CN104958789A

CN104958789A - 防止手术后粘连的复合膜的制备方法

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Publication number: CN104958789A
Application number: CN201510446205.7A
Authority: CN
Inventors: 蒋革; 罗锋; 王金星; 赵琦; 吴艳华
Original assignee: Dalian University
Current assignee: Dalian University
Priority date: 2015-07-27
Filing date: 2015-07-27
Publication date: 2015-10-07
Anticipated expiration: 2035-07-27
Also published as: CN104958789B

Abstract

本发明涉及一种防止手术后粘连的复合膜的制备方法，属于膜技术领域，所述制备方法包括如下步骤：①将多糖与生理盐水混合得到1.5～4wt％多糖溶液后与8～12％(V/V)乙酸混合，静置，得到溶液Ⅰ；②将透明质酸与生理盐水混合得到0.3～0.5wt％透明质酸溶液，静置，得到溶液Ⅱ；③将羟乙基淀粉与生理盐水混合得到0.1～4wt％羟乙基淀粉溶液Ⅲ；④将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ与溶液Ⅲ按体积比1∶1∶1混合，加入甘油得到2.5～5wt％溶液Ⅳ，搅拌、超声、静置、铺展、干燥得到复合膜，本发明有益效果为制备的复合膜能长效稳定的覆盖在创口表面，通过物理阻隔达到防止与其他器官或组织粘连目的。

Description

防止手术后粘连的复合膜的制备方法

技术领域

本发明涉及一种防止手术后粘连的复合膜的制备方法，属于膜技术领域。

背景技术

组织粘连(adhesion)是由炎症、摩擦、手术等引起的伤口，在治疗过程中产生过量纤维组织或者出血形成血块，使周边脏器与组织产生粘连的现象。这种现象在人体腹腔、心血管、脊柱、骨关节、妇科盆腔等外科手术后非常容易发生。其中腹腔和盆腔的部位粘连的发生率高达90％以上，20％左右的女性不孕患者是由盆腔粘连导致，30％的粘连有明显症状，如慢性盆腔痛，肠粘连引起的恶心、胃胀气和便秘等。组织粘连不但给患者带来极大的痛苦，严重影响其正常工作和生活，而且长期的治疗费用给患者及其家庭带来巨大的经济负担。为了解决术后粘连问题，国内外的相关科技工作者一直进行不懈的努力，采用各种措施来进行防治，例如手术法；除去纤维蛋白渗出物；分开肠管表面，注入空气等。这些方法虽然能够起到预防术后粘连的作用，但效果不肯定，为了达到预防术后粘连目的，需要长期使用大剂量的药物，这使产生副作用或病发证的危险性往往超过了它们预防肠粘连所能取得有益作用。

随着研究的深入，防粘连材料陆续问世，并逐步应用于临床，其中有代表性的就是透明质酸。透明质酸(Haluronic acid、HA)又名玻璃酸，透明质酸是一种酸性粘多糖，由N-已酰氨基葡萄糖及D-葡萄糖醛酸的重复结构组成的线形多糖结构，其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。由于透明质酸存在于大部分动物体的软结缔组织中，因此具有生物相容性及无毒的特性，在日本、美国等国家已被广泛使用。医药上已将透明质酸应用于滴眼液、手术材料和针剂。在第4，141，973号美国专利上公开发表了由于透明质酸不但能抑制出血，而且能抑制粒细胞迁移和吞噬作用，具有很好的抗炎作用，从而具有防组织粘连作用。但是由于其在体内容易分解被体内吸收，限制了防组织粘连效果。为了改善透明质酸在体内容易分解，美国专利(专利号为6，387，413B1)采取对透明质酸嫁接高分子化合物(Carboxymethyl cellulose，CMC)的方法延缓了其在体内分解速度，该方法制备的防粘连膜中的cellulose虽然是天然高分子材料，但因其不是生物体内物质，注入体内时，与体内一些物质起反应，从而引发不良反应，加上体内没有对其分解的酶，因此对其进行水解、氧化处理后，才能在体内使用。美国专利(专利号为5，017，229)公开发表了利用透明质酸通过EDC[1-ethyl-3(3-dimethylaminopropyl)carbodilimide hydrochloride]嫁接CMC(Carboxymethyl cellulose)高分子材料制备出疏水性防粘膜技术，其嫁接方式是通过化合物之间正负电荷结合而成的，该防粘连膜不容易分解，具有防粘连作用，但是EDC化学物质对人体具有毒性，清除它需要很长时间特殊处理过程。

综上所述，目前开发的防粘连材料虽然具有防粘连性能，但由于通过化学方法制备的防粘连性能材料很难清除促进合成化学添加剂，因此其有毒性和安全性问题成为制约其临床广泛应用的瓶颈。市场目前所使用的防粘连剂多是水凝胶，临床用量大，成本高；同时因为环境等外界因素会照成有效成份不能均匀、特定的作用在创口部位。

发明内容

本发明通过制备新型复合膜的物理阻隔作用，达到防止手术后引起的组织粘连现象，同时新型复合膜还具有抗菌消炎、促进伤口愈合等多重生物功效。

本发明提供了一种防止手术后粘连的复合膜的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

①将多糖与生理盐水混合得到1.5～4wt％多糖生理盐水溶液，将1.5～4wt％多糖生理盐水溶液与8～12％(V/V)乙酸混合，0～5℃静置12～48h，得到溶液Ⅰ；

所述1.5～4wt％多糖生理盐水溶液与8～12％(V/V)乙酸的体积比为1：0.6～1.2；

所述多糖为甲壳素、壳聚糖或几丁质多糖；

②将透明质酸与生理盐水混合得到0.3～0.5wt％透明质酸生理盐水溶液，0～5℃静置12～48h，得到溶液Ⅱ；

③将羟乙基淀粉与生理盐水混合得到0.1～4wt％羟乙基淀粉生理盐水溶液Ⅲ；

④将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ与溶液Ⅲ按体积比1：1：1混合，加入甘油得到2.5～5wt％溶液Ⅳ，搅拌、超声、0～5℃静置12～48h、铺展、干燥得到复合膜。

本发明所述甲壳素的分子量优选为0.5×10⁵～2×10⁵道尔顿。

本发明所述壳聚糖的分子量优选为0.2×10⁵～1×10⁵道尔顿。

本发明所述几丁质多糖的分子量优选为0.8×10⁵～1.2×10⁵道尔顿。

本发明所述透明质酸的分子量优选为0.8×10⁶～3×10⁶道尔顿，透明质酸的粘度优选为30～35dl/g。

本发明所述羟乙基淀粉的分子量优选为7×10⁴～6.7×10⁵道尔顿，羟乙基淀粉的水取代程度优选为0.4～0.75。

本发明有益效果为：

①本发明所述制备的复合膜能长效稳定的覆盖在创口表面，通过物理阻隔达到防止与其他器官或组织粘连目的；

②本发明所述制备的复合膜具有抗菌消炎和促进伤口愈合的作用；

③本发明所述制备的复合膜成份安全，能被机体吸收。

附图说明

本发明附图6幅，

图1为对照组1组的动物腹腔粘连图；

图2为对照组1组的粘连部位面积测量图；

图3为对照组2组的动物腹腔粘连图；

图4为对照组2组的粘连部位面积测量图；

图5为实施例1组的动物腹腔粘连图；

图6为实施例1组的粘连部位面积测量图。

具体实施方式

下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

下述甲壳素购于陕西帕尼尔生物科技有限公司，甲壳素的分子量为0.5×10⁵～2×10⁵道尔顿；

下述壳聚糖购于陕西帕尼尔生物科技有限公司，壳聚糖的分子量为的分子量为0.2×10⁵～1×10⁵道尔顿；

下述几丁质多糖购于陕西帕尼尔生物科技有限公司，几丁质多糖的分子量为0.8×10⁵～1.2×10⁵道尔顿；

下述透明质酸购于陕西帕尼尔生物科技有限公司，透明质酸的分子量为0.8×10⁶～3×10⁶道尔顿，透明质酸的粘度为30～35dl/g；

下述羟乙基淀粉购于陕西帕尼尔生物科技有限公司，羟乙基淀粉的分子量为7×10⁴～6.7×10⁵道尔顿，羟乙基淀粉的水取代程度为0.75～0.4；

下述术尔泰购于北京德隆威尔科技有限公司。

实施例1

一种防止手术后粘连的甲壳素/透明质酸复合膜的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

①将甲壳素与生理盐水混合得到4wt％甲壳素生理盐水溶液，将4wt％甲壳素生理盐水溶液与10％(V/V)乙酸混合，4℃静置48h，得到溶液Ⅰ；

所述4wt％甲壳素生理盐水溶液与10％(V/V)乙酸的体积比为1：0.85；

②将透明质酸与生理盐水混合得到0.5wt％透明质酸生理盐水溶液，4℃静置48h，得到溶液Ⅱ；

③将羟乙基淀粉与生理盐水混合得到2wt％羟乙基淀粉生理盐水溶液Ⅲ；

将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ与溶液Ⅲ按体积比1：1：1混合，加入甘油得到5wt％溶液Ⅳ，搅拌10min、超声2min、4℃静置24h得到成膜溶液，将20mL成膜溶液加入到10cm×10cm的成膜容器中，均匀铺展、干燥得到光滑、光亮、透明度高、无油腻感、质软、韧性强的厚度为0.03mm甲壳素/透明质酸复合膜。

实施例2

一种防止手术后粘连的壳聚糖/透明质酸复合膜的制备方法，与实施例1的区别为采用壳聚糖代替甲壳素。

实施例3

防止手术后粘连的几丁质多糖/透明质酸复合膜的制备方法，与实施例1的区别为采用几丁质多糖代替甲壳素。

应用例1

大鼠肠粘连实验：

采用腹腔注射戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉大鼠，当动物安静，呼吸平稳平衡、血压正常，壁肌肉松弛、角膜反射迟钝表现时即可进行各项试验操作。动物麻醉后仰卧位固定，剪毛消毒，无菌操作下取下腹正中切口，长3～4cm，打开腹腔后找出盲肠部分，盲肠部用干纱布反复轻轻擦拭至肠浆膜层浆膜受损，受损面积为1.2cm×1.2cm，表现为表面有针尖大血点，纱布染成淡红颜色。在损伤部位对面腹腔壁用药杓损伤一样大的面积。把盲肠损伤部位固定在能与腹腔壁损伤部位对称的腹腔壁位置上，促进粘连发生，构建腹腔粘连动物模型。对照组1在盲肠损伤部位与腹腔壁损伤部位之间擦拭生理盐水；对照组2在盲肠损伤部位与腹腔壁损伤部位之间擦拭术尔泰2mL；实施例1组在盲肠损伤部位与腹腔壁损伤部位之间覆盖实施例1制备的甲壳素/透明质酸复合膜。然后逐层关腹，缝合。手术后动物禁食12h，分笼饲养，饲料为全营养大鼠粒饲料。一周后开腹检验、取材、判断粘连等级，实验结果见表1。

根据中检评分级标准确定大鼠粘连情况：0级：完全无粘连；Ⅰ级：1～2处局部轻度粘连，用手指可分开；Ⅱ级：有两处以上Ⅰ级粘连；Ⅲ级：有广泛的粘连，部分分离困难；Ⅳ级：盲肠与腔壁紧密粘连，分离困难。

表1大鼠肠粘连实验结果

	粘连度	粘连面积(cm²)	粘连面积减少率(％)
				对照组1组	Ⅳ	1.36±0.25	0
对照组2组	Ⅲ	0.78±0.12**	42.7
				实施例1组	Ⅰ	0.29±0.17*	78.7

实施例1组与对照组1组比，*p<0.05，对照组2组与实施例1组比，**p<0.05

由表1得，与对照组1组比，实施例1组的组织粘连度明显降低。另外，与对照组1组比，对照组2组粘连面积减少42.7％，而实施例1组粘连面积减少78.7％。

Claims

1.防止手术后粘连的复合膜的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括如下步骤：

所述多糖为甲壳素、壳聚糖或几丁质多糖；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述甲壳素的分子量为0.5×10⁵～2×10⁵道尔顿。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述壳聚糖的分子量为0.2×10⁵～1×10⁵道尔顿。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述几丁质多糖的分子量为0.8×10⁵～1.2×10⁵道尔顿。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述透明质酸的分子量为0.8×10⁶～3×10⁶道尔顿，透明质酸的粘度为30～35dl/g。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述羟乙基淀粉的分子量为7×10⁴～6.7×10⁵道尔顿，羟乙基淀粉的水取代程度为0.4～0.75。