CN105120889B - 通过调节乙酰透明质酸和透明质酸酶活性而治疗炎性病状 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了用于治疗许多炎性病状和感染的组合物和相关方法及试剂盒。治疗组合物包含当与乙酰透明质酸结合时能够产生乙酰透明质酸二糖的某些透明质酸酶，和/或乙酰透明质酸二糖本身，和/或炎性透明质酸酶抑制剂。本发明还公开了透明质酸酶抑制剂治疗个体的某些感染的用途。

Description

通过调节乙酰透明质酸和透明质酸酶活性而治疗炎性病状
相关申请的交叉引用
本非临时专利申请要求2013年4月3日提交的美国临时专利申请号61/808,063的优先权，其通过引用整体并入本文。
政府权力
本发明在美国国立卫生研究院资助号AI103839-02的政府支持下进行。政府具有本发明的某些权力。
发明领域
本发明大体涉及炎性病状和感染的预防和治疗。
背景技术
以下描述包括可用于理解本发明的信息。不承认本文提供的任何信息是本要求保护的发明的现有技术或与之相关。
针对病原体的一个重要的宿主防御机制是使病原体诱导的组织损伤与炎性免疫级联的激活相关联。在此类情况下，结缔组织损伤产生有效结合并激活宿主Toll样受体(TLR)免疫通路的乙酰透明质酸降解片段，所述宿主Toll样受体(TLR)免疫通路主要用于检测微生物侵入物。该策略应该使任何旨在侵润深部组织的病原生物体几乎不可能潜入。然而，成功的病原体可以通过战术性地开发其分泌的透明质酸酶同种型的关键特征来对抗该策略。
在已经表征的细菌透明质酸酶中，已经描述了两个一般的乙酰透明质酸片段化模式。来自链球菌种肺炎链球菌(S.pneumoniae)和B族链球菌(Group B Streptococcus)(GBS)(还称为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae))的透明质酸酶仅产生二糖。相比之下，证据表明，由链霉菌和系统发育相关的痤疮丙酸杆菌(P.acnes)表达的透明质酸酶产生更大片段，尺寸类似于由免疫激活人透明质酸酶产生的那些。重要的是，由链球菌产生的二糖不激活免疫防御，而由链霉菌和痤疮丙酸杆菌产生的更大乙酰透明质酸片段显示高度免疫原性和促炎性。考虑到所有这些免疫原性、促炎性和免疫逃避作用，本发明人开发了以下描述的许多治疗策略。
发明概述
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的包含乙酰透明质酸二糖的组合物。在一些实施方案中，所述炎性病状选自由以下组成的组：肺纤维化、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、糖尿病、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症和归因于组织损伤的炎症。在某些实施方案中，所述炎性病状是痤疮。在一些实施方案中，当所述炎性病状是痤疮时，所述组合物局部施用。在某些实施方案中，所述炎性病状是肺纤维化。在一些实施方案中，当所述炎性病状是肺纤维化时，所述组合物被施用进入呼吸系统。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的包含透明质酸酶的组合物，所述透明质酸酶当与一定量乙酰透明质酸结合时能够产生乙酰透明质酸二糖。在某些实施方案中，所述透明质酸酶通过较长链乙酰透明质酸的逐渐降解而产生所述乙酰透明质酸二糖。在某些实施方案中，所述透明质酸酶由选自由以下组成的组的生物体产生：B族链球菌(GBS)、A族链球菌(Group AStreptococcus)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、肺炎链球菌(S.pneumoniae)、粪肠球菌(E.faecalis)和普氏消化链球菌(P.prevotii)。在某些实施方案中，所述炎性病状选自由以下组成的组：肺纤维化、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、糖尿病、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症和归因于组织损伤的炎症。在某些实施方案中，所述炎性病状是痤疮。在一些实施方案中，当所述炎性病状是痤疮时，所述组合物局部施用。在某些实施方案中，所述炎性病状是肺纤维化。在一些实施方案中，当所述炎性病状是肺纤维化时，所述组合物被施用进入呼吸系统。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制由受试者病原体引起的感染的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的抑制由所述病原体产生的透明质酸酶的组合物。在某些实施方案中，所述感染由选自由以下组成的组的生物体引起：B族链球菌(GBS)、A族链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、普氏消化链球菌、突变链球菌(S.mutans)、and艰难梭菌(C.difficile)。在一些实施方案中，所述病原体是GBS，并且所述组合物包含GBS透明质酸酶抑制剂。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含乙酰透明质酸二糖。在一些实施方案中，所述炎性病状选自由以下组成的组：肺纤维化、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、糖尿病、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症和归因于组织损伤的炎症。在某些实施方案中，所述炎性病状是痤疮。在一些实施方案中，当所述炎性病状是痤疮时，所述组合物被配制用于局部施用。在某些实施方案中，所述炎性病状是肺纤维化。在一些实施方案中，当所述炎性病状是肺纤维化时，所述组合物被配制用于施用进入呼吸系统。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含当与一定量乙酰透明质酸结合时能够产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶。在某些实施方案中，所述透明质酸酶通过较长链乙酰透明质酸的逐渐降解而产生乙酰透明质酸二糖。在一些实施方案中，所述透明质酸酶由选自由以下组成的组的生物体产生：B族链球菌(GBS)、A族链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌和普氏消化链球菌。在某些实施方案中，所述炎性病状选自由以下组成的组：肺纤维化、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、糖尿病、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症和归因于组织损伤的炎症。在某些实施方案中，所述炎性病状是痤疮。在一些实施方案中，当所述炎性病状是痤疮时，所述组合物被配制用于局部施用。在一些实施方案中，所述炎性病状是肺纤维化。在某些实施方案中，当所述炎性病状是肺纤维化时，所述组合物被配制用于施用进入呼吸系统。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含炎性透明质酸酶的抑制剂。在某些实施方案中，所述炎性病状选自由以下组成的组：肺纤维化、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、糖尿病、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症和归因于组织损伤的炎症。在一些实施方案中，所述炎性病状是痤疮。在某些实施方案中，当所述炎性病状是痤疮时，所述组合物被配制用于局部施用。在某些实施方案中，所述炎性病状是肺纤维化。在一些实施方案中，当所述炎性病状是肺纤维化时，所述组合物被配制用于施用进入呼吸系统。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含乙酰透明质酸二糖和当与一定量乙酰透明质酸结合时能够产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶以及任选炎性透明质酸酶抑制剂。在某些实施方案中，所述炎性病状选自由以下组成的组：肺纤维化、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、糖尿病、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症和归因于组织损伤的炎症。在一些实施方案中，所述炎性病状是痤疮。在一些实施方案中，当所述炎性病状是痤疮时，所述组合物被配制用于局部施用。在一些实施方案中，所述炎性病状是肺纤维化。在某些实施方案中，当所述炎性病状是肺纤维化时，所述组合物被配制用于施用进入呼吸系统。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制个体中由病原体引起的感染的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含能够抑制由所述病原体产生的透明质酸酶的抑制剂。在一些实施方案中，所述病原体选自由以下组成的组：B族链球菌(GBS)、A族链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、普氏消化链球菌、突变链球菌和艰难梭菌。在某些实施方案中，所述病原体是GBS，并且所述抑制剂是GBS透明质酸酶抑制剂。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒包括乙酰透明质酸二糖的组合物；和其治疗和/或抑制所述受试者炎性病状的使用说明。在某些实施方案中，所述炎性病状选自由以下组成的组：肺纤维化、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、糖尿病、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症和归因于组织损伤的炎症。在一些实施方案中，所述炎性病状是痤疮。在某些实施方案中，当所述炎性病状是痤疮时，所述组合物被配制用于局部施用。在一些实施方案中，所述炎性病状是肺纤维化。在某些实施方案中，当所述炎性病状是肺纤维化时，所述组合物被配制用于施用进入呼吸系统。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒包括当与一定量乙酰透明质酸结合时能够产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶；和其治疗和/或抑制所述受试者炎性病状的使用说明。在一些实施方案中，所述炎性病状选自由以下组成的组：肺纤维化、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、糖尿病、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症和归因于组织损伤的炎症。在某些实施方案中，所述炎性病状是痤疮。在一些实施方案中，当所述炎性病状是痤疮时，所述组合物被配制用于局部施用。在某些实施方案中，所述炎性病状是肺纤维化。在一些实施方案中，当所述炎性病状是肺纤维化时，所述组合物被配制用于施用进入呼吸系统。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者中由病原体引起的感染的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒包括：包含能够抑制由所述病原体产生的透明质酸酶的透明质酸酶抑制剂的组合物；和其治疗和/或抑制所述受试者感染的使用说明。在一些实施方案中，所述病原体是GBS，并且所述组合物包含GBS透明质酸酶抑制剂。
附图简述
参考附图示例说明了示例性实施方案。预期本文公开的实施方案和附图被认为是示例说明性而非限制性的。
根据本发明一个实施方案，图1描绘了基于推导氨基酸序列的系统发育树，显示了分泌的革兰氏阳性细菌透明质酸酶的亲缘关系。
根据本发明一个实施方案，图2描绘了GBS透明质酸酶的体内抗炎性质。缺乏透明质酸酶的GBS在系统感染模型中诱导了更高的宿主致死率(A)，更容易被宿主清除(B)，并且诱导了更高水平的促炎细胞因子(C和D)。
根据本发明一个实施方案，图3描绘了GBS透明质酸酶的体外抗炎性质。A.在用GBS、牛睾丸或Streptomyces hyaluronlyticus透明质酸酶消化之后透明质酸酶消化混合物的Bio-Gel P-4色谱。B.GBS透明质酸酶对HA的消化导致抑制的炎症。C.HA二糖抑制Pam3csk4诱导的TNFα分泌。
根据本发明一个实施方案，图4描绘了GBS透明质酸酶的抗炎功能是TLR-2依赖性的。
根据本发明一个实施方案，图5描绘了乙酰透明质酸分解产物诱导了组织损伤期间的免疫细胞激活。
根据本发明一个实施方案，图6描绘了乙酰透明质酸二糖具有抗炎性质。乙酰透明质酸二糖在巨噬细胞刺激测定中与LPS或未消化乙酰透明质酸共孵育。乙酰透明质酸二糖减少了通过LPS或未消化乙酰透明质酸的TNF-α诱导。
根据本发明一个实施方案，图7描绘了B族链球菌透明质酸酶具有抗炎性质。乙酰透明质酸用纯化的GBS透明质酸酶或PBS预消化，然后转移至骨髓衍生的巨噬细胞培养物。乙酰透明质酸用GBS透明质酸酶在先降解显著减少了通过乙酰透明质酸的TNF-α刺激。
根据本发明一个实施方案，图8描绘了GBS透明质酸酶减少乙酰透明质酸二聚化和减轻炎症。通过牛透明质酸酶与B族链球菌(GBS)透明质酸酶产生的乙酰透明质酸片段的HPLC概况(A)。刺激性乙酰透明质酸片段(4-16聚体)用GBS透明质酸酶消化4或15小时(B)。GBS透明质酸酶消化导致减少细胞因子生成(B)。
根据本发明一个实施方案，图9描绘了通过GBS透明质酸酶的乙酰透明质酸降解导致减少的TNF-α。WT和GBS透明质酸酶KO显示了如通过乙酰透明质酸清除证明的不同的透明质酸酶活性(A)。WT和KO细菌的过夜上清液与高分子量乙酰透明质酸孵育(B)。使用分解产物刺激骨髓衍生的巨噬细胞(B)。
根据本发明一个实施方案，图10描绘了HA诱导的炎症依赖于TLR2和TLR4。来自WT、TLR2和TLR4KO小鼠的骨髓衍生巨噬细胞与用来自WT或透明质酸酶KO GBS的上清液或介质对照预消化的乙酰透明质酸孵育(A)。测量了在24h的TNF-α。WT和TLR2KO小鼠腹腔感染2-3x107WT或KO GBS，并在24h从脾测量细胞因子(B和C)。
根据本发明一个实施方案，图11描绘了乙酰透明质酸二聚体不是惰性的。来自WT小鼠的骨髓衍生巨噬细胞与LPS和各种浓度的乙酰透明质酸二糖孵育。测量了在18h的TNF-α。
根据本发明一个实施方案，图12描绘了HA二糖减少TLR 2和4(A)而非TLR9(B)信号传导。HEK细胞用TLR2、4和9报告构建体转染。细胞在有或没有乙酰透明质酸二糖下与TLR2激动剂(Pam3)、TL4激动剂(LPS)或TLR9激动剂(Cpg)孵育。测量了在4h的报告基因激活。
根据本发明一个实施方案，图13描绘了HA二糖对损害形成的影响。小鼠被皮下注射200毫克LPS(有或没有100毫克乙酰透明质酸二糖)、1mg GBS透明质酸酶、或二糖和酶的组合。在24h之后处死小鼠。“KC”(CXCL1)是IL-8的鼠同系物。
根据本发明一个实施方案，图14描绘了HA二糖减少急性肺损伤。小鼠被气管内注射5毫克LPS(连同PBS)、乙酰透明质酸二糖(100毫克)或GBS酶(1mg)。在24h，处死小鼠并分析肺组织学(F&G)和细胞因子和趋化因子(A-E)。
发明描述
本文引用的所有参考文献通过引用以其整体并入本文，如同完整提出一样。除非另外定义，本文使用的技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同含义。Allen等人，Remington:The Science and Practice of Pharmacy第22版.,Pharmaceutical Press(2012年9月15日)；Hornyak等人，Introduction to Nanoscienceand Nanotechnology,CRC Press(2008)；Singleton和Sainsbury,Dictionary ofMicrobiology and Molecular Biology第3版,修订版,J.Wiley&Sons(New York,NY2006)；Smith,March’s Advanced Organic Chemistry Reactions,Mechanisms andStructure第7版,J.Wiley&Sons(New York,NY2013)；Singleton,Dictionary of DNA andGenome Technology第3版,Wiley-Blackwell(2012年11月28日)；和Green和Sambrook,Molecular Cloning:A Laboratory Manual第4版,Cold Spring Harbor LaboratoryPress(Cold Spring Harbor,NY 2012)，提供了本领域技术人员有关本申请使用的许多术语的一般指导。
本领域技术人员会发现与本文描述的那些类似或等同的许多方法和材料，其可用于实施本发明。实际上，本发明绝不限于所描述的方法和材料。为了本发明目的，下面定义了某些术语。
如本文使用的，“有益结果”可以包括但绝不限于减轻或缓解疾病病状严重度，防止疾病状态恶化，治愈疾病状态，防止疾病状态发展，降低受试者发展疾病状态的机会，以及延长受试者寿命或预期寿命。
如本文使用的“病状”和“疾病状态”可以包括但绝不限于肺纤维化、结节病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、糖尿病、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症、归因于组织损伤的炎症和痤疮。其他代表性病状描述于Jiang等人.Physiol Rev 91:221-264,2011，其通过引用以其整体并入本文，如同完整提出一样。“病状”和“疾病状态”还包括细菌、真菌和寄生虫感染。
如本文使用的“哺乳动物”指任何数目类别的哺乳动物类动物，包括但不限于人和非人灵长类动物，例如黑猩猩和其他猿和猴种；农场动物，例如牛、绵羊、猪、山羊和马；家养哺乳动物，例如狗和猫；实验动物，包括啮齿类动物，例如小鼠、大鼠和豚鼠以及类似物。该术语不指示特定的年龄或性别。因此，无论是雄性还是雌性的成年和新生受试者预期包括在该术语范围内。
如本文使用的“治疗(Treatment)”和“治疗(treating)”指治疗性治疗和预防性或预防措施，其中目标是减缓(减轻)炎性病状，预防炎性病状，追求或获得有益结果，或者降低个体发展炎性病状的机会，即使治疗最终是不成功的。“治疗(Treatment)”和“治疗(treating)”还指治疗性治疗和预防性或预防措施，其中目标是减缓(减轻)感染，预防感染，追求或获得有益结果，或者降低个体发展感染(特别是深部感染)的机会，即使治疗最终是不成功的。需要治疗的那些包括已经具有病状的那些，以及容易具有病状的那些以及要预防病状的那些。
如上简述，乙酰透明质酸(HA)是在正常生理以及病理状态中发挥重要作用的普遍存在的大分子。在组织破坏期间，HA通过直接损失或者通过宿主透明质酸酶的诱导活性而分解，并且HA片段继续通过(至少)Toll样受体(TLR)2和4激活免疫系统。对于宿主防御感染而言，这可能是通过激活宿主内源性免疫传感机制而限制细菌穿透深部组织的策略。主要的革兰氏阳性病原体例如B族链球菌(GBS)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)分泌透明质酸酶以利于组织入侵。已经假设这些透明质酸酶将进一步促成宿主监视系统的激活，并且这似乎得到以下公开发现的支持：源自哺乳动物和细菌(链霉菌)的透明质酸酶都是免疫刺激性的。然而，系统发育分析揭示了来自环境非病原体(例如，吸水链霉菌(Streptomyces hydrolyticus)、天蓝色链霉菌(S.coelicolor))和主要病原体(例如，GBS、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌)的透明质酸酶的令人惊讶的趋异(divergence)。本发明人的最近研究显示，不同于来自链霉菌的透明质酸酶，来自GBS的透明质酸酶下调宿主促炎细胞因子并且促进感染期间病原体的存活。本发明人的研究还证明，免疫调节活性的潜在机制在于HA降解片段的尺寸。如上所示，不同于降解HA为有助于TLR途径激活的片段尺寸(4-16聚体)的哺乳动物和链霉菌透明质酸酶，GBS透明质酸酶降解HA为二糖片段。最近已经确定该片段尺寸抑制促炎细胞因子分泌。
简言之，许多主要病原体进化了透明质酸酶，其破坏免疫激活性乙酰透明质酸信号，但不损害该酶促进散布的能力。相反，来自非病原体(环境的)的透明质酸酶没有处于选择性压力，并因此可以保留其促炎性质(“炎性透明质酸酶”)。在非免疫受损宿主中诱导深部感染的许多条件病原体表达抗炎性的透明质酸酶。在考虑本文描述的实验结果之后，本发明人确立了几种治疗性组合物和策略。
在一些实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状和/或减轻其严重度和/或促进其预防的方法。在各个实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的组合物，其中所述组合物包含乙酰透明质酸二糖和/或能够在与一定量的乙酰透明质酸结合时产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶。在一些实施方案中，本发明方法使用的透明质酸酶通过较长链乙酰透明质酸的逐渐降解而产生乙酰透明质酸二糖。仅作为非限制性实例，透明质酸酶可以由B族链球菌(GBS)、A族链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌和普氏消化链球菌产生。可以产生透明质酸酶的其他生物体包括脆弱类杆菌(B.fragilis)、绿脓杆菌(P.aeruginosa)、大肠杆菌(E.coli)、人白色念珠菌(C.albicans)。尽管上文具体提出了具有能够产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶的某些细菌，本领域技术人员容易理解，许多其他类型的细菌(和其他生物体)具有相同的能力。因此，具有与上文提出的细菌所具有的那些相似的结构和/或功能性质可选天然存在透明质酸酶的使用预期在本发明方法范围内。此外，本领域技术人员容易理解，通过对哺乳动物或其他微生物的透明质酸酶进行诱变，可以构建具有与来自上述名单细菌的透明质酸酶相似性质的透明质酸酶。因此，本发明方法包括使用具有前述抗炎性质的任何一种透明质酸酶(或多种透明质酸酶)，而不论它们是如何获得或产生的。而且，本发明方法不严格限于具有抗炎性质的透明质酸酶的使用，因为本领域技术人员容易理解，结构上和/或功能上类似于上述那些的可选的酶和其他物质也可用于实现基本相似的结果。在一些实施方案中，乙酰透明质酸二糖的类似物、衍生物、盐或其他结构相似物质用于本文描述的治疗性方法。在一个优选实施方案中，通过本发明方法治疗的炎性病状是痤疮。在一个优选实施方案中，通过本发明方法治疗的炎性病状由痤疮丙酸杆菌(P.acnes.)引起。
在一些实施方案中，给受试者施用炎性透明质酸酶抑制剂以缓解本文描述的炎性病状。在一些实施方案中，炎性病状是本文描述的任何炎性病状。在一些实施方案中，透明质酸酶抑制剂是痤疮丙酸杆菌透明质酸酶的抑制剂。在一些实施方案中，炎性病状是慢性的。在某些实施方案中，炎性病状是急性的。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制由病原体(条件性或其他)引起的个体感染和/或促进其预防和/或减轻其严重度的方法，包括向所述个体施用治疗有效量的抑制所述病原体产生的透明质酸酶的组合物。仅作为非限制性实例，可通过本发明方法治疗的感染可以由一种或多种生物体引起，包括B族链球菌(GBS)、A族链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、普氏消化链球菌、突变链球菌和艰难梭菌。
在一些实施方案中，本发明教导了一种用于诱导受试者炎症以促进治愈或免疫应答的方法。在一些实施方案中，所述方法包括给受试者施用治疗有效量的诱导炎症(如本文所述)尺寸的乙酰透明质酸。在一些实施方案中，，所述方法包括给受试者施用降解乙酰透明质酸为诱导炎症尺寸的透明质酸酶。
在某些实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制受试者炎性病状和/或促进其预防和/或减轻其严重度的组合物。在各个实施方案中，所述组合物包含乙酰透明质酸二糖和/或能够在与一定量的乙酰透明质酸结合时产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶。在一些实施方案中，透明质酸酶通过较长链乙酰透明质酸的逐渐降解而产生乙酰透明质酸二糖。在一些实施方案中，透明质酸酶由一种或多种生物体产生，包括B族链球菌(GBS)、A族链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌和普氏消化链球菌。在一些实施方案中，所述组合物包含单独或与乙酰透明质酸二糖组合的炎性透明质酸酶的抑制剂和/或能够产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶。在某些实施方案中，炎性病状可以包括但绝不限于肺纤维化、结节病、糖尿病、哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、呼吸窘迫综合征、博来霉素诱导的牙槽炎、肾小球肾炎、狼疮性肾炎、肾机能不全、类风湿性关节炎、关节炎、脊髓损伤、脑局部缺血、炎性粥样硬化、肝炎、肝硬化、归因于组织排斥的炎症、归因于组织损伤的炎症、痤疮及其组合。在一个优选实施方案中，炎性病状是痤疮。
在各个实施方案中，本发明教导了一种用于治疗和/或抑制由病原体(条件性或其他)引起的个体感染和/或促进其预防的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含抑制由病原体产生的透明质酸酶的透明质酸酶抑制剂。仅作为非限制性实例，感染可以由一种或多种生物体引起，包括B族链球菌(GBS)、A族链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、普氏消化链球菌、突变链球菌和艰难梭菌。
在一些实施方案中，本发明教导了一种用于诱导受试者炎症以促进治愈或免疫应答的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含诱导炎症尺寸的乙酰透明质酸和/或降解乙酰透明质酸为如本文所述诱导炎症尺寸的透明质酸酶。
随后的实施方案包括组合物实施例。在这些实施例中，所列百分比以组合物重量计。
在一些实施方案中，本文描述的组合物的透明质酸酶是组合物总活性成分的1％至100％。在一些实施方案中，透明质酸酶是总活性成分的5％至90％。在一些实施方案中，透明质酸酶是总活性成分的10％至80％。在一些实施方案中，透明质酸酶是总活性成分的20％至70％。在一些实施方案中，透明质酸酶是总活性成分的30％至60％。在一些实施方案中，透明质酸酶是总活性成分的40％至50％。
在一些实施方案中，本文描述的组合物的乙酰透明质酸，包括乙酰透明质酸二糖或更大片段，是组合物总活性成分的1％至100％。在一些实施方案中，乙酰透明质酸是总活性成分的5％至90％。在一些实施方案中，乙酰透明质酸是总活性成分的10％至80％。在一些实施方案中，乙酰透明质酸是总活性成分的20％至70％。在一些实施方案中，乙酰透明质酸是总活性成分的30％至60％。在一些实施方案中，乙酰透明质酸是总活性成分的40％至50％。
在一些实施方案中，本文描述的组合物的透明质酸酶抑制剂是组合物总活性成分的1％至100％。在一些实施方案中，透明质酸酶抑制剂是总活性成分的5％至90％。在一些实施方案中，透明质酸酶抑制剂是总活性成分的10％至80％。在一些实施方案中，透明质酸酶抑制剂是总活性成分的20％至70％。在一些实施方案中，透明质酸酶抑制剂是总活性成分的30％至60％。在一些实施方案中，透明质酸酶抑制剂是总活性成分的40％至50％。
在各个实施方案中，本文公开并且与本发明方法结合使用的一种或多种组合物或化合物可以作为药物组合物提供，所述药物组合物包括药学可接受的赋形剂连同治疗有效量的一种或多种本文描述的化合物或组合物。“药学可接受的赋形剂”表示一般是安全、无毒且所需的用于制备药物组合物的赋形剂，并且包括兽医用途以及人制药用途可接受的赋形剂。此类赋形剂可以是固体、液体、半固体或者在气雾剂组合物情况下是气体的。
在各个实施方案中，根据本发明的药物组合物可以配制用于经由任何施用途径递送。“施用途径”可以指现有技术已知的任何施用路径，包括但不限于气雾剂、鼻、口、经粘膜、经皮或胃肠外。“经皮”施用可以使用局部乳膏或软膏或借助经皮贴片来实现。“胃肠外”指一般与注射相关的施用途径，包括眶内、输注、动脉内、囊内、心内、皮内、肌肉内、腹膜内、肺内、脊柱内、胸骨内、鞘内、子宫内、静脉内、蛛网膜下、囊下、皮下、经粘膜或经气管。经由胃肠外途径，组合物可以是用于输注或注射的溶液或悬液形式，或者作为冻干粉末。经由肠内途径，药物组合物可以是片剂、凝胶胶囊、糖衣片剂、糖浆、悬液、溶液、粉剂、颗粒剂、乳液、微球或纳米微球或允许控制释放的脂质囊或聚合物囊的形式。经由局部途径，基于根据本发明化合物的药物组合物可以配制用于治疗皮肤和粘膜，并且是软膏、乳膏、乳剂、油膏(salve)、粉剂、浸渍垫(impregnated pad)、溶液、凝胶、喷雾剂、洗剂、悬液或其他美容产品。它们还可以是允许控制释放的微球或脂质囊或聚合物囊或聚合物贴片和水溶胶形式。这些局部途径组合物可以是无水形式或者水形式，取决于临床适应症。
根据本发明的药物组合物还可以含有任何药学可接受的载体。如本文使用的“药学可接受的载体”指参与从一个组织、器官或机体部分运载或运输一种或多种感兴趣的组合物或分子至另一组织、器官或机体部分的药学可接受的材料、组合物或媒介物。例如，载体可以是液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料或其组合。载体的每种组分必须是“药学可接受的”，因为它必须与制剂的其他成分相容。它还必须适合与它可能接触的任何组织或器官接触使用，意味着它必须不具有毒性、刺激性变态反应、免疫原性或过度超过其治疗益处的任何其他并发症的风险。
根据本发明的药物组合物还可以被包囊、片剂化或以乳液或糖浆制备以口服施用。可以添加药学可接受的固体或液体载体以增强或稳定组合物，或者有利于组合物的制备。液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、甘油、盐水、醇和水。固体载体包括淀粉、乳糖、硫酸钙、二水合物、石膏粉、硬脂酸镁或硬脂酸、滑石、果胶、阿拉伯树胶、琼脂或明胶。载体还可以包括持续释放材料，例如单独或含有蜡的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
按照药学常规技术制作药物制剂，所述技术包括：对于片剂形式的研磨、混合、颗粒化和必要时的压缩；或者对于硬明胶胶囊形式的混合和填充。当使用液体载体时，制剂将是糖浆、酏剂、乳液或者水或非水悬液形式。这样的液体制剂可以直接口服施用或者填充进入软明胶胶囊。
根据本发明的药物组合物和分子可以治疗有效量递送。精确的治疗有效量是将在给定受试者治疗效力方面产生最有效结果的组合物或分子的那个量。该量将根据许多因素而变化，包括但不限于治疗组合物或分子的特征(包括活性、药代动力学、药效动力学和生物利用度)、受试者的生理状态(包括年龄、性别、疾病类型和阶段、一般身体状况、对给定剂量的反应性和药物治疗类型)、制剂中药学可接受的一种载体或多种载体的性质、以及施用途径。临床和药理学领域技术人员将能够通过常规实验确定治疗有效量，例如通过监测受试者对施用组合物或分子的反应并相应调整剂量。对于额外指导，参见Allen等人，Remington:The Science and Practice of Pharmacy第22版,Pharmaceutical Press(2012年9月15日)。
本文描述的组合物或分子的任何一种的有效量的典型剂量可以如通过体外反应或动物模型中反应对技术人员所示的。此类剂量通常可以在浓度或量上减少最多约一个数量级而不失去相关的生物活性。因此，实际剂量取决于医师判断、患者病状以及治疗方法的有效性。
在一些实施方案中，当局部施用以治疗炎性皮肤病状例如痤疮时，乙酰透明质酸二糖的治疗剂量范围是每6-24小时0.01至10000mg。在一些实施方案中，当经由肠内途径施用以治疗炎性病状时，乙酰透明质酸二糖的治疗剂量范围是每6-24小时0.001至100mg/kg。在一些实施方案中，当经由胃肠外途径施用以治疗炎性病状时，乙酰透明质酸二糖的治疗剂量范围是每6-24小时0.001至100mg/kg。
在一些实施方案中，当局部施用以治疗炎性皮肤病状例如痤疮时，产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶的治疗剂量范围是每6-24小时0.001至100mg。在一些实施方案中，当经由肠内途径施用以治疗炎性病状时，产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶的治疗剂量范围是每6-24小时0.001至100mg/kg。在一些实施方案中，当经由胃肠外途径施用以治疗炎性病状时，产生乙酰透明质酸二糖的透明质酸酶的治疗剂量范围是每6-24小时0.001至100mg/kg。
在一些实施方案中，当局部施用以治疗感染时，产生诱导炎症尺寸的乙酰透明质酸的透明质酸酶的治疗剂量范围是每6-24小时0.001至100mg。在一些实施方案中，当经由肠内途径施用以治疗感染时，产生诱导炎症尺寸的乙酰透明质酸的透明质酸酶的治疗剂量范围是每6-24小时0.001至100mg/kg。
在一些实施方案中，当局部施用以治疗炎性皮肤病状例如痤疮或皮肤感染时，透明质酸酶抑制剂的治疗剂量范围是每6-24小时0.01至10000mg。在一些实施方案中，当经由肠内途径施用以治疗感染时，透明质酸酶抑制剂的治疗剂量范围是每6-24小时0.001至100mg/kg。在一些实施方案中，当经由胃肠外途径施用以治疗感染时，透明质酸酶抑制剂的治疗剂量范围是每6-24小时0.001至100mg/kg。
本发明还教导了一种用于以下一种或多种的试剂盒：在有相应需要的哺乳动物中治疗炎性疾病或感染(例如本文描述的那些的任何一种)、抑制炎性疾病或感染(例如本文描述的那些的任何一种)、促进炎性疾病或感染(例如本文描述的那些的任何一种)的预防、预防炎性疾病或感染(例如本文描述的那些的任何一种)、缓解炎性疾病或感染(例如本文描述的那些的任何一种)的症状和减少炎性疾病或感染(例如本文描述的那些的任何一种)的可能性。试剂盒是包括本文描述的本发明组合物或分子的至少一种在内的材料或组分的集合物。因此，在一些实施方案中，试剂盒包含组合物，所述组合物包含由生物体产生的一种或多种乙酰透明质酸二糖和/或透明质酸酶，所述生物体可以包括但绝不限于B族链球菌(GBS)、A族链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌和普氏消化链球菌。可以产生透明质酸酶的其他生物体包括脆弱类杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、人白色念珠菌。在某些实施方案中，试剂盒额外或可选地含有由前述生物体的任何一种或者对于组织入侵和/或宿主免疫系统逃避而言至少部分依赖透明质酸酶的任何其他病原体产生的透明质酸酶的抑制剂。试剂盒可以可选地含有本文描述的乙酰透明质酸二糖或透明质酸酶的一种或多种类似物、衍生物、盐、合成形式或药物等同物。
本发明试剂盒中配置的组分的确切性质取决于其预期目的。作为非限制性实例，一些实施方案用于选自以下的一个或多个目的：治疗一种或多种炎性病状或感染、抑制一种或多种炎性病状或感染、促进一种或多种炎性病状或感染的预防、预防一种或多种炎性病状或感染、缓解一种或多种炎性病状或感染的症状和/或减少一种或多种炎性病状或感染的可能性。在一个实施方案中，试剂盒特别用于治疗哺乳动物受试者的目的。在另一实施方案中，试剂盒特别用于治疗人类受试者的目的。在另一实施方案中，试剂盒用于治疗青年、儿童或婴儿人类受试者。在其他实施方案中，试剂盒用于兽医应用，治疗受试者，例如但不限于农畜、家养动物和实验动物。
试剂盒中可以包括使用说明。“使用说明”通常包括有形的表达，描述了使用试剂盒组分以实现希望结果而要采用的技术，例如使用本文描述的适当组合物和方法治疗炎性病状或感染、抑制炎性病状或感染、促进炎性病状或感染的预防、和/或预防炎性病状或感染、缓解炎性病状或感染的症状、减少炎性病状或感染的可能性、或抑制炎性病状或感染。任选地，试剂盒还包含其他有用的组分，例如稀释剂、缓冲剂、药学可接受的载体、注射器、导管、涂布器、吸量或测量工具、包扎材料或本领域技术人员容易理解的其他有用的附件。
试剂盒中配备的材料或组分可以提供给专业人员，以保持其可操作性和效用的任何方便和适当方式储存。例如，组分可以是溶解、水合或冻干的形式；它们可以室温、冷却或冷冻温度提供。组分通常包含在适当的包装材料中。如本文采用的，短语“包装材料”指用于容纳试剂盒内容物的一个或多个物理结构，所述内容物例如本发明组合物、分子和类似物。通过公知方法构建包装材料，以优选提供无菌、无污染物的环境。如本文使用的，术语“包装”指能够容纳个体试剂盒组分的适当固体基质或材料，例如玻璃、塑料、纸、箔和类似物。因此，例如，包装可以是用于包含适当量的本文公开的本发明组合物的一个或多个玻璃管形瓶或塑料容器。包装材料一般具有外部标签，其指示试剂盒的内容物和/或目的和/或其组分。
本领域技术人员将理解与本文描述的那些类似或等同的可用于实施本发明的许多方法和材料。实际上，本发明绝不限于所述的方法和材料。
实施例
实施例1
乙酰透明质酸、普通生理学和病理
HA是分子量大于5,000Da的糖胺聚糖。该聚合物普遍存在于几乎所有组织的细胞外基质中，并且由许多细胞类型合成，所述细胞类型包括成纤维细胞、内皮细胞和角质形成细胞。其主要且最明显的功能是促进细胞外基质的稳定性和结构，但是广泛文献还显示其参与许多其他的生理和病理状态，包括癌症、粥样硬化、肺纤维化、肺气肿、肾炎、关节炎、脑梗死和糖尿病。
实施例2
乙酰透明质酸和免疫性
最近研究暗示了HA循环的新且不同的作用。现在，几个研究已经显示，HA在通过非特异性损害和自我透明质酸酶的损伤期间快速降解。然后，HA分解产物激活TLR先天免疫信号传导，其触发强大炎症，警告宿主危险，并动员、指导和协调先天和获得性免疫性的更总体的宿主防御力。当TLR2、TLR4或下游衔接蛋白Myd88通过NF-κB激活途径激活时，细胞因子和趋化因子被触发，并且嗜中性粒细胞募集至组织破坏地点。认为该损伤关联的免疫激活代表了警告机体可能存在“危险”的有效方式。因此，该“内源性”防御机制可以补充更直接的病原体检测机制，TLR和其他模式识别受体藉由病原体检测机制识别仅由微生物产生的分子或分子基序。
实施例3
细菌透明质酸酶
透明质酸酶不仅由宿主合成，而且由真核生物、寄生虫、真菌和细菌广泛表达。据信细菌透明质酸酶(还称为乙酰透明质酸裂合酶或hyase)是通过组织的细菌散布或者饥饿期间营养素提取所必需的。因此，与免疫激活关联的病原体组织破坏和散布是宿主用于检测和对抗感染的有用且重要的过程。因此，仅预期有效病原体将发现规避该问题的方式。
实施例4
细菌透明质酸酶的新的免疫逃避机制
本发明人产生了侵入性病原体无乳链球菌(还称为GBS)中透明质酸酶基因的等位基因交换突变体。然后，本发明人对比了WT和同基因GBS突变体在败血症鼠模型中引起感染和炎症的能力。本发明人的数据显示，在透明质酸酶缺乏下，ΔHylAGBS诱导了更高水平的促炎细胞因子(IL-6，TNF-α)，更容易被宿主清除，但还诱导了更高的宿主致死率(图2)。这些发现与以下解释一致：GBS透明质酸酶具有促进病原体存活的抗炎性质。
实施例5
GBS透明质酸酶的免疫调节机制
之前公开的研究已经确立由环境微生物链霉菌合成的透明质酸酶降解HA为4-16聚体的片段尺寸，其已经显示激活TLR2或TLR4免疫途径。相比之下，GBS透明质酸酶降解HA为单一产物—一种二糖(图3A)，其没有免疫刺激能力(图3C)。与这些发现一致，本发明人发现HA+WT GBS在巨噬细胞刺激测定中诱导了与HA+牛透明质酸酶或HA+ΔHylAGBS相比更低水平的TNF-α(图3B)。因为牛透明质酸酶降解HA为4-16聚体，本发明人询问随后用GBS透明质酸酶的降解是否废除TNF-α的诱导。实际上这是本发明人的发现(图3B，右)。因为GBS透明质酸酶酶活性的主要产物是diHA(二糖)，本发明人还评价了DiHA对由TLR2激动剂Pam3csk4诱导的TNF-α分泌的直接作用。本发明人显示diHA部分抑制了Pam3csk4诱导的TNF-α分泌(图3C)。
本发明人的结果指示链霉菌和GBS透明质酸酶诱导了不同的HA片段化模式，其分别导致宿主TLR传感机制的激活和抑制。与该结论一致，本发明显示，在WT小鼠中，WT GBS诱导了与ΔhylAGBS相比更低水平的TNF-α和IL-6，但是该差异在TLR2-/-小鼠中显著减少(图4)。
实施例6
对于革兰氏阳性病原体和环境非病原体而言不同的透明质酸酶结构-功能—进化暗示
GBS是引起新生儿侵入性疾病的人类病原体。相比之下，链霉菌是环境细菌，其通常不引起人类疾病。来自革兰氏阴性细菌的透明质酸酶未被分泌，而是陷入周质空间内。之前的细菌透明质酸酶研究报道了链霉菌透明质酸酶产生与哺乳动物透明质酸酶产生的那些非常类似的片段尺寸，但是来自GBS和肺炎链球菌的透明质酸酶产生严格是二糖的片段(参见Pritchard等人.1994.Characterization of the group B streptococcalhyaluronate lyase.Arch Biochem Biophys 315:431-437；和Ponnuraj,K.,和Jedrzejas,M.J.2000.Mechanism of hyaluronan binding and degradation:structure ofStreptococcus pneumoniae hyaluronate lyase in complex with hyaluronic aciddisaccharide at 1.7Aresolution.J Mol Biol 299:885-895，两者都通过引用以其整体并入本文，如同完整提出一样)。晶体结构分析强烈表明来自这些病原体的酶经历了逐渐降解并且不释放HA片段，直至其完全降解(参见Ponnuraj,K.,和Jedrzejas,M.J.2000.Mechanism of hyaluronan binding and degradation:structure ofStreptococcus pneumoniae hyaluronate lyase in complex with hyaluronic aciddisaccharide at 1.7Aresolution.J Mol Biol 299:885-895；和Li,S.,和Jedrzejas,M.J.2001.Hyaluronan binding and degradation by Streptococcus agalactiaehyaluronate lyase.J Biol Chem276:41407-41416，两者都通过引用以其整体并入本文，如同完整提出一样)。这些生化分析大致地将细菌透明质酸酶分为两组：产生可能激活TLR信号传导的片段的那些，和产生太小以至于不能触发TLR信号传导的HA片段尺寸的那些。有趣的是，该提议的分类方案也与来自细菌透明质酸酶系统发育分析的证据相一致(图1)。序列同源性将透明质酸酶分成主要的组：属于主要革兰氏阳性病原体(GBS、肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌)的那些，和属于环境非病原体(链霉菌)的那些。条件病原体(粪肠球菌和普氏消化链球菌)符合不同的组。
实施例7
一般方法
在将可用证据组织成队列合理框架之后，本发明人确定所有这些线索不仅仅是一致，而更多反映进化力量支配一切的杰作。具体地，为了完成在感染期间极其秘密地侵入、逃避和散布的需要。本发明人总结，非常可能的是，主要病原体例如金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和GBS已经获得了有效降解宿主HA聚合物而不警报免疫系统的透明质酸酶。这些病原体透明质酸酶还可以另一方式抑制炎症：通过进一步降解由宿主透明质酸酶的酶作用产生的促炎HA片段为太小以至于不能激活TLR信号传导的片段。这种特化和进化压力对于生物体例如链霉菌而言不是如此普遍。因此，它们可能保留更随机切割的透明质酸酶。
实施例8
细菌透明质酸酶的纯化
可以使用标准的公开的细菌透明质酸酶纯化方案纯化来自金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、GBS、粪肠球菌和普氏消化链球菌(以及可用于本发明组合物和方法的其他)的透明质酸酶(参见Pritchard等人.Characterization of the group B streptococcalhyaluronate lyase.Arch Biochem Biophys 315:431-437；Berry,等人.1994.Cloningand nucleotide sequence of the Streptococcus pneumoniae hyaluronidase geneand purification of the enzyme from recombinant Escherichia coli.Infect Immun62:1101-1108.PMCID:PMC186229；和Tam,Y.C.,Chan E.C.1985Purification andcharacterization of hyaluronidase from oral Peptostreptococcus species.InfectImmun.47:508-13.PMCID:PMC263200，其全部通过引用以其整体并入本文，如同完整提出一样)。可选地，透明质酸酶可以在大肠杆菌中表达(例如，通过使用HIS标签)，并且可以使用亲和柱纯化酶。本领域技术人员将容易理解，出于实验目的和以商业规模，有许多可选方式来产生和纯化透明质酸酶。
实施例9
透明质酸酶的表达
可以在ΔHylAGBS背景中表达来自GBS、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、普氏消化链球菌和天蓝色链霉菌的透明质酸酶。为了直接对比各种透明质酸酶的酶和免疫调节功能，可以将来自GBS、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、普氏消化链球菌和天蓝色链霉菌的透明质酸酶基因插入表达载体，然后引入ΔHylAGBS。
实施例10
其他结果/结论
如本文证明的，本发明人的数据指示由GBS透明质酸酶产生的DiHA具有抗炎性质。本发明人的数据还强烈表明来自某些病原体的透明质酸酶将能够破坏4-16聚体(由宿主透明质酸酶产生)的TLR刺激活性。而且，在TLR2-/-小鼠中使用WT和ΔHylAGBS的实验强烈表明了TLR2在透明质酸酶介导的免疫调节中的作用。简言之，本发明人的研究证明了各种细菌透明质酸酶的免疫调节性质与HA片段尺寸和TLR2和/或TLR4免疫途径之间的关联。
上述各种方法和技术提供了实施本申请的许多方式。当然，要理解，不一定所有描述的目标或优势可以根据本文描述的任何特定实施方案来实现。因此，例如，本领域技术人员会理解，所述方法可以实现或优化如本文教导的一个优势或一组优势的方式进行，而不一定实现本文教导或表明的其他目标或优势。本文提到了许多可选项。要理解，一些优选的实施方案明确包括一个、另一个或几个特征，而其他实施方案明确排除一个、另一个或几个特征，而还有其他实施方案通过加入一个、另一个或几个优势特征而减少一个特定特征。
而且，技术人员会发现来自不同实施方案的各种特征的适用性。类似地，上述各种要素、特征和步骤以及每个这种要素、特征或步骤的其他已知等同替代可以被本领域普通技术人员以各种组合采用以进行根据本文描述原理的方法。在各种要素、特征和步骤中，一些将被明确包括在多种实施方案中，而其他一些被明确排除于多种实施方案。
尽管本申请已经在某些实施方案和实施例的上下文中公开，但是本领域技术人员会理解，本申请的实施方案延伸超越具体公开的实施方案至其他可选实施方案和/或其用途和调整和等同替代。
在一些实施方案中，描述本申请特定实施方案的上下文(特别是所附权利要求的某些的上下文中)中使用的术语“一(a)”和“一(an)”和“该”和类似提及可解释为涵盖单数和复数两者。本文数值范围的引用仅预期用作单独提及落入该范围的每个单独数值的速写方法。除非本文另外指明，每个个体数值并入说明书，如同其在本文被个体引述。除非本文另外指明或者上下文明显矛盾，本文描述的所有方法可以任何适当顺序进行。就本文某些实施方案提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“例如”)的使用预期仅为了更好说明本申请，并且不对以其他方式要求保护的本申请的范围提出限制。说明书中的任何语言不应理解为指示对实施本申请必要的任何非要求保护的要素。
本文描述了本申请优选的实施方案，包括本发明人已知实施本申请的最佳方式。对那些优选实施方案的变化对于阅读前述说明的那些本领域普通技术人员而言将变得明显。要考虑，技术人员可以适当采用此类变化，并且本申请可以不同于本文具体描述的其他方式实施。因此，本申请的许多实施方案包括如适用法律允许的所附权利要求中引用主题的所有调整和等同替代。而且，除非本文另外指明或者与上下文明显矛盾，本申请涵盖上述要素以其所有可能变化的任何组合。
本文提及的所有专利、专利申请、专利申请的公开以及其他材料例如文章、书籍、说明书、出版物、文件、物件和/或类似物为所有目的通过该引用以其整体并入本文，除了与其相关的任何审查文件历史、其与本文件不一致或冲突的任何、或其可能对目前或以后与本文件相关的权利要求的最大范围有限制作用的任何。作为例子，如果与并入材料的任何一个相关的术语的说明、定义和/或使用与本文件相关内容存在任何不一致或冲突，应以该术语在本文件中的说明、定义和/或使用为准。
在结尾，要理解，本文公开的申请的实施方案是本申请实施方案原理的示例说明。可以采用的其他调整可以在本申请范围内。因此，作为例子而非限制，可以根据本文教导来利用本申请实施方案的可选配置。因此，本申请实施方案不限于精确所显示和描述的那些。

Claims (7)

1.包含透明质酸酶的组合物在制备用于治疗和/或抑制受试者炎性病状的药物中的用途，其中，所述透明质酸酶当与一定量乙酰透明质酸结合时能够产生乙酰透明质酸二糖；
其中，所述炎性病状是急性肺损伤、痤疮或肺纤维化。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述透明质酸酶经由较长链乙酰透明质酸的逐渐降解而产生所述乙酰透明质酸二糖。
3.如权利要求1所述的用途，其中所述透明质酸酶由选自由以下组成的组的生物体产生：B族链球菌(GBS)、A族链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌和普氏消化链球菌。
4.如权利要求1所述的用途，其中所述炎性病状是痤疮。
5.如权利要求4所述的用途，其中所述组合物是局部施用的。
6.如权利要求1所述的用途，其中所述炎性病状是肺纤维化。
7.如权利要求6所述的用途，其中所述组合物被施用进入呼吸系统。
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