日期中禁食6小时后从尾静脉抽血，使用葡萄糖传感器测定血糖（RocheAccuTrendGlucoseSensor.Mannheim,Germany）。

表3总结了血糖水平（单位：mg/dl），表4总结了小鼠在实验期间的体重（单位：g）。

表3

表4

图3和图4的实验结果表明，在钨酸钠给药期间，治疗开始后12天未观察到体重变化或血糖变化，而同一期间内，受试雌性小鼠已经从治疗第7天内疚成功重建了排卵（参见表1）。

因此，表1-4中的实验结果表明，钨（IV）盐是用于不通过体重改变且碳水化合物代谢变化而恢复排卵和/或提高卵细胞着床的有效疗法。因此，本发明中所述的钨（IV）盐给药对雌性生殖系统具有直接效果，因而是用于治疗非糖尿病雌性哺乳动物不育症的有效疗法。

Claims (15)

1.治疗有效量的钨（VI）盐或其溶剂化物在制备用于治疗非糖尿病哺乳动物的雌性不育症的药品中的用途，其中所述钨（VI）盐具有药学或兽医学可接受的阳离子基团。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述哺乳动物为人类。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述阳离子基团是碱性阳离子或碱土阳离子。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述阳离子基团选自：钠、钾、镁和钙。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述钨（VI）盐是钨（VI）的钠盐。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其特征在于，所述溶剂化物为二水合物。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的用途，其特征在于，所述雌性不育症的治疗包括恢复排卵。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的用途，其特征在于，所述雌性不育症的治疗包括提高子宫壁上的受精卵着床。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的用途，其特征在于，所述雌性不孕症的发生伴有下丘脑-垂体轴的变化。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述下丘脑-垂体轴的变化选自：多囊卵巢综合征，代谢综合征，高催乳素血症，子宫内膜异位症，饮食失调，肥胖症，甲状腺功能减退症，多发性硬化症，类风湿关节炎，红斑狼疮，肝硬化，乳糜泻，慢性肾功能衰竭和特发性病因。

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述下丘脑-垂体轴的变化是特发性病因。

12.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述饮食失调选自神经性食欲缺乏和暴食症。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的用途，其特征在于，所述钨（VI）盐或其溶剂化物是药学或兽医学组合物的一部分，所述组合物还包含药学或兽医学可接受的赋形剂或载体。

14.根据权利要求13所述的用途，其特征在于，所述药学或兽医学组合物是用于口服的组合物。

15.根据权利要求14所述的用途，其特征在于，所述用于口服的组合物为液体组合物。