CN105132121B - 海狗油的精制方法及其在防治脂肪肝和前列腺增生的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了海狗油的精制方法，采用分子蒸馏法提纯海狗油，蒸馏温度低、系统真空度高，物料受热时间短，可有效防止加工过程中有效成分氧化分解，可维持高通量的稳定进行，一改传统方法工程序复杂，劳动强度大，无法连续生产，有机化学物残留等缺点，并在水系环境下利用微生物脂肪酶合成多不饱和脂肪酸甘油酯的形式，更利于人体吸收消化。本发明所制得的海狗油富含EPA、DHA、DPA等多种多不饱和脂肪酸，色、味指标较好，可用于脂肪肝和前列腺增生防治等保健应用。

Description

海狗油的精制方法及其在防治脂肪肝和前列腺增生的应用

技术领域

本发明属于保健食品加工技术领域，具体说是海狗油的精制方法及其在防治脂肪肝和前列腺增生的应用。

背景技术

海狗油，见于《本草纲目拾遗·卷九·兽部》，言“性热而降，善消利，治三焦浊逆之气，能清水脏积寒停饮”，“涂皲瘃”。历代本草对海狗肾论及较多，但对海狗油记载较少，仅《本草纲目拾遗》补记，除“涂皲瘃，即愈，次年不复发外”。海狗油富含的二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)等多种多不饱和脂肪酸，对降低血脂，脂肪肝，抗前列腺增生，益智，支气管炎、哮喘、皮肤病、心脏病、癌症等都有很好效果，此外还含有2-3％的角鲨烯，可有效抑制食物中不良胆固醇的吸收并加速其代谢，具有防癌，滋润皮肤的作用。

近年来，随着国外科学家对海狗油研究的深入，对其所具有的生物活性和药理作用有了进一步的认识，海狗油中的ω-3多不饱和脂肪酸较鱼油中的易于被人体消化吸收，但目前国内外市场上所售的ω-3多不饱和脂肪酸类的产品大部分还主要来自鱼油，来自海狗油的产品尚处于开发阶段。因此，开发研究海狗油功能性食品具有非常广阔的应用前景和经济价值。

目前，海狗油的精制方法有多种，传统酯化法，能耗大、程序复杂；金属盐沉淀法，掺有少量有机溶剂；尿素包合法，DPA纯化效果不好，而分子蒸馏法最显著的特点是蒸馏物料的分子由蒸发面到冷凝面的行程不受分子间碰撞力的影响，两面之间的距离小于蒸馏物料的分子运动平均自由程，具有蒸馏温度低、工作真空度高、物料受热时间短特点，已经广泛应用于食品、制药和化妆品行业用于提纯高沸点、热敏性及易氧化物质。但需注意的是，纯化分离后海狗油富含的多不饱和脂肪酸一般以：游离脂肪酸、乙酯或甘油酯形式存在，而游离脂肪酸易氧化，不易保存，且带有酸味，风味差，并且以游离脂肪酸形式存在时也不能被人体很好的吸收。如何精制出一种营养成分高，口感好且易于人体消化吸收的海狗油是研究重点。

发明内容

本发明针对现有技术之不足，提供海狗油的精制方法，保留了海狗油中纯天然有效营养成分，一改传统工艺成分品质低、能耗大、无法连续生产、劳动强度大等缺点，可长期保持在高通量下稳定运行，蒸馏过程无污染，工艺简单可，品质优良。本发明还提供了其在防治脂肪肝和前列腺增生的应用。

本发明所述海狗油的精制方法，包括如下步骤：

1)海狗动物脂肪前处理：

a、将海狗动物脂肪置于匀浆机中粉碎或切碎；

b、将粉碎或切碎后的海狗动物脂肪置于水中浸泡；

c、将浸泡后的海狗动物脂肪离心，分离出脂肪原料和水；

2)将步骤1)得到的脂肪原料采用分子蒸馏法进行分离纯化处理：

a、一级脱气：预热温度80℃，进料速率70-80L/h，蒸馏温度100℃，操作压力100Pa，刮膜转速150r/min，有效成分进入重相；

b、首次分离：取一级脱气后的重相加入进料器，80℃预热，150℃蒸馏，操作压力15Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min，得重相；

c、第二步分离：取首次分离的重相加入进料器，80℃预热，120℃蒸馏，操作压力降到0.2Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min；

d、收集：收集第二步分离得到海狗油粗品；

3)催化合成：采用酶促法在水系环境下用N435脂肪酶催化步骤2)得到的海狗油粗品与甘油合成富含EPA、DHA和DPA的甘油酯，其中，甘油：海狗油粗品＝0.2:1(g/g)，N435脂肪酶：海狗油粗品＝1:(8-10)(g/g)，反应时间24h，反应温度50℃，初始加水量0.5％，摇床转速200r/min，分子筛在反应开始后12h时加入，加热灭酶活，抽滤，得成品。

本发明步骤1)所述的浸泡，优选置于40-50℃水中浸泡15-20min，所述的离心，优选3500r/min，15-25min。

步骤3)所述的分子筛，优选型号为4A型。

本发明还涉及采用上述精制方法得到的海狗油，以及得到的海狗油在防治脂肪肝和前列腺增生的应用。

和现有技术相比，本发明的优点在于：

1、本发明所述的技术方案，以海狗动物脂肪为原料采用分子蒸馏法纯化精制海狗油，充分利用了分子蒸馏技术三大优点：蒸馏温度低、工作真空度高、物料受热时间短，能比较完全地保留海狗油多不饱和脂肪酸的营养和生理活性，含量高，且由于分子蒸馏是纯物理过程，节省大量溶剂，同时环境污染少，对操作者健康危害低，可维持高通量的稳定进行。

2、本发明所述的技术方案，采用脂肪酶N435在水系体系中催化EPA、DHA、DPA等多不饱和脂肪酸和甘油合成更利于人体吸收消化的EPA、DHA、DPA甘油酯形式，考虑到脂肪酶催化合成是可逆反应，水作为反应产物之一，反应平衡受水的量影响，含水量过大，反应的酯化率降低，而含水量过少，脂肪酶难以维持一定的构象和活性，特别控制反应体系中水含量，使得高产率形成甘油酯的同时抑制不必要的水解，在酶促反应后期通过添加分子筛，作为除水剂而达到目的能显著提高酯化率。

3、本发明以海狗动物脂肪为原料，采用分子蒸馏技术，能比较完整地保留了海狗油中二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)等多种多不饱和脂肪酸，营养成分高，一改传统工艺成分品质低、能耗大、无法连续生产、劳动强度大等缺点；采用了水系酶促法在温和条件将游离多不饱和脂肪酸与甘油充分酯化，且一步完成，操作简便，合成的脂肪酸甘油酯的形式更利于人体吸收和消化，口感好，较好地应用于防治脂肪肝和前列腺增生的等保健领域。

具体实施方式

下面以实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于这些实施例。

实施例1

海狗油的精制方法，包括如下步骤：

1)海狗动物脂肪预处理：

a、海狗动物脂肪于匀浆机中进行粉碎；

b、粉碎后的海狗动物脂肪于40℃水中浸泡15min，清洗干净；

c、浸泡后的海狗动物脂肪离心，3500r/min，15min，分离出脂肪原料和水；

2)将前处理得到的脂肪原料采用分子蒸馏法分离纯化多不饱和脂肪酸：

a、一级脱气：预热温度80℃，进料速率70-80L/h，蒸馏温度100℃，操作压力100Pa，刮膜转速150r/min，有效成分进入重相；

b、首次分离：取一级脱气后的重相加入进料器，80℃预热，150℃蒸馏，操作压力15Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min，得重相；

c、第二步分离：取首次分离的重相加入进料器，80℃预热，120℃蒸馏，操作压力降到0.2Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min；

d、收集：收集第二步分离得到海狗油粗品；

3)采用酶促法催化多不饱和脂肪酸与甘油合成甘油酯的形式：

甘油：海狗油粗品＝0.2:1(g/g)，N435脂肪酶：海狗油粗品＝1:8(g/g)，反应时间24h，反应温度50℃，初始加水量0.5％，摇床转速200r/min，分子筛在反应开始后12h时加入，型号为4A型，加热灭酶活，抽滤，得成品。

实施例2

海狗油的精制方法，包括如下步骤：

1)海狗动物脂肪预处理：

a、海狗动物脂肪于匀浆机中进行切碎；

b、切碎后的海狗动物脂肪于50℃水中浸泡20min，清洗干净；

c、浸泡后的海狗动物脂肪离心，3500r/min，20min，分离出脂肪原料和水；

2)将前处理得到的脂肪原料采用分子蒸馏法分离纯化多不饱和脂肪酸：

a、一级脱气：预热温度80℃，进料速率70-80L/h，蒸馏温度100℃，操作压力100Pa，刮膜转速150r/min，有效成分进入重相；

b、首次分离：取一级脱气后的重相加入进料器，80℃预热，150℃蒸馏，操作压力15Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min，得重相；

c、第二步分离：取首次分离的重相加入进料器，80℃预热，120℃蒸馏，操作压力降到0.2Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min；

d、收集：收集第二步分离得到海狗油粗品；

3)采用酶促法催化多不饱和脂肪酸与甘油合成甘油酯的形式：

甘油：海狗油粗品＝0.2:1(g/g)，N435脂肪酶：海狗油粗品＝1:10(g/g)，反应时间24h，反应温度50℃，初始加水量0.5％，摇床转速200r/min，分子筛在反应开始后12h时加入，型号为4A型，加热灭酶活，抽滤，得成品。

实施例3

海狗油的精制方法，包括如下步骤：

1)海狗动物脂肪预处理：

a、海狗动物脂肪于匀浆机中进行切碎；

b、切碎后的海狗动物脂肪于45℃水中浸泡18min，清洗干净；

c、浸泡后的海狗动物脂肪离心，3500r/min，25min，分离出脂肪原料和水；

2)将前处理得到的脂肪原料采用分子蒸馏法分离纯化多不饱和脂肪酸：

a、一级脱气：预热温度80℃，进料速率70-80L/h，蒸馏温度100℃，操作压力100Pa，刮膜转速150r/min，有效成分进入重相；

b、首次分离：取一级脱气后的重相加入进料器，80℃预热，150℃蒸馏，操作压力15Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min，得重相；

c、第二步分离：取首次分离的重相加入进料器，80℃预热，120℃蒸馏，操作压力降到0.2Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min；

d、收集：收集第二步分离得到海狗油粗品；

3)采用酶促法催化多不饱和脂肪酸与甘油合成甘油酯的形式：

甘油：海狗油粗品＝0.2:1(g/g)，N435脂肪酶：海狗油粗品＝1:9(g/g)，反应时间24h，反应温度50℃，初始加水量0.5％，摇床转速200r/min，分子筛在反应开始后12h时加入，型号为4A型，加热灭酶活，抽滤，得成品。

实验例：药理实验

试验1：海狗油对脂肪肝的预防作用

1主要供试品溶液：实施例1制成的海狗油。

2动物：Wistar大鼠，60只，雄性，SPF级，体重200-250g。

3主要实验仪器：UV1700紫外分光光度仪(岛津德国股份有限公司)。

4方法：

取雄性Wistar大鼠60只，按体重随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组和模型组、阳性对照组、海狗油低剂量组、海狗油中剂量组、海狗油高剂量组，其中空白对照组未经任何药物处理并饲以基础饲料，其余各组均给以大鼠第ld均后肢内侧皮注40％四氯化碳橄榄油溶液3mL/kg，并开始饲以高脂饲料，同时各组灌胃方式分别给予等体积橄榄油(模型组)、辛伐他汀4mg/kg(阳性对照组)、海狗油0.5g/kg(海狗油低剂量组)、海狗油2g/kg(海狗油中剂量组)和海狗油5g/kg(海狗油高剂量组)，每天1次，连续10周。

最后一次给药结束24h后，处死大鼠，迅速剖腹取出肝脏，在滤纸上吸干血水，取相同部位肝组织100mg，置于装有预冷的异丙醇2mL的玻璃组织研磨器中研磨，4℃静置抽提48h后，再加入预冷的异丙醇3mL使为2％的肝匀浆液，3500r/min，离心5min，取上清液，测定每g肝脏中TC、TG；另取肝组织200mg，置于装有预冷的生理盐水2mL的玻璃组织研磨器中研磨，4℃静置抽提24h，制备10％的生理盐水肝匀浆液，3500r/min，离心5min，取上清液测定每g肝脏中的FFA。

5数据处理：

实验数据以(X±s)表示，数据统计用SPSS11.0软件进行，组间对照采用one wayanova进行。

海狗油对大鼠肝脏脂质的影响

注：*，**与模型对照组比较，P<0.05，P<0.01

6讨论：

模型组大鼠血清TC、TG和FFA均明显升高，说明实验造模成功，各给药组包括阳性对照组以及各剂量海狗油组均能不同程度的降低三个指标，从海狗油各剂量组分析，呈现出一定的量效关系，表明本发明制成的海狗油可明显较低肝脏中的FFA值，保护肝脏，防止肝细胞的脂肪性变和肝脏的损伤，改善肝功能。

试验2海狗油对前列腺增长的抑制作用试验

1主要供试品溶液：实施例1制成的海狗油。

2动物：Wistar大鼠，雄性，SPF级，体重150-200g；

3主要实验仪器：4010型自动生化分析仪

4方法：

取Wistar大鼠60只，按体重随机分为6组，每组10只，分别为空白对照组和模型组、阳性对照组、海狗油低剂量组、海狗油中剂量组、海狗油高剂量组，其中空白对照组未经任何药物处理并饲以基础饲料，其余各组静脉注射戊巴比妥钠45mg/kg(0.6％，7.0mL/kg)麻醉，消毒阴囊皮肤，摘除双侧睾丸，为防止感染，术后肌注青霉素G钠2万U/kg。饲养1周后，每只皮下注射丙酸睾丸素2.5mg/kg，每天1次，连续给药30天，同时分别对模型组灌胃生理盐水，阳性对照组皮下注射雌二醇50μg/kg，海狗油低剂量组灌胃0.5g/kg、海狗油中剂量组灌胃2g/kg，海狗油高剂量组灌胃5g/kg。于末次结药后24h处死大鼠，称体重，剖腹并剪取前列腺腹叶、背叶和侧叶称湿重。计算前列腺各叶系数(mg/100g体重)，然后置于45℃烤箱中干燥48h后称重，称量前列腺各叶干重。

5数据处理：

实验数据以(X±s)表示，数据统计用SPSS11.0软件进行，组间对照采用one wayanova进行。

海狗油对前列腺增生模型大鼠各叶湿重系数影响结果

##与空白组比较P<0.01*，**与模型对照组比较P<0.05，P<0.01

海狗油对前列腺增生模型大鼠各叶干重影响结果

##与空白组比较P<0.01*，**与模型对照组比较P<0.05，P<0.01

6讨论：

给丙酸睾丸素后，大鼠前列腺湿重系数和干重明显增加，表明造模成功，给海狗油后，湿重系数和干重均减少，与阳性药作用相似，且呈现一定的量效关系，丙酸睾丸素引起的前列腺重量增加受到抑制，有统计学意义，表明海狗油有抑制前列腺增生的保健作用。

Claims (4)

1.海狗油的精制方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)海狗动物脂肪前处理：

a、将海狗动物脂肪置于匀浆机中粉碎或切碎；

b、将粉碎或切碎后的海狗动物脂肪置于水中浸泡；

c、将浸泡后的海狗动物脂肪离心，分离出脂肪原料和水；

2)将步骤1)得到的脂肪原料采用分子蒸馏法进行分离纯化处理：

a、一级脱气：预热温度80℃，进料速率70-80L/h，蒸馏温度100℃，操作压力100Pa，刮膜转速150r/min，有效成分进入重相；

b、首次分离：取一级脱气后的重相加入进料器，80℃预热，150℃蒸馏，操作压力15Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min，得重相；

c、第二步分离：取首次分离的重相加入进料器，80℃预热，120℃蒸馏，操作压力降到0.2Pa，进料速率80L/h，刮膜转速250r/min；

d、收集：收集第二步分离得到海狗油粗品；

3)催化合成：采用酶促法在水系环境下用N435脂肪酶催化步骤2)得到的海狗油粗品与甘油合成富含EPA、DHA和DPA的甘油酯，其中，甘油：海狗油粗品g/g＝0.2:1，N435脂肪酶：海狗油粗品g/g＝1:(8-10)，反应时间24h，反应温度50℃，初始加水量0.5％，摇床转速200r/min，分子筛在反应开始后12h时加入，加热灭酶活，抽滤，得成品。

2.根据权利要求1所述的海狗油的精制方法，其特征在于：步骤1)所述的浸泡，为置于40-50℃水中浸泡15-20min，所述的离心，为3500r/min，15-25min。

3.根据权利要求1所述的海狗油的精制方法，其特征在于：步骤3)所述的分子筛，型号为4A型。

4.权利要求1-3任一所述的精制方法得到的海狗油。