CN105061413A - 一种新的柠檬苦素化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新的柠檬苦素化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用，属于药物技术领域。该化合物为首次报道，是一种结构新颖的柠檬苦素化合物，可以从南五味子药材中提取、分离纯化得到。体外试验证明该化合物能够抑制腺样囊性癌细胞的增殖，诱导其凋亡，可以用来开发成治疗腺样囊性癌的药物。

Description

一种新的柠檬苦素化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及从南五味子中分离得到的一种新的柠檬苦素化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。

背景技术

南五味子属（KadsuraKaempf.exJuss.）隶属于木兰科（Magnoliaceae）五味子亚科（Schisandroideae），近年来也有许多植物分类学家倾向于把五味子科单独作为一科进行分类。南五味子属有植物29种，主产于亚洲东部和东南部。我国有10种，产于我国东南部和西南部，包括云南、贵州、四川、广东、广西、福建等省。

南五味子为南五味子属植物华中五味子（SchisandrasphenantheraRehd.EtWils.）的干燥成熟果实，其商品名习称西五味子，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等功效。早期仅作为正品五味子（北五味子、南五味子）的一种被广泛收载于各种中药专著及各版药典。由于该品种在生境分布、化学成分、组成及药效等方面与北五味子Schisandrachinensis（Turcz.）Baill.存在一定的差异，故2000年版药典将其单独列出收载于药典一部。南五味子的根茎作为滇鸡血藤被《中国药典》2010年版收载，以其为原料的制剂复方滇鸡血藤膏也被《中国药典》2010年版收载，主治瘀血阻络、月经不调。

南五味子主要化学成分较为单一，木脂素和三萜类为其特征性化学成分。此外该植物还含有少量倍半萜类成分。木脂素是南五味子的主要活性成分，根据其骨架类型可分为5大类：联苯环辛烯类；螺苯骈呋喃型联苯环辛烯类；芳基四氢萘类；二苄基丁烷类；四氢呋喃类。此外，南五味子属植物还含有少量新木脂素类化合物和柠檬苦素类化合物。

现代药理研究表明，该属植物具有抗白血病、抗氧化、抗乙型肝炎、拮抗血小板活化因子（PAF）等作用。近年来，该属植物抗肿瘤、抗病毒方面的活性尤其受人关注。

发明内容

本发明的目的是提供一种从南五味子药材中分离得到的一种新的柠檬苦素化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

具有下述结构式的柠檬苦素化合物（Ⅰ），

所述的化合物（Ⅰ）的制备方法，包含以下操作步骤：（a）南五味子干燥成熟果实粉碎，用75%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b）步骤（a）中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用10%乙醇和75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c）步骤（b）中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d）步骤（c）中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e）步骤（d）中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为55%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（Ⅰ）。

进一步地，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。

药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（Ⅰ）和药学上可接受的载体。

所述的化合物（Ⅰ）在制备治疗腺样囊性癌的药物中的应用。

所述的药物组合物在制备治疗腺样囊性癌的药物中的应用。

本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。

该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（Ⅰ），其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。

说明书附图

图1为化合物（Ⅰ）结构式；

图2为化合物（Ⅰ）二维HSQC谱；

图3为化合物（Ⅰ）二维¹H-¹HCOSY谱；

图4为化合物（Ⅰ）二维HMBC谱；

图5为化合物（Ⅰ）二维ROESY谱；

图6为不同浓度化合物（Ⅰ）作用不同时间对ACC-M的抑制率。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

主要材料、试剂来源及仪器类型：

乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。

腺样囊性癌细胞系ACC-M购自上海交通大学医学院口腔颌面外科实验室。化合物Ⅰ自制，HPLC纯度大于98%。RPMI-1640培养基、胰蛋白酶购于美国SIGMA公司。标准胎牛血清购自邢台市汇丰生物技术研究所。Annexin-v-FITC/PI试剂盒购于北京宝赛生物技术有限公司。PBS购于天津市光复精细化工研究所。MTT粉购于Amresco公司。二乙胺四乙酸二钠（EDTA）购于北京益利精细化学品有限公司。青霉素、链霉素购于华北制药股份有限公司。二甲基亚砜（DMSO）购于天津市标准科技有限公司。Giemsa染液购于珠海贝索生物技术有限公司。

XYJ型医疗净化工作台，苏州净化设备有限公司；BB5060/BB16二氧化碳培养箱，上海Heraeus公司；CX21光学显微镜，日本OLYMPUS；XD-10198101倒置显微镜，江南公司；流式细胞仪，BectionDickinsonFacscaLibur；WeLLscanMK3全自动酶标仪，芬兰LabsystemsDragon；BFX5-320型低速离心机，中国上海泸南科学仪器联营厂；GF-300型电子天平，JapanA&DCompany，Limited；725型超低温冰箱，FormaScientific.Inc；微量加样器，EPPENDORF公司。

实施例1：化合物（Ⅰ）分离制备及结构确证

（a）南五味子干燥成熟果实（10kg）粉碎，用75%乙醇热回流提取（30L×3次），合并提取液，浓缩至无醇味（5L），依次用石油醚（5L×3次）、乙酸乙酯（5L×3次）和水饱和的正丁醇（5L×3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（345g）和正丁醇萃取物；（b）步骤（a）中乙酸乙酯萃取物用D101大孔树脂除杂，依次用10%乙醇（10L）和75%乙醇（15L）洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（135g）；（c）步骤（b）中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1（10个柱体积）、50:1（8个柱体积）、25:1（12个柱体积）、15:1（8个柱体积）和5:1（6个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d）步骤（c）中组分4（28g）用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1（5个柱体积）、15:1（6个柱体积）和10:1（5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e）步骤（d）中组分2（11g）用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为55%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（Ⅰ）（32mg）。

结构确证：淡黄色针状结晶，易溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮和甲醇；HR-ESIMS显示[M+Na]⁺为m/z591.2624，结合核磁特征可得分子式为C₃₂H₄₀O₉，不饱和度为13。红外IR显示在3494，1648，1730和1715cm^-1有吸收，提示存在羟基和羰基；875cm^-1的吸收峰提示呋喃环的存在。核磁共振氢谱数据δ_H（ppm,CDCl₃,400MHz）：H-2（3.73，dd，J=9.1，6.2），H-3（4.72，d，J=9.1）,H-5（3.33，s）,H-6（4.38，s），H-9（2.29，m），H-11（1.33，m），H-11（1.85，m），H-12（1.26，m），H-12（1.98，m），H-15（6.10，s），H-16（5.10，d），H-17（5.10，s），H-18（1.04，s），H-19（1.47，s），H-21（7.51，s），H-22（6.49，s），H-23（7.44，s），H-28（0.87，s），H-29（1.11，s），H-30（6.21，dd，J=6.2，2.9），MeO-7（3.83，s），H-3’（6.97，q，J=7.3），H-4’（1.90，d，J=7.3），H-5’（1.91，s）；核磁共振碳谱数据δ_C（ppm,CDCl₃,100MHz）：213.8（C，1-C），49.0（CH₂，2-C），79.4（CH，3-C），39.3（C，4-C），44.3（CH，5-C），72.2（CH，6-C），175.8（C，7-C），136.4（C，8-C），55.4（CH，9-C），52.6（C，10-C），22.6（CH₂，11-C），33.5（CH₂，12-C），37.6（C，13-C），161.1（C，14-C），112.4（C，15-C），164.8（CH，16-C），79.6（CH，17-C），22.5（CH₃，18-C），16.2（CH₃，19-C），120.1（C，20-C），141.4（CH，21-C），110.2（CH，22-C），143.2（CH，23-C），22.4（CH₃，28-C），23.3（CH₃，29-C），129.6（CH，30-C），53.1（CH₃，MeO-7），166.6（C，1’-C），128.0（C，2’-C），139.1（CH，3’-C），14.7（CH₃，4’-C），12.0（CH₃，5’-C）；碳原子标记参见图1。氢谱中可以看出有5个甲基单峰（δH0.87、1.04、1.11、1.47和1.91），一个甲基双峰（δH1.90，J=7.3Hz），一个甲氧基单峰（δH3.83），呋喃环的三个典型次甲基（δH6.49,7.44和7.51）和一个次甲基四重峰（δH6.97）。碳谱和DEPT谱显示32个碳信号，其中包括一个羰基碳（δC213.8），两个酯羰基碳（δC166.6和175.8），六个烯烃次甲基（δC110.2，112.4，129.6，139.1，141.4和143.2），四个烯烃季碳（δC120.1，128.0，136.4和161.1），四个连氧次甲基（δC72.2，79.4，79.6和164.8），两个甲氧基（δC53.1），两个脂肪族次甲基（δC44.3和55.4），三个脂肪族季碳（δC37.6，39.3和52.6），三个脂肪族亚甲基（δC22.6，33.5和49.0），六个甲基（δC12.0，14.7，16.2，22.4，22.5和23.3）。通过氢谱和碳谱可以确定的数据，参考文献和工具书可以确定化合物（Ⅰ）的碳骨架为柠檬苦素类化合物。HMBC中，H-6（δH4.38，s）与C-4、C-5、C-7、C-10相关，可确定甲基化的2-羟基乙酸乙酯基团位于C-5上。此外，H-17（δH5.10）与C-20（δC120.1）、C-21（δC141.4）、C-22（δC110.2）相关，表明C-17连有一个呋喃环。HMBC谱中，H-3与C-1’以及H-5’与C-1’、C-2’、C-3’相关，可确定C-3连接的基团结构。综合多种二维谱信息，可鉴定化合物（Ⅰ）为墨西哥交酯型的柠檬苦素类化合物。化合物（Ⅰ）的相对构型可通过ROESY谱确定（图5）。根据柠檬苦素类化合物的文献报道，H-17主要为β构型。ROESY谱中H-17/H-12β/H-11β/H-5的连续相关性，表明这些功能团都在分子的同一面上。另一方面，呋喃环确定为α构型。在ROESY光谱中，Me-18（δH1.04）和H-22（δH6.49）之间的相关峰表明这些质子为α构型。反过来，Me-18/H-9/H-19/H-6和H-9/H-12α之间的相关峰表明这些质子为α取向。此外，H-3与H-28以及H-3与H-29的ROESY相关性可以确定C-3连接的基团为β取向。因此，可确定该化合物结构如图1所示。

实施例2：化合物（Ⅰ）药理作用试验

一、试验方法

1、细胞培养

1.1细胞复苏

首先预备37℃恒温水浴箱，将液氮中保存的SACC-M细胞冻存管取出，直接投入水浴箱，轻轻摇动，待其迅速融化后，从水箱中取出冻存管，此步骤速度宜快，应在30-60秒内完成。之后以75%酒精擦拭消毒管口后开启冻存管，将管内细胞悬液吸出，滴入50mL离心管并在离心管中滴加10倍以上含10%血清的RPMI-1640培养液，轻轻吹打，使其成为细胞悬液，低速离心（1000转/分）5分钟后，吸去上清液，再用10%的RPMI-1640培养液洗涤一次，并再次离心，吸去上清液后，用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养液将细胞稀释成细胞悬液，接种于50mL培养瓶中，轻轻拧松瓶盖，然后放入CO₂培养箱中培养，第二日更换一次培养液，之后在培养液颜色由淡红变黄后更换培养液，观察细胞爬满瓶底壁的80%时，进行细胞传代。

1.2细胞传代

首先使用弯头吸管吸取原培养液后，反复吹打瓶底，之后去除瓶内旧培养液，向瓶内加入混合消化液（0.25％胰蛋白酶和0.04％EDTA1:1）少量（以能够完全覆盖培养瓶底为宜），缓慢摇动瓶身使消化液浸湿瓶底，然后吸去大部分消化液，仅留少量进行消化。将培养瓶置于CO₂培养箱内（或25℃室温下）进行消化，2-5分钟后取出培养瓶，放倒置显微镜下观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大，部分细胞由多角形变为圆形，且已有细胞开始悬浮时，应立即停止消化。吸出残存的消化液，加入适量不含血清的培养液，轻轻转动培养瓶，冲掉残留的消化液后，将其吸出，再加入新培养液，用弯头吸管吸取瓶内培养液后反复吹打瓶底，使贴。于瓶底的细胞脱离，形成细胞悬液，注意吹打时动作要轻柔，以防用力过猛，使细胞受损。吸取细胞悬液置于离心管内，离心后，去上清，收集细胞，加入适量含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液，将细胞吹打成混悬液，计数，以1.0×10⁵/mL浓度接种在新的培养瓶内。

2、MTT比色试验

（1）接种细胞：取对数生长期细胞，用含有10%胎牛血清的1640培养液制成浓度为2×10⁵/mL的单细胞悬液，接种于96孔板内，每孔100μL。（2）培养细胞：将上述96孔板置于CO₂培养箱，在37℃、5%CO₂以及饱和湿度条件下，继续培养24h。（3）加药：用药组每孔加入稀释后的化合物（Ⅰ）药液100μL，使其终浓度为2.5、5.0、7.5、10、12.5mmol/L；对照组每孔加100μL不含血清的1640培养液。用药组和对照组每组均设6个复孔，并设调零孔，加药后继续培养。（4）呈色：继续培养24h、48h和72h后，用药组和对照组每孔加入浓度为5g/L的MTT溶液20μL，继续培养4h后，吸去全部上清液，在各孔中加入200μL的二甲基亚砜（包括调零孔），置振荡器上振荡摇匀1分钟，使结晶充分溶解。（5）比色：将96孔板置于酶标仪上，在波长为490nm处，测定各孔吸光度值(A)。重复实验3次，取其平均值。（6）计算并绘图：细胞增殖抑制率=（1-用药组平均Ａ值/对照组平均Ａ值）×100%。根据以上公式计算各浓度的生长抑制率，然后以时间为横轴，抑制率为纵轴，绘制5个浓度的抑制率曲线。

3、流式细胞术检测

3.1细胞的处理

细胞接种、培养后，取对数生长期细胞，以2×10⁵/mL浓度接种于6孔板中，而后加药，设时间对比组、浓度对比组和对照组（正常凋亡组）：（1）时间对比组：将细胞接种于6孔板中，培养24小时，细胞贴壁后，用吸管沿各孔壁将原培养液彻底吸出，然后于各孔加入等量的终浓度为12.5mmol/L含化合物（Ⅰ）药液的培养液（用药组）。加入不含化合物（Ⅰ）的培养液作为对照组，分别继续培养24h、48h、72h。（2）浓度对比组：细胞接种并贴壁成功后，用吸管彻底吸净原培养液，各孔中分别加入终浓度为2.5、5.0、7.5、10、12.5mmol/L的含化合物（Ⅰ）培养液（用药组）。对照组加入不含化合物（Ⅰ）的培养液，继续培养72h。（3）正常凋亡组：接种细胞并贴壁成功后，去除各孔中原培养液，加入不含化合物（Ⅰ）的培养液，继续培养24h、48h、72h

3.2样品的制备

（1）收集细胞：分别吸取6孔板各孔上清液，加入离心管中，取PBS液2mL漂洗6孔板各底壁后，倒入同一离心管内，然后将2mL混合消化液滴入各孔中消化细胞，缓慢摇动培养板使消化液完全浸湿其底壁，消化2min后将消化液吸入各离心管，再加入2mL培养液吹打各孔底壁，细胞彻底脱壁后，吸入离心管中。（2）离心细胞：将离心管置于低速离心机中，于1500rpm离心5min后，弃去上清液；加入12mLPBS液重悬细胞，再于1500rpm离心5min，弃上清液；再滴入3mL的PBS液于离心管中重悬细胞后，将细胞悬液吸至流式细胞仪专用上机管中，1500rpm离心5min后，弃上清液。

3.3Annexin-V-FITC和PI双标记活细胞法检测细胞凋亡

（1）用微量加样器向流式管中加入10μL的Annexin-V-FITC和5μL的PI（两种试剂勿相混，勿和管底细胞相接触）。（2）加入200μL结合缓冲液，将Annexin-V-FITC和PI冲至管底与细胞相混，并轻轻吹打，形成单细胞悬液。（3）避光反应15min或放入4℃冰箱30min。（4）上机前加入300μLPBS结合缓冲液，并轻轻吹打，而后立刻上机（流式细胞仪）检测。光源为488nm氩离子激光器，每份标本收集细胞10000个，FITC受激发后发绿色荧光，PI发红色荧光。（5）经流式细胞仪分析，获得由四个象限组成的散点图，图上每一个点代表一个细胞，都具有两个参数值。左上Q1象限代表细胞收集过程中出现的损伤细胞（An-PI+），右上Q2象限代表晚期凋亡细胞和坏死细胞（An+PI+），左下Q3象限代表正常细胞（An-PI-），右下Q4象限代表早期凋亡细胞（An+PI-）。

4、统计学分析

使用统计学软件SPSS10.0进行统计分析。（1）使用析因设计的方差分析，对相同药物浓度不同处理时间、相同处理时间不同药物浓度各组之间化合物（Ⅰ）对SACC-M细胞的生长抑制率进行两两比较。（2）使用简单相关分析，分析生长抑制率与作用时间之间、抑制率与药物浓度之间的相关性，得出相关系数r，并对r值进行t检验，从而得出药效随时间和浓度的变化关系。（3）使用二项分布的u检验对流式细胞术检测的各用药组及对照组的凋亡率进行统计分析。

二、结果及结论

1、MTT比色试验

（1）实验表明化合物（Ⅰ）对SACC-M细胞有明显的增殖抑制作用，药物作用24、48、72h后最高抑制率可达80.4%（表1及图6）。（2）相同处理时间、不同浓度组之间的抑制率比较有明显差异（P<0.01）；相同浓度组、不同处理时间之间的抑制率有明显差异（P<0.01）；药物浓度和处理时间无交互作用（P=0.901）。（3）组间两两比较：相同时间、不同浓度组之间，抑制率有明显差异（P<0.01）；处理24h、48h、72h后，同一浓度、不同时间组之间有明显差异（P<0.01）。（3）药效（抑制率）与作用时间和药物浓度均具有正相关性，抑制率与作用时间具有正相关性（r=0.291，P=0.042）；抑制率与浓度具有正相关性（r=0.926，P<0.001）。

2、流式细胞术检测

2.1对照组细胞的凋亡情况

对照组（正常凋亡组）细胞均属于自然凋亡，24h时其凋亡率为4.9%，48h时的凋亡率为7.1%，72h的凋亡率为6.1%（表2），凋亡率随培养时间差别不大，无统计学意义。

2.2用药组细胞随时间变化凋亡情况

经12.5mmol/L化合物（Ⅰ）处理24h后，其凋亡率为25.5%；处理48h后，凋亡率上升至40.9%，多为早期凋亡；处理72h后，凋亡率为67.6%，多为晚期凋亡，细胞凋亡率随着处理时间延长而明显上升（表2），各时间组之间凋亡率有统计学意义（P<0.01）。

2.3用药组细胞随浓度变化凋亡情况

处理72h后，2.5、5.0、7.5、10.0、12.5mmol/L化合物（Ⅰ）组的细胞凋亡率分别为16%、24.2%、26.1%、66.3%、67.6%，且在药物浓度达到12.5mmol/L时，晚期凋亡率明显增大（表3），各药物浓度组间凋亡率有统计学意义（P<0.01）。

结论，本研究表明化合物（Ⅰ）具有诱导SACC-M凋亡的作用，且凋亡率随药物作用时间的延长和用药浓度的增加呈上升趋势。应用化合物（Ⅰ）治疗腺样囊性癌有可能成为一种很有前景的治疗方法。

表1不同浓度不同作用时间抑制率(均值±SD)

表2不同浓度不同时间诱导凋亡率(FCM法)

实施例3

片剂的制备：按实施例1方法先制得化合物（Ⅰ），以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重量比为1:7的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例4

口服液的制备：按实施例1方法先制得化合物（Ⅰ），以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规口服液制法制成口服液。

实施例5

胶囊剂或颗粒剂的制备：按实施例1方法先制得化合物（Ⅰ），以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。

实施例6

注射液的制备：按实施例1方法先制得化合物（Ⅰ），以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例7

无菌粉针的制备：按实施例1方法先制得化合物（Ⅰ），以及利用有机酸如酒石酸、或柠檬酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或磷酸制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿中，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

Claims (6)

1.具有下述结构式的柠檬苦素化合物（Ⅰ），

。

2.权利要求1所述的化合物（Ⅰ）的制备方法，其特征在于包含以下操作步骤：（a）南五味子干燥成熟果实粉碎，用75%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b）步骤（a）中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用10%乙醇和75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c）步骤（b）中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为100:1、50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d）步骤（c）中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、15:1和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e）步骤（d）中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为55%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（Ⅰ）。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。

4.药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物（Ⅰ）和药学上可接受的载体。

5.权利要求1所述的化合物（Ⅰ）在制备治疗腺样囊性癌的药物中的应用。

6.权利要求4所述的药物组合物在制备治疗腺样囊性癌的药物中的应用。