CN104450496B - 体外受精培养筛及体外受精方法 - Google Patents

体外受精培养筛及体外受精方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104450496B
CN104450496B CN201410717130.7A CN201410717130A CN104450496B CN 104450496 B CN104450496 B CN 104450496B CN 201410717130 A CN201410717130 A CN 201410717130A CN 104450496 B CN104450496 B CN 104450496B
Authority
CN
China
Prior art keywords
sieve
external fertilization
sperm
sieve nest
hole
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201410717130.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104450496A (zh
Inventor
张丽红
盖凌
张伟
王时灿
孙林
丁海清
刘蓓
王琳琳
蒋宝宏
吕雪梅
李青
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201410717130.7A priority Critical patent/CN104450496B/zh
Publication of CN104450496A publication Critical patent/CN104450496A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104450496B publication Critical patent/CN104450496B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
    • C12M21/06—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for in vitro fertilization
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
    • C12M33/14—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus with filters, sieves or membranes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0608—Germ cells
    • C12N5/0612—Germ cells sorting of gametes, e.g. according to sex or motility
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C12N2509/10—Mechanical dissociation

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

本发明公开了一种体外受精培养筛，包括筛体，筛体边缘设有上侧边框和下侧边框，筛体上设有一能使吸管通过的小孔及孔道，孔道位于筛体上侧，筛体上遍布孔径小于卵子直径且能使正常精子自由通过的微孔。采用本发明的体外受精培养筛进行体外受精的方法为：(1)将体外受精培养筛放置入体外培养四孔皿的孔中，将培养液添加至体外培养四孔皿中；(2)将通过取卵术获得的卵冠丘复合体放置在培养筛上；(3)取精液，液化后采用密度梯度离心法分离精子，将精子通过小孔加入到体外培养四孔皿的底部，进行体外受精。本发明的体外受精培养筛，可达到优选精子受精的目的，且能减少凋亡细胞对受精卵的不良影响，有利于受精卵和胚胎的发育。

Description

体外受精培养筛及体外受精方法
技术领域
本发明涉及一种体外受精培养筛，是一种生殖医学试验中使用的设备及方法。
背景技术
体外受精(In vitro Fertilization，IVF)技术是应用特殊方法获取精子和成熟卵子，在体外完成受精过程的技术。受精卵在体外分裂成为胚胎后再将胚胎植入女方子宫内，使胚胎成长为胎儿。这种体外受精一胚胎移植技术的诞生打破了传统的女性输卵管阻塞生育无望的定论，使无数家庭享受到生儿育女的快乐。
获取精子后精子需要经体外处理以筛选优质精子，经典的做法是应用密度梯度离心法分离精子，有的实验室还要经过一次上游过程，以获得优质精子，处理后前向运动精子能达到90～95％，但仍有部分质量差的精子混于其中，因此，有些实验室会采用二次上游的方法继续筛选，但如此做费事费力，还会因增加离心次数进而造成对精子的损伤。
体外受精通常是卵泡成熟后利用取卵术获取卵冠丘复合体放入盛有培养液的培养皿，适时加入处理后的精子。最常用的培养皿是四孔培养皿。这种培养皿没有特殊设计，精子和卵冠丘复合体简单的放在一起完成受精过程。随着受精过程的进行，卵冠丘复合体颗粒细胞不断有细胞凋亡进而脱离复合体，随培养时间的延长，也会有一些精子死去，但由于培养皿过于简单的结构致使凋亡细胞和死精子积聚在受精卵周围，这可能会影响受精卵和胚胎发育。
发明内容
针对上述现有技术，为解决体外受精过程中死精子及卵子周围的颗粒细胞凋亡后积聚在卵子周围有可能对受精卵发育造成不良影响的问题，本发明提供了一种体外受精培养筛及体外受精方法，利用本发明的体外受精培养筛进行体外受精，可使受精过程中产生的死精子和凋亡颗粒细胞远离受精卵，从而以利于受精卵发育。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种体外受精培养筛，包括筛体，筛体边缘设有上侧边框和下侧边框，筛体上设有一能使吸管通过的小孔及孔道，孔道位于筛体上侧，筛体上分布多个孔径小于卵子直径(卵子直径约100μm)且能使正常精子自由通过的微孔。
优选的，所述小孔设在筛体边缘处或靠近边缘处。
优选的，所述筛体呈圆形，直径为200mm，厚度0.2mm，上侧边框高0.5mm，下侧边框高2mm，小孔直径2mm，孔道高0.5mm，微孔直径10μm(大约为3～4倍精子头部宽度)。
优选的，所述体外受精培养筛的材质为聚苯乙烯。
本发明的体外受精培养筛，使用时与经典的体外培养四孔皿结合使用(放入体外培养四孔皿的孔内，由于下侧边框的存在，可使筛体距离孔底部一定的距离，约为孔深的1/3)，采用本发明的体外受精培养筛进行体外受精的方法为：(1)将本发明的体外受精培养筛放置入体外培养四孔皿的孔中，然后通过小孔将培养液添加至体外培养四孔皿中，培养液液面高出筛体2mm；在CO2培养箱内平衡过夜；(2)将通过取卵术获得的卵冠丘复合体(卵子)放置在培养筛上；(3)取精液，液化后采用密度梯度离心法分离精子，分离的精子用培养液洗涤一次后，利用吸管将精子通过小孔加入到体外培养四孔皿的底部，精子会通过微孔上游到培养筛上层，与卵子相遇，进行体外受精。在受精过程中，活动力好的精子会通过微孔较早上游到筛体上方与卵子结合，达到优选精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘复合体的颗粒细胞也会脱离受精卵进而沉入体外培养四孔皿底部，从而减少了凋亡细胞对受精卵的不良影响，有利于受精卵和胚胎的发育。与经典体外受精技术(精子、卵子同时放入四孔培养皿中)相比，本发明的体外受精方法将卵子和精子分别放置；卵子放置在筛体上，而精子放在筛体底部，精子需经过上游至筛体上与卵子结合，通过上游法筛选高质量精子；同时受精过程中会产生凋亡颗粒细胞和死亡精子，这些细胞会通过微孔沉入四孔培养皿底部，以免凋亡细胞对受精卵发育造成的不良影响。
本发明的体外受精培养筛，使用时与经典的体外培养四孔皿结合使用，靠近培养筛边缘处有一能使吸管通过小孔，小孔上设有孔道以高出培养筛平面，以防卵子落入小孔。筛体上遍布孔径小于卵子且能使正常精子自由通过的微孔，体外受精时，加入培养液后，洗涤过的精子用吸管通过小孔加到四孔皿的底部，卵冠丘复合体(包含卵子)放在培养筛上，活动力好的精子会较早上游到培养筛上与卵子结合，达到优选精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘复合体的颗粒细胞也会脱离受精卵而沉入四孔皿底部，从而减少了凋亡细胞对受精卵的不良影响，有利于受精卵和胚胎的发育。
附图说明
图1：本发明的体外受精培养筛的结构示意图。
图2：本发明的体外受精培养筛的俯视图。
图3：图2中A处结构放大示意图。
图4：常规的体外培养四孔皿示意简图(俯视图)。
图5：常规的体外培养四孔皿的照片。
其中，1、筛体；2、上侧边框；3、下侧边框；4、小孔；5、孔道；6、微孔。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
一种体外受精培养筛，包括筛体，如图1、图2所示，筛体边缘设有上侧边框和下侧边框，筛体边缘处设有一能使吸管通过的小孔及孔道，孔道位于筛体上侧，筛体上分布多个孔径小于卵子直径(卵子直径约100μm)且能使正常精子自由通过的微孔，如图3所示。
所述筛体呈圆形，直径为200mm，厚度0.2mm，上侧边框高0.5mm，下侧边框高2mm，小孔直径2mm，孔道高0.5mm，微孔直径10μm(大约为3～4倍精子头部宽度)。
所述体外受精培养筛的材质为聚苯乙烯。
本发明的体外受精培养筛，使用时与经典的体外培养四孔皿(如图4、图5所示)结合使用(放入体外培养四孔皿的孔内，由于下侧边框的存在，可使筛体距离孔底部一定的距离，约为孔深的1/3)，采用本发明的体外受精培养筛进行体外受精的方法为：(1)将本发明的体外受精培养筛放置入体外培养四孔皿的孔中，然后通过小孔将培养液添加至体外培养四孔皿中，培养液液面高出筛体2mm；在CO2培养箱内平衡过夜；(2)将通过取卵术获得的卵冠丘复合体(卵子)放置在培养筛上；(3)取精液，液化后采用密度梯度离心法分离精子，分离的精子用培养液洗涤一次后，利用吸管将精子通过小孔加入到体外培养四孔皿的底部，精子会通过微孔上游到培养筛上层，与卵子相遇，进行体外受精。在受精过程中，活动力好的精子会通过微孔较早上游到筛体上方与卵子结合，达到优选精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘复合体的颗粒细胞也会脱离受精卵进而沉入体外培养四孔皿底部，从而减少了凋亡细胞对受精卵的不良影响，有利于受精卵和胚胎的发育。与经典体外受精技术(精子、卵子同时放入四孔培养皿中)相比，本发明的体外受精方法将卵子和精子分别放置；卵子放置在筛体上，而精子放在筛体底部，精子需经过上游至筛体上与卵子结合，通过上游法筛选高质量精子；同时受精过程中会产生凋亡颗粒细胞和死亡精子，这些细胞会通过微孔沉入四孔培养皿底部，以免凋亡细胞对受精卵发育造成的不良影响。

Claims (5)

1.一种体外受精培养筛，其特征在于：包括筛体，筛体边缘设有上侧边框和下侧边框，筛体上设有一能使吸管通过的小孔及孔道，孔道位于筛体上侧，筛体上分布多个孔径小于卵子直径且能使正常精子自由通过的微孔。
2.根据权利要求1所述的体外受精培养筛，其特征在于：所述小孔设在筛体边缘处或靠近边缘处。
3.根据权利要求1所述的体外受精培养筛，其特征在于：所述筛体呈圆形，直径为200mm，厚度0.2mm，上侧边框高0.5mm，下侧边框高2mm，小孔直径2mm，孔道高0.5mm，微孔直径10μm。
4.根据权利要求1所述的体外受精培养筛，其特征在于：所述体外受精培养筛的材质为聚苯乙烯。
5.利用权利要求1～4中任一项所述的体外受精培养筛进行体外受精的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将体外受精培养筛放置入体外培养四孔皿的孔中，然后通过小孔将培养液添加至体外培养四孔皿中，培养液液面高出筛体2mm；在CO2培养箱内平衡过夜；(2)将卵冠丘复合体放置在筛体上；(3)取精液，液化后采用密度梯度离心法分离精子，分离的精子用培养液洗涤一次后，利用吸管将精子通过小孔加入到体外培养四孔皿的底部，精子会通过微孔上游到培养筛上层，与卵子相遇，进行体外受精。
CN201410717130.7A 2014-12-02 2014-12-02 体外受精培养筛及体外受精方法 Expired - Fee Related CN104450496B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410717130.7A CN104450496B (zh) 2014-12-02 2014-12-02 体外受精培养筛及体外受精方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410717130.7A CN104450496B (zh) 2014-12-02 2014-12-02 体外受精培养筛及体外受精方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104450496A CN104450496A (zh) 2015-03-25
CN104450496B true CN104450496B (zh) 2016-08-24

Family

ID=52897255

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410717130.7A Expired - Fee Related CN104450496B (zh) 2014-12-02 2014-12-02 体外受精培养筛及体外受精方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104450496B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105936890A (zh) * 2016-06-27 2016-09-14 广西壮族自治区妇幼保健院 应用卵丘细胞复合物优选精子的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201309926Y (zh) * 2008-04-26 2009-09-16 童先宏 一种体外受精胚胎移植技术中使用的捡卵皿
CN201309925Y (zh) * 2008-04-26 2009-09-16 刘雨生 一种体外受精胚胎移植技术中使用的拆颗粒细胞皿
CN101851606A (zh) * 2010-04-07 2010-10-06 魏红江 卵丘-卵母细胞复合体刀切过滤法
CN202482320U (zh) * 2012-01-09 2012-10-10 厚朴生物科技（苏州）有限公司 一种细胞滤器
CN204342767U (zh) * 2014-12-02 2015-05-20 张丽红 体外受精培养筛

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201309926Y (zh) * 2008-04-26 2009-09-16 童先宏 一种体外受精胚胎移植技术中使用的捡卵皿
CN201309925Y (zh) * 2008-04-26 2009-09-16 刘雨生 一种体外受精胚胎移植技术中使用的拆颗粒细胞皿
CN101851606A (zh) * 2010-04-07 2010-10-06 魏红江 卵丘-卵母细胞复合体刀切过滤法
CN202482320U (zh) * 2012-01-09 2012-10-10 厚朴生物科技（苏州）有限公司 一种细胞滤器
CN204342767U (zh) * 2014-12-02 2015-05-20 张丽红 体外受精培养筛

Also Published As

Publication number Publication date
CN104450496A (zh) 2015-03-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110903976B (zh) 一种用于类器官球体培养的孔板装置
CN107475078A (zh) 一种基于微流控技术的精子筛选与体外受精仿生装置
CN204443741U (zh) 一种适用于稻飞虱饲养与生物学观察的装置
Kobayashi et al. Gonadal morphogenesis and sex differentiation in cultured chub mackerel, Scomber japonicus
CN109220902A (zh) 一种静水压诱导虹鳟三倍体的制种方法
CN202945247U (zh) 具有单培养、共培养及群培养优势的人胚胎培养皿
CN104450496B (zh) 体外受精培养筛及体外受精方法
CN104531612A (zh) 卵母细胞培养液及其培养方法
CN204342767U (zh) 体外受精培养筛
CN102893938A (zh) 黄尾密鲴与翘嘴红鲌亚科间远缘杂交的方法
CN102876573A (zh) 一种哺乳动物胚胎体外培养器及其培养方法
CN205179889U (zh) 一种多层式马铃薯幼苗培育装置
CN104531608A (zh) 一种欧洲鳗鲡肝脏细胞系及其构建方法和应用
CN207151300U (zh) 一种水培与土培组合式苗木培育器
CN102487895A (zh) 一种可口革囊星虫人工育苗的养殖技术
CN103642689B (zh) 一种哺乳动物胚胎的体外微动态培养装置及用其培养胚胎的方法
CN102524185B (zh) 一种用于昆虫观测实验的泡沫试管台及其应用方法
CN109496922A (zh) 一种静水压诱导虹鳟四倍体的制种方法
CN204560633U (zh) 一种实验用鱼类胚胎发育培养装置
CN203748447U (zh) 一种应用于固定虹鳟鱼受精卵的装置
CN103343142B (zh) 一种利用连续克隆技术生产孤雌生殖克隆猪的方法
CN104855321A (zh) 一种适用于菲律宾蛤仔的三倍体化学诱导方法
CN109418157B (zh) 一种提高原球茎多糖含量的方法及其所用培养基与应用
CN104099246A (zh) 微型孵育器
CN206428271U (zh) 胚胎培养皿

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20160824

Termination date: 20161202

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee