CN105063193A - 一种检测水稻白叶枯病菌的hda试剂盒及检测方法 - Google Patents
一种检测水稻白叶枯病菌的hda试剂盒及检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105063193A CN105063193A CN201510464084.9A CN201510464084A CN105063193A CN 105063193 A CN105063193 A CN 105063193A CN 201510464084 A CN201510464084 A CN 201510464084A CN 105063193 A CN105063193 A CN 105063193A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hda
- leaf spot
- rice leaf
- rice
- detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种检测水稻白叶枯病菌的HDA试剂盒及检测方法,包含一对特异性检测水稻白叶枯病菌的HDA引物对、10×缓冲液、ATP、dNTPs、Bst?polymerase、RecA蛋白、UvrD?helicase、阳性对照DNA和ddH2O。一种检测水稻白叶枯病菌的检测方法,是从待测样本中提取DNA作为检测模板:采用细菌DNA提取试剂盒提取待测样本DNA,保存备用;利用检测水稻白叶枯病菌的HDA试剂盒,进行HDA反应,得到扩增产物;检测扩增产物,并作出判断。该发明是水稻白叶枯病菌检测技术体系的进一步完善和发展,使得水稻白叶枯病菌的检测真正实现准确、快捷、成本低和简单易操作,特别适用于在基层单位的日常检验检疫工作中大范围推广。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测水稻白叶枯病菌的HDA试剂盒及检测方法,属于检验检疫领域。
技术背景
水稻是世界最重要的粮食作物之一,全球约有一半人口以水稻为主食。水稻白叶枯病,又称白叶瘟、茅草瘟、地火烧等,是水稻最主要病害之一,对水稻产量造成了严重的影响。该病由细菌引起,病原菌为水稻黄单胞菌(Xanthomonasoryzae)。2007年,农业部会同国家质量监督检验检疫总局共同制定了《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》,该目录将水稻白叶枯病明确列为水稻的检疫性病害。重视并加强水稻白叶枯病菌的检验检疫工作,对切实保障水稻的安全生产有着重要意义。
根据《中华人民共和国出入境检验检疫行业标准》中关于水稻白叶枯病菌的检测方法规定,对于出入境种子首先需要进行样品的清洗、研磨并获得提取液,然后进行平板培养,或利用ELISA试剂盒对提取液进行快速筛选检测。对于检测结果呈阳性的还需进行进一步的平板分离和生化鉴定。整个过程程序复杂,耗时长,且在操作过程中可能产生假阳性或假阴性结果。随着分子生物学技术的发展,以聚合酶链式反应(PCR)为依托的检验方法已应用于水稻白叶枯病的检测,该方法虽然灵敏准确,但需要高品质热循环仪,成本较高,难以大范围应用在基层单位的日常检验检疫工作中,而且,PCR反应温度循环的过程导致了反应时间较长,增加了检验的时间成本。因此,有必要开发一种更加准确、快捷、成本低、简单易操作的检测水稻白叶枯病菌的方法。
依赖解旋酶DNA等温扩增技术(Helicase-DependentisothermalDNAAmplification,简称HDA)是由美国NEB公司于2004年开发的一种核酸等温扩增技术。该技术只需在恒定温度下进行,不需要温度变化的过程,因此,在实际操作和仪器要求方面,HDA技术都比PCR技术更为便捷和廉价,真正使样品的检测实现了快速、简便和低成本,从而更容易被开发出检测的应用产品。
HDA技术原理是利用解旋酶在恒温条件下解开DNA双链,同时DNA单链结合蛋白(SSB)稳定解开的单链为引物提供结合模板,然后由DNA聚合酶催化合成互补链,新合成的双链在解旋酶的作用下又形成单链,并作为下一轮合成的模板进入循环扩增反应,最终实现靶序列的指数增长。该技术的优点在于:等温扩增,HDA技术在一个恒定温度就能完成扩增反应,不需要像普通PCR那样循环的温度变化,可以减少扩增时间;设备简单,HDA反应不需要复杂和昂贵的热循环仪设备,只需要一个简单的恒温器就可进行。因此,HDA技术有望成为一种重要的检验检测工具。
目前,国际上对于HDA技术的研究和应用尚处于起步阶段,国内外还没有关于HDA法检测水稻白叶枯病菌的研究。我们将首次提供快速检测水稻白叶枯病菌的HDA试剂盒,并建立起相应检测方法。该发明是水稻白叶枯病菌检测技术体系的进一步完善和发展。该方法的建立,将使得水稻白叶枯病菌的检测真正实现准确、快捷、成本低和简单易操作,特别适用于在基层单位的日常检验检疫工作中大范围推广,可为我国的水稻白叶枯病的有效防治做出贡献。
发明内容
本发明的目的是针对现有检测技术的不足,提供一种更加准确、快捷、成本低和简单易操作的检测水稻白叶枯病菌的HDA试剂盒及检测方法。
一、本发明所述检测水稻白叶枯病菌的HDA试剂盒包括:一对特异性检测水稻白叶枯病菌的HDA引物对(即SEQIDNo:1和SEQIDNo:2)、10×缓冲液、ATP、dNTPs、Bstpolymerase、RecA蛋白、UvrDhelicase、阳性对照DNA和ddH2O;
所述HDA引物对序列为:
SEQIDNo:1:5’-CTCGGCAAGAAGAAGCAGTC-3’;
SEQIDNo:2:5’-TAACTGCTGGCAATGATCCG-3’。
二、本发明所述检测水稻白叶枯病菌的检测方法为:
(1)从待测样本中提取DNA作为检测模板:采用细菌DNA提取试剂盒提取待测样本DNA,保存备用;
(2)利用本发明所提供的HDA试剂盒,进行HDA反应,得到扩增产物;
所述的HDA反应体系为:5μL的10×缓冲液,0.2μmol的ATP,0.1μmol的dNTPs,10UBstpolymerase,2-5μgRecA蛋白,0.2-0.4μgUvrDhelicase,2μL的10μmol/L的上游引物,2μL的10μmol/L的下游引物,2μL的样品基因组DNA,用ddH2O补至50μL;
所述的HDA反应方法为:将反应体系放入60-70oC恒温水浴锅中恒温扩增90-120min;
(3)检测扩增产物,并作出判断
所述的检测扩增产物并作出判断是采用琼脂糖凝胶电泳的方法进行,出现281bp的特异性扩增条带即判断为检测出水稻白叶枯病菌。
作为上述HDA试剂盒的一种优选技术方案,10×缓冲液包括100mM二硫苏糖醇、350mMTris-HAc、100mMMgSO4、1mg/mLBSA和25μM海藻糖,此方案简化了HDA反应过程,也节省了试剂盒空间。
作为上述HDA反应体系的一种优选技术方案,反应体系中RecA蛋白的含量为3μg。
作为上述HDA反应体系的一种优选技术方案,反应体系中UvrDhelicase的含量为0.3μg。
作为上述HDA反应方法的一种优选技术方案,将反应体系放入65oC恒温水浴锅中恒温扩增100min。
本发明的有益效果为:所开发的HDA检测法具有极高的特异性,仅能从水稻白叶枯病菌DNA中扩增出特异性条带,较生理生化检测法具有更高的灵敏度和准确性;所提供的HDA检测法在恒温下就能进行,反应温度不需要循环变化,较常规PCR检测法速度更快;扩增反应只需要普通水浴锅就可以进行,不需要复杂和昂贵的热循环仪设备。因此,该发明是水稻白叶枯病菌检测技术体系的进一步完善和发展,使得水稻白叶枯病菌的检测真正实现准确、快捷、成本低和简单易操作,特别适用于在基层单位的日常检验检疫工作中大范围推广。
附图说明
图1为本发明HDA法检测不同小种的水稻白叶枯病菌试验结果图,其中,M:DNAmarker;1-11:Xanthomonasoryzaepv.oryzaeYN1、YN11、YN18、YN24、PXO347、PXO349、PXO364、OS86、OS198、OS225、ZHE173;12:阳性对照;13:阴性对照。
图2为本发明HDA法检测水稻其他病原菌和其他植物病原菌的试验结果图。其中,M:DNAmarker,1-12:Xanthomonasoryzaepv.oryzicolaRH3、RS85、RS105、HNB8-47、PXO71、PXO86、PXO99、AHB4-75、JSB2-24、JSB3-22、YNB10-32、SCB4-1;13:Xanthomonasaxonopodispv.citriYC;14:Xanthomonascampestrispv.campestrisX8-1;15-16:UstilaginoideaoryzaeLN、SX0201;17:Xanthomonasmaltophilia;18:Burkholderiagladiolipv.alliicola;19:Burkholderiacepacia;20:Burkholderiaglumae;21:Pelliculariasasakii;22:阳性对照;23:阴性对照。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明作进一步详细的说明。本发明实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为本领域内常规方法。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过商业途径获得的常规产品。
1.HDA引物对的设计:
在GenBank数据库中搜索水稻白叶枯病菌(Xanthomonas.oryzaepv.oryzae)基因序列并利用NCBI中的BLAST工具根据进行nucleotideblast比对,获得水稻白叶枯病菌特异性的糖基转移酶基因Glycosyltransferase(GenBank号为:AF169030.1)。引物的设计经过同源性对比,选取特异性较高的区域设计扩增引物对,用于增加检测的准确度与特异性。经过对设计引物的筛选,最终确定了一对效果最佳的引物对用于本发明,命名为Xoo-JYF和Xoo-JYR(即SEQIDNo:1和SEQIDNo:2)。
2.引物对的合成和试剂盒的制备:
根据所设计引物的核苷酸序列信息由上海生工生物工程有限公司合成引物对;
将上述合成好的引物对分别配制成浓度为10μmol/L的溶液作为试剂盒,备用。试剂盒还内含:10×缓冲液,ATP,dNTPs,Bstpolymerase,RecA蛋白,UvrDhelicase,阳性对照DNA和ddH2O。
3.样品基因组DNA的提取:
实施例中所用不同小种的水稻白叶枯病菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzaeYN1、YN11、YN18、YN24、PXO347、PXO349、PXO364、OS86、OS198、OS225、ZHE173)和其他病原菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzicolaRH3、RS85、RS105、HNB8-47、PXO71、PXO86、PXO99、AHB4-75、JSB2-24、JSB3-22、YNB10-32、SCB4-1;Xanthomonasaxonopodispv.citriYC;Xanthomonascampestrispv.campestrisX8-1;UstilaginoideaoryzaeLN、SX0201;Xanthomonasmaltophilia;Burkholderiagladiolipv.alliicola;Burkholderiacepacia;Burkholderiaglumae;Pelliculariasasakii)均由美国农业部国家水稻研究中心提供。
分别提取细菌基因组DNA,提取方法参见细菌DNA提取试剂盒(上海生工生物工程有限公司)的说明书。提取的样品基因组DNAOD260/OD280范围在1.6-2.0内,浓度大于10ng/μL。
4.HDA扩增反应与电泳检测:
1)HDA反应体系和反应方法
以步骤3提取的细菌基因组DNA为模板,利用本发明所提供的HDA反应试剂盒进行反应。
反应体系为50μL,即在0.2mL的PCR反应管中加入5μL的10×缓冲液,0.2μmol的ATP,0.1μmol的dNTPs,10UBstpolymerase,3μgRecA蛋白,0.3μgUvrDhelicase,2μL的10μmol/L的上游引物Xoo-JYF,2μL的10μmol/L的下游引物Xoo-JYR,2μL的样品基因组DNA,用ddH2O补至50μL。
所述的HDA反应方法为:将反应体系放入65oC恒温水浴锅中恒温扩增100min。
2)扩增产物的电泳检测
用1×TAE电泳缓冲液制备1.5%的琼脂糖凝胶。取扩增产物与5μL10×上样缓冲液混合后,在已制备的琼脂糖凝胶的点样孔中进行点样。设置电压(3V/cm-5V/cm),电泳时间为50min-60min。用凝胶成像仪拍照记录。
采用上述引物对特异性的扩增片段长度为281bp,根据检测样品是否产生281bp的扩增条带判定样品中是否含有水稻白叶枯病菌成分。
3)检测水稻白叶枯病菌HDA方法的确定
凝胶电泳结果见图1和图2。图1显示所有水稻白叶枯病菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzaeYN1、YN11、YN18、YN24、PXO347、PXO349、PXO364、OS86、OS198、OS225、ZHE173)均产生了和阳性对照一致的特异性条带;图2显示除阳性对照产生特异性条带外,其余检测菌株(Xanthomonasoryzaepv.oryzicolaRH3、RS85、RS105、HNB8-47、PXO71、PXO86、PXO99、AHB4-75、JSB2-24、JSB3-22、YNB10-32、SCB4-1;Xanthomonasaxonopodispv.citriYC;Xanthomonascampestrispv.campestrisX8-1;UstilaginoideaoryzaeLN、SX0201;Xanthomonasmaltophilia;Burkholderiagladiolipv.alliicola;Burkholderiacepacia;Burkholderiaglumae;Pelliculariasasakii)均未产生特异性条带。
以上结果表明,所提供的试剂盒和检测方法能够完全准确的对水稻白叶枯病菌进行鉴定。与已有检测方法相比,该发明具有快捷、成本低和简单易操作的优点,特别适用于在基层单位的日常检验检疫工作中大范围推广。
SEQIDNo:1:5’-CTCGGCAAGAAGAAGCAGTC-3’
SEQIDNo:2:5’-TAACTGCTGGCAATGATCCG-3’
SEQIDNo:3:水稻白叶枯病菌糖基转移酶基因Glycosyltransferase序列(GenBank号为:AF169030.1):
attcgcccgcaaggtcgttctgacggctattcgtgggcgatcctctgatgaaacttccgagtcgatcattgatgagcgttttggcggttgagttccagcgaatttatgtggtgaagaacggcgtgaccacctgactgatacagatgtggagaatgctccggcacctcgtcgaaaaggggctggttgccgcgcagtttttgttggtactgggtgcgagctatagccataagaatcgtgacctggctatcctggcttggaaagagttgcgtcgacgcggccacaatatcgccttagttatggctggtgcagtggtcgccaagggaagctctcggcaagaagaagcagtcgcccgctggggcgctgacgaagagcaacttgtaataatgccagatgtaagtagtgcggtcaggaactggttattgcggcatgccagcatcgtgttgtatccaacctcagcggaaggcttcggcctcgtcccgtttgaggctgcttctatgggaaccccaacggcgcatgtgagcttcggcccacttagggagctaatagattcgccagaacttcctcaggattgggatccgttgcgcatggcggatcattgccagcagttattgcaagatccccagttggccggaaaaaatatcaagcgtgtccttgctagcggggggcgcctcgtttggagtgcgactgcagccgatctgaccgtggcgtaccgtcaaacgcttgcgtccgcgccgcgaaactaatatttccagaggtttaaaatatgaatacgactgaccttgatcaaatatcgcttgaacaagcactcattgacttcgaagtagccaatgcacgcgtgatggacctcacttcgcgtctgacctctatgagtcgggagctgatccagactcgatcggaattggagcgcttacgtatcggtgcagcgcccatttcgtactcagtcaccaattttgagggctacgacgatgtccataatcgttatgcgcagatacctgcatcgcgtttggtgaagtttgcttcgatgtttaacagtaagctgcgtcggtgtctgtaatggaccgtcctcgtattcttcattgcatcacggtgtataacgggggggcattcgtacctgccgcaatcaaaagtgcgctgcgcctagatcagccaggaagcacaaatagatgtataagtcctggatgacg。
Claims (6)
1.一种检测水稻白叶枯病菌的HDA试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包含一对特异性检测水稻白叶枯病菌的HDA引物对、10×缓冲液、ATP、dNTPs、Bstpolymerase、RecA蛋白、UvrDhelicase、阳性对照DNA和ddH2O;
所述HDA引物对序列为:
SEQIDNo:1:5’-CTCGGCAAGAAGAAGCAGTC-3’;
SEQIDNo:2:5’-TAACTGCTGGCAATGATCCG-3’。
2.根据权利要求1所述的一种检测水稻白叶枯病菌的HDA试剂盒,其特征是:所述10×缓冲液包括100mM二硫苏糖醇、350mMTris-HAc、100mMMgSO4、1mg/mLBSA和25μM海藻糖,此方案简化了HDA反应过程,也节省了试剂盒空间。
3.一种检测水稻白叶枯病菌的检测方法:其特征是:
(1)从待测样本中提取DNA作为检测模板:采用细菌DNA提取试剂盒提取待测样本DNA,保存备用;
(2)利用检测水稻白叶枯病菌的HDA试剂盒,进行HDA反应,得到扩增产物;
所述试剂盒包含一对特异性检测水稻白叶枯病菌的HDA引物对、10×缓冲液、ATP、dNTPs、Bstpolymerase、RecA蛋白、UvrDhelicase、阳性对照DNA和ddH2O;
所述HDA引物对序列为:
SEQIDNo:1:5’-CTCGGCAAGAAGAAGCAGTC-3’;
SEQIDNo:2:5’-TAACTGCTGGCAATGATCCG-3’;
所述的HDA反应方法为:将反应体系放入60-70oC恒温水浴锅中恒温扩增90-120min;
(3)检测扩增产物,并作出判断
所述的检测扩增产物并作出判断是采用琼脂糖凝胶电泳的方法进行,出现281bp的特异性扩增条带即判断为检测出水稻白叶枯病菌。
4.根据权利要求3所述的一种检测水稻白叶枯病菌的检测方法,其特征是:所述反应体系中RecA蛋白的含量为3μg。
5.根据权利要求3所述的一种检测水稻白叶枯病菌的检测方法,其特征是:所述反应体系中UvrDhelicase的含量为0.3μg。
6.根据权利要求3所述的一种检测水稻白叶枯病菌的检测方法,其特征是:所述反应体系是放入65oC恒温水浴锅中恒温扩增100min。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510464084.9A CN105063193A (zh) | 2015-07-31 | 2015-07-31 | 一种检测水稻白叶枯病菌的hda试剂盒及检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510464084.9A CN105063193A (zh) | 2015-07-31 | 2015-07-31 | 一种检测水稻白叶枯病菌的hda试剂盒及检测方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105063193A true CN105063193A (zh) | 2015-11-18 |
Family
ID=54492697
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510464084.9A Pending CN105063193A (zh) | 2015-07-31 | 2015-07-31 | 一种检测水稻白叶枯病菌的hda试剂盒及检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105063193A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111621549A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-09-04 | 南京农业大学 | 水稻种子中白叶枯病菌lamp快速检测方法及应用 |
CN116656850A (zh) * | 2023-07-27 | 2023-08-29 | 中国热带农业科学院三亚研究院 | 基于CRISPR/Cas12a-RPA快速检测水稻白叶枯病菌的序列组合及其应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101608235A (zh) * | 2009-03-27 | 2009-12-23 | 南京农业大学 | 水稻白叶枯病菌和水稻细条病菌的padlock探针及多重检测方法 |
CN103498000A (zh) * | 2013-10-11 | 2014-01-08 | 中国计量学院 | 一种多重pcr法检测水稻检疫性病原菌的引物组及试剂盒和方法 |
CN104372078A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-02-25 | 河北省食品检验研究院 | 一种食品中产气荚膜梭菌的hda引物及其应用方法 |
CN104450975A (zh) * | 2014-12-31 | 2015-03-25 | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 检测番茄斑萎病毒的rt-hda引物、试剂盒及方法 |
-
2015
- 2015-07-31 CN CN201510464084.9A patent/CN105063193A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101608235A (zh) * | 2009-03-27 | 2009-12-23 | 南京农业大学 | 水稻白叶枯病菌和水稻细条病菌的padlock探针及多重检测方法 |
CN103498000A (zh) * | 2013-10-11 | 2014-01-08 | 中国计量学院 | 一种多重pcr法检测水稻检疫性病原菌的引物组及试剂盒和方法 |
CN104372078A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-02-25 | 河北省食品检验研究院 | 一种食品中产气荚膜梭菌的hda引物及其应用方法 |
CN104450975A (zh) * | 2014-12-31 | 2015-03-25 | 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 检测番茄斑萎病毒的rt-hda引物、试剂盒及方法 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111621549A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-09-04 | 南京农业大学 | 水稻种子中白叶枯病菌lamp快速检测方法及应用 |
CN111621549B (zh) * | 2020-06-05 | 2022-07-12 | 南京农业大学 | 水稻种子中白叶枯病菌lamp快速检测方法及应用 |
CN116656850A (zh) * | 2023-07-27 | 2023-08-29 | 中国热带农业科学院三亚研究院 | 基于CRISPR/Cas12a-RPA快速检测水稻白叶枯病菌的序列组合及其应用 |
CN116656850B (zh) * | 2023-07-27 | 2023-10-31 | 中国热带农业科学院三亚研究院 | 基于CRISPR/Cas12a-RPA快速检测水稻白叶枯病菌的序列组合及其应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103898108B (zh) | 对河流弧菌o2,o4,o13,o15和o18特异的核苷酸及其应用 | |
CN104046700A (zh) | 一种快速鉴定驴皮、马皮和骡子皮的检测试剂盒 | |
CN104059975B (zh) | 对普罗威登斯菌o3,o4,o8,o12,o13和o20特异的核苷酸及其应用 | |
CN113186313A (zh) | 基于RPA-LbCas12a-TTECDS体系的沙门氏菌检测引物组、方法与试剂盒 | |
CN104232783B (zh) | 牛种布氏菌弱毒疫苗株a19的快速检测方法 | |
CN105018486A (zh) | 一种检测水稻细菌性条斑病菌的hda试剂盒及检测方法 | |
CN105063193A (zh) | 一种检测水稻白叶枯病菌的hda试剂盒及检测方法 | |
CN103993090B (zh) | 对普罗威登斯菌o31,o41,o42,o43和o50特异的核苷酸及其应用 | |
CN105154559A (zh) | 对副溶血弧菌k36,k37,k68特异的核苷酸及其应用 | |
Aviv et al. | Real-time reverse transcription PCR as a tool to study virulence gene regulation in bacterial pathogens | |
Hu et al. | Comparison of droplet digital PCR and real‐time quantitative PCR for quantitative detection of the parasitic ciliate Ichthyophthirius multifiliis in the water environment | |
CN110894550A (zh) | 鳗鲡疱疹病毒(hva)的raa恒温荧光检测方法及试剂 | |
CN112592965B (zh) | 一种TaqMan探针法的E.coli宿主DNA残留检测试剂盒 | |
CN105256041B (zh) | 对亲水气单胞菌o44,o24,o25和o28特异的核苷酸及应用 | |
CN103146841A (zh) | 一种同步检测十八种发热伴出疹病原体的试剂盒及其检测方法 | |
CN105154438B (zh) | 对蜂房哈夫尼亚菌g5907,g5908,g5913,g5916特异的核苷酸及其应用 | |
He et al. | Graphene Oxide-Based Fluorometric Determination of the eta Gene in Pseudomonas aeruginosa Using Nicking Enzyme-Mediated Cyclic Signal Amplification | |
CN105177144A (zh) | 对副溶血弧菌k4,k32,k34特异的核苷酸及其应用 | |
CN108841997A (zh) | 一种电化学基因芯片法检测常见型甲型流感病毒的试剂盒 | |
CN112592985B (zh) | 一种蜡样芽孢杆菌实时荧光pcr检测方法及应用 | |
CN110894551A (zh) | 草鱼出血病i型病毒(gcrv-i)的raa恒温荧光检测方法及试剂 | |
CN105112406A (zh) | 对蜂房哈夫尼亚菌g5897,g5898,g5900特异的核苷酸及其应用 | |
CN113481310B (zh) | 一种检测生姜腐烂病病原的lamp引物组、lamp试剂盒及其应用 | |
CN105154439A (zh) | 对蜂房哈夫尼亚菌g5902,g5903,g5904,g5906特异的核苷酸及其应用 | |
CN106676101A (zh) | 一种用于乳腺癌诊断的锁核酸修饰分子信标及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20151118 |