CN105168130A - 一种肿瘤靶向聚合物胶束及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种肿瘤靶向聚合物胶束，包括对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体兰考韦泰修饰的第一聚合物载体，所述第一聚合物载体为聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物；还包括用于包覆所述第一聚合物载体形成核壳结构混合胶束的第二聚合物载体，且所述第二聚合物载体在肿瘤组织的偏酸性环境中不稳定，在pH值为6.0～6.5时解聚合，所述第二聚合物载体为聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物。本发明基于细胞膜成分磷脂酰乙醇胺在细胞有丝分裂M相时外向化及肿瘤组织偏酸性的基础上，实现了细胞周期特异性靶向载体的功能，是一种高效、低毒、肿瘤细胞靶向治疗的载体。本发明同时公开了上述一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法。

Description

一种肿瘤靶向聚合物胶束及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种肿瘤靶向聚合物胶束及其制备方法，属于肿瘤细胞靶向治疗载体及其制备方法技术领域。

背景技术

由于肿瘤组织内的肿瘤细胞、肿瘤血管内皮细胞、肿瘤淋巴管内皮细胞等表面会表达一些区别于正常组织的特异性受体，因此利用与受体有亲和力的配体修饰的材料会对肿瘤组织产生主动靶向性；采用配体修饰策略的靶向给药系统，即经受体介导的内吞途径入胞，是目前癌症治疗过程中能够有效提高对肿瘤的靶向效率和治疗效果的方法。

胶束是一种新型的给药方式，两亲性嵌段共聚物胶束指的是两亲性嵌段共聚物在溶液中自组装形成“核-壳”结构的纳米载体，胶束的核能包封疏水性药物并保护它们不被降解，壳可以起到稳定的作用。疏水性药物进入疏水核，亲水性药物进入亲水壳层，可显著提高药物的水溶解性，兼且可具有靶向作用、增溶作用、提高稳定性作用、长循环作用等，是一种极具潜力的新型给药体系。由不同嵌段聚合物、聚合物/表面活性剂自组装成的混合胶束或聚离子复合物胶束，相对于单一嵌段聚合物形成的胶束而言，物理稳定性和载药能力都得到了提高。

哺乳动物细胞在有丝分裂过程中除了细胞数量发生变化，细胞内的很多成分也会发生变化；比如组成细胞膜的重要组分磷脂，在有丝分裂过程中的组成以及位置会发生改变。其中，磷脂酰乙醇胺是哺乳动物细胞膜磷脂的主要成分之一，大约占20%，磷脂酰乙醇胺主要位于细胞膜内叶。研究表明，在有丝分裂过程中，细胞膜内叶的磷脂酰乙醇胺会外化，暴露于分裂期细胞的卵裂沟处。

发明内容

本发明的目的是提供一种肿瘤靶向聚合物胶束，具有细胞周期特异性靶向载体功能，对于肿瘤治疗药物具有较好的靶向性输送能力。

为解决上述问题，本发明所采取的技术方案如下：

一种肿瘤靶向聚合物胶束，包括：对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰的第一聚合物载体。

作为上述技术方案的具体优选，所述对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体为兰考韦泰、肉桂霉素和植物大环寡肽kalata B1中的一种，所述第一聚合物载体为包括亲水段和疏水段的共聚物，所述亲水段为聚乙二醇、聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚氨基酸、壳聚糖中的一种，所述疏水段为外消旋聚乳酸、左旋聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、ε-己内酯、聚氨基酸中的一种。

其中，兰考韦泰的CAS编号为1391-36-2；肉桂霉素的CAS编号为1405-39-6；植物大环寡肽kalata B1为一种结构公知的植物大环寡肽。

作为上述技术方案的改进，还包括用于包覆所述第一聚合物载体形成核壳结构混合胶束的第二聚合物载体，且所述第二聚合物载体在肿瘤组织的偏酸性环境中不稳定，在pH值为6.0～6.5时解聚合。

作为上述技术方案的具体优选，所述第二聚合物载体为聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物、或聚乙二醇和聚(β-氨基酯)的共聚物、或pH敏感化学键链接的胶束，所述pH敏感化学键为腙键、乙缩醛、原酸酯和乙烯醚中的一种。

本发明与现有技术相比较，本发明的实施效果如下：

本发明所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束，基于细胞膜成分磷脂酰乙醇胺在细胞有丝分裂M相时外向化及肿瘤组织偏酸性的基础上，创造性的采用了与磷脂酰乙醇胺具有特异性结合和高亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体并与对酸性环境敏感的第二聚合物载体组成核壳结构的混合胶束。

静脉注入体内后通过实体瘤的高通透性和滞留效应迅速主动聚集在肿瘤组织，在肿瘤组织部位第二聚合物载体解聚合，暴露出靶向配体修饰的第一聚合物载体，然后特异性结合至M相肿瘤细胞膜外化的磷脂酰乙醇胺，携带胶束聚集于M相肿瘤细胞中，不仅可以增大载药量而且使载体具有良好的入胞能力。

本发明所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束实现了细胞周期特异性靶向载体的功能，是一种高效、低毒、肿瘤细胞靶向治疗的载体。

本发明同时也提供了上述肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，其包括对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体的制备过程：

当对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体的分子结构中具有活性的氨基时，其包括以下步骤：

步骤A1.1、通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化所述第一聚合物载体末端的羧基；

步骤A1.2、使步骤一中活化的羧基与对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体中的氨基缩合；

步骤A1.3、对步骤二的反应产物进行透析和滤膜过滤操作，干燥滤液即得能够与细胞膜成分磷脂酰乙醇胺特异性结合的靶向载体；

当对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体的分子结构中不具有活性的氨基时，其包括以下步骤：

步骤B1.1、通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体末端的羧基；

步骤B1.2、使步骤一中活化的羧基与所述第一聚合物载体中的氨基缩合；

步骤B1.3、对步骤二的反应产物进行透析和滤膜过滤操作，干燥滤液即得能够与细胞膜成分磷脂酰乙醇胺特异性结合的靶向载体。

作为上述技术方案的具体优选，所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法包括兰考韦泰修饰第一聚合物载体的制备过程，且所述第一聚合物载体为聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物，其包括以下步骤：

步骤1.1、将HOOC-PEG-PDLLA溶于N,N-二甲基甲酰胺中，先加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应一段时间后，再加入交联剂N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌48～72小时，得到PDLLA-PEG-CONHS；

步骤1.2、将步骤一的最终反应液过滤后，向其中滴加溶解有兰考韦泰的二甲基亚砜溶液，之后加入三乙胺调节pH值至7以上，室温搅拌至溶液澄清；

步骤1.3、将步骤二最终获得的溶液经透析袋透析后过滤，得澄清透明溶液，冷冻干燥后得兰考韦泰修饰的聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物。

作为上述技术方案的改进，所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法还包括在肿瘤组织的偏酸性环境中不稳定，在pH值为6.0～6.5时解聚合，且用于包覆所述第一聚合物载体形成核壳结构混合胶束的第二聚合物载体的制备过程，所述第二聚合物载体为聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物，其包括以下步骤：

步骤2.1：将Boc-His(Dnp)-OH▪isopropanol即溶于异丙醇的N-(叔丁氧羰基)-1-(2,4-二硝基苯基)-L-组氨酸溶解于1,4-二氧六环中，加入氯化亚砜反应1小时，生成沉淀过滤，用1,4-二氧六环及乙醚洗涤沉淀，将沉淀用硝基甲烷完全溶解后，加入足量无水乙醚重结晶，得Dnp-NCA▪Hcl；

步骤2.2：将步骤2.1制得的Dnp-NCA▪Hcl用N,N-二甲基甲酰胺溶解后加入碳酸钠中和盐酸，室温搅拌1小时后，加入mPEG-NH2▪Hcl的N,N-二甲基甲酰胺溶液减压反应72小时后，离心后用微孔滤膜过滤得酱油色溶液，向其中加入乙醚后，静置使其沉淀，抽滤后真空干燥，得到的棕色固体PEG-b-poly(N^im-Dnp-His)；

步骤2.3：将步骤2.2制得的PEG-b-poly(N^im-Dnp-His)加入N,N-二甲基甲酰胺溶解后，加入β-巯基乙醇反应过夜，脱去2,4-二硝基苯基将所得淡黄色溶液装入透析袋中透析，透析后先离心再过滤，滤液冷冻干燥后即得聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物。

作为上述技术方案的改进，所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法还包括对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体和第二聚合物载体制备成核壳结构混合胶束的过程，其包括以下步骤：

将所制得的对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体以及第二聚合物载体溶于水中，经超声处理后加入透析袋透析，制备成粒径为10～1000 nm的核壳结构混合胶束。

作为上述技术方案的改进，所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，还包括核壳结构混合胶束包载药物的方法：

将所制得的对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体以及第二聚合物载体溶于水中制得载体溶液，通过溶剂将药物溶解后，滴加于所述载体溶液中，通过搅拌或超声使之均匀分散后透析，再滤膜过滤，即得载药胶束溶液。

附图说明

图1为本发明所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的作用原理示意图；

图2为本发明所述的Dur-PEG-PDLLA的合成路线图；

图3为本发明所述的PEG-P(His)的合成路线；

图4为本发明所述的兰考韦泰的氢谱图；

图5为本发明所述的PEG-PDLLA的氢谱图；

图6为本发明所述的Dur-PEG-PDLLA的氢谱图；

图7为本发明所述的Dur-PEG-PDLLA的粒径分布示意图；

图8为本发明所述的mPEG-NH2的氢谱；

图9为本发明所述的PEG-P(His)的氢谱。

具体实施方式

下面将结合具体的实施例来说明本发明的内容。

下文所述PEG-PDLLA即为聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物，所述Dur-PEG-PDLLA即为兰考韦泰作为靶向配体修饰的聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物。所述PEG-P(His)即为聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物。

如图1所示，为发明所述一种肿瘤靶向聚合物胶束的构建及释药过程示意图。本发明所述一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，包括以下步骤：

一、Dur-PEG-PDLLA的制备，如图2所示，包括以下步骤：

步骤1.1：将HOOC-PEG-PDLLA（具体结构可见图2，可以通过市售获得）溶于N,N-二甲基甲酰胺中，先加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（即EDC）反应一段时间后再加入交联剂N-羟基琥珀酰亚胺（即NHS），室温搅拌48～72小时后，使羧基活化；得到PDLLA-PEG-CONHS（具体结构可见图2）。

步骤1.2：将步骤1.1的最终反应液过滤后，向其中滴加溶解有兰考韦泰的二甲基亚砜溶液，之后加入三乙胺调节pH值至7.4左右，室温搅拌72小时，得澄清溶液。

步骤1.3：将步骤1.2最终获得的溶液经透析袋（截留分子量为3500Da）透析24小时后，用孔径0.22微米或0.45 微米的聚醚砜滤膜过滤，得澄清透明溶液，在灯光下观察有淡蓝色乳光，冷冻干燥后得Dur-PEG-PDLLA（具体结构可见图2）。

上述反应过程中所涉及的主要原料和产物的氢谱图见图4至图6，根据上述方法获得的Dur-PEG-PDLLA的粒径分布情况见图7。

二、PEG-P(His)的制备，如图3所示，包括以下步骤：

步骤2.1：将Boc-His(Dnp)-OH▪isopropanol即溶于异丙醇的N-(叔丁氧羰基)-1-(2,4-二硝基苯基)-L-组氨酸溶解于1,4-二氧六环中，加入氯化亚砜反应1小时，生成沉淀过滤，用1,4-二氧六环及乙醚洗涤沉淀，将沉淀用硝基甲烷完全溶解后，加入足量无水乙醚重结晶，得到淡黄色固体Dnp-NCA▪Hcl（具体结构可见图3）。

步骤2.2：将步骤2.1制得的Dnp-NCA▪Hcl用N,N-二甲基甲酰胺溶解后加入碳酸钠中和盐酸，室温搅拌1小时后，加入mPEG-NH2▪Hcl的N,N-二甲基甲酰胺溶液减压反应72小时后，离心后用微孔滤膜过滤得酱油色溶液，向其中加入乙醚后，静置使其沉淀，抽滤后真空干燥，得到的棕色固体PEG-b-poly(N^im-Dnp-His)（具体结构可见图3）。

步骤2.3：将步骤2.2制得的PEG-b-poly(N^im-Dnp-His)加入N,N-二甲基甲酰胺溶解后，加入β-巯基乙醇反应过夜，脱去2,4-二硝基苯基将所得淡黄色溶液装入透析袋（截留分子量为1000Da）透析24小时，离心后用聚醚砜滤膜过滤，聚醚砜滤膜孔径可以选用常用的0.22微米或0.45微米，滤液冷冻干燥后即获得PEG-P(His)（具体结构可见图3）。

上述反应过程中所涉及的主要原料和产物的氢谱图见图8和图9。

三、将Dur-PEG-PDLLA和PEG-P(His)制备成核壳结构混合胶束，其包括以下步骤：

将所制得的Dur-PEG-PDLLA以及PEG-P(His)溶于水中，经超声处理后加入透析袋透析，制备成粒径为10～1000 nm的以兰考韦泰修饰的聚合物胶束。

四、所述核壳结构混合胶束包载药物的方法包括以下步骤：

将难溶性药物用适当溶剂（药学上使用的能溶解该药物的溶解）溶解，制得粒径10～1000 nm的聚合物胶束。

具体地，以治疗药物紫杉醇或长春碱的包载为例：

将Dur-PEG-PDLLA和PEG-P(His)溶于水中，将紫杉醇或长春碱采用乙醇溶解后，滴加于载体溶液中，剧烈搅拌20分钟，于冰下探头超声30分钟，重蒸水透析过夜，通过0.22微米或0.45微米的滤膜过滤，即得载药胶束溶液。

五、Dur-PEG-PDLLA和PEG-P(His) 靶向性输送能力的考察：

HELA细胞采用含10%胎牛血清DMEM培养基，37度5% CO2，培养箱中培养，采用双胸苷阻断法同步化，具体做法：HELA细胞，DMEM培养基培养24小时，待细胞贴壁后加入胸苷(2 mM/L)，继续培养18小时，PBS洗涤三次，洗去胸苷，加新鲜DMEM培养基培养9小时，加入胸苷(2 mM/L)继续培养17小时，磷酸盐缓冲液洗涤三次，洗去胸苷（同步化G1期），加新鲜DMEM培养基继续培养4小时（同步化S期）、10小时(同步化G2/M期)；

正常组细胞及不同时相HELA细胞分别加入包载荧光物质FITC的Dur-PEG-PDLLA、PEG-P(His)混合胶束和PEG-PDLLA、PEG-P(His)混合胶束（包载FITC的方法参考紫杉醇或长春碱的包载方法），培养1小时后，细胞采用4%多聚甲醛固定，采用流式细胞仪分析不同组细胞摄取荧光强度。

结果Dur-PEG-PDLLA、PEG-P(His)混合胶束组正常细胞组、同步化G1期组、同步化S期组、同步化G2/M期组平均荧光强度分别为37.3±5.2、23.6±3.9、26.4±6.6、72.7±13.4；

而PEG-PDLLA、PEG-P(His)混合胶束组正常细胞组、同步化G1期组、同步化S期组、同步化G2/M期组平均荧光强度分别为21.2±3.4、17.3±3.4、19.6±5.3、23.6±6.1。

结果表明：首先，PEG-P(His)具有针对肿瘤细胞组织的靶向输送能力；其次，采用兰考韦肽修饰PEG-PDLLA以后，相同条件下比未修饰PEG-PDLLA的摄取量显著增加，并且采用兰考韦肽修饰以后同步化G2/M期细胞摄取量显著高于其它时相细胞摄取量，这与本申请采用兰考韦肽修饰的特点是相关的。

在本发明中，PEG-PDLLA也可以采用其他类似的由亲水段和疏水段组成的共聚物代替：如亲水段还可以采用PEG（聚乙二醇）、PEO（聚环氧乙烷）、PVP（聚乙烯吡咯烷酮）、聚氨基酸、壳聚糖等，疏水段还可以采用PLLA（左旋聚乳酸）、PLG（聚乙醇酸）、PLGA（聚乳酸-羟基乙酸共聚物）、PCL（ε-己内酯）、聚氨基酸等。

在本发明中，与兰考韦泰类似对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体还可以是肉桂霉素、植物大环寡肽kalata B1等环肽。

选用上述替代PEG-PDLLA的共聚物和替代兰考韦泰的环肽后，对于肉桂霉素等具有活性氨基的环肽，可以参考图2的化学修饰反应制成替代Dur-PEG-PDLLA的靶向载体：即通过EDC和NHS活化共聚物末端的羧基，然后与作为靶向配体的环肽中的氨基缩合，最后通过透析和滤膜过滤，干燥滤液即得能够与细胞膜成分磷脂酰乙醇胺特异性结合的靶向载体；

对于例如植物大环寡肽kalata B1等类似结构的环肽，其分子结构中不具有活性的氨基，则可以通过EDC和NHS活化作为靶向配体的环肽末端的羧基，然后与共聚物中的氨基缩合，最后通过透析和滤膜过滤，干燥滤液即得能够与细胞膜成分磷脂酰乙醇胺特异性结合的靶向载体。

在本发明中，用于包覆Dur-PEG-PDLLA形成核壳结构混合胶束的pH敏感材料PEG-P(His)还可以替换为聚乙二醇和聚(β-氨基酯)的共聚物；也可以采用pH敏感化学键（如腙键、乙缩醛、原酸酯、乙烯醚等）链接的胶束：比如PEG与PDLLA采用腙键链接制备而成的胶束。

聚乙二醇和聚(β-氨基酯)的共聚物制备方法可以参考如图3所示的PEG-P(His)的制备反应方法。

以上内容是结合具体的实施例对本发明所作的详细说明，不能认定本发明具体实施仅限于这些说明。对于本发明所属技术领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明保护的范围。

Claims (9)

1.一种肿瘤靶向聚合物胶束，其特征是，包括：对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰的第一聚合物载体。

2.如权利要求1所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束，其特征是，所述对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体为兰考韦泰、肉桂霉素和植物大环寡肽kalata B1中的一种，所述第一聚合物载体为包括亲水段和疏水段的共聚物，所述亲水段为聚乙二醇、聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚氨基酸、壳聚糖中的一种，所述疏水段为外消旋聚乳酸、左旋聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、ε-己内酯、聚氨基酸中的一种。

3.如权利要求1或2所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束，其特征是，还包括用于包覆所述第一聚合物载体形成核壳结构混合胶束的第二聚合物载体，且所述第二聚合物载体在肿瘤组织的偏酸性环境中不稳定，在pH值为6.0～6.5时解聚合。

4.如权利要求3所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束及其制备方法，其特征是，所述第二聚合物载体为聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物、或聚乙二醇和聚(β-氨基酯)的共聚物、或pH敏感化学键链接的胶束，所述pH敏感化学键为腙键、乙缩醛、原酸酯和乙烯醚中的一种。

5.如权利要求1所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，其特征是，包括对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体的制备过程：

当对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体的分子结构中具有活性的氨基时，其包括以下步骤：

步骤A1.1、通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化所述第一聚合物载体末端的羧基；

步骤A1.2、使步骤一中活化的羧基与对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体中的氨基缩合；

步骤A1.3、对步骤二的反应产物进行透析和滤膜过滤操作，干燥滤液即得能够与细胞膜成分磷脂酰乙醇胺特异性结合的靶向载体；

当对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体的分子结构中不具有活性的氨基时，其包括以下步骤：

步骤B1.1、通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体末端的羧基；

步骤B1.2、使步骤一中活化的羧基与所述第一聚合物载体中的氨基缩合；

步骤B1.3、对步骤二的反应产物进行透析和滤膜过滤操作，干燥滤液即得能够与细胞膜成分磷脂酰乙醇胺特异性结合的靶向载体。

6.如权利要求5所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，其特征是，包括兰考韦泰修饰第一聚合物载体的制备过程，且所述第一聚合物载体为聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物，其包括以下步骤：

步骤1.1、将HOOC-PEG-PDLLA溶于N,N-二甲基甲酰胺中，先加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应一段时间后，再加入交联剂N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌48～72小时，得到PDLLA-PEG-CONHS；

步骤1.2、将步骤一的最终反应液过滤后，向其中滴加溶解有兰考韦泰的二甲基亚砜溶液，之后加入三乙胺调节pH值至7以上，室温搅拌至溶液澄清；

步骤1.3、将步骤二最终获得的溶液经经透析袋透析后过滤，得澄清透明溶液，冷冻干燥后得兰考韦泰修饰的聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物。

7.如权利要求5或6所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，其特征是，还包括在肿瘤组织的偏酸性环境中不稳定，在pH值为6.0～6.5时解聚合，且用于包覆所述第一聚合物载体形成核壳结构混合胶束的第二聚合物载体的制备过程，所述第二聚合物载体为聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物，其包括以下步骤：

步骤2.1：将Boc-His(Dnp)-OH▪isopropanol即溶于异丙醇的N-(叔丁氧羰基)-1-(2,4-二硝基苯基)-L-组氨酸溶解于1,4-二氧六环中，加入氯化亚砜反应1小时，生成沉淀过滤，用1,4-二氧六环及乙醚洗涤沉淀，将沉淀用硝基甲烷完全溶解后，加入足量无水乙醚重结晶，得Dnp-NCA▪Hcl；

步骤2.2：将步骤2.1制得的Dnp-NCA▪Hcl用N,N-二甲基甲酰胺溶解后加入碳酸钠中和盐酸，室温搅拌1小时后，加入mPEG-NH2▪Hcl的N,N-二甲基甲酰胺溶液减压反应72小时后，离心后用微孔滤膜过滤得酱油色溶液，向其中加入乙醚后，静置使其沉淀，抽滤后真空干燥，得到的棕色固体PEG-b-poly(N^im-Dnp-His)；

步骤2.3：将步骤2.2制得的PEG-b-poly(N^im-Dnp-His)加入N,N-二甲基甲酰胺溶解后，加入β-巯基乙醇反应过夜，脱去2,4-二硝基苯基将所得淡黄色溶液装入透析袋中透析，透析后先离心再过滤，滤液冷冻干燥后即得聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物。

8.如权利要求7所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，其特征是，还包括对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体和第二聚合物载体制备成核壳结构混合胶束的过程，其包括以下步骤：

将所制得的对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体以及第二聚合物载体溶于水中，经超声处理后加入透析袋透析，制备成粒径为10～1000 nm的核壳结构混合胶束。

9.如权利要求8所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，其特征是，还包括核壳结构混合胶束包载药物的方法：

将所制得的对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体以及第二聚合物载体溶于水中制得载体溶液，通过溶剂将药物溶解后，滴加于所述载体溶液中，通过搅拌或超声使之均匀分散后透析，再滤膜过滤，即得载药胶束溶液。