CN105126082A

CN105126082A - 一种多肽药物制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN105126082A
Application number: CN201510607509.7A
Authority: CN
Inventors: 李霞; 黄河青; 谭永利; 张明会
Original assignee: Qilu Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Qilu Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2015-09-22
Filing date: 2015-09-22
Publication date: 2015-12-09
Anticipated expiration: 2035-09-22
Also published as: CN105126082B

Abstract

本发明公开了一种以枸橼酸和碳酸盐的混合物为缓冲盐体系的多肽药物制剂，该制剂包括GLP-1类似物，缓冲剂，等渗调节剂或稳定剂，防腐剂。本发明的优点在于使用较少量的缓冲盐使多肽药物制剂的pH稳定在较高pH条件，同时该缓冲盐可以减少GLP-1类似物的聚集、降解、氧化和沉淀，保证药物制剂在运输、贮存过程中的稳定性。本发明还公开了上述多肽药物制剂的制备方法。

Description

一种多肽药物制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于GLP-1类似物药物制剂领域，具体是指在枸橼酸盐和碳酸盐组成的缓冲盐体系中配制的GLP-1类似物药物制剂，更具体地涉及利拉鲁肽药物制剂及其制备方法。

背景技术

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是一种由末端空肠、回肠和结肠的L细胞所分泌的葡萄糖依赖性肠降血糖多肽激素。GLP-1对人体有多重生理作用：第一，GLP-1能作用于胰腺的β细胞，可以葡萄糖浓度依赖性地诱导胰岛素分泌，提高β细胞敏感性，促进胰岛素的合成；由动物试验还发现GLP-1可以增加β细胞的量；GLP-1还可作用于α细胞，抑制胰高糖素的分泌，因此，GLP-1能够有效降低血糖且不增加低血糖发生。第二，GLP-1可作用于大脑，可以增加饱腹感，从而减少能量摄入，还可以改善认知与记忆功能。第三，GLP-1还可作用于肝脏、胃肠道和心脏，从而减少肝糖输出，减弱胃肠运动，延缓胃排空，保护与改善心脏功能。正是由于以上多重作用，GLP-1被开发用于治疗2型糖尿病。

利拉鲁肽(liraglutide)化学名称为：Arg³⁴Lys²⁶-(N-ε-(γ-Glu(N-α-十六酰基)))-GLP-1[7-37]；分子式为C₁₇₂H₂₆₅N₄₃O₅₁；相对分子质量为3751.20Da；化学结构式如下：

利拉鲁肽是一种GLP-1类似物，与人GLP-1具有97％的序列同源性，利拉鲁肽是在内源性GLP-1的结构基础上进行了两处修饰：一是在第26位氨基酸处增加了一个16碳的棕榈酰脂肪酸侧链；另一是将第34位的赖氨酸置换成精氨酸，这种的结构改变带来的结果是利拉鲁肽可以从皮下组织缓慢吸收，不易被DPP-IV酶降解，其半衰期延长到13个小时，降糖作用可以持续24小时，同时保持了与人GLP-1的高度同源性(97％)，很少产生抗体。

目前上市的GLP-1类似物药物，包括利拉鲁肽、阿必鲁肽，以及胰岛素类药物、皮下注射类药物所用缓冲盐大多数为磷酸缓冲盐，然而人们平常食用的大多数食物都包含相当量的磷酸盐，除了患某些疾病或接受全营养输液的患者外，一般人是不会患低磷酸盐血症(磷酸盐缺乏症)的，相反，磷酸盐摄取过多(注射给药，或者对于肾衰竭的患者)，可能引起高磷酸血症，导致低血钙症或其他严重的电解质失调。若使用枸橼酸盐和碳酸盐作为上述药物体系的缓冲盐时可避免对人体的上述损害。

药物的纯度，是指药物的纯净程度。在药物的研究、生产、供应和临床使用等方面，必须保证药物的纯度，才能保证药物的有效和安全。药物中含有杂质是影响纯度的主要因素，如药物中含有超过限量的杂质，就有可能使理化常数变动，外观性状产生变异，并影响药物的稳定性；杂质增多也使药物含量明显偏低或活性降低，毒副作用显著增加。

多肽类药物在长期贮存过程中容易受其所处环境中酸、碱、水等因素的影响，其理化、生物学性质会发生变化，所以药物在贮存和运输过程中，对环境要求比较高，如：低温、避光、避免冷冻及振荡等。然而在运输和贮存环境中，药物的保存无法达到上述要求，药物容易受环境的影响而发生吸附、降解、聚集、氧化等影响药物稳定性的变化，产生药物杂质，使药物纯度降低。本发明在试验过程中发现枸橼酸盐-碳酸盐组合物制成的缓冲盐更能保证药物的稳定性。并且使用多种纯度检测方法和有关物质的对比证明，使用枸橼酸-碳酸钠缓冲盐配置的GLP-1类似物药物组合物的稳定性优于使用磷酸盐缓冲盐配制的GLP-1类似物药物组合物的稳定性。

发明内容

本发明通过处方筛选和稳定性试验，获得了一种以枸橼酸盐-碳酸盐为缓冲剂的稳定的含有GLP-1类似物的多肽药物制剂。

一种含有GLP-1类似物的多肽药物制剂，其中所述GLP-1类似物选自利拉鲁肽、艾塞那肽、阿必鲁肽、杜拉鲁肽、利司那肽、索玛鲁肽，所述多肽药物制剂的缓冲剂选自枸橼酸盐和碳酸盐的混合物；所述多肽药物制剂的pH值范围为4.0-10.0。

优选地，本发明的一种多肽药物制剂，所述缓冲剂选自枸橼酸和碳酸钠的混合物。

本发明的一种多肽药物制剂，所述多肽药物制剂中枸橼酸的浓度范围为0.01-10mg/ml，优选0.1-1mg/ml，更优选0.2-0.6mg/ml；所述碳酸钠的浓度范围为0.01-15mg/ml，优选0.1-3mg/ml，更优选0.3-0.8mg/ml。

本发明是在保证体系溶液具有抵抗外来少量强酸、强碱和水的稀释而保持溶液pH基本不变、且溶液渗透压符合等渗要求的基础上，使用少量的缓冲盐。在本发明的多肽药物制剂中使用少量枸橼酸-碳酸盐组成的缓冲盐之后，使得本制剂的pH稳定在较高pH条件，同时，使用该缓冲盐体系能够减少GLP-1类似物的聚集、降解、氧化和沉淀，保证药物制剂在运输、贮存过程中的稳定性。

本发明的一种多肽药物制剂，所述GLP-1类似物为利拉鲁肽，所述多肽药物制剂中利拉鲁肽的浓度范围为1-12mg/ml，优选3-9mg/ml，更优选4-8mg/ml，最优选6mg/ml；所述多肽药物制剂的pH值范围为7.4-8.9。

本发明的一种多肽药物制剂，还包括药学上可接受的防腐剂，所述防腐剂选自苯酚、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、2－苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、2－苯基乙醇、苯甲醇、氯丁醇、氯甲酚、对羟基苯甲酸乙酯之一或其任意混合；优选的防腐剂为苯酚、间甲酚之一或其混合物；更优选的防腐剂为苯酚；所述防腐剂的浓度范围为0.1-15mg/ml，优选2-8mg/ml，更优选4.5-6.5mg/ml。

本发明的一种多肽药物制剂，还包括等渗调节剂，所述等渗调节剂选自甘油、丙二醇、PEG400、甘露醇、海藻糖、氯化钠、山梨醇、蔗糖、精氨酸、甘氨酸；优选的等渗调节剂为丙二醇或甘油；所述等渗调节剂的浓度范围为1-30mg/ml，优选10-20mg/ml，更优选13-18mg/ml。

本发明的一种多肽药物制剂，还包括稳定剂，所述稳定剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯80、泊洛沙姆188；优选的稳定剂为聚山梨酯80；所述稳定剂的浓度范围为0.1-1mg/ml。

本发明还涉及一种制备上述多肽药物制剂的方法，包括如下步骤：

a)将枸橼酸和碳酸钠溶解于水得第一种溶液；

b)将等渗调节剂(或稳定剂)及防腐剂溶解于第一种溶液，得第二种溶液；

c)将GLP-1类似物溶解于水得第三种溶液；

d)将第二种溶液和第三种溶液混合；

e)将d)中得到的混合溶液的pH值调节至4.0-10.0；

f)将e)中所得溶液使用0.22μm的滤器过滤、无菌分装，既得所述多肽药物制剂产品；

或者包括如下步骤：

a)将枸橼酸和碳酸钠溶解于水得第一种溶液；

c)将GLP-1类似物溶解于第二种溶液；

d)将c)中得到的混合溶液的pH调节至4.0-10.0；

e)将d)中所得溶液使用0.22μm的滤器过滤、无菌分装，既得所述多肽药物制剂产品。

进一步地，本发明的上述制备方法，其中所述枸橼酸的浓度范围为0.01-10mg/ml，优选0.1-1mg/ml；所述碳酸钠的浓度范围为0.01-15mg/ml，优选0.1-3mg/ml；所述制剂的pH值范围为7.4-8.9。

本发明发现使用枸橼酸-碳酸钠缓冲盐不仅可以将制剂稳定在偏碱的pH范围内，并能明显提高GLP-1类似物药物的稳定性，样品在37℃条件下存放1个月，使用分子筛高效液相、反相高效液相及电泳方法对药物的纯度进行测定，结果显示，GLP-1药物的分子筛高效液相色谱纯度和电泳纯度在97％以上，优于磷酸氢二钠缓冲体系中样品的纯度；

同时，经RP-HPLC检测，枸橼酸-碳酸钠缓冲盐的GLP-1药物较磷酸氢二钠体系中的GLP-1药物产生杂质较少；枸橼酸-碳酸钠缓冲盐体系样品溶液保持无色澄清，未见可见异物。

综上可知，本发明选用的枸橼酸-碳酸盐缓冲盐体系可以减少GLP-1类似物的降解、氧化、沉淀和聚集，保证药物制剂在运输和贮存过程中的稳定性，保证药物的纯度，减少药物中聚体及其他杂质的产生，减少药物的毒副作用，降低用药风险，提高药物的安全性。

具体实施方式

下面通过实施例来进一步说明本发明。应当理解为：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，在本发明技术方案的前提下对本发明的简单改进均属于本发明的保护范围。

枸橼酸-碳酸钠缓冲盐配制GLP-1类似物药物制剂处方

以枸橼酸-碳酸钠为缓冲盐，设计GLP-1类似物药物制剂处方组成如下：

1、枸橼酸-碳酸钠缓冲盐用量

实施例1

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.2mg/ml
		碳酸钠	0.8mg/ml
丙二醇	14mg/ml
		苯酚	5.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.9

实施例2

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.6mg/ml
		碳酸钠	0.3mg/ml
丙二醇	14mg/ml
		苯酚	5.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至7.4

实施例3

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
丙二醇	14mg/ml
		苯酚	5.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

2、利拉鲁肽用量

实施例4

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	4mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
丙二醇	14mg/ml
		苯酚	5.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

实施例5

实施例6

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	8mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
丙二醇	14mg/ml
		苯酚	5.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

3、防腐剂用量

实施例7

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
丙二醇	14mg/ml
		苯酚	4.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

实施例8

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.8mg/ml
丙二醇	14mg/ml
		苯酚	6.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

4、等渗调节剂种类及用量

实施例9

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
丙二醇	13mg/ml
		苯酚	5.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

实施例10

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
丙二醇	18mg/ml
		苯酚	5.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

实施例11

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
甘油	13mg/ml
		苯酚	5.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

实施例12

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
甘油	18mg/ml
		苯酚	5.5mg/ml
氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

5、稳定剂种类及用量

实施例13

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
聚山梨酯80	1mg/ml
		氯化钠	5.5mg/ml
苯酚	5.5mg/ml
		氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

实施例14

主药/辅料	终浓度
		利拉鲁肽	6mg/ml
枸橼酸	0.4mg/ml
		碳酸钠	0.5mg/ml
聚山梨酯80	0.1mg/ml
		氯化钠	5.5mg/ml
苯酚	5.5mg/ml
		氢氧化钠和/或盐酸	调pH至8.15

制备工艺：

使用枸橼酸-碳酸钠缓冲盐体系制备利拉鲁肽药物制剂的制备工艺如下：

a)依次称取枸橼酸、碳酸钠溶解于1/2最终体积的注射用水得缓冲溶液；

b)称取等渗调节剂(或稳定剂)及防腐剂溶解于缓冲溶液，得辅料溶液；

c)称取所需利拉鲁肽原粉溶解于辅料溶液，检测并控制苯酚含量在4.5mg/ml-6.5mg/ml；利拉鲁肽含量控制在4mg/ml-8mg/ml，得半成品溶液。

d)测定半成品溶液pH值，用氢氧化钠和/或盐酸溶液调节半成品pH，至8.15左右；

e)将d)溶液使用0.22μm的滤器过滤；

f)将e)中溶液无菌分装至卡式瓶中，加塞、轧盖，既得制剂产品。

不同缓冲盐配制样品的稳定性对比

使用磷酸氢二钠缓冲体系配制利拉鲁肽制剂样品，同枸橼酸-碳酸钠缓冲盐配制的利拉鲁肽制剂样品放置于37℃±2℃条件下避光贮存，考察样品的稳定性。样品处方组成如下：

表1.不同缓冲盐样品处方组成

分别使用分子筛高效液相色谱(SEC-HPLC)、反相高效液相色谱(RP-HPLC)、电泳等不同的纯度检测方法对稳定性考察样品的纯度进行检测，检测方法及检测结果如下：

表2.不同缓冲盐样品稳定性纯度考察结果

表3.不同缓冲盐样品稳定性纯度变化情况对比

分别使用分子筛高效液相色谱(SEC-HPLC)、反相高效液相色谱(RP-HPLC)、电泳等不同的纯度检测方法对在37℃±2℃条件下避光贮存的磷酸盐处方和枸橼酸-碳酸钠处方的利拉鲁肽样品进行纯度检测，三种检测方的检测结果均可说明枸橼酸-碳酸钠处方的利拉鲁肽样品的纯度高于磷酸盐处方的利拉鲁肽样品的纯度。并且枸橼酸-碳酸钠处方的利拉鲁肽样品纯度降低幅度明显小于磷酸盐处方的利拉鲁肽样品的纯度的降低幅度，表明枸橼酸-碳酸钠处方的利拉鲁肽样品更为稳定。

表4.不同缓冲盐样品稳定性有关物质考察结果

使用反相高效液相色谱(RP-HPLC)方法对37℃±2℃条件下避光贮存的磷酸盐处方和枸橼酸-碳酸钠处方的利拉鲁肽样品进行有关物质的检测，检测结果说明枸橼酸-碳酸钠处方利拉鲁肽样品有关物质的增加幅度为5.13％，少于磷酸盐处方利拉鲁肽样品有关物质的增加幅度(5.33％)。

以上检测结果证明利拉鲁肽样品在枸橼酸-碳酸钠缓冲体系中纯度高，产生杂质少，稳定性优于磷酸盐处方的利拉鲁肽样品。

Claims

1.一种含有GLP-1类似物的多肽药物制剂，所述GLP-1类似物选自利拉鲁肽、艾塞那肽、阿必鲁肽、杜拉鲁肽、利司那肽、索玛鲁肽，其特征在于，所述多肽药物制剂的缓冲剂选自枸橼酸盐和碳酸盐的混合物；所述多肽药物制剂的pH值范围为4.0-10.0。

2.根据权利要求1所述的多肽药物制剂，其特征在于，所述缓冲剂选自枸橼酸和碳酸钠的混合物。

3.根据权利要求2所述的多肽药物制剂，其特征在于，所述多肽药物制剂中枸橼酸的浓度范围为0.01-10mg/ml，优选0.1-1mg/ml，更优选0.2-0.6mg/ml；所述碳酸钠的浓度范围为0.01-15mg/ml，优选0.1-3mg/ml，更优选0.3-0.8mg/ml。

4.根据权利要求3所述的多肽药物制剂，其特征在于，所述GLP-1类似物为利拉鲁肽，所述多肽药物制剂中利拉鲁肽的浓度范围为1-12mg/ml，优选3-9mg/ml，更优选4-8mg/ml，最优选6mg/ml；所述多肽药物制剂的pH值范围为7.4-8.9。

5.根据权利要求4所述的多肽药物制剂，其特征在于，还包括药学上可接受的防腐剂，所述防腐剂选自苯酚、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、2－苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、2－苯基乙醇、苯甲醇、氯丁醇、氯甲酚、对羟基苯甲酸乙酯之一或其任意混合；优选的防腐剂为苯酚、间甲酚之一或其混合物；更优选的防腐剂为苯酚；所述防腐剂的浓度范围为0.1-15mg/ml，优选2-8mg/ml，更优选4.5-6.5mg/ml。

6.根据权利要求5所述的多肽药物制剂，其特征在于，还包括等渗调节剂，所述等渗调节剂选自甘油、丙二醇、PEG400、甘露醇、海藻糖、氯化钠、山梨醇、蔗糖、精氨酸、甘氨酸；优选的等渗调节剂为丙二醇或甘油；所述等渗调节剂的浓度范围为1-30mg/ml，优选10-20mg/ml，更优选13-18mg/ml。

7.根据权利要求5所述的多肽药物制剂，其特征在于，还包括稳定剂，所述稳定剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯80、泊洛沙姆188；优选的稳定剂为聚山梨酯80；所述稳定剂的浓度范围为0.1-1mg/ml。

8.制备权利要求6所述的多肽药物制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)将枸橼酸和碳酸钠溶解于水得第一种溶液；

b)将等渗调节剂及防腐剂溶解于第一种溶液，得第二种溶液；

c)将GLP-1类似物溶解于水得第三种溶液；

d)将第二种溶液和第三种溶液混合；

e)将d)中得到的混合溶液的pH值调节至4.0-10.0；

f)将e)中所得溶液过滤、无菌分装，既得所述多肽药物制剂产品；

或者包括如下步骤：

a)将枸橼酸和碳酸钠溶解于水得第一种溶液；

c)将GLP-1类似物溶解于第二种溶液；

d)将c)中得到的混合溶液的pH调节至4.0-10.0；

e)将d)中所得溶液过滤、无菌分装，既得所述多肽药物制剂产品。

9.制备权利要求7所述的多肽药物制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)将枸橼酸和碳酸钠溶解于水得第一种溶液；

b)将稳定剂及防腐剂溶解于第一种溶液，得第二种溶液；

c)将GLP-1类似物溶解于水得第三种溶液；

d)将第二种溶液和第三种溶液混合；

e)将d)中得到的混合溶液的pH值调节至4.0-10.0；

或者包括如下步骤：

a)将枸橼酸和碳酸钠溶解于水得第一种溶液；

b)将稳定剂及防腐剂溶解于第一种溶液，得第二种溶液；

c)将GLP-1类似物溶解于第二种溶液；

d)将c)中得到的混合溶液的pH调节至4.0-10.0；

10.根据权利要求8或9中所述的制备方法，其中所述枸橼酸的浓度范围为0.01-10mg/ml，优选0.1-1mg/ml；所述碳酸钠的浓度范围为0.01-15mg/ml，优选0.1-3mg/ml；所述制剂的pH值范围为7.4-8.9。