CN105168232A - 一种琼胶寡糖在制备降脂药物中的应用 - Google Patents

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本发明公开了一种琼胶寡糖在制备降脂药物中的应用，所述琼胶寡糖分子量为5～1.5kDa，结构为-G-[A-G]n-，n为正整数，0≤n≤31，G代表D-半乳糖，A代表3,6-内醚半乳糖；本发明提供一种琼胶寡糖在制备降脂药物中的应用，开拓了琼胶寡糖新的应用领域；本发明所述琼胶寡糖能够降低血糖，降解皮下脂肪，缓解修复高脂饮食诱导的脂肪肝等问题，从而实现降脂减肥的功能；琼胶寡糖作为降脂药物对人体无任何毒副作用，具有良好的应用前景。

Description

一种琼胶寡糖在制备降脂药物中的应用
(一)技术领域
本发明涉及一种琼胶寡糖的应用，特别涉及一种琼胶寡糖在制备降脂药物中的应用。
(二)背景技术
近年来随着生活水平的提高、饮食结构的变化和部分人的自我预防保健的意识不强，使高血脂和脂肪肝等代谢性疾病的发病率呈上升的趋势，致使肥胖及相关代谢性疾病已成为全球面临的严重公众健康问题，尤其在发达及发展中国家。因此，寻找一种有效地降血糖血脂、减肥等多功能性物质是亟待解决的问题。
琼胶是一种海洋红藻来源的多糖，主要由半乳糖和3,6-内醚半乳糖以α-(1,3)andβ-(1,4)交替连接组成，琼胶因其特殊的凝结特性而作为食品添加剂广泛地应用于食品行业。琼胶寡糖是琼胶经过酶降解或是酸降解得到的分子量相对较小的琼胶，不仅具有功能性低聚糖的一般特性，还具有许多普通寡糖无法替代的生理功能特性，如较强的抗癌、抗氧化、抗炎、抗龋齿及抗淀粉老化等活性，是一种极具开发潜力的新型的海洋功能性低聚糖。目前关于琼胶寡糖(agaro-oligosaccharide，AOS)的研究大多处于结构、制备工艺、抗氧化活性和促进益生菌增长等方面，而琼胶寡糖对血脂血糖的影响的研究未见相关报道。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种琼胶寡糖的新应用，即琼胶寡糖在制备降血脂或皮下脂肪药物中的应用。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种琼胶寡糖在制备降脂药物中的应用。
本发明所述琼胶寡糖分子量为5～1.5kDa，结构为-G-[A-G]n-，n为正整数，0≤n≤31，G代表D-半乳糖，A代表3,6-内醚半乳糖。
进一步，本发明提供一种琼胶寡糖在制备降血脂药物中的应用。
进一步，本发明还提供一种琼胶寡糖在制备降解皮下脂肪药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明提供一种琼胶寡糖在制备降脂药物中的应用，开拓了琼胶寡糖新的应用领域；本发明所述琼胶寡糖能够降低血糖，降解皮下脂肪，缓解修复高脂饮食诱导的脂肪肝等问题，从而实现降脂减肥的功能；琼胶寡糖作为降脂药物对人体无任何毒副作用，具有良好的应用前景。
(四)附图说明
图1胰岛素浓度变化曲线图。
图2胰岛素抵抗能力柱形图。
图3小鼠肝脏切片照片，A-CT，B-HF，C-HFA。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1琼胶寡糖的制备与分子量测定
(1)琼胶寡糖的制备
将10g琼胶加入10L蒸馏水中(10mg/ml)加热溶解后，加入1mol/LHCl水溶液至HCl终浓度为0.1mol/L，60℃水浴加热反应1小时，反应结束后，向反应液中加入1mol/LNaOH水溶液中和反应液pH值至7，然后采用截留分子量为200～500的纳滤膜过滤除盐后，截留液50℃减压浓缩蒸干，获得琼胶寡糖8g，记为琼胶寡糖AO，结构为式(Ⅰ)所示。
(2)琼胶寡糖AO分子量的测定
取琼胶寡糖AO用0.1mol/LNa2SO4水溶液配制5mg/ml溶液，用TSK-GELG3000PWXL凝胶色谱柱(30cm×7.8mm)，采用HP1260型高效液相色谱仪分析测定，流动相为0.1mol/LNa2SO4水溶液，柱温25℃，流速0.5ml/min，采用示差检测器(G1362A，安捷伦公司)和多角度激光散射仪(DOWNHeleosⅡ，美国Wyatt公司)检测，经测量AO的分子量为5～1.5kDa，AO的结构为-G-[A-G]n-(n为正整数，0≤n≤31，G代表D-半乳糖，A代表3,6-内醚半乳糖)。
实施例2琼胶寡糖AO在降血脂和脂肪中的应用
(1)治疗型脂肪肝模型动物实验
①实验动物及分组：选用健康20±2gICR雄鼠，购于上海斯莱克动物中心。按随机分组的方法将小鼠分为三组，每组六只；第一组为正常组(CT)，第二组为模型组(HF)，第三组为实验组(HFA)。
②实验方法：取20±2gICR雄鼠30只，20只喂高脂高糖饲料，其余喂正常饲料，自由取食；6周后眼睑取血，测定血脂，选取12只血总胆固醇＞3.5mmol/L为脂肪肝模型小鼠，随机分成HF和HFA；造模成功后HF和HFA继续以高脂高糖饲料饲养，CT仍以正常饲料饲养；另，HFA灌胃0.3g/mL的琼胶寡糖AO的水溶液，每天两次，一次0.5mL，连续灌胃六周，CT和HF灌以等量的水；每两周记录体重一次。高脂高糖饲料质量组成为：70％普通饲料，10％猪油，10％蛋黄，8％白砂糖，2％胆固醇；普通饲料购于浙江省药检所。
③小鼠检测材料的取得和测定：a.血清：给小鼠禁食不禁水12h后，眼睑采血500μL全血，4℃，4000×g离心10min两次，小心取出全部血清，使用总胆固醇TCH试剂盒(购自浙江东欧诊断产品有限公司，型号YZB/浙09502013)按照说明书检测血清中的总胆固醇；b.糖耐量和胰岛素抵抗：给小鼠禁食不禁水12h后，按照3g/kg小鼠体重的量给小鼠灌蔗糖，用血糖检测仪测定0、30、45、60、90、120min的血糖浓度并在0、30、60min时采血，用ELASE小鼠胰岛素检测试剂盒(杭州肯图科技有限公司，型号CK-E20353M)检测胰岛素浓度，并计算出胰岛素抵抗为0-15min血糖曲线下面积和胰岛素曲线下面积之积，结果见图1和图2；c.腹脂：小鼠颈椎处死后，解剖取得小鼠腹部脂肪，称重保存；d.肝脏：取新鲜肝脏固定在10％甲醛固定液中脱水，HE染色，切片，观察并拍照，结果见图3，其中A-CT，B-HF，C-HFA，其余结果见表1所示。
表1治疗型脂肪肝模型各项指标变化综合表
④实验结果：表1中数据均采用SPSS17.0统计软件统计，表1中某些数值上方标号“1”表示与CT比较(P<0.01)，“2”表示与CT比较(P<0.05)，“3”表示与HF比较(P<0.05)；由表1可以看出，a.胆固醇：HFA组胆固醇含量有降低的趋势，与HF相比，差异显著(P<0.05)，而HF与CT相比差异极为显著(P<0.01)；b.蔗糖耐量：CT与HF的糖耐量曲线下面积有一定的差异，可能由于个体差异太大，统计结果为差异不显著；而HFA与HF相比，基本没有差异；c.空腹胰岛素血症：CT与HF相比差异极为显著(P<0.01)，与HFA相比差异显著(P<0.05)，HFA与HF相比差异亦极为显著(P<0.01)；d.胰岛素抵抗：CT与HF相比差异极为显著(P<0.01)，与HFA相比差异显著(P<0.05)，HFA与HF相比亦有显著差异(P<0.05)；e.腹脂/体重：CT与HF相比有显著差异(P<0.05)，HFA与HF相比亦有显著差异(P<0.05)。
上述结果表明，琼胶寡糖AO具有降低总胆固醇，空腹胰岛素血症，腹脂等降血脂、降解脂肪功能，而对血糖的影响没有明显的效果。
(2)预防型高血脂模型动物实验
①实验动物及分组：选用五周龄健康的C57BL/6雌鼠，购于上海斯莱克动物中心。按随机分组的方法将小鼠分为三组，每组六只：第一组为正常组(FCT)，第二组为模型组(FHF)，第三组为实验组(FHFA)。
②实验方法：小鼠正常饲养一周后，按上述方法随机分组；FCT继续以正常饲料饲养，其余以高脂饲料(D12492，美国)饲养；FHFA组以4g/kg的量给小鼠灌胃0.4g/mL的AO水溶液，如小鼠20g，则灌以200μL、0.4g/mL的AO水溶液，每天一次，连续灌胃八周。
③小鼠检测材料的取得和测定：a.血清：给小鼠禁食不禁水12h后，眼睑采血500μL全血，4℃，4000×g离心10min两次，小心取出全部血清，使用总胆固醇TCH试剂盒按照说明书检测血清中的总胆固醇；b.糖耐量和胰岛素抵抗：给小鼠禁食不禁水12h后，按照3g/kg小鼠体重的量给小鼠灌蔗糖，用血糖检测仪测定0、30、45、60、90、120min的血糖浓度并在0、30、60min时采血，用ELASE小鼠胰岛素检测试剂盒检测胰岛素浓度，并计算出胰岛素抵抗为0-15min血糖曲线下面积和胰岛素曲线下面积之积；c.腹脂：小鼠颈椎处死后，解剖取得小鼠腹部脂肪，称重保存；结果见表2所示。
表2预防型高血脂模型各项指标综合表
指标 CT HF HFA
体重(g) 20.60±1.19 22.98±1.391 20.25±1.003
胆固醇(mmol/L) 2.70±0.48 3.51±0.351 2.25±0.193
甘油三酯(mmol/L) 0.77±0.11 0.82±0.22 0.52±0.111,3
LDL(mmol/L) 0.23±0.06 0.25±0.07 0.18±0.044
腹脂/体重 0.014±0.005 0.037±0.0162 0.025±0.0072
④实验结果：表2中数据均采用SPSS17.0统计软件统计，表2中某些数值上方标号“1”表示与CT比较(P<0.01)，“2”表示与CT比较(P<0.05)，“3”表示与HF比较(P<0.01)，“4”表示与HF比较(P<0.05)；由表2可以看出，a.体重：HF与CT相比较有极显著差异(P<0.01)，HFA与HA相比亦有极显著差异(P<0.01)；b.胆固醇：HFA组胆固醇含量有降低的趋势，与HF相比，差异极为显著(P<0.01)，而HF与CT相比差异极为显著(P<0.01)；c.甘油三酯：CT与HF相比没有显著差异(P>0.05)，而HFA与HF和CT相比差异均极为显著(P<0.01)；d.低密度脂蛋白(LDL)：CT与HF相比没有显著差异(P>0.05)，但HFA与HF相比有显著差异(P<0.05)；e.腹脂/体重：CT与HF相比有显著差异(P<0.05)，HFA与CT相比亦有显著差异(P<0.05)，与HF比较却没有显著差异(P>0.05)。
上述结果亦可看出琼胶寡糖关于降血脂、降解皮下脂肪的功能。

Claims (4)

1.一种琼胶寡糖在制备降脂药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述琼胶寡糖分子量为5～1.5kDa，结构为-G-[A-G]n-，n为正整数，0≤n≤31，G代表D-半乳糖，A代表3,6-内醚半乳糖。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用为琼胶寡糖在制备降血脂药物中的应用。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用为琼胶寡糖在制备降解皮下脂肪药物中的应用。
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