CN202482320U - 一种细胞滤器 - Google Patents

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孙振华
徐军军
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    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/04—Cell isolation or sorting

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Abstract

本实用新型涉及一种进行细胞分离的装置，尤其是涉及一种从经酶消化组织或培养细胞中分离单个细胞的细胞过滤器。本实用新型的细胞滤器由管腔和位于管腔中的一个或多个筛网组成，筛网周边与管腔内壁无缝连接。

Description

一种细胞滤器
技术领域
本实用新型涉及细胞分离领域，具体而言涉及一种细胞分离装置。
背景技术
在细胞(尤其是干细胞)治疗中，需要以单个细胞的形式输注至病人，原因是多个细胞组成的细胞团存在堵塞血管的风险。所以，在细胞的生产过程中，需要将贴壁培养的细胞经过胰酶的消化，形成单个细胞后用于临床治疗。胰酶消化完成后，为了防止未消化完全的细胞团的存在，还需要过滤通过细胞滤器，以滤去细胞团，得到单细胞悬液。从组织获取细胞的过程中也存在同样的问题，组织经过酶的消化，经常会有未消化的组织块或者结缔组织的存在，这时候要用细胞滤器将未消化的细胞和结缔组织除去。目前，可以使用市购的细胞滤器进行过滤，例如使用来自美国BD Falcon公司的尼龙膜细胞滤器。
然而，现有的细胞滤器存在一些缺点，主要表现在以下方面：1)大多数采用底部为筛网、上端为腔体的开放式结构，容易污染；2)上端腔体容量有限，过滤大量细胞悬液时需要多次取液和滴加，处理时间较长；3)大多数是一次性使用，进行多次过滤需要换多个细胞滤器。总之，目前使用的细胞滤器是一种低效率、高成本、存在污染风险的方法，不适用于规模化制备细胞。
因此，研制一种高效、低成本且安全性高的细胞滤器势在必行。
实用新型内容
本实用新型的目的在于解决细胞制备过程中细胞悬液过滤低效率、高成本、存在污染风险的问题。
为此，如图1所示，本实用新型提供了一种用于过滤细胞悬液的细胞滤器1，其特征在于所述细胞滤器由管腔2和位于管腔2中的一个或多个筛网3组成，筛网3周边与管腔2内壁无缝连接。
本实用新型的细胞滤器中筛网面积可以远大于普通细胞筛网的面积，能够一次性过滤大量细胞悬液，能够满足规模化细胞生产的需要。
本实用新型可实现不同孔径筛网的梯度过滤，并且不经过取液和滴加的过程直接实现了细胞悬液的过滤和转移，缩短了处理时间，并增加了细胞制备的效率。
本实用新型的细胞滤器的筛网位于整个细胞滤器的中间部分，采用封闭式过滤的方式，减少了污染的可能性。
附图说明
图1本实用新型的细胞滤器的一实例。
图2本实用新型的细胞滤器的另一实例。
图3本实用新型的细胞滤器的又一实例。
具体实施方式
在本实用新型中，管腔2的中部与两端口径可以相同或不同，优选中部口径大于两端之间，这样可以使用更大的筛网，以增加过滤效率。
在本实用新型中，管腔2可以各种形状，只要其两端形状与要连接的容器匹配即可，例如为方形筒状、空心柱状、不规则筒状、两端细中间粗的筒状、一端细另一端粗的筒状。
在本实用新型中，管腔2的一端或两端内可以有螺纹，以适合连接于有螺纹口的容器。
在本实用新型中，管腔2的两端口径可以相同或不同，以适应所连接口径相同或不同的容器。
在本实用新型中，管腔2的两端连接的容器可以是细胞培养瓶和/或离心管。
在本实用新型中，管腔2可以由金属或塑料(例如聚丙烯)注塑而成，并且管腔2可长可短，例如长度为5cm-30cm，口径为2cm-10cm。在本实用新型中，口径是指管口的最大径。
在本实用新型中，筛网3可以由尼龙丝制作，并且可以有不同的孔径筛网的孔径，例如为4目-325目。
在本实用新型中，中间筛网3可以是一个或多个，例如1-10个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个。
在本实用新型中，管腔1的腔截面和筛网3的大小可以相同或不同。在筛网3周边与管腔2内壁无缝连接后，筛网3的面积可以和其周边截管腔2的截面积一样，也可以大于管腔2直径，使得它在管腔2中凸起，从而增大筛网的面积，加大过滤效率。
在多个筛网3的情况下，它们可以具有相同或不同的孔径，优选在过滤时在后的筛网的孔径小于在前的筛网的孔径。
图4中示例性示出了利用本实用新型进行细胞过滤的操作：将本实用新型的细胞滤器一端连接到装有待过滤液体的培养瓶或离心管，另外一端连接一个空的培养瓶或离心管，细胞悬液或组织消化液通过细胞滤器管腔的一端流入，经过中间筛网(一个或几个相同规格或不同规格)的过滤，从另一端管腔流出，最终得到过滤后的细胞悬液。从而实现了封闭式、高效、大容量过滤的目的，封闭式的过滤方法保证了过滤过程中的安全性，防止了因为暴漏在空气中而引起的潜在污染。
实施例
实施例1
如图1所示，本实用新型的细胞滤器1的一实例由管腔2和位于管腔2中的筛网3组成，筛网3周边与管腔2内壁无缝连接。
实施例2
如图2所示，本实用新型的细胞滤器11的另一实例由柱形管腔12和位于管腔中的三个筛网13组成，筛网13周边与管腔12内壁无缝连接。
实施例3
如图3所示，本实用新型的细胞滤器21的另一实例由中部直径大于两端的筒形管腔22和位于管腔中的三个筛网23组成，最上面筛网孔径最大，中间筛网孔径居中，最下面筛网孔径最小，筛网23周边与管腔22内壁无缝连接。
实施例4：脐带间充质干细胞单细胞悬液制备
显微镜下观察贴壁培养的脐带间充质干细胞融合率达85％-90％后，将培养瓶取出培养箱，将培养瓶内旧培养液倒掉，用8-10ml PBS轻轻冲洗细胞培养瓶1-2遍，洗涤后的PBS弃去。每个培养瓶按比例(2ml/75cm2)加入0.125％胰蛋白酶和0.01％EDTA溶液消化细胞，轻轻摇动培养容器，使消化液流遍所有细胞表面，消化时间为1.5-2.5min，消化结束后向每个培养容器中加入生理盐水适量(5ml/75cm2)，反复吹打培养瓶底部使细胞大部分脱落。将20个培养瓶里的细胞悬液集中到一个培养瓶，得到细胞悬液共100ml，反复吹打，使细胞尽量分散。将细胞滤器的一端旋转连接到装有细胞悬液的培养瓶，另一端连接到一个空的容器，中间筛网为100目孔径。倒置，使细胞悬液转移到空的容器中，制得单细胞悬液。计数将该单细胞悬液调整到1×106/ml。经相差显微镜(200×)镜检，视野中全部是单细胞。
实施例4：原代脂肪干细胞过滤分离
抽脂来源的脂肪组织分装到T175培养瓶中，加入50ml生理盐水，反复三次充分洗涤脂肪组织，加入等量新配制的预热的胶原酶I溶液，封口膜封口，剧烈晃动培养瓶数下，置于气浴摇床中，37℃，充分消化，直到看起来较为平滑。加入等量培养基终止消化。将细胞滤器一端旋接到培养瓶上，另一端旋接到一个空培养瓶上，细胞滤器的中间筛网由40目μm孔径的筛网、70目孔径的筛网、100目孔径的筛网和150目孔径的筛网共四个不同规格的筛网组成，充分消化的脂肪组织经过这四个从大到小孔径的筛网的过滤，滤去了未消化的结缔组织和细胞团块，最终得到单细胞悬液。经相差显微镜(200×)镜检，视野中全部是单细胞。

Claims (10)

1.一种细胞滤器，其特征在于所述细胞滤器由管腔和位于管腔中的一个或多个筛网组成，所述筛网周边与所述管腔内壁无缝连接。
2.根据权利要求1所述的细胞滤器，其特征在于所述管腔的两端内壁为螺纹结构，以能够旋转连接至具有匹配螺纹结构的容器口的容器。
3.根据权利要求1或2所述的细胞滤器，其特征在于所述管腔为方形筒状、空心柱状、筒状、两端细中间粗的筒状或一端细另一端粗的筒状。
4.根据权利要求1或2所述的细胞滤器，其特征在于所述管腔的长度为5cm-30cm，并且/或者口径为2cm-10cm。
5.根据权利要求1或2所述的细胞滤器，其特征在于所述筛网有1-10个。
6.根据权利要求1或2所述的细胞滤器，其特征在于所述筛网的面积大于所述筛网周边截所述管腔的截面积。
7.根据权利要求1或2所述的细胞滤器，其特征在于所述筛网的孔径为4目-325目。
8.根据权利要求1或2所述的细胞滤器，其特征在于所述管腔的两端口径不同。
9.根据权利要求1或2所述的细胞滤器，其特征在于所述管腔由金属、塑料或聚丙烯制成。
10.根据权利要求1或2所述的细胞滤器，其特征在于所述筛网由尼龙丝制成。
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