CN105132374A - 一种神经干细胞换液系统及其用于神经干细胞培养的换液方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种更换细胞培养液的方法，特别涉及一种神经干细胞换液系统及其用于神经干细胞培养的换液方法。一种神经干细胞换液系统，该系统包括依次连接的细胞拦击器、废液储存瓶、无菌空气瓶和抽气泵，细胞拦击器是由钛棒滤头与不锈钢管相连而成，钛棒滤头的孔径为4.0-5.0μm。该系统的另一种结构是：包括依次连接的细胞拦击器、注射器和连接管，细胞拦击器是内置不锈钢滤网的不锈钢管，不锈钢滤网的孔径为4.0-5.0μm。本发明神经干细胞换液系统及其用于神经干细胞培养的换液方法可以缩短神经干细胞培养过程中换液时间，防止了换液过程中珍贵的神经干细胞流失，清除培养液中残留的组织碎片，延长体外培养细胞的寿命，节约了人力、提高了生产力、便于工业化生产。

Description

一种神经干细胞换液系统及其用于神经干细胞培养的换液方法

技术领域

本发明涉及一种更换细胞培养液的方法，特别涉及一种神经干细胞换液系统及其用于神经干细胞培养的换液方法。

背景技术

大量培养人神经干细胞主要用于防治神经退行性疾病，如帕金森氏症，老年痴呆症，脊髓损伤等病症。通常神经干细胞培养过程中需定期换液，去除部分代谢废液，然后补充等量新鲜营养液，从而保证了神经干细胞继续分裂和生长。据了解国内外最常见方法之一是直接吸弃法和离心弃液法，即将细胞培养瓶先竖立，等神经干细胞球沉淀后，轻轻吸弃上清液，再补充等量新鲜培养液，经测定去除的上清液中含有部分单个神经干细胞和小的神经干细胞球，直接造成培养过程中神经干细胞数量的损失。另一方法是离心弃液法，先将细胞培养瓶竖起，待神经干细胞球沉降后，用移液管吸取上清液转移至离心管，离心1500转/分，20分钟，弃去上清液收集沉淀的单个神经干细胞和小的神经干细胞球，输回到培养瓶中，加新鲜培养液培养，该法缺点是费时费力，而且离心沉淀液体中含有长期培养的细胞碎片组织，培养液中含有这些碎片组织影响神经干细胞的长期培养。

发明内容

本发明提供一种神经干细胞换液系统，采用该系统进行换液，在换液过程中神经干细胞或悬浮细胞不丢失，且速度快、省时、省力的优点，采用钛棒过滤方式和不锈钢滤网过滤方式去除废液。

本发明还提供一种用于神经干细胞培养的换液方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种大规模培养神经干细胞换液系统，该系统包括依次连接的细胞拦击器、废液储存瓶、无菌空气瓶和抽气泵，细胞拦击器是由钛棒滤头与不锈钢管相连而成，钛棒滤头的孔径为4.0-5.0μm。

作为优选，钛棒滤头为平顶下端弧形，平顶连接不锈钢管，钛棒滤头的长度为22mm，直径为18mm，不锈钢管长度为215mm，外径为12mm，内径为4mm，不锈钢管通过连接管与废液储存瓶相连，不锈钢管与连接管相连接的一端设有宝塔型螺纹口。该装置适用于大规模培养神经干细胞。

一种采用所述的神经干细胞换液系统进行培养中的神经干细胞或悬浮细胞换液方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

换液顺序是：竖瓶-插入钛棒滤头-抽液-补液-重新培养；

具体步骤是：将含有干细胞培养液的细胞培养瓶竖起，瓶口朝上，开盖后将神经干细胞换液系统的钛棒滤头伸进培养瓶内，抽取细胞培养瓶内需要更换掉的培养液，取出钛棒滤头，向细胞培养瓶内加入新鲜培养液，盖盖继续培养。

作为优选，钛棒滤头堵塞不能抽取时，将其伸进另一瓶新鲜的培养液中，通过正压吹气，洗去吸附滤头表面的细胞，洗下的细胞并入其他细胞培养瓶或单独培养。

一种神经干细胞换液系统，该神经干细胞换液系统包括依次相连的注射器、细胞拦击器和细胞培养瓶，细胞拦击器是内置不锈钢滤网的不锈钢管，不锈钢滤网的孔径为4.0-5.0μm；注射器的体积为100-200ml，细胞拦击器的一端与注射器的针筒头部相连，细胞拦击器的另一端通过皮管连接移液管，移液管直接插入待换液的细胞培养瓶中。该系统适合小规模培养神经干细胞的换液。

本发明采用钛棒过滤方式吸除废液，补充新鲜营养液，达到换液的目的。在换液过程中干细胞不丢失，且速度快、省事、省力的优点，采用钛棒过滤方式去除废液。

发明人原来采用直接弃液法，后来把这些弃液经过离心后，发现有很多单个神经干细胞和小的神经干细胞球。所以改用离心换液法，一次离心法换液周期需30~50分钟，一台离心机只能换取2~3瓶培养液，每瓶装量200毫升，换取量为100毫升。然而在大批量培养神经干细胞时，特别费时费人工，效率极低。因此特别设计了本发明的神经干细胞换液系统，该系统利于大规模生产，省时省人工，效率高。另外在实验室少量培养神经干细胞时，另外提供了一种简易拦击神经干细胞或漂浮细胞的神经干细胞换液系统，该系统适合实验室小规模培养神经干细胞。

本发明神经干细胞换液系统及其用于神经干细胞培养的换液方法可以缩短神经干细胞培养过程中换液时间，防止了换液过程中珍贵的神经干细胞流失，节约了人力、提高了生产力、便于工业化生产。

附图说明

图1是本发明神经干细胞换液系统的结构示意图；

图2是本发明细胞拦击器的结构示意图；

图3是本发明神经干细胞换液系统的另一种结构示意图；

图中：1抽气泵；2无菌空气瓶；3废液储存瓶；4细胞培养瓶；5细胞拦击器A；6不锈钢管；7连接管；8不锈钢滤网；9细胞拦击器B；10注射器。

具体实施方式

下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实施例1：

一种神经干细胞换液系统，如图1和图2所示，该系统包括依次相连的神经干细胞换液用细胞拦击器A5、废液储存瓶3、无菌空气瓶2和抽气泵1，细胞拦击器A的主体为钛棒滤头与不锈钢管6连接，再连接管相连接，钛棒滤头规格：钛棒滤头为平顶下端弧形，平顶连接不锈钢管，总长度为237mm,其中滤头长度22mm，直径18mm，孔径为3500目（约4.5μm），不锈钢管长度为215mm，外径为6mm，内径为4mm，不锈钢管通过连接管与废液储存瓶3相连，不锈钢管与连接管7相连接的一端设有宝塔型螺纹口。钛棒滤头材料为钛合金。

一种培养中的神经干细胞换液方法，换液顺序是：竖瓶-插入钛棒滤头-抽液-补液-重新培养；

具体步骤是：将含有神经干细胞培养液的培养瓶竖起，瓶口朝上，5~10分钟后开盖将细胞拦击器A的钛棒滤头伸进培养瓶内，抽取培养瓶内一半体积的培养液，钛棒滤头不得触及瓶口，钛棒滤头伸入位置靠近液面下，随着液面的下降而下移，通常抽取100毫升只需1分钟左右，取出钛棒滤头，向培养瓶内加入新鲜培养液，盖盖继续培养。

一瓶换液的时间为1~2分钟。然后依据此法进行下一瓶操作，周而复始，直至钛合金堵塞不能抽取（或一个滤头用于一瓶），该滤头伸进另一瓶新鲜的培养液中，通过正压吹气，洗去吸附滤头表面的细胞，洗下的细胞并入他瓶或单独培养。

本实施例适用于大量培养瓶培养液的更换。

实施例2

一种神经干细胞换液系统如图3所示，该系统包括依次相连的注射器10、细胞拦击器B9和细胞培养瓶4，细胞拦击器B9是内置不锈钢滤网8的不锈钢管，不锈钢滤网8的孔径为4.5μm。注射器10的体积为100-200ml。细胞拦击器B的一端与注射器的针筒头部相连，细胞拦击器B的另一端通过一根皮管连接移液管，移液管直接插入待换液的细胞培养瓶4中，利用人工对注射器10的拉力，在吸出100ml液体时，使漂浮的神经干细胞被阻止在不锈钢滤网外。所以，经过该神经干细胞换液系统处理的液体中不含有任何神经干细胞或漂浮细胞，可以含有细胞碎片，这些液体作为废液或其他用。

本实施例适用于少量培养瓶培养液的更换。

实施例3

直接弃液法和本法换液系统对细胞流失的影响

直接弃液法是将待换液的神经干细胞培养瓶竖立20分钟，肉眼看见全部神经干细胞球沉淀到瓶底后，取出上清液，在显微镜放大100倍条件下，检查100个视野。结果：每一个视野都有1-7个神经干细胞和悬浮细胞，达到100%。本法换液系统是将神经干细胞换液系统抽出的废液，在显微镜放大100倍条件下，检查100个视野。结果：在100个视野中，只发现一个视野有一个神经干细胞，1%。只有少量细胞碎片组织。说明本法换液系统阻止宝贵的细胞流失，而且还去除了细胞的碎片组织。离心换液法是可以阻止宝贵的细胞流失，但是不但离心法换液时间（每瓶总需30~50分钟）长，而且沉淀的细胞液体中含许多细胞碎片组织，这些碎片组织对神经干细胞长期培养是不利的。

结果表明本发明的细胞拦击器A和B两种滤头的孔径都可以阻挡细胞通过，而且抽滤时间很短，每瓶抽滤100ml只需要1-2分钟。

本发明由于改变了神经干细胞的换液方式，即采用具有钛棒滤头的细胞拦击装置或不锈钢滤网的简易换液系统进行抽滤换液，不但阻止宝贵的神经干细胞丢失，而且除去长期培养神经干细胞期间产生的碎片组织，使神经干细胞生长活力增强，有利于长期培养。

该法不增加任何赋形剂，完全是物理改变的情况下，换液后使干细胞的丢失几乎为零，而每瓶换液的时间由原30~50分钟缩短为1~3分钟，换液效率明显提高，有利于工业化生产，真正做到多、快、好、省。

以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (5)

1.一种神经干细胞换液系统，其特征在于：该系统包括依次连接的细胞拦击器、废液储存瓶、无菌空气瓶和抽气泵，细胞拦击器是由钛棒滤头与不锈钢管相连而成，钛棒滤头的孔径为4.0-5.0μm。

2.根据权利要求1所述的神经干细胞换液系统，其特征在于：钛棒滤头为平顶下端弧形，平顶连接不锈钢管，钛棒滤头的长度为22mm，直径为18mm，不锈钢管长度为215mm，外径为12mm，内径为4mm，不锈钢管通过连接管与废液储存瓶相连，不锈钢管与连接管相连接的一端设有宝塔型螺纹口。

3.一种采用权利要求1所述的神经干细胞换液系统进行培养中的神经干细胞或悬浮细胞换液方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

换液顺序是：竖瓶-插入钛棒滤头-抽液-补液-重新培养；

具体步骤是：将含有干细胞培养液的细胞培养瓶竖起，瓶口朝上，开盖后将神经干细胞换液系统的钛棒滤头伸进培养瓶内，抽取细胞培养瓶内需要更换掉的培养液，取出钛棒滤头，向细胞培养瓶内加入新鲜培养液，盖盖继续培养。

4.根据权利要求3所述的神经干细胞换液的方法，其特征在于：钛棒滤头堵塞不能抽取时，将其伸进另一瓶新鲜的培养液中，通过正压吹气，洗去吸附滤头表面的细胞，洗下的细胞并入其他细胞培养瓶或单独培养。

5.一种神经干细胞换液系统，其特征在于：该神经干细胞换液系统包括依次相连的注射器、细胞拦击器和细胞培养瓶，细胞拦击器是内置不锈钢滤网的不锈钢管，不锈钢滤网的孔径为4.0-5.0μm；注射器的体积为100-200ml，细胞拦击器的一端与注射器的针筒头部相连，细胞拦击器的另一端通过皮管连接移液管，移液管直接插入待换液的细胞培养瓶中。