CN104922392A - 一种治疗非小细胞肺癌的中药组合物及其检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗非小细胞肺癌的中药组合物及其检测方法。所述的中药组合物由以下重量份的原料制得：黄芪、牛蒡子、灵芝、五味子、和合草、苦杏仁、升麻、山麦冬、葛根、党参、板蓝根、百倍、当归和甘草。该中药组合物的制备方法是先加水回流煎煮，过滤，滤液浓缩成浸膏，再加入乙醇回流提取，过滤滤液浓缩，添加适量的辅料制成制剂。本发明中药组合物经薄层检测是有效成分含量高，纯度高的中药组合物，而且本发明的中药组合物具有增加免疫力，解毒抗癌，活血化瘀，抗癌的效果，对非小细胞肺癌具有显著的治疗效果。

Description

一种治疗非小细胞肺癌的中药组合物及其检测方法

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种治疗非小细胞肺癌的中药组合物及其检测方法。

背景技术

癌症是常见多发病，由于癌症发病的部位不同， 可有各种不同的癌症，如非小细胞肺癌、胃癌、肺癌、骨癌、皮肤癌、肠癌、肝癌等等。癌症是当前严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一，给社会和家庭带来了沉重的负担。

    肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,已成为全国人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。非小细胞型肺癌占所有肺癌的80%，包括有鳞状细胞癌、腺癌、大细胞癌等几种类型，非小细胞癌的癌细胞生长缓慢，恶性程度相对低些，扩散转移发生的较晚。临床上非小细胞肺癌的治疗主要包括外科手术治疗、放射治疗、化学治疗以及以分子靶向治疗为代表的新型治疗方法，但是非小细胞肺癌对化疗、放疗的敏感性差，寻找有效的治疗方法是当前非小细胞肺癌治疗亟需解决的问题。

鉴于目前对非小细胞肺癌的治疗效果不明显，人们开始从传统中医药中寻求可以有效非小细胞肺癌的良方，以解决非小细胞肺癌对人们的危害。中医学强调辨瘤与辨证，扶正与祛邪、局部与整体和调节平衡的原则，通过多方面多靶点的调节，保护和调动机体自身的抗癌能力，恢复和重建机体的阴阳平衡，从而达到治疗肿瘤的目的。因此，寻找一种有效治疗非小细胞肺癌的中药组合物是当前降低非小细胞肺癌给患者带来重大的痛苦的重要途径。

发明内容

为了克服现有技术化疗、放疗治疗非小细胞肺癌副作用大，敏感性差,易于复发的缺陷，本发明提供了一种治疗非小细胞肺癌的中药组合物及其检测方法，公开一种治疗非小细胞肺癌的中药组合物，该中药组合物疗效好，副作用小，它由以下原料制得：黄芪8-28份、牛蒡子10-22份、灵芝10-20份、五味子10-18份、和合草6-10份、苦杏仁6-10份、升麻6-10份、山麦冬9-15份、葛根9-18份、党参6-10份、板蓝根9-16份、百倍9-15份、当归8-16份和甘草6-14份。

优选的，本发明治疗非小细胞肺癌的中药组合物最佳配方是由以下原料制得：黄芪20份、牛蒡子16份、灵芝15份、五味子10份、和合草8份、苦杏仁8份、升麻8份、山麦冬10份、葛根13份、党参7份、板蓝根11份、百倍12份、当归12份和甘草10份。

本发明中药组合物在中药组分选择上以增加免疫力、解毒抗癌、软坚散结、活血化瘀、益气扶正为主要标准，其中，黄芪有增强机体免疫功能、保肝、利尿、活血化瘀、降压、抗肿瘤的作用；牛蒡子具有消肿散结、解毒抗癌的功效；茯苓具有抗氧化，防衰老，增加免疫力，抗癌的作用；五味子具有补肾益肝，宁心安神，益气生津止渴之效；山麦冬有治疗肺燥干咳、虚劳咳嗽、津伤口渴、心烦失眠、肠燥便秘的作用；板蓝根具有清火解毒，凉血止血的功效，当归可以调节机体免疫功能、增强抗癌的作用。本发明中药组合物组合后具有增加免疫力，解毒抗癌，活血化瘀，抗癌的效果，对非小细胞肺癌具有显著的治疗效果。

本发明还提供了一种上述所述中药组合物的制备方法，其主要包含下述步骤：

 加药材总重量的4-6倍的水，浸泡40-60分钟，煎煮2-3次，每次2-4小时，滤过，合并滤液，在60℃将滤液减压浓缩至相对密度1.20-1.25的浸膏，加入乙醇至含醇量为85%（v/v），静置24小时，取上清液，回收乙醇至浓缩，添加适量的辅料，制成制剂。

优选地，本发明中药组合物按照常规制备工艺制备成散剂、丸剂、片剂或胶囊剂，便于携带和服用。

另外，本发明还提供了一种治疗非小细胞肺癌药物的中药组合物的检测方法，所述的检测方法包括以下步骤中的一种或几种的组合：

（1）黄芪的薄层检测：称取中药组合物，加入甲醇，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱上，用40％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，合并正丁醇液，用水洗涤2次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水=13:7:2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（2）五味子的薄层检测：取中药组合物，加入三氯甲烷，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1.5ml 使溶解，作为供试品溶液；另取五味子对照药材，分别同“制备供试品溶液”相同方法，制成对照药材溶液；再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典 2010 年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液1μl和对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15:5:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置 254nm 紫外光下检视，供试品色谱中， 在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；  

（3）葛根的薄层检测：称取中药组合物，加入甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，置已处理好的聚酰胺柱上，先用水洗涤，弃去洗液， 再用30%乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液； 另取葛根素对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水=7:2.5:0.25为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

本发明的中药组方中黄芪、五味子、葛根经薄层检测其有效成分均能高效的提取出来，而且杂质较小，证明本发明的中药组合物是有效成分含量高，纯度高的中药组合物，对治疗非小细胞肺癌具有显著的治疗效果。

总之，本发明药物组合物在非小细胞肺癌症方面，与现有技术相比具有如下优势：

1）本发明组合物在非小细胞肺癌治疗中具有显著的协同作用，增加免疫力，解毒抗癌，活血化瘀，抗癌的效果，有助于非小细胞肺癌患者的痊愈过程；

2）与当前治疗非小细胞肺癌的药物相比，本发明中药组合物为天然纯中药制剂，不良反应和副作用小，特别是其对于非小细胞肺癌患者的身体不产生任何破坏作用，而且具有调节身体的作用，增强患者的免疫力和抵抗力；

3）本发明中药组合物作用全面，药物治疗效果更佳，显著提高了非小细胞肺癌患者的用药依从性，并提高了患者的生活质量。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步描述本发明，本发明不仅仅限于以下实施例。在本发明的范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明进行的变更、组合或替换，对于本领域的技术人员来说是显而易见的，且包含在本发明的范围之内。

 实施例1、本发明的中药组合物的散剂

处方：

黄芪80g、牛蒡子100g、灵芝100g、五味子100g、和合草60g、苦杏仁60g、升麻60g、山麦冬90g、葛根90g、党参60g、板蓝根90g、百倍90g、当归80g、甘草60g。

制备方法：

 加药材总重量的5倍的水，浸泡60分钟，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，在60℃将滤液减压浓缩至相对密度1.20的浸膏，加入乙醇至含醇量为85%（v/v），静置24小时，取上清液，回收乙醇至浓缩，添加适量的辅料，制成散剂。

 实施例2、本发明的中药组合物的胶囊剂

处方：

黄芪200g、牛蒡子160g、灵芝150g、五味子100g、和合草80g、苦杏仁80g、升麻80g、山麦冬100g、葛根130g、党参70g、板蓝根110g、百倍120g、当归120g、甘草100g。

制备方法如实施例1，制成胶囊剂。

 实施例3、本发明的中药组合物的片剂

处方：

黄芪100g、牛蒡子140g、灵芝140g、五味子120g、和合草80g、苦杏仁80g、升麻70g、山麦冬100g、葛根130g、党参80g、板蓝根120g、百倍140g、当归100g份、甘草80g。

制备方法如实施例1，制成片剂。

实施例4、本发明的中药组合物的丸剂

处方：

黄芪250g、牛蒡子200g、灵芝160g、五味子160g、和合草80g、苦杏仁80g、升麻70g、山麦冬120g、葛根160g、党参90g、板蓝根150g、百倍140g、当归140g、甘草130g。

制备方法如实施例1，制成丸剂。

 实施例5、本发明的中药组合物中黄芪的薄层检测

黄芪的薄层检测：取中药组合物3g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水=13:7:2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

 实施例6、本发明的中药组合物中延胡索的薄层检测

五味子的薄层检测：取中药组合物5g，加三氯甲烷 40ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1.5ml 使溶解，作为供试品溶液；另取五味子对照药材 2g，分别同“制备供试品溶液”相同方法，制成对照药材溶液；再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典 2010 年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液1μl和对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15:5:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置 254nm 紫外光下检视，供试品色谱中， 在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

 实施例7、本发明的中药组合物中葛根的薄层检测

葛根的薄层检测：取中药组合物4g，加甲醇 50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml使溶解，置已处理好的聚酰胺柱上，先用水100 ml洗涤，弃去洗液， 再用30%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液； 另取葛根素对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水=7:2.5:0.25为展开剂，展开，取出，晾干，置紫 365nm 外光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

 试验例1、本发明中药组合物对移植性小鼠Lewis肺癌抑瘤率影响

1、试验对象：

选取60只SPF级KM小鼠，体重22～26g，雌雄各半。

2、试验药物：本发明实施例2制备的胶囊剂，金复康口服液，购于江西一村制药有限责任公司。

3、瘤模型的建立

   小鼠肺癌Lewis瘤株细胞培养于1640培养液中，37℃，5％CO2下常规培养，平均每两天传代一次，至对数生长期时用生理盐水制备成密度为3.0×107个/ml单细胞悬液，在无菌条件下注射于10只小鼠腹腔内，接种后7天见小鼠腹腔明显肿大，此时，脱颈处死，放入盛有75％乙醇的烧杯中浸泡2～3分钟，将消毒后的小鼠放入超净工作台中，暴露腹部，用无菌注射器抽取腹水放入无菌试剂瓶内备用。将上述腹水用台盼蓝计数，用生理盐水稀释，调整细胞数至1.0×107个/ml，形成细胞悬浮液，接种于余下小鼠右腋下，每只0.4ml。

4、试验方法：

    接种肿瘤后随机分为5组，分别为模型组、金复康组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，接种第四天开始给药，每天上午灌胃给药1次，检测分组前及解剖前称量动物空腹体重，给药10天后结束试验，腹腔注射2%戊巴比妥钠（0.2ml·kg-1）麻醉，腹主静脉取血完毕后，剪断腹主动脉放血处死，然后进行常规腋下取瘤，称取肿瘤的重量；抑瘤率=（模型组瘤重-试验组瘤重）/模型组瘤重×100%；各组给药方式如下所述：

模型组：灌胃给予相同体积的生理盐水；

金复康组：灌胃给予金复康口服液5ml/kg；

低剂量组：灌胃给予实施例2制备的胶囊剂 20mg/kg/d；

中剂量组：灌胃给予实施例2制备的胶囊剂40mg/kg/d；

高剂量组：灌胃给予实施例2制备的胶囊剂60mg/kg/d。

5、试验结果

    试验结果如表1所示。

        表1  本发明中药组合物对小鼠肺癌瘤重和抑瘤率的影响（x±s）

   

与模型组组比较，*P<0.05，**P<0.01。

    由表1可知，本发明中药组合物对Lewis肺癌小鼠具有显著的药物疗效，在一定的范围内，剂量越大对Lewis肺癌小鼠效果越明显。

试验例2、本发明中药组合物对非小细胞肺癌的临床试验

 1、受试者资料

经过病理组织学和细胞学检查确诊为非小细胞肺癌患者，年龄在 35-70 之间；重要脏器组织功能基本正常。符合入选标准的患者为50例。男30例，女20例，平均年龄58.34岁。

 2、试验方法

本发明实施例2制备的胶囊剂，1.5g/次，分早晚两次服用，1周为一个疗程。

 3、疗效标准

 西医诊断标准参照中华人民共和国卫生部医政司编写的《中国常见恶性肿瘤诊治规范》中所指定标准；中医诊断标准参照卫生部《中药新药临床研究指导原则》制定；临床症候疗效标准将咳嗽、咯痰、痰血、胸闷、胸痛、气急、发热等常见症状按轻、中、重分为3级(参照卫生部《中药新药临床研究指导原则》)，分别记为2、4、6分，在治疗前后进行累积对比，按积分比法评价疗效；

显效：治疗后症状体征积分值下降≥ 2/3；

有效：治疗后症状体征积分值下降≥1/3，但﹤2/3 ；

无效：达不到有效标准者。

 4、试验结果

 4.1、临床观察肺癌患者50例，经本发明中药组合物治疗4个疗程后，症候改善显效7例，有效36例，有效率86%。

  4.2、典型病例

 病例1：王某，女，54岁，患者2011年初咳嗽数月，伴声音嘶哑，恶心，低热盗汗， 上腹疼痛不适，食欲不振，全身疲乏等症状，到医院进行CT和MRI检查确诊为肺癌；中医诊断为毒热蕴结型肺积；服用本发明中药组合物，1.5g/次，分早晚两次服用，4个疗程后，患者咳嗽、上腹疼痛、声音嘶哑症状明显减轻，食欲好转。

病例2：宋某，男，65岁，患者症状为胸闷、气急，咳痰，并有持续、固定而剧烈的胸痛，身体消瘦虚弱。行胸部CT检查发现右肺占位病变，伴右侧胸腔大量积液，服用本发明中药组合物，1.5g/次，分早晚两次服用，4个疗程后，患者胸闷、气喘、咳痰症状完全消失，无胸腔积液，食欲增加、睡眠质量提高，病情得到明显控制。

Claims (5)

1.一种治疗非小细胞肺癌的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料制得：

黄芪8-28份、牛蒡子10-22份、灵芝10-20份、五味子10-18份、和合草6-10份、苦杏仁6-10份、升麻6-10份、山麦冬9-15份、葛根9-18份、党参6-10份、板蓝根9-16份、百倍9-15份、当归8-16份和甘草6-14份。

2.如权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的原料制得：

黄芪20份、牛蒡子16份、灵芝15份、五味子10份、和合草8份、苦杏仁8份、升麻8份、山麦冬10份、葛根13份、党参7份、板蓝根11份、百倍12份、当归12份和甘草10份。

3.一种如权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

   加药材总重量的4-6倍的水，浸泡40-60分钟，煎煮2-3次，每次2-4小时，滤过，合并滤液，在60℃将滤液减压浓缩至相对密度1.20-1.25的浸膏，加入乙醇至含醇量为85%（v/v），静置24小时，取上清液，回收乙醇至浓缩，添加适量的辅料，制成制剂。

4.如权利要求3所述的治疗非小细胞肺癌的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述的中药组合物制成散剂、丸剂、片剂或胶囊剂。

5.如权利要求1所述的治疗非小细胞肺癌的中药组合物，其特征在于，该组合物检测方法包括以下步骤中的一种或几种的组合：

（1）黄芪的薄层检测：称取中药组合物，加入甲醇，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱上，用40％甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，合并正丁醇液，用水洗涤2次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水=13:7:2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（2）五味子的薄层检测：取中药组合物，加入三氯甲烷，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷溶解，作为供试品溶液；另取五味子对照药材，分别同“制备供试品溶液”相同方法，制成对照药材溶液；再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典 2010 年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照药材溶液1μl和对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸=15:5:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置 254nm 紫外光下检视，供试品色谱中， 在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；  

（3）葛根的薄层检测：称取中药组合物，加入甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水溶解，置已处理好的聚酰胺柱上，先用水洗涤，弃去洗液， 再用30%乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液； 另取葛根素对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；按照中国药典2010年版一部附录VIB中薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水=7:2.5:0.25为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。