CN104880443B - 一种基于酶催化反应测定过氧化氢的方法 - Google Patents

一种基于酶催化反应测定过氧化氢的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于酶催化反应测定过氧化氢的方法。在12支10mL比色管中都加入0.0～2.0mL pH=4.2克拉克‑鲁布斯缓冲液、0.1～1.5mL 0.05mol/L碘化钾和0.0～1.2mL 2.0×10‑6 mol/L牛血红蛋白，然后依次加入0.0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL 6.40×10‑5mol/L H2O2溶液，反应20分钟后，再在每支管中加入0.1～0.7mL 2.38×10‑4mol/L纳米银，用二次蒸馏水定容，继续反应10分钟后，用1cm石英比色皿，以λex=λem的方式扫描共振散射光谱；在430nm处分别测定加有H2O2溶液的散射强度I430nm和不加H2O2的试剂空白的散射强度I0，计算差值ΔI430nm=I0‑I430nm。另取池塘水或新鲜雨水过滤，同法测定其散射强度值，计算出池塘水或新鲜雨水中H2O2的含量。本发明测定方法选择性好、灵敏度高。

Description

一种基于酶催化反应测定过氧化氢的方法
技术领域
本发明涉及过氧化氢的测定方法，特别是基于酶催化反应测定过氧化氢的共振散射光谱法。
背景技术
过氧化氢是一种强氧化剂，可用做消毒剂、漂白剂、杀菌剂、脱氧剂等，广泛用于食品、纺织、造纸、医药、化工、环保、电子等领域。过氧化氢与人类健康密切相关，长期接触过氧化氢会出现呼吸道及皮肤刺激等症状，空气中过氧化氢含量不得超过1.4mg/m3。另一方面，过氧化氢是酸雨形成的主要原因之一。因此，过氧化氢的测定在环境、化学、医学、生物科学等领域都具有十分重要的意义。目前测定H2O2的方法主要有分光光度法、荧光法、色谱法、化学发光法、电化学法、共振散射光谱法和滴定法等。共振散射光谱法因具有简便快速、灵敏度高、检出限低等特点，近年来已用于痕量分析。而将酶催化反应与共振散射光谱法相结合可进一步提高方法的灵敏度。牛血红蛋白（Hb）具有过氧化物模拟酶的性质，它可催化H2O2氧化过量I-生成I3 -，I3 -会阻碍纳米银之间的聚集，使体系的共振散射强度降低，根据反应前后纳米银聚集状态改变而引起体系共振散射强度的变化可建立定量测定H2O2的方法，此方法目前尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于酶催化反应测定过氧化氢的共振散射光谱法。
具体步骤为：
在12支10mL比色管中都加入0.0～2.0mL pH=4.2克拉克-鲁布斯（Clark-Lubs， C-L） 缓冲溶液、0.1～1.5mL 0.05mol/L碘化钾(KI)溶液和0.0～1.2mL 2.0×10-6 mol/L牛血红蛋白(Hb)溶液，然后在12支比色管中分别加入0.0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL 6.40×10-5mol/L过氧化氢溶液，于室温下放置20分钟后，再在每支比色管中都加入0.1～0.7mL 2.38×10-4mol/L纳米银即AgNPs溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀，继续反应10分钟后，用1cm石英比色皿于荧光分光光度计上以λex=λem的方式扫描共振散射光谱。在430nm波长处分别测定加有过氧化氢溶液的共振散射强度I430nm和不加过氧化氢的试剂空白溶液的共振散射强度I0，计算共振散射强度的差值ΔI430nm =I0-I430nm，其共振散射强度的差值ΔI430nm与过氧化氢浓度C在3.20×10-8～2.24×10-5 mol/L范围内成线性关系，线性回归方程为△I=2.992×107c+37.82，相关系数0.9971，检出限2.20×10-8mol/L；另取池塘水或新鲜雨水过滤，取2 mL滤液同法测定共振散射强度值，计算出池塘水或新鲜雨水中过氧化氢的含量。
本发明测定方法选择性好、灵敏度高。
附图说明
图1为本发明实施例空白与9.6×10-6mol/L过氧化氢的共振散射光谱图；
图中标记：a：空白；b：pH4.2 C-L缓冲液- 0.005mol/LKI – 4.0×10-7mol/LHb –9.6×10-6 mol/L H2O2-AgNPs。
具体实施方式
实施例：
于12支10mL比色管中都加入1.0mL pH=4.2 克拉克-鲁布斯（Clark-Lubs， C-L）缓冲溶液、1.0mL 0.05mol/L 碘化钾(KI)溶液和0.5mL 2.0×10-6 mol/L牛血红蛋白(Hb)溶液，然后在12支比色管中分别加入0.0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL 6.40×10-5mol/L过氧化氢溶液，于室温下放置20分钟后，再在每支比色管中都加入0.5mL 2.38×10-4mol/L 纳米银即AgNPs溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀，继续反应10分钟后，用1cm石英比色皿于荧光分光光度计上以λex=λem的方式扫描共振散射光谱。在430nm波长处分别测定加有过氧化氢溶液的共振散射强度I430nm和不加过氧化氢的试剂空白溶液的共振散射强度I0，计算共振散射强度的差值ΔI430nm =I0-I430nm，其共振散射强度的差值ΔI430nm与过氧化氢浓度C在3.20×10-8～2.24×10-5 mol/L范围内成线性关系，线性回归方程为△I=2.992×107c+37.82，相关系数0.9971，检出限2.20×10-8 mol/L；另取池塘水和新鲜雨水过滤，取2 mL 滤液同法测定共振散射强度值，代入上述回归方程，分别计算出池塘水和新鲜雨水中过氧化氢的含量。同时做了加标回收实验，结果见表1。
表1：水样分析结果（n=5）
样品 测定值(10-6mol/L) 回收率( %) RSD(%)
池塘水 3.734 108.40 0.63
雨水 2.474 104.94 0.75

Claims (1)

1.一种测定过氧化氢的方法，其特征在于具体步骤为：
在12支10mL比色管中都加入0.0～2.0mL pH=4.2克拉克-鲁布斯缓冲溶液、0.1～1.5mL0.05mol/L碘化钾溶液和0.0～1.2mL 2.0×10-6 mol/L牛血红蛋白溶液，然后在12支比色管中分别加入0.0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL 6.40×10-5mol/L过氧化氢溶液，于室温下放置20分钟后，再在每支比色管中都加入0.1～0.7mL 2.38×10- 4mol/L纳米银即AgNPs溶液，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀，继续反应10分钟后，用1cm石英比色皿于荧光分光光度计上以λex=λem的方式扫描共振散射光谱；在430nm波长处分别测定加有过氧化氢溶液的共振散射强度I430nm和不加过氧化氢的试剂空白溶液的共振散射强度I0，计算共振散射强度的差值ΔI430nm =I0-I430nm，其共振散射强度的差值ΔI430nm与过氧化氢浓度c在3.20×10-8～2.24×10-5 mol/L范围内成线性关系，线性回归方程为△I=2.992×107c+37.82，相关系数0.9971，检出限2.20×10-8 mol/L；另取池塘水或新鲜雨水过滤，取2 mL滤液同法测定共振散射强度值，计算出池塘水或新鲜雨水中过氧化氢的含量。
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