CN105078904A - 一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针及其制备方法，该卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针由卡巴他赛、药用包合高分子材料、白蛋白、泊洛沙姆、无机物载体、氨基酸保护剂、注射用水组成。本发明的制备方法如下：将极细的无机物载体粉末分散在溶有主药和药用包合高分子材料的有机溶液中，将白蛋白用其他有机溶剂溶解，将二者混合后，减压回收有机溶剂，将药物包裹在药用包合高分子材料和白蛋白上。加入水化介质，充分水化后，挤压过聚碳酯膜，降低脂微球白蛋白粒径，加入氨基酸保护剂冷冻干燥得到脂微球白蛋白粉末。本发明的制备方法易于生产放大，制得的脂微球白蛋白粒径小、包封率高，具有良好的稳定性，明显降低了的毒性，临床使用方便。

Description

一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物制剂技术领域，具体涉及一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针及其制备方法。

背景技术

卡巴他赛为白色至类白色粉末，分子式C₄₅H₅₇NO₁₄，分子量835.93，其具有亲脂性，不溶于水，可溶于乙醇，且在碱性条件下不稳定，结构式如下：

卡巴他赛是新一代紫杉烷类抗肿瘤药，可通过红豆杉萃取的前体半合成制得，是一种新的微管抑制剂，能够与微管蛋白结合，促进微管的组装并抑制其分解，从而稳定微管，具有抑制有丝分裂期和分裂间期的肿瘤细胞功能，起到抗肿瘤作用。与紫杉醇、多西他赛相比，卡巴他赛抑制肿瘤细胞增殖的能力更强，并对多西他赛耐药的肿瘤患者有效。2010年经美国FDA批准用于激素难治性晚期前列腺癌的治疗，是FDA批准的第一个用于对多西他赛产生耐受的前列腺癌的治疗药物。

脂微球白蛋白属于靶向给药系统的一种新剂型，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

目前制备脂微球白蛋白的方法较多，常用的有薄膜法、反相蒸发法、超声波分散、溶剂注入法和复乳法等，这些方法一般称为被动载药法，在制备含药脂微球白蛋白时，首先将药物溶于水相或有机相中，然后按适宜的方法制备含药脂微球白蛋白，该法适于脂溶性强的药物，所得脂微球白蛋白具有较高包封率。

白蛋白是一种生物内源性蛋白，具有可生物降解、无毒、无抗原性等诸多特点，被认为是一个理想的药物载体，白蛋白载药体系是现今药学研究中一个极具生命力的研究方向。白蛋白载药体系主要分为两大类，一类是化学偶联的白蛋白载药体系，另一类是物理结合体系的白蛋白载药体系。化学偶联的白蛋白可以改善药物的药代动力学特性，但结合后形成了新的化学分子。物理结合形式的白蛋白给药体系是一个更为理想的载药模式，将药物分子包裹在白蛋白纳米颗粒中，可以明显提高非水溶性药物在水中的稳定性与溶解度。同时，利用肿瘤组织的透过性增强及滞留效应，可以使得白蛋白纳米载药体系达到靶向给药的目的。

已上市的卡巴他赛制剂仅有法国Sanofi-Aventis公司研制的卡巴他赛注射液(商品名Jevtan)，为两支西林瓶的组合包装，一支为60mg的卡巴他赛溶于1.5mL吐温80中，另一支为溶剂，为5.7mL13％乙醇水溶液。临床使用前，先用13％乙醇稀释至10mg/mL，在给药前，进一步用5％葡萄糖或生理盐水稀释至临床使用浓度，稀释后注射用需在4小时内使用，否则会产生沉淀。

虽然卡巴他赛具有良好的抗肿瘤作用，但是市售的卡巴他赛注射液存在以下缺陷：

(1)使用表面活性剂吐温80配制成注射液，在临床应用中易产生不良反应并引起较多的并发症，如严重的过敏反应、体液潴留等，因此临床使用时需要采用激素类药物预先给药防止过敏，并缓慢滴注。

(2)临床使用前需要进行两步稀释，使用步骤繁琐，存在用药方面的安全隐患。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，以满足临床用药需求并保证用药的安全性和有效性。本发明的另一目的是提供上述卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针的制备方法，可直接用于工业化生产，制备工艺简单，所得产品稳定性好。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，包括以下重量份数的各组分：卡巴他赛2～12份，药用包合高分子材料1～200份，白蛋白1～200份，泊洛沙姆1～50份，无机物载体50-300份，氨基酸保护剂1～150份。

所述卡巴他赛和药用包合高分子材料的重量比1:5-30，所述卡巴他赛和白蛋白的重量比1:5-30，所述卡巴他赛与泊洛沙姆的重量比1:1～10。

所述的成膜材料选自聚乙二醇(1000)单鲸蜡基醚、聚氧乙烯烷基醚、乙酰化单甘油酯中的一种或几种。

所述的无机物载体选氯化钠、氯化钾、氯化镁一种或者几种。

所述的氨基酸保护剂选自甘氨酸、天门苏冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸中的一种或几种。

一种制备所述的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针的方法，包含以下步骤：

1)将卡巴他赛、药用包合高分子材料和泊洛沙姆溶于有机溶剂中；

2)将白蛋白溶于有机溶剂中，与步骤1的溶剂混合；

3)加入极细无机物载体粉末，40～60℃，减压除去有机溶剂，形成干燥粉末；

4)40～60℃，在干燥粉末中加入水化介质，水化后，依次加压过0.8μm、0.45μm、0.22μm的聚碳脂膜降低粒径、过滤除菌；

5)加入氨基酸保护剂，冷冻干燥，得到卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针。

步骤4)中，所述的水化介质为注射用水、无机盐水或含有氨基酸保护剂的水溶液；当为冻干保护剂的水溶液时，步骤5)则直接进行冷冻干燥，得到卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针。

所述的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针使用前水化复溶，注射给药，脂微球白蛋白复溶后平均粒径在20-300nm之间，药物包封率>90％。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点及突出性效果：

1)在卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针中加入带电荷的合成磷脂，既可以增加连续的脂质双分子层间的距离，从而增加对脂溶性要去的包封能力，又可以增加脂质白蛋白胶体粒子间的排斥力，避免了脂微球白蛋白的絮凝，使脂微球白蛋白粒径的贮存期间的变化减小到最低程度。

2)采用冷冻干燥技术，真空压塞，克服了脂质白蛋白可能会发生的氧化、凝聚、融合等变化，从而导致有害成分增多、包封率下降等问题，解决了脂质白蛋白不稳定的问题。

3)制备过程中，只需减压除去有机溶剂，将药用包合高分子材料和药物的混合溶液沉积在无机物载体的表面，工艺简单。

4)无机物载体在水化过程中，可发挥增溶作用，水化时间短，制备的脂质白蛋白粒径小，粒度分布均匀。

5)易于生产放大，制得的脂微球白蛋白粒径小、包封率高，靶向作用强，具有良好的稳定性，与卡巴他赛注射液相比明显降低了的毒性，临床使用方便。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，但本发明不受以下实施例的限制。

实施例1

一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，处方为：卡巴他赛3g，聚乙二醇(1000)单鲸蜡基醚85g，聚氧乙烯烷基醚1.5g，白蛋白75g，泊洛沙姆10g，氯化钠120g，甘氨酸30g，加注射用水至1000mL。

上述卡巴他赛脂微球白蛋白注射剂的制备方法为：将处方量的卡巴他赛、聚乙二醇(1000)单鲸蜡基醚、聚氧乙烯烷基醚、泊洛沙姆、溶于1000mL乙醇中，将白蛋白溶于三氯甲烷中，将二个有机溶剂合并后50℃下加入0.5％的活性炭，过滤除热原。加入处方量的过100目的氯化钠载体，减压除去混合溶剂，得干燥粉末。加入注射用水，充分水化，通过高压均质机挤压依次过0.8μm、0.45μm、0.22μm的聚碳脂膜，加入30g甘氨酸，搅拌溶解，分装于西林瓶中，冷冻干燥。

所获得的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，使用前水化复溶，获得注射剂，直接注射给药即可。复溶后的脂微球白蛋白平均粒径在20-300nm之间，药物包封率>90％。

实施例2

一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，处方为：卡巴他赛6g，乙酰化单甘油酯100g，聚乙二醇(1000)单鲸蜡基醚5g，白蛋白85g，泊洛沙姆10g，氯化钾145g，天门苏冬氨酸55g，加注射用水至1000mL。

上述卡巴他赛脂微球白蛋白注射剂的制备方法为：将处方量的卡巴他赛、乙酰化单甘油酯、聚乙二醇(1000)单鲸蜡基醚溶于800mL氯仿中，将白蛋白溶于三氯甲烷中，将二个有机溶剂合并后50℃下加入0.5％的活性炭，过滤除热原。加入处方量的过100目的氯化钾载体，减压除去混合溶剂，得干燥粉末。加入注射用水，充分水化，通过高压均质机挤压依次过0.8μm、0.45μm、0.22μm的聚碳脂膜，加入55g天门苏冬氨酸，搅拌溶解，分装于西林瓶中，冷冻干燥。

所获得的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，使用前水化复溶，获得注射剂，直接注射给药即可。复溶后的脂微球白蛋白平均粒径在20-300nm之间，药物包封率>90％。

实施例3

一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，处方为：卡巴他赛8g，聚氧乙烯烷基醚130g，乙酰化单甘油酯7g，白蛋白100g，泊洛沙姆25g，赖氨酸180g，加注射用水至1000mL。

上述卡巴他赛脂微球白蛋白注射剂的制备方法为：将处方量的卡巴他赛、聚氧乙烯烷基醚、乙酰化单甘油酯溶于1500mL甲醇中，将白蛋白溶于三氯甲烷中，将二个有机溶剂合并50℃下加入0.5％的活性炭，过滤除热原。加入处方量的过100目的赖氨酸载体，减压除去混合溶剂，得干燥粉末。加入注射用水，充分水化，通过高压均质机挤压依次过0.8μm、0.45μm、0.22μm的聚碳脂膜，分装于西林瓶中，冷冻干燥。

所获得的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，使用前水化复溶，获得注射剂，直接注射给药即可。复溶后的脂微球白蛋白平均粒径在20-300nm之间，药物包封率>90％。

实施例4

一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，处方为：卡巴他赛25g，乙酰化单甘油酯475g，聚乙二醇(1000)单鲸蜡基醚10g，白蛋白95g，泊洛沙姆90g，氯化镁700g，亮氨酸260g，加注射用水至5000mL。

上述卡巴他赛脂微球白蛋白注射剂的制备方法为：将处方量的卡巴他赛、乙酰化单甘油酯、聚乙二醇(1000)单鲸蜡基醚、泊洛沙姆溶于5000mL乙醇中，将白蛋白溶于三氯甲烷中，将二个有机溶剂合并50℃下加入0.5％的活性炭，过滤除热原。加入处方量的过100目的葡萄糖载体，减压除去混合溶剂，得干燥粉末。加入注射用水，充分水化，通过高压均质机挤压依次过0.8μm、0.45μm、0.22μm的聚碳脂膜，加入260g右旋糖苷，搅拌溶解，分装于西林瓶中，冷冻干燥。

所获得的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，使用前水化复溶，获得注射剂，直接注射给药即可。复溶后的脂微球白蛋白平均粒径在20-300nm之间，药物包封率>90％。

实施例5卡巴他赛脂微球白蛋白LD50考察

卡巴他赛脂微球白蛋白为实施例4制备。卡巴他赛注射液为法国Sanofi-Aventis公司生产。实验动物SPF级ICR小鼠，140只，雌雄各半。

将卡巴他赛脂微球白蛋白、卡巴他赛注射液通过小鼠尾静脉给药，测定两种制剂的半数致死量，采用SPASS18.0软件统计，结果见表1。

表1卡巴他赛脂微球白蛋白LD50考察结果表

	卡巴他赛注射液	卡巴他赛脂微球白蛋白
			LD50(mg/kg)	65.23	154.28

95％置信区间(mg/kg)

59.08～71.57

138.17～169.45

结果显示，卡巴他赛脂微球白蛋白的毒性明显低于市售的注射液，LD50值是市售品的2.37倍，证明本发明制备的卡巴他赛脂微球白蛋白明显降低了药物的毒性。

实施例6卡巴他赛脂微球白蛋白的稳定性考察

取实施例4制备的卡巴他赛脂微球白蛋白，于4℃保存，结果见表2。

表2卡巴他赛脂微球白蛋白的稳定性考察结果表

时间(月)	外观	平均粒径(nm)	含量(％)	包封率(％)
					1	淡黄色疏松块状	130.8	99.6	94.2
2	淡黄色疏松块状	120.9	100.1	93.5
					3	淡黄色疏松块状	134.2	99.1	94.1
6	淡黄色疏松块状	135.4	99,3	92.6
					9	淡黄色疏松块状	140.8	98.6	93.5
12	淡黄色疏松块状	138.7	99.0	91.9

从表2可以看出，自制的注射用卡巴他赛脂微球白蛋白，在4℃稳定性良好，保存12个月各主要检测指标无明显变化。

实施例7卡巴他赛脂微球白蛋白与市售卡巴他赛注射液大鼠药代动力学实验

将市售的卡巴他赛注射液作为参比制剂，卡巴他赛脂微球白蛋白复溶后分别通过大鼠尾静脉注射给药，测定二者的药代动力学参数。分别于给药后0、5、15、30min，1、2、4、6、8、10、12、18、24h，大鼠眼眶取血，上述血浆处理后，HPLC法测定血药浓度，绘制药物浓度—时间曲线，数据经DAS软件进行分析，结果见表3。

表3卡巴他赛脂微球白蛋白和卡巴他赛注射液的药代动力学参数

	脂微球白蛋白	注射液
			AUC(0-t)(mg/L*h)	5.242	3.457
AUC(0-∞)(mg/L*h)	7.986	6.264
			CL(L/h/Kg)	0.673	1.252
Vl(L/Kg)	0.26	0.61
			T1/2x(h)	32.7	6.01

由结果可见，本发明的脂微球白蛋白，与市售注射液相比可明显降低药物在血浆中的清除速率，生物利用度更高，体内循环时间更长，更有助于发挥药效。

实施例8卡巴他赛脂微球白蛋白与卡巴他赛注射液药效学对比研究

取BALB/C小鼠，每组10只，皮下接种1×10⁷个小鼠乳腺癌细胞EMT-6细胞，接种肿瘤后24小时腹腔给予注射卡巴他赛脂微球白蛋白或注射液，每天一次，连续5天，阴性对照给予等体积的无菌生理盐水。各组动物接种肿瘤后第12天活杀，取肿瘤后称重，计算卡巴他赛对肿瘤的抑制率，抑制率％＝(对照组平均瘤重—治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重*100％。结果见表4。

表4腹腔给药卡巴他赛脂微球白蛋白、卡巴他赛注射液对小鼠乳腺癌EMT-6的作用

组别	剂量mg/Kg	动物数(只)开始/结束	瘤重(g)	抑制率％
					空白对照	0	10/10	1.67+0.17	0
卡巴他赛脂微球白蛋白	5	10/10	0.46+0.23	72.5
					卡巴他赛脂微球白蛋白	3	10/10	0.69+0.21	58.7
卡巴他赛注射液	5	10/10	0.81+0.25	51.5
					卡巴他赛注射液	3	10/10	1.05+0.16	37.1

相同给药方式，相同剂量的卡巴他赛脂微球白蛋白与卡巴他赛注射液比较，有更明显的抑瘤作用，表明卡巴他赛脂微球白蛋白具有更好的抗肿瘤效果。

Claims (8)

1.一种卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，其特征在于：包括以下重量份数的各组分：卡巴他赛1份，药用包合高分子材料5~100份，白蛋白5~100份，泊洛沙姆1~10份，无机物载体10-200份，氨基酸保护剂1~30份。

2.根据权利要求1所述的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，其特征在于：由以下重量份数的各组分组成：卡巴他赛1份，药用包合高分子材料10~30份，白蛋白10~30份，泊洛沙姆1~4份，无机物载体20-45份，氨基酸保护剂1~15份。

3.根据权利要求1或2所述的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，其特征在于，所述的药用包合高分子材料选自聚乙二醇（1000）单鲸蜡基醚、聚氧乙烯烷基醚、乙酰化单甘油酯中的一种或几种。

4.根据权利1或2所述的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，其特征在于，所述的无机物载体选氯化钠、氯化钾、氯化镁一种或者几种。

5.根据权利1或2所述的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针，其特征在于，所述的氨基酸保护剂选自甘氨酸、天门苏冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸中的一种或几种。

6.一种制备权利要求1或2所述的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针的方法，其特征在于：包含以下步骤：

1）将卡巴他赛、药用包合高分子材料和泊洛沙姆溶于有机溶剂中；

2）将白蛋白溶于有机溶剂中，与步骤1的溶剂混合；

3）加入极细无机物载体粉末，40~60℃，减压除去有机溶剂，形成干燥粉末；

4）40~60℃，在干燥粉末中加入水化介质，水化后，依次加压过0.8μm、0.45μm、0.22μm的聚碳脂膜降低粒径、过滤除菌；

5）加入氨基酸保护剂，冷冻干燥，得到卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针。

7.根据权利要求6所述的制备卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针的方法，其特征在于：步骤4）中，所述的水化介质为注射用水、无机盐水或含有氨基酸保护剂的水溶液。

8.根据权利要求1或2所述的制备卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针的方法，其特征在于：所述的卡巴他赛脂微球白蛋白冻干粉针使用前水化复溶，注射给药，脂微球白蛋白复溶后平均粒径在20-300nm之间，药物包封率>90%。