CN105154351B - 一株红球菌及其降解玉米赤霉烯酮的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株红球菌及其降解玉米赤霉烯酮的应用。该红球菌(Rhodococcus sp.)，其保藏编号为CGMCC No.7186。本发明还提供了含有该保藏菌株的生物脱毒剂及其制备方法。此外，本发明还提供了所述菌株或生物脱毒剂在降解玉米赤霉烯酮中的应用。

Description

一株红球菌及其降解玉米赤霉烯酮的应用

技术领域

本发明涉及一株红球菌Rhodococcus sp.及其在降解真菌毒素玉米赤霉烯酮中的应用。

背景技术

玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)是一种具有二羟基苯甲酸内酯结构的雌激素类真菌毒素，其化学名称为6-(10-羟基-6-氧代-反式-1-十-碳烯)-β-雷锁酸-内酯，它广泛存在于霉变的玉米、高梁、小麦、燕麦、大麦等谷类作物中，主要由禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)、黄色镰刀菌(Fusarium culmorum)、克鲁克威尔镰刀菌(Fusariumcrookwellense)产生。ZEN主要为生殖毒性，其进入人和动物体内后产生雌激素效应综合症状，引起动物体雌激素过多和动情反应，包括不孕或不育，还能导致雄性动物睾丸萎缩，精液质量低劣等症状。ZEN同时也具有血液毒性、肝毒性、免疫毒性和基因毒性。

我国食品和饲料工业平均每年因霉变所致损失达总产量10％以上。从全国仓库和饲料厂中抽样检测，发现玉米等农作物和饲料中ZEN的检出率高达100％，检出浓度超标严重。ZEN比较容易在富含淀粉的禾谷类种子上产生，该类谷物在田间、收获过程、收获后储藏期间以及饲料和食品成品储存、使用等诸多环节中，都有可能受到ZEN的污染。这些被毒素污染的粮食不但对人畜的健康造成了威胁和危害，而且严重地制约了我国农产品的出口贸易。

因此，如何减少或者完全去除真菌毒素已成为国内外研究的热点。目前，ZEN脱毒方法主要包括物理法、化学法和生物法。传统的物理和化学方法如辐照、去皮、吸附、臭氧处理等虽然能部分清除真菌毒素，但是这些方法具有破坏营养、去毒不彻底及成本高等缺陷，实际应用具有一定的局限性。使用生物方法去毒条件温和且具有高效性、特异性，可以最大程度地保留粮谷中的营养成分，降解后的产物对环境无污染，因此，日益被科学界所关注。早在上世纪80年代，El-Sharkawy和Abul-Hajj发表了一系列关于真菌和放线菌转化ZEN的重要文章。他们在文章中描述了Thamnidium elegans和Mucor bainieri可将ZEN转化为一种无雌激素效应的产物ZEN-4-O-β-glucoside(El-Sharkawy,S.,Abul-Hajj,Y..Microbialtransformation of zearalenone.1.Formation of zearalenone 4-O-b-glucoside[J].J.Nat.Prod.1987a,50:520–521.)。另外，由Streptomyces rimosus和Cunninghamellabainieri转化的产物8′-hydroxy-zearalenone和2,4-dimethoxyzearalenone都未表现出雌激素毒性(El-Sharkawy,S.,Abul-Hajj,Y..Microbial transformation ofzearalenone.2.Reduction,hydroxylation,and methylation products[J].J.Org.Chem.1987b,53:515–519.)。另据报道，其它一些微生物对玉米赤霉烯酮也有转化、降解作用，例如，恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、解毒毛孢酵母(Trichosporonmycotoxinivorans)和一些根霉菌(Rhizopus stolonifer，Rhizopus oryzae，Rhizopusmicrosporus)，藤黄微球菌(Micrococcus luteus)等(Abdulla D Altalhi,Bahig El-Deeb.Localization of zearalenone detoxification gene(s)in Pzea-1plasmid ofPseudomonas Putida Zea-1and expressed in Escherichia Coli[J].Journal ofHazardous Materials,2009,161(2/3):1166-1172；Molnar O,Schatzmayr G,Fuchs E,etal.Trichosporon mycotoxinivorans sp.nov.,a new yeast species useful inbiological detoxification of various mycotoxins[J].Systematic and AppliedMicrobiology,2004,27(6):661-671；Varga J,Peteri Z,Tabori K,et al.Degradationof ochratoxin A and other mycotoxin by Rhizopus isolates[J].Int.J.foodicrobial.,2005,99:321-328；程波财,姜淑英,汪孟娟,等.藤黄微球菌降解真菌毒素玉米赤霉烯酮的研究[J].中国生态学杂志,2010,22(5):389-392.)。但是这些微生物对ZEN降解速率不高，降解能力弱，并且在对代谢产物分析后，有一部分微生物是将ZEN转化成ZEN的同分异构体和玉米赤霉烯醇，这些产物的雌激素毒性或低于ZEN或更强于ZEN。因此，发掘高效、安全、特异性降解玉米赤霉烯酮的微生物菌株具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一株能高效降解玉米赤霉烯酮的微生物菌株及其应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一株红球菌(Rhodococcus sp.)，是从河南林州上寨村赤霉病高发区的玉米耕种层土壤中分离得到的，其培养物已于2013年1月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，其分类命名为红球菌Rhodococcus sp.，保藏编号为CGMCC No.7186。与其它生物的情况一样，本发明具有降解玉米赤霉烯酮的红球菌Rhodococcus sp.仍然易发生变异。因此，可以利用本领域已知的物理和化学诱变方法得到该菌株的突变株。例如，可以通过用化学药剂如N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍或者紫外或Co₆₀辐照处理得到其突变株，这些突变株，只要保留了玉米赤霉烯酮降解能力这样一个特征，也属于本发明的一部分。

本发明还提供一种ZEN生物脱毒剂，它的活性成分为红球菌Rhodoccocus sp.(保藏编号为CGMCC No.7186)或其衍生的突变株，优选地，它的活性成分为红球菌Rhodoccocussp.(保藏编号为CGMCC No.7186)或其衍生的突变株的细胞内容物。该生物脱毒剂可以是液体剂型也可以是固体剂型，并通过现有技术中已公开的制备方法来制备。具体地，本发明提供了上述生物脱毒剂的制备方法，该方法包括：

(1)将保藏编号为CGMCC No.7186的红球菌Rhodoccocus sp.或其衍生的突变株在固体培养基上活化；

(2)将活化后的菌种接种于种子培养基中培养至对数生长期，制得种子液；

(3)将所述种子液接种于发酵培养基中培养至稳定期，制得发酵液。该发酵液可以作为液体型生物脱毒剂使用。

进一步地，为了达到更好的脱毒效果，本发明还可以将上述发酵液离心或板框过滤，收集菌体细胞，然后高压或超声破壁后得到细胞内容物，制得以细胞内容物作为活性成分的液体型生物脱毒剂。

进一步地，本发明的方法还可以包括将上述液体型生物脱毒剂与吸附剂混合后干燥，或者直接将液体型生物脱毒剂喷雾干燥后制得固体型生物脱毒剂。其中，所述液体型生物脱毒剂与吸附剂的重量比为1:2–10，所述吸附剂可以是玉米芯粉、麸皮、淀粉、硅藻土、凹凸棒土、蛭石、轻质碳酸钙或泥炭中的一种或几种。

进一步地，在上述制备方法中，用来培养红球菌Rhodoccocus sp.培养物的培养基是多种多样的，但是从生产的经济、细胞生物量、脱毒活性角度看，优选某些培养基。例如，优选的碳源为葡萄糖，但也可以使用麦芽糖、甘油、果糖、半乳糖、甘露糖、α-乳糖、糖蜜等。优选的氮源为酵母膏、酪蛋白胨，但也可以使用玉米浆、酵母浸出粉、牛肉膏等。可掺入培养基中的营养无机盐有能够产生下列离子的常规可溶性盐：锌离子、钠离子、镁离子、钙离子、铁离子、氯离子、碳酸根离子、硫酸根离子、硝酸根离子等。在本发明的一个实施方式中，所述的种子培养基由下列组分按照质量体积比组成：胰蛋白胨1％，酵母提取物0.5％，NaCl1.0％，pH 7.0-7.2；所述的发酵培养基由下列组分按照质量体积比组成：酵母膏0.8％，酪蛋白胨0.4％，葡萄糖1.0％，(NH₄)₂SO₄ 0.1％，K₂HPO₄ 0.2％，MgSO₄ 0.02％，NaCl 0.01％，pH 7.0-7.2。

进一步地，在上述制备方法中，所述活化后的菌种按种子罐中种子培养基的0.5–10％接种量接种入种子罐；所述种子液按发酵罐中发酵培养基的0.5–10％接种量接种入发酵罐。

进一步地，步骤(3)发酵培养条件为：无菌空气的通气量为1:0.5–1.2，搅拌速度为50–240转/分，培养温度约30–37℃，培养时间约36–72小时，发酵液中活细胞数量至少达到10⁸CFU/ml。

进一步地，本发明要求保护所述红球菌Rhodoccocus sp.、其衍生的突变株及上述生物脱毒剂在降解玉米赤霉烯酮中的应用。

具体地，在降解玉米赤霉烯酮时，采用如下(a)或(b)方式中的任一种：

(a).将液体型生物脱毒剂喷施于待脱毒的谷物或者饲料及饲料原料，降解玉米赤霉烯酮，所述发酵液中活细胞数量至少达到10⁸CFU/ml；

(b).将固体型生物脱毒剂按照质量百分含量为0.01–5％的添加量加入到待脱毒的饲料及饲料原料，混合均匀，降解玉米赤霉烯酮。

上述应用中，所述谷物为玉米、小麦、大麦、稻谷或高梁。所述饲料原料及饲料为玉米、小麦、大麦、稻谷、高梁或粮食加工副产物如麸皮、玉米皮等饲料原料及它们加工而成的饲料。

本发明的优点在于：本发明提供的保藏号为CGMCC No.7186的红球菌Rhodoccocussp.菌株对玉米赤霉烯酮具有高效的降解作用。该菌株可在温和的外界条件下(温度约30–37℃，pH 7.0-7.2)或者直接在动物肠道环境中，利用微生物自身合成的酶在较短的时间内将玉米赤霉烯酮完全降解成无荧光无紫外吸收的产物，也不产生其他玉米赤霉烯酮同分异构体，具有真正的快速高效的ZEN脱毒能力。使用保藏号为CGMCC No.7186的菌株生产降解玉米赤霉烯酮的固体型或液体型生物脱毒剂，具有生产使用成本低、简单、易操作，降解安全、高效等优点。本发明提供的菌株和生物脱毒剂可以用于谷物、饲料、饲料原料中玉米赤霉烯酮的去除，对于解决饲料及其原料中毒素污染问题，提高粮食利用率，保证畜牧业的安全生产、提高畜牧业经济效益具有重要的意义。

附图说明

图1：红球菌Rhodoccocus sp.的电镜照片(×15,000)。

图2：基于16S rDNA基因序列采用临近法构建的Rhodoccocus sp.和相近菌株的系统发育进化树。

图3：Rhodoccocus sp.在MM液体培养基中对ZEN降解效果的HPLC图(ZEN浓度为25μg/ml)。

图4：Rhodoccocus sp.在MM液体培养基中对ZEN的降解效果(ZEN浓度为25μg/ml)。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但并不是限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂供应商购买得到。

实施例1 红球菌Rhodoccocus sp.获得与鉴定

从河南林州上寨村赤霉病高发区的玉米耕种层中采集土样，以96孔深孔板为培养载体，采用微量富集培养方法，首先将样品在无菌水中制成菌悬液，以10％的接种量接种于MM液体培养基(NH₄NO₃ 1g/L，(NH₄)₂SO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.41g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，K₂HPO₄ 1.5g/L，NaCl 0.5g/L，FeSO₄·7H₂O 0.037g/L，pH 7.0-7.2，121℃灭菌30min)中，培养基中ZEN终浓度为25μg/ml，培养7天后再以10％接种量移种，培养基中ZEN浓度不变。经过连续5次移种后，HPLC检测ZEN含量，以未接菌含相同ZEN浓度的MM培养基为阴性对照。HPLC检测获得具有降解ZEN的菌悬液，然后将菌悬液按稀释涂布法以合适的稀释度涂布在LB琼脂平板(酵母提取物5g/L，胰蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，琼脂粉15g/L，pH 7.0-7.2，121℃灭菌30min)，30℃培养72h后，挑取分离程度良好且菌落形态不同的单菌落，在ZEN浓度为25μg/ml的MM培养基中进行脱毒试验，HPLC检测各个纯培养物的毒素降解效果，最终成功获得能够高效降解ZEN的菌株Rhodoccocus sp.，挑取Rhodoccocus sp.单菌落于LB液体培养基中，培养至对数期中期时，用50％的甘油与培养物等体积混合后置于-80℃保存。

采用16S rDNA序列分析、生理生化、化学组成特征等分类法对降解菌株进行分类鉴定，结果表明该菌株的分类地位归属于放线菌科红球菌属。2013年1月22日将该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，其保藏编号为CGMCC No.7186。

形态特征和培养特征：该菌株于LB琼脂培养基上，30℃培养24h，其显微形态：杆状，大小(2-3.6)μm×0.7μm，无芽孢，无鞭毛(如图1所示)，好氧；菌落形态：乳白色，圆形且边缘整齐，表面光滑不透明，大小1.5-2.3mm。

生理生化特征：pH耐受范围为6-12，已测生长温度范围4-30℃，能在NaCl浓度低于5％培养基中生长；过氧化物酶阳性，无溶血性。能利用的碳源有糊精、D-海藻糖、蔗糖、N-乙酰l-D-葡萄糖胺、N-乙酰神经氨酸、D-果糖、D-甘露醇、L-天门冬氨酸、L-谷氨酸、L-组氨酸、甘氨酸-L-脯氨酸、葡萄糖酸、半乳糖二酸、奎宁酸、丙酮酸甲酯、D-乳酸甲酯、L-乳酸、α-酮戊二酸、苹果酸、α-羟丁酸、α-丁酮酸、乙酰乙酸、丙酸、乙酸；不能利用的碳源有D-麦芽糖、D-纤维二糖、龙胆二糖、松二糖、水苏糖、、D-棉籽糖、α-D-乳糖、D-蜜二糖、β-甲基-D-半乳糖苷、水糖苷、N-乙酰-β-D-甘露糖胺、N-乙酰-D-半乳糖胺、N-乙酰神经氨酸、α-D-葡萄糖、鼠李糖、D-半乳糖、3-甲基-D-葡萄糖、岩藻糖、肌苷、D-山梨醇、D-阿糖醇、m-肌醇、甘油、D-葡萄糖-6-磷酸、D-果糖-6-磷酸、D-天门冬氨酸、D-丝氨酸、果胶、半乳糖醛酸、半乳糖酸内酯、D-葡萄糖醛酸、D-葡萄糖二酸、柠檬酸、吐温40、γ-氨基丁酸、甲酸。

16S rRNA序列分析：利用引物F9(5'-GAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，SEQ ID No.1)和R1544(5'-AGAAAGGAGGTGATCCA-3'，SEQ ID No.2)进行PCR扩增，长度为1510bp的16S rDNA序列(16SrDNA如序列表中SEQ ID No.3所示)与Genbank数据库中已有序列进行Blast比对，该序列与红球菌属16S rDNA相似度较高，相似性范围在94.6–99.0％之间。系统发育树如图2所示。在红球菌属公认的所有种中，相似性最高是Rhodoccocus qingshengii djl-6，它们的16S rRNA序列相似性达到99％，且通过DNA-DNA杂交证明两株菌同源性约为86％，故Rhodoccocus sp.菌株归属为Rhodoccocus qingshengii种。

化学组成：采用Perkin/Elmer公司的Lambda35UV/VIS Spectrometer测得Rhodoccocus sp.菌株的G+C mol％含量为60.58；脂肪酸含量百分比如下：十四碳饱和脂肪酸，5.00；w7c-十六碳单不饱和脂肪酸/w6c-十六碳单不饱和脂肪酸，18.19；十六碳饱和脂肪酸，24.29；10-甲基十六碳饱和脂肪酸，4.38，w8c-十七碳单不饱和脂肪酸，1.82；w5c-异式十七碳单不饱和脂肪酸，4.69；十七碳饱和脂肪酸，1.66；10-甲基十七碳饱和脂肪酸，2.59；w9c-十八碳单不饱和脂肪酸，8.20；10-甲基十八碳饱和脂肪酸，24.29；w11c/w9c-十九碳单不饱和脂肪酸，1.34。

根据以上所有结果表明，本发明Rhodoccocus sp.应归属为红球菌中的新菌株，这一分类是基于直接的实验室比较和对已发表的类似物种的描述所作的检索。

实施例2 Rhodoccocus sp.在MM液体培养基中对ZEN的降解效果

将-80℃保存的Rhodoccocus sp.在LB琼脂培养基上活化，30℃培养，挑单菌落接种于LB液体培养基中，30℃，200转/分钟培养24h；4000转/分钟离心10分钟，弃上清，用等体积的无菌水重悬菌体，重复2次后弃上清，加入等体积MM培养基，以10％接种量接种于含浓度为25μg/ml ZEN的MM培养基中，同时以未接菌含相同ZEN浓度的MM培养基为空白阴性对照，30℃，200转/分钟培养12h，取样，加入等体积的甲醇，充分混合，静置1h，取混合液于14000转/分钟离心10min，取上清液进行HPLC检测。检测条件参照GB/T 23504-2009作部分改进，具体方法如下：安捷伦C18柱(5μm，150mm×4.6mm)；流动相为乙腈：水：甲醇(46：46：8)；流速1.0ml/min；进样量10μl；检测波长为激发波长274nm，发射波长：440nm。

HPLC检测结果表明：MM培养基中的ZEN在8h后完全降解，降解率达100％(如图3和图4所示)。

实施例3 Rhodoccocus sp.液体型生物脱毒剂的制备

种子培养基组分及配比：胰蛋白胨1％，酵母提取物0.5％，NaCl 1.0％，pH7.0-7.2。发酵培养基组分及配比：酵母膏0.8％，酪蛋白胨0.4％，葡萄糖1.0％，(NH₄)₂SO₄0.1％，K₂HPO₄ 0.2％，MgSO₄ 0.02％，NaCl 0.01％，pH 7.0-7.2。

(1)菌种活化：将保藏号为CGMCC No.7186的Rhodoccocus sp.冻存管接种于固体培养基上，于30℃条件下培养24-36小时，并测定其毒素降解性能，再接种于试管斜面上备用。

(2)种子培养：从斜面培养基上挑菌接入种子培养基中，于30℃条件下培养至对数期，制得一级种子；然后，用500升的种子罐，种子培养基投料量350升，投料完毕后121℃高压湿热灭菌，冷却至30℃后，将上述培养好的菌种以10％(体积百分比)的接种量接种入种子罐，搅拌速度为220转/分，培养温度30℃，无菌空气通入量为1:0.8(体积比)，约24-36小时培养至对数生长期，获得二级种子液。

(3)发酵培养：采用容积为5000升的发酵罐，发酵培养基投料量3500升，在1.1kg/cm²的压力、121℃的温度下，进行高压湿热灭菌，灭菌后冷却至30℃，将二级种子液按10％的接种量接种入发酵罐，无菌空气的通气量为1:0.8–1.2，搅拌速度为240转/分，培养温度30℃，培养时间约48–60小时，制得发酵液，发酵液中活细胞数量至少达到10⁸CFU/ml。

(4)细胞内容物的制备：将上述发酵液用管式离心机离心，转速15000转/分，收集菌体细胞，用一半体积PBS盐溶液悬浮，用高压均质机破壁后得到细胞内容物，制得具有ZEN降解活性的液体型生物脱毒剂。

实施例4 Rhodoccocus sp.固体型生物脱毒剂的制备

将实施例3生产出来的Rhodoccocus sp.液体型生物脱毒剂与玉米芯粉按照1:2的重量比混合均匀后，50℃以下低温干燥至水分为8％以下，制成具有ZEN降解活性的固体型生物脱毒剂。

实施例5 液体型生物脱毒剂对谷物中ZEN的降解效果

将实施例3制备的液体型生物脱毒剂用水稀释20倍，然后按重量比1:1的比例喷洒到污染ZEN的玉米粉中作为试验组，将水以同样的比例喷洒到污染毒素的玉米粉中作为对照组，每组三个重复，混合均匀后静置处理4小时，分别从对照组和实验组准确称取2g样品于具塞锥形瓶中，加入10ml乙腈：水(9:1)，剧烈振荡抽提毒素2分钟，经过滤后，准确移取1ml滤液于离心管中，然后置于氮吹仪中50℃将溶剂挥干，加入1ml甲醇重新溶解，14000rpm离心，取上清液进行HPLC检测，结果表明该液体型生物脱毒剂对ZEN污染玉米粉经过4小时的脱毒，其降解率可达96.2％，而对照组无任何降解现象(结果见表1)。

表1 Rhodoccocus sp.液体型生物脱毒剂对谷物中ZEN的降解效果

处理前ZEN含量

处理后ZEN含量

降解率(％)

	(mg/kg)	(mg/kg)
				对照组	5.32	5.35	0
实验组	5.46	0.21	96.2

实施例6固体型生物脱毒剂对谷物中ZEN的降解效果

将实施例4制备的固体型生物脱毒剂按照4％的重量比添加到污染ZEN的试验组玉米粉中，将玉米芯粉同样以4％的重量比加入到污染ZEN的对照组玉米粉中，将对照组和试验组均按1:1的比例加入无菌水，每组三个重复，混合均匀后静置处理4小时。分别从对照组和试验组准确称量2g样品放入具塞锥形瓶中，加入10ml乙腈：水(9:1)，剧烈振荡抽提毒素2分钟，经过滤后，准确移取1ml滤液于离心管中，然后置于氮吹仪中50℃将溶剂挥干，加入1ml甲醇重新溶解，14000rpm离心，上清液用HPLC检测ZEN的含量，结果表明该固体型生物脱毒剂对污染玉米粉经过4小时的脱毒，其降解率可达83.6％，而对照组无任何降解现象(结果见表2)。

表2 Rhodoccocus sp.固体型生物脱毒剂对谷物中ZEN的降解效果

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (11)

1.一株红球菌（Rhodococcus sp.），其保藏编号为 CGMCC No. 7186。

2.一种生物脱毒剂，它的活性成分为红球菌（Rhodococcus sp.），所述红球菌（Rhodococcus sp.）的保藏编号为 CGMCC No. 7186。

3.一种生物脱毒剂，它的活性成分为红球菌（Rhodococcus sp.）的细胞内容物，所述红球菌（Rhodococcus sp.）的保藏编号为 CGMCC No. 7186。

4.一种权利要求2所述的生物脱毒剂的制备方法，其特征在于，该方法包括：

（1）将保藏编号为CGMCC No.7186的红球菌（Rhodococcus sp.）在固体培养基上活化；

（2）将活化后的菌种接种于种子培养基中培养至对数生长期，制得种子液；

（3）将所述种子液接种于发酵培养基中培养至稳定期，制得发酵液，即得液体型生物脱毒剂。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，该方法还包括将液体型生物脱毒剂与吸附剂混合，干燥后制得固体型生物脱毒剂，或者将液体型生物脱毒剂喷雾干燥后制得固体型生物脱毒剂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述液体型生物脱毒剂与吸附剂按1:2–1: 10的重量比进行混合，所述吸附剂为玉米芯粉、麸皮、淀粉、硅藻土、凹凸棒土、蛭石、轻质碳酸钙或泥炭中的一种或几种。

7.一种权利要求3所述的生物脱毒剂的制备方法，其特征在于，该方法包括：

（1）将保藏编号为CGMCC No.7186的红球菌（Rhodococcus sp.）在固体培养基上活化；

（2）将活化后的菌种接种于种子培养基中培养至对数生长期，制得种子液；

（3）将所述种子液接种于发酵培养基中培养至稳定期，制得发酵液；

（4）将所述发酵液离心或板框过滤，收集菌体细胞，然后高压或超声破壁后得到细胞内容物，制得液体型生物脱毒剂。

8.根据权利要求7所述的生物脱毒剂的制备方法，其特征在于，该方法还包括将液体型生物脱毒剂与吸附剂混合，干燥后制得固体型生物脱毒剂，或者将液体型生物脱毒剂喷雾干燥后制得固体型生物脱毒剂。

9.根据权利要求8所述的生物脱毒剂的制备方法，其特征在于，所述液体型生物脱毒剂与吸附剂按1: 2–1:10的重量比进行混合，所述吸附剂为玉米芯粉、麸皮、淀粉、硅藻土、凹凸棒土、蛭石、轻质碳酸钙或泥炭中的一种或几种。

10.权利要求2或3所述的生物脱毒剂在降解玉米赤霉烯酮中的应用，其特征在于，在降解玉米赤霉烯酮时，采用如下（a）或（b）方式中的任一种：

（a）．将如权利要求4或7所述的制备方法制得的液体型生物脱毒剂喷施于待脱毒的谷物或者饲料及饲料原料，降解玉米赤霉烯酮，发酵液中活细胞数量至少达到10⁸ CFU/ml；

（b）．将如权利要求5或8所述的制备方法制得的固体型生物脱毒剂按照质量百分含量为0.01%–5% 的添加量加入到待脱毒的饲料及饲料原料，混合均匀，降解玉米赤霉烯酮。

11.权利要求1所述的红球菌（Rhodococcus sp.）在降解玉米赤霉烯酮中的应用。