CN104876921A - 作为AKT蛋白激酶抑制剂的5H-环戊二烯并[d]嘧啶 - Google Patents

作为AKT蛋白激酶抑制剂的5H-环戊二烯并[d]嘧啶 Download PDF

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Abstract

式I化合物可用于抑制AKT蛋白激酶。公开了使用式I化合物及其立体异构体和药学上可接受的盐来体外、原位和体内诊断、预防或治疗哺乳动物细胞中这种疾患或相关的病理病症的方法。

Description

作为AKT蛋白激酶抑制剂的5H-环戊二烯并[d]嘧啶
本申请是中国发明专利申请(申请日：2009年1月9日；申请号：200980108321.0(国际申请号：PCT/US2009/030617)；发明名称：作为AKT蛋白激酶抑制剂的5H-环戊二烯并[d]嘧啶)的分案申请。
发明背景
发明领域
本发明涉及新颖的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(例如，AKT和相关激酶)的抑制剂，涉及包含该化合物的药物组合物，涉及用于制备该化合物的方法并且涉及该化合物在治疗中的用途。更具体地，本发明涉及可用于治疗和预防哺乳动物中诸如癌症和炎症的过度增殖疾病的某些4-取代的5H-环戊二烯并[d]嘧啶。
背景技术描述
蛋白激酶(PK)是通过ATP的末端(γ)磷酸盐转移而催化蛋白质的酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基上的羟基磷酸化的酶。通过信号转导途径，这些酶以依赖于PK活性的一种方式或另一种方式调节细胞生长、分化和增殖，即基本上细胞生命的所有方面(Hardie,G.和Hanks,S.(1995)The Protein Kinase FactsBook.I and II(蛋白激酶翔实资料，I和II),Academic Press,San Diego,CA)。此外，异常PK活性已经涉及大量疾患，所述疾患的范围从相对非危及生命的疾病如银屑病至极其致命的疾病如成胶质细胞瘤(脑癌)。蛋白激酶是治疗性调节的重要靶标类型(Cohen,P.(2002)Nature Rev.Drug Discovery 1:309)。
明显地，非典型的蛋白磷酸化和/或表达通常被报导为引起癌症中异常的细胞增殖、转移和细胞存活的作用之一。多种激酶的异常调节和/或表达已特别牵涉癌症，所述多种激酶其中包括Akt、VEGF、ILK、ROCK、p70S6K、Bcl、PKA、PKC、Raf、Src、PDK1、ErbB2、MEK、IKK、Cdk、EGFR、BAD、CHK1、CHK2和GSK3。
蛋白激酶包括两类：蛋白酪氨酸激酶(PTK)和丝氨酸-苏氨酸激酶(STK)。蛋白激酶B/Akt酶是在多种人类肿瘤中过度表达的一组丝氨酸/苏氨酸激酶。PI3K脂质产品最具特征的靶之一是57KD丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Akt，在信号转导途径中的PI3K的下游(Hemmings,B.A.(1997)Science 275:628；Hay N.(2005)Cancer Cell 8:179-183)。Akt是急性转化型逆转录病毒AKT8的原癌基因v-akt的人类同源物。由于它与蛋白激酶A和蛋白激酶C的高度序列同源性，Akt还被称为蛋白激酶B(PKB)并与A和C相关(RAC)。已知存在Akt的三种同种型，即Akt1、Akt2和Akt3，它们表现80％的总同源性(Staal,S.P.(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.84:5034；Nakatani,K.(1999)Biochem.Biophys.Res.Commun.257:906；Li等人(2002)Current Topics in Med.Chem.2:939-971；WO 2005/113762)。Akt同种型共享共同的结构域组织，所述结构域组织由在N端的血小板白细胞C激酶底物同源结构域、激酶催化结构域和在C端的短调节区组成。此外，Akt2和Akt3均显示剪接变体。通过PtdInd(3,4,5)P3募集到细胞膜时，Akt的同种型Akt1(PKBα)、Akt2(PKBβ)和Akt3(PKBγ)分别在T308、T309和T305被PDK1磷酸化(活化)，并且Akt的同种型Akt1、Akt2和Akt3则分别在S473、S474和S472被PDK1磷酸化(活化)。这种磷酸化被认为是通过mTOR-Rictor复合物发生，尽管PDK1(Balendran,A.,(1999)Curr.Biol.9:393)、自磷酸化(Toker,A.(2000)J.Biol.Chem.275:8271)和整联蛋白连接激酶(ILK)(Delcommenne,M.(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:11211)已经牵涉该过程。Akt活化需要其在C端疏水基序中的残基Ser 473上磷酸化(Brodbeck等人(1999)J.Biol.Chem.274:9133-9136；Coffer等人(1991)Eur.J.Biochem.201:475-481；Alessi等人(1997)Curr.Biol.7:261-269)。虽然Akt的单磷酸化使该激酶活化，但最大的激酶活性则需要双(磷酸化)。
认为Akt通过抑制细胞凋亡并增强血管生成与增殖而显示其对癌症的作用(Toker等人(2006)Cancer Res.66(8):3963-3966)。Akt在多种形式的人类癌症中过度表达，所述癌症包括，但不限于，结肠癌(Zinda等人(2001)Clin.Cancer Res.7:2475)、卵巢癌(Cheng等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:9267)、脑癌(Haas Kogan等人(1998)Curr.Biol.8:1195)、肺癌(Brognard等人(2001)Cancer Res.61:3986)、胰腺癌(Bellacosa等人(1995)Int.J.Cancer64:280-285；Cheng等人(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.93:3636-3641)、前列腺癌(Graff等人(2000)J.Biol.Chem.275:24500)和胃癌(Staal等人(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:5034-5037)。
已探索了PI3K/Akt/雷帕霉素的哺乳动物靶标(mTOR)途径用于靶向性小分子抑制剂疗法(Georgakis,G.和Younes,A.(2006)Expert Rev.AnticancerTher.6(1):131-140；Granville等人(2006)Clin.Cancer Res.12(3):679-689)。对PI3K/Akt信号传导的抑制诱导细胞凋亡并抑制具有升高的Akt水平的肿瘤细胞的生长(Kim等人(2005)Current Opinion in Investig.Drugs6(12):1250-1258；Luo等人(2005)Molecular Cancer Ther.4(6):977-986)。
靶向异常调节途径并最终导致疾病的激酶抑制剂的开发对于医学机构和制药机构都具有巨大的伦理学兴趣和商业兴趣。抑制(1)Akt向细胞膜的募集，(2)被PDK1或PDK2活化，(3)底物磷酸化或(4)Akt下游的靶之一的化合物可能是作为独立疗法或与其他可接受的程序结合的有价值的抗癌剂。
美国专利申请公布2005/0130954特别公开了作为AKT抑制剂的多种化合物。据称，该化合物可用于治疗诸如癌症的过度增殖疾病。
发明概述
在一个方面，本发明涉及是AKT蛋白激酶的抑制剂的化合物。因此，本发明的化合物可用于治疗哺乳动物中诸如癌症和炎症的过度增殖疾病。
更具体地，本发明的一个方面提供了式I化合物及其立体异构体和药学上可接受的盐：
其中R1、R1a、R2、R2a、L和A如本文所定义。
本发明的另一方面提供了预防或治疗由AKT调节的疾病或疾患的方法，所述方法包括将有效量的本发明化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐施用于需要这种治疗的哺乳动物。这种疾病和疾患的实例包括，但不限于，过度增殖疾患(例如癌症)、神经变性、心脏肥大、疼痛、偏头痛和神经损伤性疾病(neurotraumatic disease)。
本发明的另一方面提供了预防或治疗癌症的方法，所述方法包括将有效量的本发明化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐单独地施用于需要这种治疗的哺乳动物或与具有抗癌性的一种或多种另外的化合物组合施用于需要这种治疗的哺乳动物。
在另一方面中，本发明提供了抑制哺乳动物中AKT蛋白激酶产生的方法，所述方法包括将式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐以有效抑制AKT蛋白激酶产生的量施用于所述哺乳动物。
在又一方面中，本发明提供了抑制AKT蛋白激酶的活性的方法，所述方法包括使所述激酶与式I化合物接触。
本发明化合物可有利地与其他已知的治疗剂组合使用。因此，本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物包含式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐以及第二治疗剂。
本发明的另一方面提供了治疗哺乳动物中过度增殖疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的本发明化合物施用于所述哺乳动物。
本发明的另一方面提供了本发明化合物在制造用于治疗过度增殖疾病的药物中的用途。
本发明的另一方面提供了用于治疗过度增殖疾病的本发明化合物。
本发明的另外的方面是式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐用于治疗的用途。在一个实施方案中，所述治疗包括AKT蛋白激酶介导的病症的治疗。
本发明的另一方面提供了治疗过度增殖疾病的药物组合物，该药物组合物包含本发明化合物。
本发明的另一方面提供了治疗癌症的药物组合物，该药物组合物包含本发明化合物。
本发明的另一方面提供了药物组合物，该药物组合物包含本发明化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的另一方面包括本发明化合物的制备方法、分离方法和纯化方法。
发明详述
现将详细参考本发明的某些实施方案，其实例在所附的结构和式中说明。虽然本发明将连同列举的实施方案来说明，但应当理解，它们不意图将本发明限制于那些实施方案。相反，本发明意图涵盖可包括在通过权利要求所定义的本发明范围内的所有的可选方案、改良方案和等同方案。本领域技术人员将了解可用于本发明实践的许多与本文描述的那些类似或等价的方法和物质。本发明决不限于描述的方法和物质。在一个或多个并入的文献和类似的物质与本申请不相同或矛盾的情况下，包括但不限于定义的术语、术语使用、描述的技术或类似情况，以本申请为准。
定义
术语“烷基”包括碳原子的直链或支链基团。某些烷基部分被缩写，例如，甲基(“Me”)、乙基(“Et”)、丙基(“Pr”)和丁基(“Bu”)，并且使用进一步的缩写来指明化合物的具体异构体，例如，1-丙基或正丙基(“n-Pr”)、2-丙基或异丙基(“i-Pr”)、1-丁基或丁基或正丁基(“n-Bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-Bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-Bu”)、1,1-二甲基乙基或叔丁基(“t-Bu”)或类似物。缩写有时与元素缩写和化学结构结合使用，例如甲醇(“MeOH”)或乙醇(“EtOH”)。
本申请通篇使用的其他缩写包括，例如，苄基(“Bz”)和苯基(“Ph”)。
术语“治疗”(“treat”)或“治疗”(“treatment”)是指治疗性的、预防性的(prophylactic)、减轻的或预防性的(preventative)措施。对本发明来说，有益的或所期望的临床结果包括，但不限于，症状的缓和、疾病程度的减少、疾病的稳定(即，不恶化的)状态、疾病进程的延迟或减缓、疾病状态的改善或减轻，以及消退(不管是部分的或完全的)，不管是可察觉的还是无法觉察的。“治疗”还可指与如果不接受治疗所预期的存活相比延长的存活。需要治疗的那些包括已患有病症或疾患的那些以及易于患病症或疾患的那些或其中预防病症或疾患的那些。
短语“治疗有效量”或“有效量”是指当施用于需要这种治疗的哺乳动物时本发明化合物的量，所述量足以(i)治疗或预防特定疾病、病症或疾患，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状的发作。对应这种量的化合物的量将依赖于诸如以下的因素而变化：特定化合物、疾病状况及其严重性、需要治疗的哺乳动物的特性(例如，重量)，但仍可由本领域技术人员常规确定。
术语“癌症”和“癌性的”是指或描述通常以失控的细胞生长为特征的哺乳动物的生理疾患。“肿瘤”包括一种或多种癌细胞。癌症的实例包括，但不限于，瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。这种癌症的更具体的实例包括鳞状上皮细胞癌(例如，上皮鳞状上皮细胞癌)、包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺的腺癌和肺的鳞状细胞癌的肺癌、腹膜癌、肝细胞癌、包括胃肠癌的胃癌(gastric cancer)或胃癌(stomach cancer)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney cancer)或肾癌(renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、包括黑素瘤的皮肤癌以及头颈癌。
短语“药学上可接受的”表示物质或组合物必须与包括制剂的其他成分和/或用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上相容。
如本文使用，短语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的药学上可接受的有机盐或无机盐。
本发明的化合物还包括这种化合物的其他的盐，所述其他的盐不必须是药学上可接受的盐，并且可用作用于制备和/或纯化本发明化合物的中间体和/或用于分离本发明化合物的对映体的中间体。
术语“哺乳动物”是指患有或有风险发展为本文所述的疾病的温血动物，并且包括，但不限于，豚鼠、狗、猫、大鼠、小鼠、仓鼠和灵长类，包括人类。
AKT抑制剂
本发明提供了潜在地可用于治疗由AKT调节的疾病、病症和/或疾患的化合物及其药学制剂。
本发明的一个实施方案提供了式I化合物及其立体异构体和药学上可接受的盐：
其中：
R1和R1a独立地选自氢、甲基、乙基、-CH＝CH2,-CH2OH、CF3、CHF2或CH2F；
R2选自氢、OH、OCH3或F；
R2a选自氢、甲基或F，或
R2和R2a是氧代；
L选自：
其中单波形线是L连接至A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置；
A是：
X是从L至Y的直连键、CH2,O,C＝O、NH或C(＝O)NH；
Y是CH或N；
Z为不存在、CH2或O，其中选择L、X、Y、Z和b以致任何氮均不与另一个氮直接键合；
G是用1至4个Ra基团任选取代的苯基或由卤素任选取代的5-6元杂芳基；
R3和R4独立地选自氢或甲基；
R5和R6独立地选自氢或C1-C4烷基；
a是0或1；
b是0、1或2；并且
每个Ra独立地是卤素、C1-C6-烷基、C3-C6-环烷基、-O-(C1-C6-烷基)、CF3、-OCF3、S(C1-C6-烷基)、CN、-OCH2-苯基、NH2、-NO2、-NH-(C1-C6-烷基)、-N-(C1-C6-烷基)2、哌啶、吡咯烷、CH2F、CHF2、-OCH2F、-OCHF2、-OH、-SO2(C1-C6-烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1-C6-烷基)和C(O)N(C1-C6-烷基)2；或
b是1，R3是氢，并且R4和R5与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的5-6元杂环，并且R6选自由H或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组，以致A具有如下结构：
Rc和Rd独立地选自氢和甲基；并且
c是1或2；或
b是1，Z是CH2，并且R5和Y与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的6元杂环，并且R6选自由H或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组，以致A具有如下结构：
在某些实施方案中，R1是甲基。
在某些实施方案中，R1a是氢。
在某些实施方案中，R2是氢。
在某些实施方案中，R2是OH。
在某些实施方案中，R2a是氢。
在某些实施方案中，式I选自：
在某些实施方案中，式I选自：
在某些实施方案中，L选自：
在某些实施方案中，L是：
其中单波形线是L连接A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置，提供具有以下结构的式Ia化合物：
在某些实施方案中，L是：
其中单波形线是L连接A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置，提供具有以下结构的式Ib化合物：
在某些实施方案中，L是：
其中单波形线是L连接A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置，提供具有以下结构的式Ic化合物：
在某些实施方案中，L是：
其中单波形线是L连接A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置，提供具有以下结构的式Id化合物：
在某些实施方案中，L是：
其中单波形线是L连接A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置，提供具有以下结构的式Ie化合物：
在某些实施方案中，L是：
其中单波形线是L连接A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置，提供具有以下结构的式If化合物：
在某些实施方案中，L是：
其中单波形线是L连接A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置，提供具有以下结构的式Ig化合物：
在某些实施方案中，L是：
其中单波形线是L连接A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置，提供具有以下结构的式Ih化合物：
在某些实施方案中，L是：
其中单波形线是L连接A的位置并且双波形线是L连接至嘧啶的位置，提供具有以下结构的式Ii化合物：
在某些实施方案中，A是：
在某些实施方案中，X是从L至Y的直连键、CH2、O、C＝O、NH或C(＝O)NH。
在某些实施方案中，X是从L至Y的直连键。
在某些实施方案中，X是CH2。
在某些实施方案中，X是O。
在某些实施方案中，X是C＝O。
在某些实施方案中，X是NH。
在某些实施方案中，X是C(＝O)NH。
在某些实施方案中，Y是CH或N。
在某些实施方案中，Y是N。
在某些实施方案中，Y是CH。
在某些实施方案中，Z为不存在、CH2或O。
在某些实施方案中，Z为不存在或O。
在某些实施方案中，Z不存在。
在某些实施方案中，Z是CH2。
在某些实施方案中，Z是O。
式I化合物是选择L、X、Y、Z和b以致任何氮均不与另一个氮直接键合的化合物。
在某些实施方案中，X是从L至Y的直连键，Y是CH2并且Z是O，以致A具有A1结构：
在A1的某些实施方案中，a是0。
在A1的某些实施方案中，b是2。
在A1的某些实施方案中，R3是氢。
在A1的某些实施方案中，R4是氢。
在A1的某些实施方案中，R5是C1-C4烷基。在A1的某些实施方案中，R5是甲基。
在A1的某些实施方案中，R6是C1-C4烷基。在A1的某些实施方案中，R6是甲基。
在某些实施方案中，X是C(＝O)NH，Y是CH并且Z不存在，以致A具有A2结构：
在A2的某些实施方案中，a是1。
在A2的某些实施方案中，b是1。
在A2的某些实施方案中，R3是氢。
在A2的某些实施方案中，R4是氢。
在A2的某些实施方案中，R5是氢。
在A2的某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，X是从L至Y的直连键，Y是CH并且Z不存在，以致A具有A3结构：
在A3的某些实施方案中，a是0。
在A3的某些实施方案中，b是1。
在A3的某些实施方案中，R3是氢。
在A3的某些实施方案中，R4是氢。
在A3的某些实施方案中，R5是C1-C4烷基。在A3的某些实施方案中，R5是异丙基。
在A3的某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，X是从L至Y的直连键，Y是CH并且Z不存在，以致A具有A4结构：
在A4的某些实施方案中，a是0。
在A4的某些实施方案中，a是1。
在A4的某些实施方案中，b是0。
在A4的某些实施方案中，b是1。
在A4的某些实施方案中，R3是氢。
在A4的某些实施方案中，R4是氢。
在A4的某些实施方案中，R5是氢。
在A4的某些实施方案中，R5是C1-C4烷基。在A4的某些实施方案中，R5是异丙基。
在A4的某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，X是NH，Y是CH并且Z不存在，以致A具有A5结构：
在A5的某些实施方案中，a是0。
在A5的某些实施方案中，b是1。
在A5的某些实施方案中，R3是氢。
在A5的某些实施方案中，R4是氢。
在A5的某些实施方案中，R5是C1-C4烷基。在A5的某些实施方案中，R5是异丙基。
在A5的某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，X是C＝O，Y是N并且Z不存在，以致A具有A6结构：
在A6的某些实施方案中，b必须是1或2。
在A6的某些实施方案中，a是1。
在A6的某些实施方案中，b是2。
在A6的某些实施方案中，R3是氢。
在A6的某些实施方案中，R4是氢。
在A6的某些实施方案中，R5是氢。
在A6的某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，X是C＝O，Y是CH并且Z不存在，以致A具有A7结构：
在A7的某些实施方案中，a是0。
在A7的某些实施方案中，b是1。
在A7的某些实施方案中，R3是氢。
在A7的某些实施方案中，R4是氢。
在A7的某些实施方案中，R5是C1-C4烷基。在A7的某些实施方案中，R5是叔丁基。在A7的某些实施方案中，R5是异丙基。
在A7的某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，R3是氢。
在某些实施方案中，R3是甲基。
在某些实施方案中，R4是氢。
在某些实施方案中，R4是甲基。
在某些实施方案中，R5是氢。
在某些实施方案中，R5是C1-C4烷基。
在某些实施方案中，R5是甲基。
在某些实施方案中，R5是异丙基。
在某些实施方案中，R5是叔丁基。
在某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，R6是甲基。
在某些实施方案中，a是1。
在某些实施方案中，a是0。
在某些实施方案中，b是0。
在某些实施方案中，b是1。
在某些实施方案中，b是2。
在某些实施方案中，Z是O并且b是2。
在某些实施方案中，b是1，R3是氢并且R4和R5与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的5-6元杂环，以致A具有A8结构：
其中c是1或2，Rc和Rd独立地选自氢和甲基，并且R6选自由H或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组。
在某些实施方案中，c是1，以致A具有A8a结构：
在A8a的某些实施方案中，X是C＝O。
在A8a的某些实施方案中，Y是CH。
在A8a的某些实施方案中，Z不存在。
在A8a的某些实施方案中，a是0。
在A8a的某些实施方案中，Rc是甲基。
在A8a的某些实施方案中，Rd是甲基。
在A8a的某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，c是2，以致A具有A8b结构：
在某些实施方案中，b是1，Z是CH2，并且R5和Y与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的6元杂环，并且R6选自由氢或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组，以致A具有A9结构：
在式A9的某些实施方案中，X是从L至Y的直连键。
在式A9的某些实施方案中，a是0。
在式A9的某些实施方案中，R6是氢。
在某些实施方案中，G是用1个至4个Ra基团任选取代的苯基或由卤素任选取代的5-6元杂芳基。
在某些实施方案中，每个Ra独立地是卤素、C1-C6-烷基、C3-C6-环烷基、-O-(C1-C6-烷基)、CF3、-OCF3、S(C1-C6-烷基)、CN、-OCH2-苯基、NH2、-NO2、-NH-(C1-C6-烷基)、-N-(C1-C6-烷基)2、哌啶、吡咯烷、CH2F、CHF2、-OCH2F、-OCHF2、-OH、-SO2(C1-C6-烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1-C6-烷基)和C(O)N(C1-C6-烷基)2。
涉及式I的G基团，实例包括用1个或多个Ra基团任选取代的苯基，所述Ra基团独立地选自F、Cl、Br、I、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、环丙基、CN、CF3、-OMe、-OEt、-OCF3、-NO2、-SMe和-OCH2Ph。G的示例性实施方案包括苯基、2-氯苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、4-氟苯基、4-溴苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-异丙基苯基、4-三氟甲基苯基、4-氰基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧基苯基、4-硫代甲基苯基、4-三氟甲氧基苯基、4-环丙基苯基、4-氯-3-氟苯基、3,4-二氟苯基、4-溴-3-氟苯基、3-氟-4-甲基苯基、3-氟-4-甲氧基苯基、3-氟-4-三氟甲基苯基、4-氰基-3-氟苯基、3,4-二氯苯基、2,4-二氯苯基、2,4-二氟苯基、2-氯-4-氟苯基、2-氟-4-氯苯基、3,5-二氯苯基、3,5-二氟苯基、3-氯-5-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、3,5-二氟-4-氯苯基、2,3-二氟-4-氯苯基、2,5-二氟-4-氯苯基、3,5-二氟-4-溴苯基、2,3-二氟-4-溴苯基、2,5-二氟-4-溴苯基、4-(OCH2Ph)-苯基、4-氯苯基、2,4-二氯苯基、3,4-二氯苯基、4-氯-3-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-氟-4-溴苯基、4-氟苯基、3,4-二氟苯基、2,4-二氟苯基、4-溴苯基、4-氯-2-氟苯基、4-甲氧基苯基、4-甲基苯基、4-氰基苯基、4-三氟甲基苯基、4-碘苯基、4-硝基苯基、4-叔丁基苯基、2-氟苯基、3-三氟甲基苯基、2-氟-4-三氟甲基苯基、3-氟-4-三氟甲氧基苯基、3-氟-4-三氟甲基苯基和4-三氟甲氧基苯基。
在某些实施方案中，G是4-氯苯基、4-溴苯基、4-三氟甲基苯基或2,4-二氯苯基。
涉及式I的G基团，短语“由卤素任选取代的5-6元杂芳基”包括由卤素任选取代的噻吩和吡啶。具体的实例包括，但不限于，以下的结构：
应理解，本发明的某些化合物可包含不对称或手性中心，并因此以不同的立体异构体形式存在。期望本发明化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映体、对映体和阻转异构体，以及其混合物如外消旋混合物，形成了本发明的一部分。
在本文所示的结构中，如果任何特定的手性原子的立体化学未被指定，则所有立体异构体被涵盖在内，并作为本发明的化合物被包括。如果通过表示特定构型的实楔形线或虚线指定立体化学，则该异构体被如此指定并定义。
应进一步理解到，本发明化合物可以未溶剂化的形式存在以及与药学上可接受的溶剂(例如水、乙醇及类似物)以溶剂化的形式存在，并且期望本发明包含溶剂化的形式和未溶剂化的形式。
化合物的合成
本发明化合物可通过包括与化学领域中公知的方法类似的方法的合成途径来合成，特别是根据本文包含的描述来合成。起始物质通常是从诸如Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)、Alfa Aesar(Ward Hill,MA)或TCI(Portland,OR)的商业来源获得，或者使用本领域技术人员公知的方法容易地制备(例如，通过通常在以下文献中描述的方法而制备：Louis F.Fieser和Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis(用于有机合成的试剂),第1-19卷,Wiley,N.Y.(1967-1999版)，或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie(贝尔斯坦有机化学手册),4,Aufl编辑Springer-Verlag,Berlin,包括增刊(还可经贝尔斯坦在线数据库获得))。
为了说明性的目的，方案1-20显示了用于制备本发明化合物以及关键中间体的一般方法。对于单个反应步骤的更详细的描述，参见以下的实施例部分。本领域技术人员将理解，其他合成途径可用于合成本发明化合物。虽然特定起始物质和试剂在方案中描述并在以下讨论，但其他起始物质和试剂可易于代替以提供多种衍生物和/或反应条件。此外，根据本公开内容，可使用本领域技术人员公知的常规化学进一步修饰由以下描述的方法制备的许多化合物。
方案1
方案1显示制备化合物7的方法，其中Hal是Br、Cl或I。根据方案1，中间体3可通过溴化(+)-长叶薄荷酮1以提供二溴化物2而制备。然后用诸如乙醇钠的碱处理二溴化物2。氧化裂解(例如，在-80℃至-50℃臭氧解)蒲勒烯酸酯(pulegenate)3得到酮酯4，其中Rf是C1-C3烷基。通过在诸如KOH的碱存在下，酮酯4与硫脲反应制备嘧啶环5。在化合物5的2位的巯基通过还原(例如，在氨水中的阮内镍)而消除以得到化合物6。可选择地，通过用，例如，诸如NH4OAc的氨合成子处理，然后在50℃至250℃和/或在高压下在甲酰胺存在下采用NH4CO2H的处理，酮酯4可被转化为相同的羟基嘧啶6。羟基嘧啶6的活化(例如，POCl3)提供了4-卤代嘧啶7。
方案2
方案2显示了制备化合物11的方法，其中Hal是Br、Cl或I并且R1和R1a在本文中定义。根据方案2，使用氨合成子(例如NH4OAc)对化合物8氨基化得到化合物9，其中Rg是C1-C3烷基。使用例如甲酸铵，在甲酰胺存在下，在50℃至250℃和/或在高压下的嘧啶形成，得到双环单元10。使用例如POCl3或SOCl2对化合物10活化得到活化的嘧啶11。
方案3
方案3显示制备化合物11的可选择的方法，其中Hal是Br、Cl或I并且R1和R1a基团在本文中定义。根据方案3，通过在诸如KOH的碱存在下酮酯8与硫脲反应而制备嘧啶环，其中Rg是C1-C3烷基。在化合物12的2位的巯基通过还原(例如，在氨水中的阮内镍)而消除以得到10。使用例如POCl3或SOCl2对化合物10活化得到活化的嘧啶11。
方案4
方案4显示制备化合物16、17、18和19的方法，其中Hal是Br、Cl或I并且R1和R1a在本文中定义。根据方案4，用诸如间氯过苯甲酸(“m-CPBA”)、过硫酸氢钾制剂或过氧化氢的氧化剂氧化4-卤代嘧啶11提供了N-氧化物13。用乙酸酐使N-氧化物13重排得到中间体14，其中如果使用乙酸酐则Rj是甲基。然后在温和条件下(例如，在0℃至室温下，在水溶剂/有机溶剂混合物中的LiOH)水解化合物14得到醇15。然后，化合物15：1)经过分离(例如，用手性或非手性的固定相的色谱法)；2)被官能化(例如，4-硝基苯甲酰氯、NEt3)以促进分离，分离(例如，色谱法或重结晶)并然后在0℃至室温下，在水溶剂/有机溶剂混合物中，在用诸如氢氧化锂的碱处理时水解；或3)被氧化(例如Swern氧化)然后被不对称还原(例如，在氢气存在下的催化手性催化剂、Corey-Bakshi-Shibata催化剂(“CBS催化剂”)或在手性配体存在下的硼氢化物还原剂)。所有可选方案提供了成为分离的非对映体16和17的途径。
任选地，化合物16和17的7-羟基可在诸如NaH或KOH的碱存在下，采用诸如烷基卤化物(例如，MeI)的烷基化试剂烷基化，以提供化合物18和19。
方案5
方案5显示了制备化合物20和21的方法，其中Rk是卤素或NO2，Hal是Br、Cl或I，并且R1和R1a在本文中定义。根据方案5，用诸如m-CPBA、过硫酸氢钾制剂或过氧化氢的氧化剂氧化4-卤代嘧啶11提供了N-氧化物13。用乙酸酐使N-氧化物13重排得到中间体14，其中如果使用乙酸酐则Rj是甲基。然后在温和条件下(例如，在0℃至室温下，在水溶剂/有机溶剂混合物中的LiOH)水解化合物14以得到醇15。然后，化合物15被官能化(例如，4-硝基苯甲酰氯或4-溴苯甲酰氯，在NEt3存在下，在-20℃至50℃)并分离(例如，色谱法或重结晶)以提供成为分离的、被保护的非对映体20和21的途径。
方案6
方案6显示用于形成化合物26和28的方法，其中R1、R1a、R2和R2a如本文所定义。在Na2CO3存在下，使用例如Pd(PPh3)4或Pd(dppf)Cl2，然后除去苯甲酸酯保护基(例如，在0℃至50℃下，在水溶剂/有机溶剂混合物中的LiOH)的卤代嘧啶22与适当取代的硼酸或酯23之间的Pd-介导的偶联得到化合物24，其中Hal是Br、Cl或I，并且Rk是卤素或NO2，其中PG是胺保护基，且Rm是氢或用OH任选取代的烷基，或两个Rm基团与它们连接的原子一起形成具有1个B原子和2个O原子而余下的为碳原子的5元或6元环，并且所述环可用烷基任选地取代。除去胺保护基(例如对于Boc基团，是HCl/二噁烷或TFA)和随后的酰化(例如HBTU、Hunig碱)得到25。
可选择地，任选地还原烯烃24(例如，H2-Pd/C)，然后除去胺保护基(例如，对于Boc基团，为HCl/二噁烷或TFA)和随后的酰化(例如，HBTU、Hunig碱)得到27。
对化合物25或27的羟基的任选的官能化可提供成为可选择的R2基团的通道。例如，通过用例如DAST处理，醇可被转化为氟基团，其中化合物26或28的R2为F并且R2a为H。可选择地，醇25或27可被烷基化(例如，MeI、NaH)以得到甲氧基类似物，其中化合物26和28的R2为OMe并且R2a为H。可选择地，化合物25或27可被氧化(例如，类似于Swern的条件)以提供酮，其中化合物26或28的R2和R2a为氧代，该酮又可用诸如DAST或Deoxo-Fluor的氟化剂在诸如二氯甲烷(“DCM”)或氯仿的合适的溶剂中处理以得到偕-二氟化物类似物，其中化合物26或28的R2为F并且R2a为F。
方案7
方案7显示制备化合物26和28的可选择的途径，其中R1、R1a、R2和R2a如本文所定义。在此方案中，嘧啶部分在较早阶段被官能化。在Na2CO3存在下，使用例如Pd(PPh3)4或Pd(dppf)Cl2，然后除去苯甲酸酯保护基(例如，在0℃至50℃下，在水溶剂/有机溶剂混合物中的LiOH)的卤代嘧啶29与适当取代的硼酸或酯23之间的Pd-介导的偶联得到化合物30，其中Hal是Br、Cl或I，其中PG是胺保护基，且Rm是氢或用OH任选取代的烷基，或两个Rm基团与它们连接的原子一起形成具有1个B原子和2个O原子而余下的为碳原子的5元或6元环，并且所述环可用烷基任选地取代。除去胺保护基(例如对于Boc基团，为HCl/二噁烷或TFA)和随后的酰化(例如HBTU、Hunig碱)得到26。
可选择地，任选地还原烯烃30(例如，H2-Pd/C)，然后除去胺保护基(例如，对于Boc基团，为HCl/二噁烷或TFA)和随后的酰化(例如，HBTU、Hunig碱)得到化合物28。
方案8
方案8显示产生化合物39和40的方法，其中R1、R1a、R2、R2a、R5和G如本文所定义。使用诸如BuLi、t-BuLi、Mg等的强碱处理适当取代的卤代苯34，并在-100℃至50℃下将新形成的阴离子加入酮化合物33中得到化合物35，其中Hal是Br、Cl或I，其中Pg是胺保护基。在路易斯酸(例如，在-20℃至100℃下AlCl3)存在下用卤代苯36处理化合物35，并且如果必要，对所述胺再次保护(例如对于Boc基团为Boc2O)，得到化合物37，其中Hal是Br、Cl或I。化合物37转化成合适的有机金属(例如，用Sn2Me6，Pd(PPh3)4；双频哪醇硼酸酯(bispinacol ester boronate)，Pd(dppf)Cl2；或Mg处理)然后使用例如在二噁烷中的PdCl2(PPh3)2和Na2CO3水溶液，在室温至回流下与化合物38的Pd-介导的偶联，并最终除去胺保护基(例如，对于Boc基团为HCl/二噁烷)和醇保护基(例如，在THF/H2O中的LiOH，在0℃至50℃下)得到化合物39，其中Rk是卤素或NO2。
可选择地，在相同的Pd-偶联和脱保护步骤中，可使用不同官能化的嘧啶部分(例如，化合物29，其中Hal是Br、Cl或I)以得到化合物40。
方案9
方案9显示制备化合物43的方法。使用例如在二噁烷中的PdCl2(dppf)和Na2CO3水溶液，在室温至回流下，化合物38与化合物41之间的钯介导的偶联，然后是酯的皂化(例如，在THF/水中的LiOH或NaOH，在0℃至回流下)，得到化合物42，其中Rk是卤素或NO2。在标准偶联条件下(例如，HBTU/DIPEA/DMF)用适当取代的伯胺或仲胺处理新形成的酸得到化合物43。
方案10
方案10显示制备具有不同取代的嘧啶部分的化合物45的方法，其中R1、R1a、R2和R2a如本文定义。使用例如在二噁烷中的PdCl2(dppf)和Na2CO3水溶液，在室温至回流下，在化合物29与化合物41之间的钯-介导的偶联，然后是酯的皂化(例如，在THF/水中的LiOH或NaOH，在0℃至回流下)，得到化合物44，其中Hal是Br、Cl或I。在标准偶联条件下(例如，HBTU/DIPEA/DMF)用适当取代的伯胺或仲胺处理新形成的酸得到化合物45。
方案11
方案11显示产生化合物48和50的方法，其中R1、R1a、R2和R2a如本文所定义。在室温至回流下，在合适的溶剂(例如异丙醇)中，用化合物29和叔胺碱(例如Hunig碱)处理适当地单取代的二氮杂草46，然后，例如在Boc基团的情况下使用TFA或HCl/二噁烷，在0℃至室温下除去胺保护基以得到化合物47，其中Hal是Br、Cl或I，其中PG是胺保护基。使用标准酰胺形成条件(例如，HBTU/DIPEA/DCM，在0℃至回流下)用适当取代的酸处理化合物47得到化合物48。
可选择地，在室温至回流下，在合适的溶剂(例如异丙醇)中，用化合物38和叔胺碱(例如Hunig碱)处理适当地单取代的二氮杂草46，然后，例如在Boc基团的情况下使用TFA或HCl/二噁烷，在0℃至室温下除去胺保护基以得到化合物49，其中Rk是卤素或NO2。使用标准酰胺形成条件(例如，HBTU/DIPEA/DCM，在0℃至回流下)用适当取代的酸处理化合物49然后是酯的皂化(例如，在THF/水中的LiOH或NaOH，在0℃至回流下)以得到化合物50。
方案12
方案12显示用于形成化合物53和54的方法，其中R1、R1a、R2、R2a、R3、R4、R5、R6、G、a和b如本文所定义。在0℃至50℃下，使用例如在EtOH中的NaBH4，将化合物51还原，其中PG是胺保护基。然后在室温至100℃下，使用例如，诸如在DMF中的NaH的碱，用合适的含胺的侧链(amine-containing side chain)(例如，N(CH3)2CH2CH2Cl)使所得的醇烷基化。这之后是在0℃至室温下，例如在Boc的情况下使用HCl/二噁烷或TFA，对哌啶胺脱保护，得到化合物52。然后，在室温至140℃下，使用卤代嘧啶29和叔胺碱(例如Hunig碱)在例如DMF中处理化合物52以得到化合物53，其中Hal是Br、Cl或I。
可选择地，可在类似条件下用化合物38处理化合物52，然后在0℃至回流下，使用例如在THF/水中的LiOH使苯甲酰基团皂化，得到化合物54，其中Hal是Br、Cl或I并且Rk是卤素或NO2。
方案13
方案13描述制备化合物61的途径，其中G和a如本文所定义。在0℃至室温下，使用例如在THF中的LiBH4和ClSi(CH3)3，使氨基酸55还原，然后，例如，如果Pg是Boc则使用Boc2O来保护胺得到化合物56，其中PG是胺保护基。在-20℃至室温下，使用，例如，甲烷磺酰氯和三乙胺在DCM中使醇56活化，然后用诸如叠氮化物的被保护的胺(使用，例如，在DMF中的叠氮化钠，在室温至120℃下)取代并对所述胺脱保护(例如，对于Boc基团，使用HCl/二噁烷或TFA)可得到氨基叠氮化物57。可通过在室温至回流下，使用例如THF中的Pd(PPh3)4的有机锌59与氯嘧啶58之间的钯介导的偶联，然后是酯的皂化以得到酸60来制备化合物60。在标准条件下(例如，HBTU/Hunig碱)酸60与胺57的偶联和叠氮化物的还原(例如，H2-Pd/C或PPh3)可提供化合物61。
可选择地，可采用与以上类似的程序，使用可选择地取代的嘧啶29代替氯嘧啶58，然后皂化，得到化合物62。与胺57类似的偶联和叠氮化物还原则提供化合物63。
方案14
方案14描述用于形成化合物67和68的方法，其中G和a如本文所定义。在本实例中，使用方案13中描述Pd-介导的条件使化合物58和59偶联。这之后，使用例如m-CPBA或过硫酸氢钾制剂而形成嘧啶-1-氧化物，然后是在较高温度下(例如，50℃至回流)用乙酸酐酰化和重排，并随后在0℃至50℃下，使用例如在THF/水中的LiOH对乙酸酯和酯皂化而得到酸64。将酸保护(例如，MeOH、三甲基硅烷基重氮甲烷，在-20℃至室温下)为甲基酯，然后对醇的酰化(例如，对硝基苯甲酰氯、在DCM中的NEt3，在-20℃至回流)以促进分离，分离(例如色谱法或重结晶)和苯甲酸酯和甲基酯的皂化(使用，例如，在THF/水中的LiOH，在0℃至50℃下)提供了化合物65和66。使用标准酰胺形成条件(例如，HBTU，Hunig碱，DCM，在-20℃至回流)，这些化合物可与氨基叠氮化物57偶联，然后还原该叠氮化物(例如，H2-Pd/C或PPh3)以得到化合物67和68。
通过用任选取代的卤代嘧啶11替换方案14中的氯嘧啶58或通过进行方案17中描述的转化而制备化合物67和68的任选取代的形式。
方案15
方案15描述了化合物73的制备，其中R1、R1a、R2、R2a、R5、R6、G和a如本文所定义。在室温至回流下，使用例如在异丙醇中的PdCl2(PPh3)2和Na2CO3水溶液的卤代嘧啶29与硼酸69之间的Pd-介导的反应提供了苯酚70，其中Hal是Br、Cl或I。通过胺介导的环氧化物71的开环，然后如果所得的胺是伯胺或仲胺则进行胺保护(例如，Boc2O)而制备化合物72。在例如Mitsunobu条件下(例如，偶氮二甲酸二乙酯和PPh3，在-40℃至5℃，然后温至室温高至50℃)化合物72与化合物70的偶联，然后如果需要，任选的脱保护(例如，对于Boc基团为HCl/二噁烷或TFA)，提供化合物73。
方案16
方案16描述了化合物77的制备，其中R1、R1a、R2、R2a、R5、R6和G如本文所定义。在0℃至50℃下，在诸如MeOH的质子溶剂中，在诸如氨基磺酸的酸存在下，用TMS-CN和醛处理苯胺74，然后在-78℃至室温下，在THF中使用例如LiAlH4还原所得的腈，得到化合物75。在0℃至50℃下，在诸如三乙酰氧基硼氢化钠的还原剂存在下，使用合适的醛或酮对该胺的烷基化(例如，烷基卤化物和碱如NaH)或还原氨化提供了化合物76。然后可通过用例如硼烷、在DMSO中的PdCl2(dppf)和KOAc、Sn2(CH3)6和Pd(PPh3)4或可选择地用Mg或Zn的活化形式处理，将化合物76转化为合适的有机金属试剂。然后，可使用钯-介导的反应(例如，在例如异丙醇中的Pd(PPh3)4和Na2CO3水溶液，在室温至回流下)将该有机金属试剂与卤代嘧啶29偶联，得到化合物77，其中Hal是Br、Cl或I。
方案17
方案17显示用于提供了可选择的R2和R2a基团的化合物79的羟基的官能化的一般方法，其中A、L、R1和R1a如本文定义。通过用诸如例如DAST的氟化剂处理，醇79可转化为氟-基团78。可选择地，醇79可被烷基化(例如，甲基化剂如MeI和强碱如NaI)以提供甲氧基类似物80(在这种情况下，R2a是氢)。可选择地，化合物79可被氧化(例如，类似于Swern的条件)以提供酮82，该酮又可用诸如DAST或Deoxo-Fluor的氟化剂在诸如DCM或氯仿的合适的溶剂中处理，以得到偕-二氟类似物81。还可用诸如MeMgBr或MeLi的合适的有机金属亲核试剂处理酮82以产生叔醇83。其可如上所述地进一步氟化或甲基化而分别提供化合物84和80(在此情况下，R2a是甲基)。方案17通常应用于式I化合物及其中间体，其中R2是OH并且R2a是氢。
方案18
方案18描述了用于制备化合物88的过程，其中R1、R1a、R2、R2a、R3、R4、R5、R6、G、Z、a和b如本文所定义。通过在标准酰胺偶联条件下(例如，1,1-羰基二咪唑)用例如肼处理，将酸85转化为酰肼，然后在室温至150℃下与化合物86缩合，并除去保护基(例如，如果Pg是Boc则使用HCl/二噁烷或TFA)以得到化合物87，其中PG是胺保护基。在室温至200℃下，在碱(例如，NEt3、Hunig碱等)存在下，任选地在或不在微波辅助下的密封容器中，用化合物29处理化合物87可得到化合物88，其中Hal是Br、Cl或I。
方案19
方案19显示用于合成化合物94和95的一般方案，其中R1、R1a、R2、R2a、R5、R6、G和a如本文所定义。在酸(例如，质子酸如催化的浓H2SO4)存在下，化合物89和90之间的迈克尔反应提供了化合物91，其中Hal是Br、Cl或I。该卤代吲哚91可转化为有机金属(例如，用Sn2(CH3)6，Pd(PPh3)4；双频哪醇硼酸酯，Pd(dppf)Cl2；或活化的Mg处理)，然后与化合物29进行Pd-介导的偶联而得到化合物92，其中，对于Suzuki偶联，在室温至回流下，使用例如在二噁烷中的PdCl2(PPh3)2和Na2CO3水溶液；或者对于Stille偶联，在室温至回流下，使用例如在甲苯中的Ph(PPh3)4。使用例如Fe/AcOH对92中的硝基还原或在PtO2催化剂下的氢化提供了伯胺93。该胺的可选择的官能化(例如还原氨化，烷基化等)然后分离两种非对映体，则提供化合物94和95。
方案20
方案20描述化合物108的制备，其中R1、R1a、R2、R2a、R5、R6和G如本文所定义。用草酰氯酰化96，然后用诸如AlCl3的路易斯酸处理所得酰氯得到化合物97，然后化合物97可用氢氧化铵水溶液和诸如过氧化氢的氧化剂处理以提供伯胺98，其中Hal是Br、Cl或I。用例如NaOH的碱水解酰胺98提供了羧酸99(程序在J.Med.Chem.,37,2308-2314(1994)中描述)。在标准偶联条件下(例如，HBTU、DIEA)化合物99与N,O-二甲羟胺偶联产生酰胺101。化合物101可与化合物102反应以产生酮103，化合物102是格氏试剂、锌或锂阴离子。化合物103的烯化反应(例如，在碱(例如，NaH、KOBut或NaN(Si(CH3)3)2)存在下与甲基三苯基溴化膦)产生烯烃104，烯烃104与丙烯胺在诸如DMF的有机溶剂中反应以得到化合物105。例如通过在Pd(PPh3)4存在下用1,3-二甲基嘧啶-2,46(1H,3H,5H)-三酮处理除去烯丙基，然后用例如Boc的合适的胺保护基，使用Boc2O，再次保护游离的胺，得到化合物106，其中PG是胺保护基。然后，通过用例如硼烷、在DMF中的PdCl2(dppf)和KOAc、Sn2(CH3)6和Pd(PPh3)4处理或可选择地用Mg或Zn的活化形式处理，化合物106可转化为合适的有机金属试剂。然后使用钯介导的反应(例如，在例如DMF中的PdCl2(dppf)和Na2CO3水溶液，在室温至回流下)，该有机金属试剂可与卤代嘧啶29偶联以得到化合物107，其中Hal是Br、Cl或I。除去保护基，随后对无保护的游离的胺进行最后的功能化(例如，烷基化或还原氨化以引入新的取代基)产生最终化合物108。然后，这些类似物可经过分离技术以得到单一的非对映体。
在制备式I化合物时，保护中间体的远端官能团(例如，伯胺或仲胺等)可能是必须的。对于这样的保护的需求将依赖于远端官能团的特性和制备方法的条件而变化。合适的氨基保护基(NH-Pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、Boc、苄氧羰基(CBz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)。对这样的保护的需求由本领域技术人员容易地确定。对于保护基的一般描述及其用途，参见T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基),John Wiley&Sons,New York,1991。
分离方法
将反应产物彼此分离和/或从起始物质分离可能是有利的。通过本领域常见的技术将每个步骤或一系列步骤的所期望的产物分离和/或纯化(在下文中为分离)为期望程度的均一性。通常，这样的分离包括多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可包括许多方法，包括，例如：反相和正相色谱法；尺寸排阻色谱法；离子交换色谱法；高、中和低压液相色谱法和设备；小规模分析色谱法；模拟移动床(SMB)色谱法和制备型薄层或厚层色谱法以及小规模薄层色谱法与快速色谱法的技术。本领域技术人员将应用最合适获得所需分离的技术。
通过本领域技术人员公知的方法，例如通过色谱法和/或分步结晶，非对映体混合物可基于它们物理化学差异而被分离为它们单独的非对映体。可通过与合适的光学活性化合物(例如，手性助剂，如手性醇或Mosher酰氯)反应而将对映体混合物转化为非对映体混合物，分离该非对映体并将单独的非对映体转化(例如，水解)为相应的纯对映体而分离对映体。对映体还可通过使用手性HPLC柱分离。
可通过使用例如形成非对映体的方法使用光学活性拆分剂拆分外消旋混合物来获得基本上不含其立体异构体的单一立体异构体，例如对映体(Eliel,E.和Wilen,S."Stereochemistry of Organic Compounds(有机化合物的立体化学),"John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,(1975)J.Chromatogr.,113(3):283-302)。可通过任何合适的方法分离并离析本发明的手性化合物的外消旋混合物，所述方法包括：(1)与手性化合物形成离子的、非对映体的盐并通过分步结晶或其他方法分离，(2)与手性衍生化试剂形成非对映体化合物，分离该非对映体并转化为纯的立体异构体，和(3)直接在手性条件下分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见："Drug Stereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology(药物立体化学，分析方法和药理学),"Irving W.Wainer编辑,Marcel Dekker,Inc.,New York(1993)。
在方法(1)中，可通过诸如番木鳖碱、奎宁、麻黄素、马钱子碱、α-甲基-β-苯乙胺(安非他命)及类似物的对映体纯的手性碱与带有诸如羧酸和磺酸的酸性官能团的不对称化合物反应，形成非对映体的盐。可通过分步结晶或离子色谱法使得非对映体的盐分离。为了分离氨基化合物的旋光异构体，加入诸如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸的手性羧酸或磺酸可使得非对映体的盐形成。
可选择地，通过方法(2)，待拆分的底物与手性化合物的一个对映体反应以形成非对映体对(E.和Wilen,S."Stereochemistry of Organic Compounds(有机化合物的立体化学)",John Wiley&Sons,Inc.,1994,第322页)。可通过使不对称化合物与对映体纯的手性衍生化试剂如薄荷基衍生物反应而形成非对映体化合物，然后分离该非对映体并水解以提供纯的或富集的对映体。测定光学纯度的方法包括制成外消旋混合物的手性酯，诸如在例如碱存在下用如(-)氯甲酸薄荷酯制备的薄荷酯，或Mosher酯α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酸酯，(Jacob III.J.Org.Chem.,(1982)47:4165)，并且为了两种阻转异构对映体或非对映体的存在而分析1H NMR谱。阻转异构体化合物的稳定的非对映体可通过正相和反相色谱法参照用于分离阻转异构的萘基-异喹啉的方法(WO 96/15111)而分离并离析。
通过方法(3)，可通过使用手性固定相的色谱法分离两种对映体的外消旋混合物("Chiral Liquid Chromatography(手性液相色谱法)"(1989)W.J.Lough,编辑,Chapman和Hall,New York；Okamoto,J.of Chromatogr.,(1990)513:375-378)。可通过用于区分具有不对称碳原子的其他手性分子的方法，例如旋光性和圆二色性来区分富集的或纯化的对映体。
施用和药物制剂
本发明化合物可通过适于待治疗的病症的任何方便途径来施用。合适的途径包括口服、肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬膜外)、透皮、直肠、鼻、局部(包括颊面和舌下)，阴道、腹膜内、肺内和鼻内。
所述化合物可以任何方便的施用形式施用，所述施用形式例如片剂、粉剂、胶囊、溶液、分散体、悬浮液、糖浆、喷雾剂、栓剂、凝胶、乳剂、贴片等。这样的组合物可包含在药物制剂中的常规组分，例如稀释剂、载体、pH调节剂、增甜剂、填充剂和另外的活性剂。如果需要肠胃外施用，则组合物将是无菌的，并且是适于注射或输注的溶液或悬浮液形式。
通过将本发明化合物与载体或赋形剂混合而制备了典型的制剂。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员公知的并且在例如以下文献中详细描述：Howard C.Ansel等人,Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems(药物剂型和药物递送系统),(第8版2004)；Alfonso R.Gennaro等人,Remington:The Science and Practice of Pharmacy(雷明顿：药剂学科学与实践),(第20版2000)；和Raymond C.Rowe,Handbook of PharmaceuticalExcipients(药物赋形剂手册),(第5版.2005)。制剂还可包括一种或多种缓冲液、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂(opaquing agent)、助流剂、操作助剂、着色剂、增甜剂、芳香剂、调味剂、稀释剂和其他已知的添加剂以提供药物(即，本发明化合物或其药物组合物)的优越表现或有助于制造药品(即，药物)。
本发明的一个实施方案包括含有式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐的药物组合物。在进一步的实施方案中，本发明提供了含有式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
采用本发明化合物治疗的方法
本发明包括通过施用一种或多种本发明化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐而治疗或预防疾病或病症的方法。在一个实施方案中，采用式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、佐剂或媒介物以可检测地抑制AKT活性的量治疗人类患者。
在本发明的另一实施方案中，提供了治疗哺乳动物的过度增殖疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐施用于所述哺乳动物。
在另一实施方案中，一种治疗或预防需要这样的治疗的哺乳动物中的癌症的方法，其中所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐施用于所述哺乳动物。所述癌症选自乳癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、骨髓疾患、淋巴疾患、毛细胞癌、口腔和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口腔癌、咽癌、小肠癌、结肠-直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌、Hodgkin癌和白血病。本发明的另一实施方案提供了式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐在制造用于治疗癌症的药物中的用途。
在另一实施方案中，一种治疗或预防由AKT调节的疾病或疾患的方法，所述方法包括将有效量的式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐施用于需要这样的治疗的哺乳动物。这样的疾病和疾患的实例包括，但不限于，(1)心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；(2)肺：支气管癌(鳞状上皮细胞、未分化小细胞、未分化大细胞、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨性过误瘤(chondromatous hanlartoma)、间皮瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌；(3)肠胃：食道(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管腺癌、胰岛素瘤、胰升糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽瘤)、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；(4)生殖泌尿道：肾(腺癌、维尔姆斯瘤[肾胚细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤；(5)肝：肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；(6)骨：骨源性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(osteochronfroma)(骨软骨性外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；(7)神经系统：头骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤(meningiosarcoma)、神经胶质瘤病)、脑(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、胶质瘤、室鼓膜瘤、生殖细胞瘤[松果体瘤]、多形性成胶质细胞瘤(glioblastomamultifonn)、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；(8)妇科：子宫(子宫内膜癌)、子宫颈(子宫颈癌、肿瘤前期宫颈非典型增生)、卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未归类癌]、粒层泡膜细胞瘤、Sertoli-Leydig细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(环胎性横纹肌肉瘤)、输卵管(癌)；(9)血液：血液(髓细胞性白血病[急性和慢性]、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增殖性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征)、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；(10)皮肤：晚期黑素瘤、恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、胎块发育不良痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、银屑病；(11)肾上腺：成神经细胞瘤；(12)胸部：转移性乳腺癌；乳腺癌；(13)结肠癌；(14)口腔哎；(15)毛细胞性白血病；(16)头颈癌；(17)和其他，包括难治愈的转移疾病(refractory metastatic disease)；卡波西肉瘤；Bannayan-Zonana综合征；和考登病或Lhermitte-Duclos病以及其他类型的过度增殖疾患。
本发明的化合物和方法还可用于治疗诸如以下的疾病和病症：类风湿性关节炎、骨关节炎、克罗恩病、血管纤维瘤、眼病(例如，视网膜血管形成、糖尿病视网膜病、与年龄相关的黄斑变性、黄斑变性等)、多发性硬化、肥胖、再狭窄、自体免疫性疾病、变态反应、哮喘、子宫内膜异位症、动脉粥样硬化、静脉移植物狭窄(vein graft stenosis)、周围吻合的修复移植物狭窄(peri-anastomatic prothetic graft stenosis)、前列腺增生、慢性阻塞性肺病、银屑病、由组织修复引起的神经学损伤的抑制、疤痕组织形成(并可有助于伤口愈合)、多发性硬化、炎性肠病、感染，特别是细菌、病毒、逆转录病毒或寄生虫的感染(通过增加细胞凋亡)、肺病、赘生物、帕金森病、移植排斥(为免疫抑制剂)、败血症性休克等。
本发明的另一实施方案提供了式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐在制造用于治疗过度增殖疾病的药物中的用途。在进一步的实施方案中，本发明提供了式I化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐在制造用于治疗癌症的药物中的用途。在进一步的实施方案中，癌症选自癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。这样的癌症的更具体的实例包括鳞状上皮细胞癌(例如，上皮鳞状上皮细胞癌)，肺癌包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺的腺癌和肺的鳞状细胞癌，腹膜癌、肝细胞癌、包括胃肠癌的胃癌(gastric cancer)或胃癌(stomach cancer)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney cancer)或肾癌(renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、包括黑素瘤的皮肤癌以及头颈癌。
组合治疗
本发明化合物及其立体异构体和药学上可接受的盐可单独使用，或与用于治疗的其他治疗剂组合使用。本发明化合物可与一种或多种其他药物组合使用，所述其他药物例如通过不同的作用机制起作用的抗炎化合物。药物组合制剂或给药方案的第二化合物优选地对本发明化合物具有互补活性以便它们没有不利地互相影响。这样的分子适当地以有效用于意图目的的量存在于组合中。化合物可在单一药物组合物中一起施用或分开施用，并且当分开施用时，这可同时发生或以任何顺序顺次发生。这样的顺次施用在时间上可以是接近的或者是远离的。
实施例
为了说明本发明，包括了以下实施例。然而，应当理解，这些实施例不限制本发明并且仅意图表明实施本发明的方法。本领域技术人员将认识到，描述的化学反应可容易地适于制备许多本发明的其他化合物，并且用于制备本发明化合物的可选择的方法被视为属于本发明的范围。例如，根据本发明合成未举例说明的化合物可通过对于本领域技术人员显然的改良方法而成功地进行，例如，通过适当地保护干扰基团，通过利用本领域公知的、不同于所描述的试剂的其他合适的试剂，和/或通过对反应条件进行常规的改良。可选择地，本文公开的或本领域公知的其他试剂将被视为适用于制备本发明其他化合物。
在以下所述的实施例中，除非另外说明，否则所有温度均以摄氏度列出。试剂购自商业供应商，如Sigma-Aldrich、Alfa Aesar或TCI，并且不经进一步纯化使用，除非另外说明。
以下列出的反应通常在氮气或氩气的正压力下或采用的干燥管(除非另外说明)在无水溶剂中进行，并且反应烧瓶通常装备橡胶隔片用于经注射器引入底物和试剂。玻璃仪器是烘箱干燥的和/或热干燥的。
柱色谱法在具有硅胶柱的Biotage系统(制造商：Dyax Corporation)上或在硅石SepPak柱(silica SepPak cartridge)(Waters)上进行(除非另外说明)。在以400MHz运行的Varian仪器上记录1H NMR谱。获得CDCl3[使用氯仿(7.25ppm)作为参考标准]、d6-DMSO[使用DMSO(2.50ppm)作为参考标准]、CH3OD[使用甲醇(3.31ppm)作为参考标准]或d6-丙酮[使用丙酮(2.05ppm)作为参考标准]溶液(以ppm报导)的1H-NMR谱。可选择地，四甲基硅烷可用作内标标准品(0.00ppm)。当峰多重性被报导时，使用以下缩写：s(单峰)，d(二重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，br(宽峰)，dd(双二重峰)，dt(双三重峰)。当给出耦合常数时，其以赫兹(Hz)报导。
实施例A
AKT-1激酶测定
本发明中描述的化合物的活性可通过以下激酶测定来确定，所述激酶测定通过使用商业可得的IMAP试剂盒的荧光偏振测量全长人类重组体活性AKT-1对荧光标记肽的磷酸化。
测定原料得自IMAP AKT测定散装试剂盒(AKT Assay Bulk Kit)，产品编号R8059，来自Molecular Devices,Sunnyvale,CA。该试剂盒原料包括IMAP反应缓冲液(5×)。稀释的1×IMAP反应缓冲液包含10mM Tris-HCl，pH 7.2、10mM MgCl2、0.1％BSA、0.05％NaN3。使用前立即将DTT常规地加至1mM的最终浓度。还包含IMAP结合缓冲液(Binding Buffer)(5×)和IMAP结合试剂。按照1:400将IMAP结合试剂稀释到1×IMAP结合缓冲液中制备结合溶液。
荧光标记的AKT底物(Crosstide)具有序列(Fl)-GRPRTSSFAEG。在1×IMAP反应缓冲液中配制20μM储备溶液。
使用的板包括用于化合物稀释和用于制备化合物-ATP混合物的Costar3657(由聚丙烯制成的并具有白色的v-底的382-孔)。测定板是PackardProxyPlateTM-384F。
使用的AKT-1是由用PDK1和MAP激酶2活化的全长人类重组AKT-1制成。
为了进行该测定，制备了在二甲亚砜(“DMSO”)中10mM的化合物的储备溶液。该储备溶液和对照化合物以1:2连续稀释9次至DMSO(10μL化合物+10μL DMSO)中以得到跨越所期望的剂量范围的50×稀释系列。接着，2.1-μL在DMSO中的化合物的等分试样被转移至含有50μL在1×IMAP反应缓冲液中的10.4μM ATP的Costar 3657板中，该缓冲液含有1mM DTT。充分混合后，将2.5-μL等分试样转移至ProxyPlateTM-384F板。
通过加入含有200nM荧光标记的肽底物和4nM AKT-1的溶液的2.5-μL等分试样开始该测定。将板以1000g离心分离1分钟并在环境温度下孵育60分钟。然后，该反应通过加入15μL结合溶液而猝灭，再次离心并在环境温度下孵育另外的30分钟，然后在设定为测量荧光偏振的Victor 1420Multilabel HTS计数器上读数。
在以上测定中测试了代表性化合物并发现它们具有小于10μM的IC50值。
实施例1
(5R,7R)-4-(4-((S)-(4-氯苯基)(2-(二甲基氨基)乙氧基)甲基)哌啶-1-基)-5- 甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇
步骤1：将4-(4-氯苯甲酰)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.63g,11.2mmol)溶于乙醇(100mL)，然后将四氢硼酸钠(424mg,112mmol)加入该溶液。反应混合物在室温下搅拌3h。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。将粗的反应混合物浓缩，然后残余物用EtOAc(100mL)稀释并用水(2×50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥、过滤并浓缩以得到4-((4-氯苯基)(羟基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.46g,94％)，其直接用于下一步。m/z:326(MH+)
步骤2：向4-((4-氯苯基)(羟基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.25g,3.84mmol)的DMF(50mL)溶液中加入在矿物油中的氢化钠60％w/w分散体(384mg,9.59mmol)。反应混合物在室温下搅拌10分钟然后加入2-氯-N,N-二甲基乙胺盐酸盐(608mg,4.22mmol)。反应混合物在70℃下搅拌12h。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。将反应混合物冷至室温并用EtOAc(50mL)稀释，并且用水中的10％LiCl(2×50mL)，然后用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到4-((4-氯苯基)(2-(二甲基氨基)乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯，其通过反相HPLC纯化然后通过SFC分离对映体(253mg和246mg,33％)m/z:397(MH+)
步骤3：向4-((4-氯苯基)(2-(二甲基氨基)乙氧基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(156mg,0.39mmol)的甲醇(1mL)溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(1mL,4.0mmol)。反应混合物在室温下搅拌2h。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。除去溶剂，并且(S)-2-((4-氯苯基)(哌啶-4-基)甲氧基)-N,N-二甲基乙胺不经进一步纯化而用于下一步。m/z:297(MH+)
步骤4：在0℃下，向(5R,7R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(65mg,0.196mmol)在THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中加入氢氧化锂(19mg,0.39mmol)。反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后将其温至室温并搅拌2h。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。除去THF并加入水(5mL)。残余物用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机层用NaHCO3(10mL)、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物用1-丁醇(2mL)稀释，并加入粗制(S)-2-((4-氯苯基)(哌啶-4-基)甲氧基)-N,N-二甲基乙胺，然后加入DIPEA(0.39mL,2.2mmol)。将反应混合物加热至135℃并搅拌4h。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。蒸发溶剂并以硅胶(0％-6％2N NH3于MeOH/DCM中)梯度洗脱纯化残余物，得到泡沫状(5R,7R)-4-(4((S)-(4-氯苯基)(2-(二甲基氨基)乙氧基)甲基)哌啶-1-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇(78mg,98％).m/z:445(M+)；1H NMR(DMSO d6):9.33(br s,1H),8.61(s,1H),7.48(d,2H,J＝8.2Hz),7.34(d,2H,J＝8.2Hz),5.14-5.11(m,1H),4.69-4.66(m,1H),4.41-4.39(m,1H),4.16-4.14(m,1H),3.45-3.04(m,7H),2.81-2.75(m,6H),2.13-2.00(m,4H),1.39-1.70(m,3H),1.11(d,3H,J＝6.8Hz).
实施例2
(5R,7R)-4-(4-((R)-(4-氯苯基)(2-(二甲基氨基)乙氧基)甲基)哌啶-1-基)-5- 甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇
在0℃下，向(5R,7R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(65mg,0.196mmol)在THF(1mL)和水(1mL)的溶液中加入氢氧化锂(19mg,0.39mmol)。反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后将其温至室温并搅拌2h。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。除去THF并加入水(5mL)。残余物用EtOAc(3×10mL)萃取。合并的有机层用NaHCO3(10mL)、盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗产物用1-丁醇(2mL)稀释并加入粗制(R)-2-((4-氯苯基)(哌啶-4-基)甲氧基)-N,N-二甲基乙胺，然后加入DIPEA(0.39mL,2.2mmol)。将反应混合物加热至135℃并搅拌4h。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。蒸发溶剂并以硅胶(0％-6％2N NH3于MeOH/DCM中)梯度洗脱纯化残余物，得到白色泡沫状(5R,7R)-4-(4-((R)-(4-氯苯基)(2-(二甲基氨基)乙氧基)甲基)哌啶-1-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇(78mg,98％)。m/z:445(M+)；1H NMR(DMSO d6)δ(ppm)9.46(br s,1H),8.63(s,1H),7.48(d,2H,J＝8.0Hz),7.35(d,2H,J＝8.1Hz),5.18-5.15(m,1H),4.59-4.55(m,2H),4.20-4.16(m,1H),3.58-3.24(m,6H),3.03-2.98(m,1H),2.81-2.75(m,6H),2.14-2.01(m,4H),1.36-1.21(m,3H),1.13(d,3H,J＝6.9Hz).
实施例3
N-((S)-1-氨基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基)-5-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊 二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-甲酰胺
步骤1：将(R)-(+)-长叶薄荷酮(76.12g,0.5mmol)、无水NaHCO3(12.5g)和无水醚(500mL)加入1L圆底烧瓶。在氮气下，用冰浴使反应混合物冷却。经30分钟滴加溴(25.62mL,0.5mmol)。将混合物过滤，并小心加入到冰冷却浴中的NaOEt(21％,412mL,1.11mmol)。该混合物在室温下搅拌过夜，然后加入5％HCl(1L)和醚(300mL)。水相用醚(2×300mL)萃取。合并的有机相用水洗涤，干燥并浓缩。将残余物加入加温的盐酸氨基脲(37.5g)和NaOAc(37.5g)的水(300mL)溶液。接着加入沸腾的乙醇(300mL)以得到澄清溶液。将混合物回流2.5小时，然后在室温下搅拌过夜。用水(1L)和醚(300mL)处理混合物。水相用醚(2×300mL)萃取。合并的有机相用水洗涤，干燥并浓缩。通过真空蒸馏(73℃-76℃，以0.8mm Hg)纯化残余物以得到(2R)-2-甲基-5-(丙-2-亚基)环戊烷羧酸乙酯(63g,64％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ4.13(m,2H),3.38(d,J＝16Hz,0.5H),2.93(m,0.5H),2.50-2.17(m,2H),1.98(m,1H),1.76(m,1H),1.23(m,6H),1.05(m,6H).
步骤2：用干冰/异丙醇将乙酸乙酯(100mL)中的(2R)-2-甲基-5-(丙-2-亚基)环戊烷羧酸乙酯(24g,0.122mol)冷却至–68℃。将含臭氧化的氧气(5-7ft3h-1O2)鼓泡进入该溶液，持续3.5小时。在室温下用氮气吹扫反应混合物，直至颜色消失。真空下除去乙酸乙酯，然后将残余物溶于乙酸(150mL)并通过冰水冷却。然后加入锌粉(45g)。将溶液搅拌30分钟，然后过滤。滤液用2N NaOH(1.3L)和NaHCO3中和。水相用醚(3×200mL)萃取。将有机相合并，用水洗涤，干燥并浓缩以提供(2R)-2-甲基-5-氧代环戊烷羧酸乙酯(20g,96％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ4.21(m,2H),2.77(d,J＝11.2Hz,1H),2.60(m,1H),2.50-2.10(m,3H),1.42(m,1H),1.33(m,3H),1.23(m,3H).
步骤3：将在水(60mL)中的KOH(8.3g,147.9mmol)加入(2R)-2-甲基-5-氧代环戊烷羧酸乙酯(20g,117.5mmol)与硫脲(9.2g,120.9mmol)的混合物在乙醇(100mL)中的溶液。该混合物回流10小时。冷却后，除去溶剂，并在0℃下用浓HCl(12mL)中和残余物。然后用DCM(3×150mL)萃取混合物。除去溶剂，并通过硅胶色谱用己烷/乙酸乙酯(2:1)洗脱来纯化残余物以得到(R)-2-巯基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(12g,56％).MS(APCI+)[M+H]+183.
步骤4：将阮内镍(15g)和NH4OH(20mL)加入(R)-2-巯基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(12g,65.8mmol)在蒸馏水(100mL)中的悬浮液。混合物回流3小时，然后过滤。将滤液浓缩以提供(R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(9.89g,99％)。MS(APCI+)[M+H]+151.
步骤5和步骤6描述了起始于(R)-2-甲基-5-氧代环戊烷羧酸乙酯可选择地合成(R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇。
步骤5：将乙酸铵(240g,3110mmol)加入(R)-2-甲基-5-氧代环戊烷羧酸乙酯(106g,623mmol)的MeOH(1.2L)溶液。在氮气下，该反应混合物在室温下搅拌20小时，其后，通过TLC和HPLC确定其完成。将反应混合物浓缩以除去MeOH。将所得残余物溶于DCM，用H2O洗涤两次，用盐水洗涤一次，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩以得到油状的(R)-2-氨基-5-甲基环戊-1-烯羧酸乙酯(102g,97％收率)。LC/MS(APCI+)m/z 170[M+H]+.
步骤6：将在甲酰胺(303.5mL,7640mmol)中含有(R)-2-氨基-5-甲基环戊-1-烯羧酸乙酯(161.6g,955mmol)和甲酸铵(90.3g,1433mmol)的溶液加热至150℃的内部温度并搅拌17小时。将反应混合物冷却，并转移至2L单颈瓶(single nextracted flask)。然后通过高真空蒸馏除去过量的甲脒。甲脒停止馏出后，将蒸馏釜中余下的油溶于DCM并用盐水(3×200mL)洗涤。将合并的含水洗液用DCM萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将所得的油溶于最小限度的DCM，然后使用分液漏斗将该溶液加入搅拌的醚溶液(约5体积醚对DCM溶液)，导致形成一些沉淀。该沉淀通过经中等玻璃料漏斗(medium frit funnel)过滤而除去，所述漏斗用醚淋洗并处理。将滤液浓缩，用醚研碎，再重复2次，然后在高真空线上干燥以得到浆糊状固体的(R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(93.2g,65.0％收率)。LC/MS(APCI-)m/z 149.2.
步骤7：将(R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(5.8g,38.6mmol)在POCl3(20mL)中的混合物回流5分钟。真空下除去过量的POCl3，并将残余物溶于DCM(50mL)。然后将混合物加入饱和NaHCO3溶液(200mL)。用DCM(3×100mL)萃取水相，并将合并的有机相干燥并浓缩。所得残余物通过硅胶色谱法用乙酸乙酯洗脱来纯化以得到(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(3.18g,49％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.81(s,1H),3.47(m,1H),3.20(m,1H),3.05(m,1H),2.41(m,1H),1.86(m,3H),1.47(m,3H).
步骤8：将Pd(PPh3)4(10mg,0.09mmol)加入(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并-[d]-嘧啶(300mg,1.78mmol)的脱气溶液和0.5M 5-乙氧基羰基-2-噻吩基溴化锌的THF(3.6mL,1.78mmol)溶液中。将反应混合物在70℃下搅拌16小时，然后将其冷至室温并用乙醚(10mL)稀释。加入水(5mL)然后形成沉淀并过滤。用更多的乙醚洗涤固体并浓缩滤液。所得的油在硅胶(0％-75％EtOAc/己烷)上纯化以得到油状的(R)-5-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸乙酯(400mg,78％)。m/z:289(MH+),1HNMR(CDCl3):δ(ppm)8.95(s,1H),7.84-7.82(m,1H),7.70-7.69(m 1H),4.39(dq,2H,J1＝7.2Hz,J2＝1.2Hz),3.77(quint.,1H,J＝7.2Hz),3.23-1.14(m,1H),3.001-2.95(m,1H),2.42-2.31(m,1H),1.98-1.92(m,1H),1.40(dt,3H,J1＝7.2Hz,J2＝1.2Hz),1.29(d,3H,J＝7.2Hz).
步骤9：将1N氢氧化钠的水(2.4mL)溶液加入(R)-5-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸乙酯(236mg,0.818mmol)的乙醇(2.5mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌16小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。加入水(5mL)，然后该溶液用1N HCl(1mL)酸化并用EtOAc(3×5mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。所得(R)-5-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸不经进一步纯化而使用。m/z:261(MH+).
步骤10：将四氢硼酸锂(190mg,8.50mmol)的THF(4mL)溶液冷至0℃。滴加三甲基氯硅烷(2.2mL,17mmol)。混合物在室温下搅拌20分钟然后回到0℃。然后加入(S)-2-氨基-3-(2,4-二氯苯基)丙酸(1.00g,4.27mmol)。允许反应缓慢温至室温，同时搅拌过夜。将混合物冷至0℃，并通过缓慢加入甲醇(1mL)然后缓慢加入2N氢氧化钠水溶液(4.2mL,8.54mmol)猝灭。减压下除去挥发物。浆料用水(5mL)稀释并用DCM(3×15mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以提供(S)-2-氨基-3-(2,4-二氯苯基)丙-1-醇固体，其不经进一步纯化而用于下一步。MS m/z 220(M+).
步骤11：将二碳酸二叔丁酯(850mg,3.90mmol)加入(S)-2-氨基-3-(2,4-二氯苯基)丙-1-醇(859mg,3.90mmol)的CHCl3(10mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌18小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。减压下除去溶剂，并将所得残余物在硅胶上纯化(49:49:2DCM:EtOAc:MeOH)以得到(S)-1-(2,4-二氯苯基)-3-羟基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯固体(1.17g,94％)。MS m/z 320(M+)；1H NMR(CDCl3):δ(ppm)7.38(s,1H),7.23-7.17(m,2H),4.84-4.82(m,1H),3.95-3.87(m,1H),3.74-3.68(m,1H),3.63-3.55(m,1H),3.02-2.98(m,2H),2.31(br s,1H),1.39(s,9H).
步骤12：将(S)-1-(2,4-二氯苯基)-3-羟基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(50mg,0.156mmol)的DCM(1mL)溶液冷至0℃。加入三乙胺(24μL,0.172mmol)，然后加入甲磺酰氯(24μL,0.312mmol)。允许反应混合物缓慢温至室温并搅拌4小时。反应混合物的TLC分析显示不再有起始物质。加入乙醚并过滤沉淀。将滤液浓缩，然后用DMF(0.5mL)稀释所得残余物，并加入叠氮化钠(51mg,0.781mmol)。将反应混合物加热至100℃，持续16小时。混合物的LC-MS显示不再有起始物质。加入水(5mL)，并用乙醚(3×5mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。以硅胶(0％-70％EtOAc/己烷)梯度洗脱纯化粗产物，得到油状的(S)-1-叠氮基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(32mg,59％)。m/z 345(M+)；1HNMR(CDCl3)δ(ppm)7.39(s,1H),7.21-7.17(m,2H),4.71-4.68(m,1H),4.07-4.02(m,1H),3.52-3.38(m,2H),2.95-2.86(m,2H),1.38(s,9H).
步骤13：将TFA(0.56mL,7.24mmol)加入(S)-1-叠氮基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.290mmol)的DCM(2mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌1小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。除去溶剂，并将残余物与甲苯(3×10mL)共蒸发。(S)-1-叠氮基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-胺不经进一步纯化而被带入下一步。m/z 246(MH+).
步骤14：将(S)-1-叠氮基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-胺(33mg,0.134mmol)加入(R)-5-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸(35mg,0.134mmol)的DCM(0.7mL)溶液。加入HBTU(56mg,0.148mmol)然后加入DIPEA(0.23mL,1.34mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。除去溶剂，并以硅胶(0％-50％EtOAc/己烷)梯度洗脱纯化所得残余物，得到油状的N-((S)-1-叠氮基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基)-5-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-甲酰胺(59mg,90％)。m/z 486(MH+).
步骤15：将10％Pd/C(6mg)加入N-((S)-1-叠氮基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基)-5-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-甲酰胺(59mg,0.121mmol)的甲醇(2.5mL)溶液。将溶液置于真空下并用H2(3×)吹扫，然后反应混合物在氢气氛下搅拌2小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。将反应混合物过滤并浓缩以得到泡沫状N-((S)-1-氨基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基)-5-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-甲酰胺(53mg,95％)。m/z 461(M+)；1H NMR(DMSO d6)δ(ppm)8.91(s,1H),8.58-8.56(m,1H),7.90(br s,2H),7.84(d,1H,J＝4.3Hz),7.78(d,1H,J＝4.1Hz),7.60(m,1H),7.39-7.33(m,2H),4.55-4.42(m,1H),3.87-3.77(m,1H),3.19-2.84(m,6H),2.33-2.26(m,1H),1.88-1.82(m,1H),1.18(d,3H,J＝6.9Hz).
实施例4
N-((S)-1-氨基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基)-5-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二 氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-甲酰胺
步骤1：在0℃下，将m-CPBA(1.06g,6.12mmol)分批加入(R)-5-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸甲酯(883mg,3.06mmol)的CHCl3(20mL)溶液。反应混合物在0℃下搅拌10分钟，然后将其温至室温并搅拌18小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。将反应混合物冷至0℃，并滴加入Na2S2O3(968mg,6.12mmol)的水(5mL)溶液，然后加入Na2CO3(649mg,6.12mmol)的水(10mL)溶液。反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后将其温至室温并用CHCl3(3×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到油状的N-氧化物。将粗产物溶于乙酸酐(5.8mL,61.2mmol)，然后将溶液加热至90℃持续2小时。然后在减压下除去过量的乙酸酐，并将残余物溶于DCM(20mL)，并缓慢倾入冷至0℃的、搅拌的Na2CO3饱和水溶液。该混合物用DCM(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到油状物。将该油状物溶于THF(15mL)，并加入LiOH(366mg,7.65mmol)的水(2.2mL)溶液。在N2下，将反应混合物在室温下搅拌16小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。加入水(10mL)，并用EtOAc(3×10mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到固体，该固体通过反相HPLC纯化以得到(R)-5-(7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸(336mg,40％)，其为非对映体混合物。m/z 277(MH+).
步骤2：将三甲基硅烷基重氮甲烷(1.10mmol)滴加入(R)-5-(7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸(200mg,0.723mmol)在MeOH(5mL)和Et2O(5mL)中的悬浮液。反应混合物在室温下搅拌1小时，然后在减压下除去溶剂。用DCM(10mL)稀释残余物，然后冷至0℃。加入三乙胺(131μL,0.94mmol)，然后加入对硝基苯甲酰氯(148mg,0.792mmol)。允许反应混合物缓慢温至室温并搅拌4小时。反应混合物的TLC分析显示不再有起始物质。反应混合物通过加入NaHCO3饱和水溶液(5mL)猝灭，然后用DCM(3×10mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。以硅胶(10％-45％EtOAc/己烷)梯度洗脱纯化粗产物，得到5-((5R,7R)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酸基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸甲酯固体(32mg,10％)。m/z 440(MH+)；1H NMR(CDCl3)δ(ppm)9.12(s,1H),8.31-8.26(m,4H),7.87(d,1H,J＝4.0Hz),7.76(d,1H,J＝4.0Hz),6.63(dd,1H,J1＝7.7Hz,J2＝7.8Hz),3.95(s,3H),2.71-2.65(m,1H),2.51-2.43(m,1H),1.43(d,3H,J＝7.1Hz).
步骤3：将氢氧化锂(6mg,0.146mmol)加入5-((5R,7R)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酸基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸酯(32mg,0.073mmol)在THF(0.5mL)和水(0.5mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌1小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。减压下除去THF，然后加入1N HCl(5mL)。反应混合物用EtOAc(3×5mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以得到5-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸。该粗制混合物不经进一步纯化而直接用于下一步。
步骤4：将(S)-1-叠氮基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-胺(20mg,0.0724mmol)加入5-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-羧酸(35mg,0.145mmol)的DCM(0.5mL)溶液。加入DMF(125μL)以完全溶解起始物质。加入DIPEA(126μL,0.724mmol)，然后加入HBTU(30mg,0.079mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。除去溶剂，然后通过反相HPLC纯化所得残余物以得到N-((S)-1-叠氮基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基)-5-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-甲酰胺固体产物(4mg,10％)。m/z 504(MH+).
步骤5：将10％w/w Pd/C(1mg)加入N-((S)-1-叠氮基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基)-5-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-甲酰胺(4.0mg,0.008mmol)的MeOH(0.5mL)溶液。然后将该溶液置于真空下，并用H2(3×)吹扫。然后将反应混合物在氢气氛下搅拌2小时。该反应混合物的LC-MS分析显示不再有起始物质。将反应混合物过滤，然后浓缩以得到N-((S)-1-氨基-3-(2,4-二氯苯基)丙-2-基)-5-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)噻吩-2-甲酰胺固体(3.7mg,98％)。m/z 477(M+).1H NMR(DMSO d6)δ(ppm)8.91(s,1H),8.58-8.56(m,1H),7.90(br s,2H),7.84(d,1H,J＝4.3Hz),7.78(d,1H,J＝4.1Hz),7.60(m,1H),7.39-7.33(m,2H),5.22-5.17(m,1H),4.59-4.50(m,1H),3.87-3.77(m,1H),3.19-2.84(m,5H),2.33-2.26(m,1H),1.88-1.82(m,1H),1.13(d,3H,J＝6.9Hz).
实施例5
(5R,7R)-4-(4-(4-(4-氯苯基)哌啶-4-基)苯基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二 烯并[d]嘧啶-7-醇
步骤1：将乙酸铵(240g,3110mmol)加入(R)-2-甲基-5-氧代环戊烷羧酸乙酯(106.0g,622.8mmol)的MeOH(1.2L)溶液。在氮气下，将反应混合物在室温下搅拌20小时。通过TLC和HPLC确定反应完成。将反应混合物浓缩以除去MeOH。将所得残余物溶于DCM，用H2O洗涤两次，用盐水洗涤一次，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩以得到油状的(R)-2-氨基-5-甲基环戊-1-烯羧酸乙酯(102g,97％收率)。LC/MS(APCI+)m/z 170[M+H]+.
步骤2：将在甲酰胺(303.5mL,7640mmol)中含有(R)-2-氨基-5-甲基环戊-1-烯羧酸乙酯(161.6g,955.0mmol)和甲酸铵(90.3g,1430mmol)的溶液加热至150℃的内部温度并搅拌17小时。将反应混合物冷却，然后转移至2L单颈瓶。然后通过高真空蒸馏除去过量的甲脒。甲脒停止馏出后，将蒸馏釜中余下的油溶于DCM并用盐水(3×200mL)洗涤。将合并的含水洗液用DCM萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将所得的油溶于最小限度的DCM，然后使用分液漏斗将该溶液加入搅拌的醚溶液(约5体积醚对DCM溶液)，导致形成一些沉淀。该沉淀通过经中等玻璃料漏斗的过滤而除去，所述漏斗用醚淋洗并处理。将滤液浓缩，在醚中研碎，再重复2次，然后在高真空线中干燥以得到浆糊状固体的(R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(93.23g,65.00％收率)。LC/MS(APCI-)m/z 149.2.
步骤3：将纯的POCl3(463.9mL,5067mmol)通过加料漏斗缓慢加入0℃的(R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(152.2g,1013mmol)的DCE(1.2L)溶液。添加完成时，将反应混合物温至室温。然后将反应混合物加热至回流并搅拌70分钟。通过HPLC确定反应完成。将反应混合物冷至室温，并如下将过量的POCl3分4份猝灭：将反应混合物转移至分液漏斗并滴入在冰浴中冷却的含有冰和饱和NaHCO3溶液的烧杯。反应混合物的每一部分添加完成后，则将猝灭的混合物搅拌30分钟以确保完全破坏POCl3，然后转移至分液漏斗。将混合物转移至分液漏斗并用DCM萃取两次。将合并的萃取物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。如下在硅胶上纯化粗产物：在3L玻璃漏斗(fritted funnel)上，将硅胶(1kg)在9:1己烷:乙酸乙酯中制成浆料，二氧化硅在真空下沉降并用沙盖上。用DCM/己烷混合物装载粗产物并在真空下用1L侧口烧瓶(sidearm flask)洗脱化合物以得到油状的(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(104.4g,61.09％收率)。
步骤4：将固体77％最大量的m-CPBA(12g,53mmol)分批加入0℃下的(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(5g,30mmol)的CHCl3(80mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物冷至0℃，然后通过加入NaHCO3(25g,196mmol)在水(100mL)中的浆料处理。这之后滴加入在水(100mL)中的Na2CO3(14g,128mmol)。反应混合物搅拌30分钟。水相用CHCl3萃取。有机相用MgSO4干燥并在减压、低温下(<25℃)浓缩以提供粗制(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶1-氧化物(5.5g,100％)，其不经进一步纯化而用于下一步。
步骤5：将(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶1-氧化物(5.5g,29.8mmol)的Ac2O(40.5mL,429mmol)溶液加热至110℃持续3小时。冷却后，蒸发乙酸酐，然后将所得残余物溶解在DCM中。将该溶液加入搅拌的、饱和的NaHCO3冷溶液中。各层用DCM萃取，MgSO4干燥，过滤并浓缩。将粗制油状物用20％EtOAc/己烷洗脱来色谱法分离(Biotage)以提供(5R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基乙酸酯(3.0g,44.4％)。
步骤6：将(5R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基乙酸酯(11.86g,52.33mmol)在2:1THF:H2O(270mL)中的溶液冷却至0℃并用氢氧化锂水合物(3.95g,94.2mmol)处理。反应在室温下搅拌4小时。将反应浓缩并用水稀释，然后用6N HCl酸化至pH 6。水层用EtOAc萃取。合并的有机物用盐水洗涤，MgSO4干燥，过滤并浓缩。粗制残余物用30-50％EtOAc/己烷洗脱来色谱法分离(Biotage 65)以得到(5R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇(6.09g,63％)。
步骤7：在0℃下，将固体4-硝基苯甲酰氯(6.73g,36.3mmol)加入(5R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇(6.09g,33.0mmol)和NEt3(5.98mL,42.9mmol)在DCM(165mL)中的搅拌溶液。将反应温至室温，然后在室温下搅拌3小时。将反应用DCM和饱和NaHCO3水溶液稀释。将合并的萃取物用盐水洗涤，MgSO4干燥，过滤并浓缩。粗制残余物用10％-14％EtOAc/己烷洗脱色谱法分离若干次以得到(5R,7S)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(3.96g,36％)和(5R,7R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(5.92g,54％)。
步骤8：在-78℃、氮气下，将正丁基锂(16mL,2.5M在己烷中的溶液,39.9mmol)加入1-溴-4-氯苯(8.62g,45.0mmol)的无水THF(100mL)溶液。30分钟后，在-78℃下，滴加1-Boc-哌啶酮(6.62g,33.2mmol)的无水THF(5mL)溶液。30分钟后，在-78℃下，将反应用饱和NH4Cl溶液(100mL)猝灭，用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱，用EtOAc/己烷(0–40％)洗脱来纯化以得到4-(4-氯苯基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(7.64g,74％收率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.38(d,J＝7.2Hz,2H),7.15(d,J＝7.3Hz,2H),3.94(br s,2H),3.18(br s,2H),1.89(br s,2H),1.46(s,11H).LCMS:M+1312.2.
步骤9：在0℃、氮气下，将固体三氯化铝(0.68mL,5.1mmol)加入4-(4-氯苯基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.40g,1.3mmol)的溴苯(5.4mL,51.3mmol)溶液。在0℃下搅拌4小时后，该混合物用冰猝灭并在减压下浓缩。将混合物溶于1N LiOH(30mL)并用EtOAc(2×30mL)萃取。将合并的有机物用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将粗产物直接溶解在EtOAc(4mL)和Na2CO3水溶液(2M,4mL)中。一次加入二碳酸二叔丁酯(0.851g,3.9mmol)。将混合物在23℃下搅拌过夜。第二天，将两层分离，并且水层用EtOAc(2×10mL)进一步萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，浓缩并通过柱色谱法(0-40％EtOAc/己烷)纯化以得到4-(4-溴苯基)-4-(4-氯苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.302g,51％收率)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ7.46(d,J＝7.2Hz,2H),7.32(d,J＝6.9Hz,2H),7.19(d,J＝7.0Hz,2H),7.12(d,J＝7.3Hz,2H),3.54(br s,2H),2.35(br s,2H),1.54(br s,2H),1.43(s,11H).LCMS:M+1452.2.
步骤10：在23℃、氮气下，将双频哪醇硼酸酯(93mg,0.37mmol)加入4-(4-溴苯基)-4-(4-氯苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg,0.33mmol)的1,4-二噁烷(5mL)溶液。然后加入乙酸钾(98mg,1.0mmol)，并最后加入1,1’-双(二苯基膦)二茂铁]氯化钯(II)(10mg,0.02mmol)。将混合物在氮气下加热至100℃。3小时后，将反应冷至室温，用H2O(10mL)稀释，并用EtOAc(2×10mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质通过柱色谱法(从100％己烷至4:6EtOAc:己烷的梯度)纯化以得到硼酸酯(120mg,72％收率)。将(5R,7R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(82mg,0.246mmol)加入该硼酸酯(120mg,0.24mmol)，然后加入1,4-二噁烷(3mL)和Na2CO3水溶液(1M,0.3mL)。用氮气冲刷该混合物，并一次加入双(三苯基膦)氯化钯(II)(8.6mg,0.123mmol)。在100℃、氮气下，加热该混合物12小时。然后将反应混合物用0.1N LiOH溶液(10mL)稀释，并萃取至EtOAc(2×10mL)。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过柱色谱法(0-100％EtOAc/己烷)纯化以得到油状的4-(4-氯苯基)-4-(4-((5R,7R)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酸基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(36mg,29％收率)。
步骤11：将4-(4-氯苯基)-4-(4-((5R,7R)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酸基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(36mg,0.069mmol)溶于DCM(3mL)并冷至0℃。然后滴加TFA(1.5mL)。所得溶液在0℃下搅拌1小时，在减压下浓缩，溶于DFM(1mL)并通过反相HPLC(0-100％AcCN/H2O)纯化以得到(5R,7R)-4-(4-(4-(4-氯苯基)哌啶-4-基)苯基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇的二TFA盐(9mg,31％收率)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.09(s,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,2H),7.52(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(q,J＝4.8Hz,4H),5.64(d,J＝6.0Hz,1H),5.06(q,J＝6.8Hz,1H),3.85(br s,1H),3.05(br s,3H),2.89(m,2H),2.61(br s,3H),2.11(m,2H),1.16(t,J＝6.4Hz,3H),1.04(d,J＝6.6Hz,3H).LCMS:M+1420.4.
实施例6
N-((R)-2-(4-氯苯基)-2-(6-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4- 基)-1H-吲哚-3-基)乙基)丙-2-胺
步骤1：将1-((1E)-2-硝基乙烯基)-4-氯苯(0.206g,1.12mmol)加入6-溴吲哚(0.200g,1.02mmol)的甲醇(5mL)溶液，然后加入氨基磺酸(39.6mg,0.40mmol)。将该混合物在80℃下搅拌16小时。将该混合物浓缩，然后用EtOAc(15mL)稀释并用H2O(15mL)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法用EtOAc/己烷(0-50％)洗脱纯化以得到6-溴-3-(1-(4-氯苯基)-2-硝基乙基)-1H-吲哚(0.175g,45.2％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.12(s,1H),7.51(s,1H),7.28(d,J＝8.5Hz,2H),7.25-7.20(m,3H),7.17(d,J＝8.5Hz,1H),7.15(s,1H),5.12(t,1H),5.01(q,1H),4.88(q,1H).
步骤2：将在1,4-二噁烷(5.00mL)中含有6-溴-3-(1-(4-氯苯基)-2-硝基乙基)-1H-吲哚(0.210g,0.553mmol)、双频哪醇硼酸酯(168mg,0.664mmol)和乙酸钾(0.163g,1.66mmol)的溶液去氧，然后加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(II)与二氯甲烷的复合物(22.6mg,0.0276mmol,1:1)。该混合物在80℃下加热15小时。将该混合物冷至环境温度，用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(2×10mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用EtOAc/己烷(0-50％)洗脱纯化以得到纯的硼酸酯(0.146g,74.5％)。将(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(52.4mg,0.311mmol)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(17.5mg,0.0249mmol)加入该硼酸酯(0.146g,0.342mmol)，然后加入乙腈(0.933mL)和KOAc水溶液(0.933mL，1M)。将该混合物冷至环境温度，用H2O(10mL)稀释并用EtOAc(2×10mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱法用EtOAc/己烷(0-100％)洗脱纯化以得到(5R)-4-(3-(1-(4-氯苯基)-2-硝基乙基)-1H-吲哚-6-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(0.115g,85.4％)。LCMS:M+1433.4.
步骤3：将氯化镍六水合物(31.6mg,0.133mmol)在甲醇(10mL,200mmol)中的悬浮液用超声波处理，直至完全溶解。在室温下将四氢硼酸钠(15.1mg,0.398mmol)以小份加入该搅拌的溶液。随着加入的NaBH4越来越多，形成了沉淀。NaBH4添加完成时，允许悬浮液在室温下搅拌30分钟。将(5R)-4-(3-(1-(4-氯苯基)-2-硝基乙基)-1H-吲哚-6-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(115mg,0.266mmol)的MeOH(2mL)溶液加入该搅拌的悬浮液。将四氢硼酸钠(35.2mg,0.930mmol)以小份小心加入该搅拌的悬浮液。在室温下将反应混合物搅拌1小时。反应混合物经硅藻土过滤，然后用NH4OH水溶液(10mL,20％NH4OH溶液)处理滤液。然后用CHCl3(4X 10mL)萃取滤液。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。将粗制2-(4-氯苯基)-2-(6-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙胺带入下一步。LCMS:M+1403.5.
步骤4：将丙酮(0.0195mL,0.266mmol)加入2-(4-氯苯基)-2-(6-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙胺(107mg,0.266mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.139mL,0.797mmol)的二氯甲烷(2.0mL)溶液。反应混合物搅拌10分钟，然后加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.0188g,0.0885mmol)。搅拌2.5小时后加入饱和NaHCO3，并将混合物激烈搅拌10分钟。用DCM(3×10mL)萃取混合物。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过SFC手性色谱法(手性OJH(21.2×250mm)25％甲醇+0.1％TEA)纯化以得到N-((R)-2-(4-氯苯基)-2-(6-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-1H-吲哚-3-基)乙基)丙-2-胺(19.8mg,16.8％)，其为第一峰。LCMS:M+1445.3.1H NMR(CDCl3,400MHz)δ11.16(s,1H),8.93(s,1H),7.93(s,1H),7.49-7.46(m,3H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H),7.31(d,J＝8.5Hz,2H),4.36(t,1H),3.89(m,1H),3.23(m,1H),3.14-2.99(m,2H),2.94-2.86(m,1H),2.77(m,1H),2.34(m,1H),1.68(m,1H),0.96(d,6H),0.92(d,3H).
实施例7
(R)-N-(2-(4-氯苯基)-2-(4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基) 苯氧基)乙基)丙-2-胺
步骤1：将2-丙胺(1.71mL,20.0mmol)加入2-(4-氯苯基)环氧乙烷(2.69g,16.7mmol)和水(6.67mL)的混合物中。该混合物在室温下搅拌。24小时后，加入另外的2-丙胺(1.13mL,13.3mmol)。总共40小时后，加入水(15mL)。用醚(4×50mL)萃取内容物。将合并的醚溶液干燥(Na2SO4)。过滤并蒸发溶剂后，将物质溶于二氯甲烷(100mL)。加入二碳酸二叔丁酯(4.01g,18.4mmol)，然后加入三乙胺(2.56mL,18.4mmol)。混合物在室温下搅拌20小时。加入更多的Boc2O(2g)。4小时后，加入咪唑(1.136g,16.68mmol)。20分钟后，内容物用DCM(50mL)稀释，用1.0M NaH2PO4(2×50mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。通过快速色谱法纯化粗产物得到2-(4-氯苯基)-2-羟基乙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯(3.32g,63％)。
步骤2：将(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(137mg,0.812mmol)和4-羟基苯硼酸(123mg,0.894mmol)溶于异丙醇(1.6mL)。缓慢加入在水中的碳酸钠(0.97mL,1.0M)，然后加入双(三苯基膦)氯化钯(26.5mg,0.0378mmol)。该混合物在100℃(浴)下搅拌16小时。用水(5mL)和EtOAc(10mL)稀释内容物。将水层分离并用EtOAc(2×5mL)萃取。将合并的EtOAc溶液用盐水(5mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。粗产物通过快速色谱法纯化粗产物得到粘性油状的(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯酚(160mg,87％)，其在静置时凝固。
步骤3：在-30℃(浴)下，将偶氮二羧酸二乙酯(0.166mL,1.05mmol)缓慢加入2-(4-氯苯基)-2-羟基乙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯(265mg,0.843mmol)、(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯酚(159mg,0.703mmol)和三苯基膦(276mg,1.05mmol)的四氢呋喃(7.0mL)溶液。允许该混合物温至室温并搅拌过夜。大部分起始物质残留。加入三苯基膦(276mg,1.05mmol)。将内容物冷至-30℃。加入偶氮二羧酸二乙酯(0.166mL,1.05mmol)。该混合物在室温下搅拌4小时。加入2-(4-氯苯基)-2-羟基乙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯(265mg,0.843mmol)。该混合物在室温下搅拌过夜。加入EtOAC(10mL)和水(10mL)。分离有机层。水层用EtOAc(2×10mL)萃取。将合并的有机溶液干燥(Na2SO4)。粗产物通过快速色谱法纯化以得到(R)-2-(4-氯苯基)-2-(4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯氧基)乙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯(26mg,7％)。
步骤4：在0℃下，将三氟乙酸(0.5mL)滴加入(R)-2-(4-氯苯基)-2-(4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯氧基)乙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯(26mg,0.0498mmol)的二氯甲烷(1.0mL)溶液。该混合物在0℃下搅拌10分钟，然后在室温下搅拌2小时。浓缩内容物。所得残余物通过反相HPLC纯化以得到(R)-N-(2-(4-氯苯基)-2-(4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯氧基)乙基)丙-2-胺的TFA盐(7.5mg,23％)。1H NMR(d6-DMSO,500MHz)δ(ppm):8.9(s,1H),8.7(s,br,2H),7.8(t,2H),7.5(m,4H),7.1(d,2H),5.7(d,1H),3.8(m,1H),3.4-3.5(m,2H),3.3-3.4(m,1H),3.0-3.1(m,1H),2.9(m,1H),2.3(m,1H),1.7(m,1H),1.3(dd,6H),0.9(dd,3H).MS(422.3,M+1).
实施例8
(5R,7R)-4-(3-(氨基(4-氯苯基)甲基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪 -7(8H)-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇
步骤1：将1,1-羰基二咪唑(1.60g,9.89mmol)加入2-(叔丁氧羰基氨基)-2-(4-氯苯基)乙酸(2.57g,9.00mmol)的CH2Cl2(22.5mL,9.00mmol)溶液，并将混合物搅拌30分钟直至气体停止释放。然后将肼(0.367mL,11.7mmol)加入该溶液，并将混合物在室温下搅拌12小时。将反应混合物用CH2Cl2稀释并用NaHCO3(10％)洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)并浓缩。将残余物通过反相色谱法(Biotage SP4,40+M,C18,25％至100％MeCN/H2O)纯化。将含有产物的级分倒入分液漏斗并用乙酸乙酯(3×)萃取。将合并的有机层干燥并浓缩以得到1-(4-氯苯基)-2-肼基-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯固体(1.95g,72％)。LCMS(APCI+)M+H+:299(5％)；M+H+-Boc:199(100％)；rt＝2.78分钟。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(s,1H),7.30(s,4H),5.85(d,J＝6.6Hz,1H),5.21(s,1H),3.87(s,2H),1.42(s,9H).
步骤2：在0℃下，将六氟磷酸三乙基氧鎓(3.20g,28.0mmol)加入3-氧代哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.54g,12.7mmol)的CH2CL2(31.7mL)溶液，并将所得溶液在室温下搅拌18小时。将反应混合物用饱和NaHCO3洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓缩以得到油状的3-乙氧基-5,6-二氢吡嗪-1(2H)-羧酸叔丁酯。LCMS(APCI+)M+H-t-Bu:173(40％)；rt＝3.14分钟
步骤3：将3-乙氧基-5,6-二氢吡嗪-1(2H)-羧酸叔丁酯(0.762g,3.34mmol)和1-(4-氯苯基)-2-肼基-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯(1.00g,3.34mmol)的甲苯(6.67mL,3.34mmol)溶液加热至回流，并在该温度下搅拌1小时。将反应混合物冷至室温，用乙酸乙酯稀释，并用水洗涤。将有机层干燥并浓缩以得到残余物，该残余物通过反相色谱法(Biotage SP4,40+M,C18,10％至100％ACN/H2O)纯化以提供3-((叔丁氧羰基氨基)(4-氯苯基)甲基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(0.92g,60％)。LCMS(APCI+)M+H+:463(25％),464(90％),466(25％),467(5％)；rt＝3.56分钟。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33(d,J＝8.6Hz,1H),7.29(d,J＝8.6Hz,1H),6.12(d,J＝7.8Hz,1H),5.87(d,J＝7.8Hz,1H),4.84(d,J＝17.6Hz,1H),4.75(d,J＝17.6Hz,1H),3.93(m,1H),3.80(m,1H),3.73(m,1H),3.49(m,1H),1.47(s,9H),1.41(s,9H).
步骤4：将3-((叔丁氧羰基氨基)(4-氯苯基)甲基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(0.652g,1.41mmol)的MeOH(7.03mL,1.41mmol)溶液用HCl(g)饱和。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后真空浓缩以提供泡沫状(4-氯苯基)(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-基)甲胺二盐酸盐(0.47g,99％)。LCMS(APCI+)M+H+:264(50％),266(10％),267(3％)；rt＝1.76分钟。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ10.62(s,1H),10.18(s,1H),9.43(s,3H),7.57(d,J＝8.6Hz,2H),7.53(d,J＝8.6Hz,2H),6.13(m,1H),4.51(m,2H),4.44(m,1H),3.56(m,3H).
步骤5：将(4-氯苯基)(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-基)甲胺二盐酸盐(50mg,0.149mmol)、(5R,7R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(49.8mg,0.149mmol)和DIEA(0.130mL,0.745mmol)的NMP(0.30mL,0.149mmol)溶液在100℃下加热1天。将粗制反应混合物用甲醇稀释并过滤。将滤液纯化(C18,5％-95％MeCN/H2O+1％TFA)。将含有产物的级分通过用25％NaOH碱化并萃取至CH2Cl2/异丙醇(3:1)而分离。浓缩有机层，并用甲醇稀释残余物。溶液用HCl(g)饱和。蒸发溶液以得到(5R,7R)-4-(3-(氨基(4-氯苯基)甲基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇二盐酸盐(15.3mg,25％)。LCMS(APCI+)rt＝2.28分钟。1H NMR(400MHz,d6-DMSO+3滴D2O)δ8.83(d,J＝7.8Hz,1H),7.55(s,4H),6.02(d,J＝8.6Hz,1H),5.30(m,1H),4.54(m,1H),4.36(m,1H),4.24(m,1H),4.09(m,1H),3.48(m,1H),2.21(m,1H),2.08(m,1H),1.26(m,1H),1.19(m,3H).
实施例9
(5R,7R)-4-(3-(1-(4-氯苯基)-2-(异丙基氨基)乙基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并 [4,3-a]吡嗪-7(8H)-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇
步骤1：采用实施例8，步骤1的程序，使用3-(叔丁氧羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(2.00g,5.85mmol)以提供2-(4-氯苯基)-3-肼基-3-氧代丙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯(1.90g,5.34mmol,91％)。LCMS(APCI+)M+H+:356(100％),358(50％),rt 3.50分钟.
步骤2：采用实施例8，步骤3的程序，使用2-(4-氯苯基)-3-肼基-3-氧代丙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯(1.90g,5.34mmol)以提供3-(2-(叔丁氧羰基(异丙基)氨基)-1-(4-氯苯基)乙基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(1.66g,3.18mmol,60％)。LCMS(APCI+)M+H+:519(66％),520(95％),rt 4.09分钟。
步骤3：采用实施例8，步骤4的程序，使用3-(2-(叔丁氧羰基(异丙基)氨基)-1-(4-氯苯基)乙基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(1.66g,3.18mmol)以提供N-(2-(4-氯苯基)-2-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-基)乙基)丙-2-胺二盐酸盐(0.65g,1.66mmol,52％)。LCMS(APCI+)M+H+:320(100％),322(25％),rt 1.89分钟。
步骤4：采用实施例8，步骤5的程序，使用N-(2-(4-氯苯基)-2-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-基)乙基)丙-2-胺二盐酸盐(95mg,0.15mmol)以提供(5R,7R)-4-(3-(1-(4-氯苯基)-2-(异丙基氨基)乙基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇二盐酸盐(20mg,0.042mmol,28％)。LCMS APCI+(M+H+):rt 2.20分钟。在254nm下的HPLC纯度98％,rt＝1.82分钟。1H NMR(400MHz,d6-DMSO+2滴D2O)δ8.81(d,J＝6.6Hz,1H),7.47(d,J＝8.2Hz,2H),7.40(dd,J＝8.6Hz,3.5Hz,2H),5.48(dd,J＝29,16Hz,1H),5.32(td,J＝8.2,2.0Hz,1H),5.21(dd,J＝32,17Hz,1H),4.84(q,J＝7Hz,1H),4.31(m,2H),3.84(m,1H),3.71(m,1H),3.43(m,4H),2.23(dd,J＝12,8.2Hz,1H),2.12(m,1H),1.26(d,J＝6.6Hz,6H),1.16(t,J＝7.5Hz,3H).
实施例10
(4-氯苯基)(7-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-5,6,7,8- 四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-基)甲胺
采用实施例8，步骤5的程序,使用(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶和(4-氯苯基)(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-基)甲胺二盐酸盐(100mg,0.30mmol)以提供(4-氯苯基)(7-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-基)甲胺二盐酸盐(75mg,0.19mmol,64％)：LCMS APCI+(M+H+):396(60％),398(20％),rt2.48min.在254nm下的HPLC纯度>99％,rt＝1.68min.1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ9.51(s,3H),8.85(d,J＝9.4Hz,1H),7.61(d,J＝7.0Hz,2H),7.55(d,J＝7.8Hz,2H),6.08(br d,J＝9.0Hz,1H),5.42(dd,J＝26Hz,16Hz,1H),5.19(dd,J＝21Hz,18Hz,1H),4.55(m,1H),4.29(m,1H),3.79(m,1H),3.14(m,1H),2.96(m,1H),2.32(m,1H),1.82(m,1H),1.15(t,J＝6.8Hz,2H),1.04(d,J＝6.2Hz,3H).
实施例11
(5R,7R)-4-(3-((R)-1-氨基-2-(4-氯苯基)乙基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a] 吡嗪-7(8H)-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇
步骤1：采用实施例8，步骤1的程序，使用(R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸(3.02g,10.0mmol)以提供(R)-3-(4-氯苯基)-1-肼基-1-氧代丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(3.16g,10.0mmol,>99％)。LCMS APCI+(M+H+):314(95％),316(40％),rt 2.92分钟。
步骤2：采用实施例8，步骤2和步骤3的程序，使用(R)-3-(4-氯苯基)-1-肼基-1-氧代丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(3.16g,10.0mmol)以提供(R)-3-(1-(叔丁氧羰基氨基)-2-(4-氯苯基)乙基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(4.03g,8.43mmol,84％)。LCMS APCI+(M+H+):477(20％),478(80％),479(20％),rt 3.63分钟。
步骤3：采用实施例8，步骤4的程序，使用(R)-3-(1-(叔丁氧羰基氨基)-2-(4-氯苯基)乙基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-羧酸叔丁酯(4.03g,8.43mmol)以提供(R)-2-(4-氯苯基)-1-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-基)乙胺二盐酸盐(2.47g,7.06mmol,84％)。LCMS APCI+(M+H+):278(100％),rt 1.91分钟。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ10.57(br s,1H),10.43(br s,1H),9.05(br s,3H),7.33(d,J＝8.6Hz,2H),7.20(d,J＝8.6Hz,2H),4.95(br s,1H),4.52(m,3H),3.92(m,1H),3.51(m,2H),3.38(m,2H).
步骤4：采用实施例8，步骤5的程序，使用(R)-2-(4-氯苯基)-1-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-基)乙胺二盐酸盐(66mg,0.114mmol)以提供(5R,7R)-4-(3-((R)-1-氨基-2-(4-氯苯基)乙基)-5,6-二氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8H)-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇盐酸盐(49mg,0.046mmol,40％)。LCMS APCI+(M+H+):426(100％),428(20％),rt 2.17分钟。在254nm下的HPLC纯度>99％,rt＝1.73分钟。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ8.98(s,3H),8.85(s,1H),7.30(d,J＝7.8Hz,2H),7.15(d,J＝8.2Hz,2H),5.30(m,1H),5.23(s,2H),4.85(br s,1H),4.35(m,1H),4.00(m,1H),3.76(m,1H),3.70(s,1H),3.61(s,1H),3.51(m,1H),3.40(m,1H),3.27(m,1H),2.16(m,2H),1.15(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例12
(5R,7R)-4-(4-(1-(4-氯苯基)-2-(异丙基氨基)乙基氨基)苯基)-5-甲基-6,7- 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇盐酸盐
步骤1：将TMSCN(19.9mL,149mmol)加入4-氯苯甲醛(20.0g,142mmol)、4-溴苯胺(25.1g,146mmol)和氨基磺酸(0.691g,7.11mmol)的MeOH(56.9mL)溶液，并将反应混合物在室温下搅拌6小时。将反应混合物过滤并用乙醇洗涤滤饼，得到2-(4-溴苯基氨基)-2-(4-氯苯基)乙腈固体(38.0g,83％)。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ7.53(d,J＝8.2Hz,2H),7.44(d,J＝8.6Hz,2H),7.37(d,J＝9.0Hz,2H),6.64(d,J＝9.0Hz,2H),5.38(d,J＝9.0Hz,1H),4.06(d,J＝9.0Hz,1H).
步骤2：在-78℃下，将THF(1.0M)中的氢化铝锂(52.9mL,52.9mmol)加入2-(4-溴苯基氨基)-2-(4-氯苯基)乙腈(20.0g,62.2mmol)的THF(311mL,62.2mmol)溶液。允许反应在-78℃下搅拌并经4小时逐渐温至室温。将反应混合物倒入1N HCl。然后将溶液碱化并用乙酸乙酯(3×)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩以得到油状物。该残余物通过柱色谱法首先用乙酸乙酯/己烷(2:1)然后用5％MeOH/CH2Cl2->10％MeOH/CH2Cl2+1％NH4OH洗脱来纯化，提供油状物N1-(4-溴苯基)-1-(4-氯苯基)乙烷-1,2-二胺(9.60g,49％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.38(d,2H),7.34(d,2H),7.15(d,2H),6.53(d,2H),4.59(dd,J＝9.8,4.7Hz,1H),3.14(dd,J＝12.9,4.7Hz,1H),3.05(dd,J＝12.9,9.4Hz,1H).
步骤3：将NaBH(OAc)3(4.88g,23.0mmol)加入N1-(4-溴苯基)-1-(4-氯苯基)乙烷-1,2-二胺(5.00g,15.4mmol)和丙-2-酮(1.24mL,16.9mmol)的1,2-二氯乙烷(51.2mL,15.4mmol)溶液，并将所得溶液在室温下搅拌12小时。该反应接着进行LCMS。反应混合物用饱和NaHCO3猝灭并用乙酸乙酯(3×)萃取。将合并的有机层干燥并浓缩以得到油状的所期望的产物，其不经进一步纯化(5.40g,95％).1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(d,J＝9.0Hz,2H),7.34(d,J＝9.0Hz,2H),7.15(d,J＝9.0Hz,2H),6.53(d,J＝9.0Hz,2H),4.59(m,1H),3.10(m,2H).
步骤4：将N1-(4-溴苯基)-1-(4-氯苯基)-N2-异丙基乙烷-1,2-二胺(0.556g,1.51mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二杂氧戊硼烷)(0.576g,2.27mmol)、KOAc(0.594g,6.05mmol)和DMSO(7.56mL,1.51mmol)的混合物用氮气脱气5分钟。然后将PdCl2(dppf)*CH2Cl2(0.062g,0.076mmol)加入该溶液，并在80℃、氮气下将反应加热过夜。1天后加入另外的4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧硼戊烷)(1.15g,4.54mmol)、KOAc(1.19g,12.1mmol)和PdCl2(dppf)*CH2Cl2(0.124g,0.152mmol)，并将反应在80℃下加热另外的24小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释以沉淀无机盐。将浆料过滤以除去盐，然后将滤液浓缩并直接装载至C18样品柱(C18samplet)(40+M)上，然后在Biotage Horizon(10％-100％ACN/H2O+1％iPA,1mMNH4OAc)上洗脱。含有产物的柱级分倒入分液漏斗，用1N NaOH碱化并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥并浓缩以提供泡沫状产物(0.220g,35％)。LCMS APCI+(M+H+):415(25％),417(10％),rt 3.76分钟。
步骤5：将1-(4-氯苯基)-N2-异丙基-N1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊-2-基)苯基)乙烷-1,2-二胺(0.075g,0.181mmol)、Pd(PPh3)4(0.017g,0.015mmol)和2N Na2CO3(0.226mL,0.452mmol)加入(5R,7R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(0.050g,0.151mmol)的正丙醇(0.464mL,0.151mmol)溶液。通过将氮气鼓入该溶液而将悬浮液脱气。将深色的悬浮液在90℃下加热14小时。将混合物冷至室温，然后浓缩。所得残余物用乙酸乙酯稀释并过滤。将滤液用饱和NaHCO3和盐水洗涤。将有机层干燥并浓缩。所得残余物通过Biotage SP4(C18,25+0-100％ACN)纯化。收集含有产物的级分并通过Gilson C18(5-95ACN/H2O+1％TFA)再次纯化。将含有产物的试管通过LCMS鉴别，收集并蒸发。将物质部分溶于CH2Cl2并将HCl(g)鼓泡进入该混合物以沉淀固体(5R,7R)-4-(4-(1-(4-氯苯基)-2-(异丙基氨基)乙基氨基)苯基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇盐酸盐(8.10mg,12％)。LCMS APCI+(M+H+):437(100％),439(30％),rt 2.55分钟。在254nm下的HPLC纯度>99％,rt＝2.17分钟。1H NMR(400MHz,d6-丙酮)δ8.88(s,1H),7.81(d,J＝8.2Hz,1H),7.78(d,J＝8.6Hz,1H),7.59(d,J＝3.5Hz,1H),7.58(d,J＝3.1Hz,1H),7.40(d,J＝8.2Hz,2H),6.65(t,J＝9.0Hz,2H),5.26(m,1H),5.15(td,J＝7.4,4.3Hz,1H),3.88(m,2H),3.62(br s,2H),3.50(br s,1H),2.17(m,2H),1.45(m,2H),1.41(d,J＝6.6Hz,6H),1.10(t,J＝7.0Hz,3H),0.88(m,1H).
实施例13
(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d] 嘧啶-4-基)苯甲酰胺
步骤1：将Na2CO3的溶液(1.65mL,1M)加入(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(253mg,1.50mmol)和4-甲氧基羰基苯基硼酸(297mg,1.65mmol)的1,4-二噁烷(4.5mL)溶液。该混合物用N2吹扫2分钟。一次性加入催化剂Pd(dppf)Cl2(98mg,0.12mmol)。将反应瓶密封并在微波中加热至110℃，持续30分钟。将水(20mL)加入混合物并用DCM(3×15mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过快速色谱法(0-50％EtOAc/己烷梯度洗脱)纯化以得到油状的(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酸甲酯(300mg,70％)。1H NMR(CDCl3,500MHz)δ9.07(s,1H),8.16(d,＝8.5Hz,2H),7.88(d,J＝8.5Hz,2H),3.96(s,3H),3.81-3.76(m,1H),3.15-3.00(m,2H),2.44-2.40(m,1H),1.78-1.74(m,1H),1.01(d,J＝6.5Hz,3H).
步骤2：在0℃下，将LiOH(64mg,2.68mmol)的H2O(10mL)溶液加入(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酸甲酯(359mg,1.34mmol)的THF(6mL)溶液。允许该混合物温至室温并搅拌过夜。真空除去挥发性溶剂。将水层用1N HCl酸化至pH 3。固体沉淀并通过过滤收集，用醚洗涤并真空干燥以得到(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酸固体(306mg,90％)。
步骤3：将DIPEA(37μL,0.21mmol)和O-(苯并三唑-1基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(80mg,0.21mmol)加入(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酸(51mg,0.2mmol)的DMF(1mL)溶液。该混合物加热至70℃，持续18小时。该混合物用DCM(10mL)稀释。加入饱和NH4Cl(10mL)。分离各层。水层用DCM(2×10mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过快速色谱法(0-100％EtOAc/己烷梯度洗脱)纯化以得到油状的(R)-2-(N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酰氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(49mg,31％)。
步骤4：将TFA(182μL,2.36mmol)加入(R)-2-(N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酰氨基)乙基氨基甲酸叔丁酯(49mg,0.094mmol)的DCM(1mL)溶液。该混合物在室温下搅拌1.5小时。该混合物真空浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化以得到油状的(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺(9mg,22％)。MS(APCI+)[M+H]+421.2.1H NMR(D2O,500MHz)δ9.09(s,1H),7.81(d,J＝8.5Hz,2H),7.63(d,J＝8.0Hz,2H),7.35(d,J＝8.5Hz,2H),7.15(D,J＝8.0Hz,2H),4.63(s,2H),3.87(t,J＝6.5Hz,2H),3.82-3.79(m,1H),3.26-3.11(m,4H),2.63(s,2H),2.50-2.42(m,1H),1.86-1.81(m,1H),0.86(s,J＝7.00Hz,3H).
实施例14
(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-三氟甲基苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二 烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺
以与(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺类似的方式制备(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-三氟甲基苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺。MS(APCI+)[M+H]+455.2.1H NMR(D2O,500MHz)δ8.86(s,1H),7.77-7.96(m,4H),7.56(d,J＝8.0Hz,2H0,7.35(d,J＝8.0Hz,2H),4.75(s,2H),3.84(t,J＝6.0Hz,2H),3.70-3.67(m,1H),3.84(t,J＝6.0Hz,2H),3.24-2.87(m,2H),2.41-2.35(m,1H),1.76-1.71(m,1H),1.27-1.19(m,1H),0.81(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例15
(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-溴苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d] 嘧啶-4-基)苯甲酰胺
以与(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-氯苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺类似的方式制备(R)-N-(2-氨基乙基)-N-(4-溴苄基)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯甲酰胺。MS(APCI+)[M+H]+465.2.1H NMR(D2O,500MHz)δ8.82(s,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.52(d,J＝8.5Hz,2H),7.48(d,J＝8.0Hz,7.06(d,J＝8.0Hz,2H),4.58(s,2H),3.75(t,J＝6.5Hz,2H),3.69-3.66(m 1H),,3.22-2.78(m,4H),2.37-2.29(m,1H),1.71-1.67(m,1H),1.22-1.37(m,2H),0.75(d,J＝6.0Hz,3H).
实施例16
(S)-2-(4-溴苯基)-3-(叔丁基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢 -5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-5,6-二氢哌啶-1(2H)-基)丙-1-酮
步骤1：将Na2CO3(2mL,2M)溶液加入(5R,7R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(334mg,1.00mmol)、3,6-二氢-2H-吡啶-1-叔丁氧羰基-4-硼酸、频哪醇酯(340mg,1.10mmol)的1,4-二噁烷(6mL)溶液。该混合物用N2吹扫2分钟。一次性加入催化剂Pd(dppf)Cl2(65mg,0.08mmol)。将反应瓶密封并在微波中加热至120℃持续20分钟。加入LiOH溶液(0.7mL,3M)。该混合物在室温下搅拌18小时。将水(30mL)加入该混合物，用DCM(3×20mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过快速色谱法(0-5％MeOH/DCM梯度洗脱)纯化以得到油状的4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(221mg,67％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ9.01(s,1H),6.44(s,1H),5.30(m,1H),4.16-4.11(m,2H),3.71-3.55(m,3H),2.83-2.78(m,1H),2.50-2.30(m,1H),2.28-2.24(m,2H),1.50(s,9H),1.28-1.22(m,3H).
步骤2：将TFA(193μL,2.5mmol)加入4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(33mg,0.10mmol)的DCM(1mL)溶液。该混合物在室温下搅拌1小时，并浓缩以得到油状的(5R,7R)-5-甲基-4-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇，其不经进一步纯化而使用。
步骤3：将DIPEA(174μL,1.0mmol)和O-(苯并三唑-1基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(42mg,0.11mmol)加入(5R,7R)-5-甲基-4-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇(23mg,0.10mmol)和(S)-2-(4-溴苯基)-3-(叔丁基氨基)丙酸(33mg,0.11mmol)的DCM(1mL)溶液。该混合物在室温下搅拌1小时。该反应用饱和NH4Cl猝灭，用DCM(2×10mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化以得到(S)-2-(4-溴苯基)-3-(叔丁基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-5,6-二氢哌啶-1(2H)-基)丙-1-酮二三氟乙酸固体(13mg,24％)。MS(APCI+)[M+H]+514.2.1H NMR(D2O,400MHz)8.66(s,1H),7.46(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(J＝8.4Hz,2H),6.18-6.15(m,1H),5.06-5.00(m,1H),4.44-4.40(m,1H),4.25-4.22(m,1H),4.01-3.65(m,5H),3.52-3.45(m,2H),3.38-3.05(m,3H),2.05-1.82(m,3H),1.17(s,9H),0.77(d,J＝7.2Hz,3H).
实施例17
(S)-2-(4-溴苯基)-3-(叔丁基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7- 二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-基)丙-1-酮
步骤1：将5％Pd/C(10mg)加入4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(17mg,0.05mmol)的EtOAc(1mL)溶液。该混合物在室温、氢气氛下搅拌过夜。该混合物通过硅藻土过滤并浓缩以得到油状的4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(13mg,78％)，其不经进一步纯化而使用。
步骤2：将TFA(77μL,1.0mmol)加入4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(13mg,0.04mmol)的DCM(1mL)溶液。该混合物在室温下搅拌1小时并浓缩以得到油状的(5R,7R)-5-甲基-4-(哌啶-4-基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇，其不经进一步纯化而使用。
步骤3：将DIPEA(70μL,0.40mmol)和O-(苯并三唑-1基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(16mg,0.042mmol)加入(5R,7R)-5-甲基-4-(哌啶-4-基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇(9.3mg,0.04mmol)和(S)-2-(4-溴苯基)-3-(叔丁基氨基)丙酸(12mg,0.4mmol)的DCM(1mL)溶液。该混合物在室温下搅拌1小时。该反应用饱和NH4Cl猝灭并用DCM(2×10mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化以得到(S)-2-(4-溴苯基)-3-(叔丁基氨基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-基)丙-1-酮二三氟乙酸固体(4.6mg,22％)。MS(APCI+)[M+H]+516.2.1H NMR(D2O,500MHz)δ8.85(s,1H),7.68(d,J＝7.5Hz,2H),7.34(d,J＝7.5Hz,2H),5.33(t,J＝4.5Hz,1H),4.64-4.59(m,1H),4.38-4.34(m,1H),3.97-3.89(m,1H),3.70-3.47(m,2H),3.38-3.13(m,3H),2.91-2.82(m,2H),2.35-2.29(m,1H),2.14-2.07(m,1H),1.94-1.77(m,2H),1.58-1.47(m,1H),1.40(s,9H),1.18(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例18
(S)-2-(4-氯苯基)-2-((S)-5,5-二甲基吡咯烷-2-基)-1-(4-((R)-5-甲基-6,7-二 氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-基)乙酮
步骤1：将Na2CO3(0.36mL,2M)的溶液加入(R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(101mg,0.60mmol)、3,6-二氢-2H-吡啶-1-叔丁氧羰基-4-硼酸、频哪醇酯(204mg,0.66mmol)的1,4-二噁烷(1.8mL)溶液。该混合物用N2吹扫2分钟。一次性加入催化剂Pd(PPh3)2Cl2(21mg,0.03mmol)。将混合物在110℃、N2下加热8小时。将水(20mL)加入该混合物并用DCM(3×15mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过快速色谱法(首先用0-50％EtOAc/己烷，然后用0-4％MeOH/DCM梯度洗脱)纯化以得到油状的(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(127mg,67％)。1H NMR(CDCl3,500MHz)δ8.91(s,1H),6.31(s,1H),3.64-3.55(m,1H),3.10-3.03(m,2H),2.98-2.90(m,2H),2.83-2.78(m,1H),2.42-2.34(m,2H),1.77-1.69(m,2H).1.49(s,9H),1.19(d,J＝7.0Hz,3H).
步骤2：将5％Pd/C(40mg)加入(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(63mg,0.20mmol)的EtOAc(4mL)溶液。该混合物在室温、氢气氛下搅拌过夜。该混合物通过硅藻土过滤并浓缩以得到油状的(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(58mg,91％)，其不经进一步纯化而使用。
步骤3：将TFA(193μL,2.50mmol)加入(R)-4-(5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(32mg,0.10mmol)的DCM(1mL)溶液。该混合物在室温下搅拌1小时并浓缩以得到油状的(R)-5-甲基-4-(哌啶-4-基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶，其不经进一步纯化而使用。
步骤4：将DIPEA(174μL,1.00mmol)和O-(苯并三唑-1基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(25mg,0.065mmol)加入(R)-5-甲基-4-(哌啶-4-基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶(22mg,0.10mmol)和(S)-2-((S)-1-(叔丁氧羰基)-5,5-二甲基吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基)乙酸(20mg,0.054mmol)的DCM(2mL)溶液。该混合物在室温下搅拌2小时。将反应用饱和NH4Cl猝灭并用DCM(2×10mL)萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗产物通过快速色谱法(0-5％MeOH/DCM梯度洗脱)纯化以得到(S)-5-((S)-1-(4-氯苯基)-2-(4-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)-2,2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯固体(26mg,84％)。1H NMR(CD3OD,500MHz)δ8.73(s,3H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),7.25(d,J＝8.5Hz,2H),4.73-4.70(m,2H),4.40-4.35(m,1H),3.89-3.86(m,1H),3.76-3.70(m,2H),3.49-3.43(m,1H),3.25-3.20(m,2H),3.18-2.97(m,2H),2.86-2.70(m,3H),2.34-2.25(m,1H),2.16-2.13(m,1H),1.83-1.67(m,2H),1.54(s,9H),1.38(s,3H),1.36(s,3H),1.25-1.20(m,3H).
步骤5：在0℃下，将4M HCl的1,4-二噁烷(0.344mL)溶液加入(S)-5-((S)-1-(4-氯苯基)-2-(4-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-基)-2-氧代乙基)-2,2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(26mg,0.046mmol)的1,4-二噁烷(1mL)溶液。允许该混合物升温并在室温下搅拌4小时。将混合物真空浓缩。将所得残余物溶于最少量的DCM并在0℃下加入醚(5mL)。固体沉淀。将混合物倒出并真空干燥以得到(S)-2-(4-氯苯基)-2-((S)-5,5-二甲基吡咯烷-2-基)-1-(4-((R)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌啶-1-基)乙酮二盐酸盐固体(26mg,100％)。MS(APCI+)[M+H]+467.3.1HNMR(D2O,500MHz)δ8.96(s,1H),7.48(d,J＝8.5Hz,2H),7.38(d,J＝8.5Hz,2H),4.60-4.20(m,3H),4.01-3.52(m,6H),3.48-3.05(m,4H),2.85-2.82(m,1H),2.43-2.36(m,1H),1.96-1.86(m,5H),1.32(s,3H),1.1.31(s,3H),1.19(d,J＝7.5Hz,3H).
实施例19
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并 [d]嘧啶-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮
步骤1：将(5R,7R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(65mg,0.195mmol)溶于i-PrOH(5mL)，然后加入1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(51mg,0.253mmol)。加入N,N-二异丙基乙胺(49mg,0.350mmol)，并将反应混合物加热至80℃，持续12小时，然后减压下除去溶剂。所得残余物溶解在EtOAc中，然后用水洗涤2次并用盐水洗涤1次。有机部分经硫酸镁干燥，过滤然后浓缩。所得残余物经硅胶色谱法纯化以得到4-((5R,7R)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酸基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(78mg,81％)。LCMS(APCI+)M+＝498.1,Rt＝3.81min.
步骤2：将4-((5R,7R)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲酸基)-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(78mg,0.160mmol)溶于二氯甲烷(2mL)，然后加入HCl(4M于二噁烷中,0.58mL)。将所得混合物在环境下搅拌4小时，此时经旋转蒸发而浓缩。不经进一步纯化而使用所得的(5R,7R)-4-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯盐酸盐(64mg,94％)。LCMS(APCI+)M+H+＝398.1,Rt＝2.32min.
步骤3：将(5R,7R)-4-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯盐酸盐(61mg,0.140mmol)和3-(叔丁氧羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(48mg,0.140mmol)悬浮于二氯甲烷(5mL)。然后加入N,N-二异丙基乙胺(54mg,0.420mmol)。加入HBTU(53mg,0.140mmol)，并将所得溶液在环境下搅拌16小时。此后，反应混合物通过加入饱和碳酸钠溶液猝灭，然后用二氯甲烷萃取2次。合并的有机部分经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。如此得到的残余物通过硅胶色谱法纯化以得到(5R,7R)-4-(4-((S)-3-(叔丁氧羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(50mg,50％)。LCMS(APCI+)M+＝721.1,Rt＝4.51min.
步骤4：将(5R,7R)-4-(4-((S)-3-(叔丁氧羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(50mg,0.069mmol)溶于THF/水混合物(1:1,2mL)，然后加入固体氢氧化锂(6mg,0.139mmol)。将所得混合物在环境下搅拌16小时，此时将其用EtOAc稀释然后用饱和碳酸氢钠溶液洗涤2次。有机层经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。将所得残余物溶解在二氯甲烷(5mL)中，然后加入HCl(4M于二噁烷,0.25mL)。该混合物搅拌16小时，此时经旋转蒸发除去溶剂。将所得的残余物溶于二氯甲烷(1mL)然后加入乙醚(50mL)。所得沉淀通过过滤收集并干燥以得到(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮二盐酸盐(29mg,78％)。LCMS(APCI+)M+＝472.2,Rt＝2.05min.
实施例20
(5R,7R)-4-(3-(1-(4-氯苯基)-2-(异丙基氨基)乙基)苯并[d]异噻唑-6-基)-5- 甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇
步骤1：将草酰氯(3.7mL,42mmol)滴加入3-溴苯硫酚(5.00g,26.4mmol)的醚(20mL)溶液。将该混合物加热回流1.5小时，冷至室温并真空浓缩。所得残余物溶解于DCM(50mL)中，并冷至0℃。分批加入氯化铝(4.23g,31.7mmol)。将所得混合物搅拌回流30分钟，冷至室温并在搅拌下倒入冰水中。将有机层分离并用饱和NaHCO3水溶液、水和盐水连续洗涤。将有机层干燥并真空浓缩以得到固体，将该固体悬浮于在己烷中的20％EtOAc(50mL)并加热回流10分钟。冷却后，通过过滤收集沉淀的固体以提供粗制6-溴苯并[b]噻吩-2,3-二酮(3.22g,50％)。在5℃-10℃下，将该6-溴苯并[b]噻吩-2,3-二酮加入氢氧化铵(35％水溶液，40mL)，然后逐滴加过氧化氢(35％水溶液,5.5mL,66mmol)。所得混合物在室温下搅拌30分钟，然后过滤以得到6-溴苯并[b]噻吩-3-甲酰胺(1.30g,38％)固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.66(d,J＝8.8Hz,1H),8.62(s,1H),8.23(s,1H),7.81(s,1H),7.73(d,J＝8.8Hz,1H).
步骤2：将10N NaOH溶液(10mL,100mmol)加入6-溴苯并[b]噻吩-3-甲酰胺(1.20g,4.67mmol)的MeOH(80mL)溶液。该混合物加热回流过夜。冷却后，该混合物用2N HCl酸化。将所得沉淀过滤并干燥以得到6-溴苯并[d]异噻唑-3-羧酸(1.10g,91％)固体。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.65(s,1H),8.55(d,J＝8.8Hz,1H),7.77(d,J＝8.8Hz,1H).
步骤3：将DIEA(11.7mL,67.4mmol)和HBTU(7.03g,18.5mmol)加入6-溴苯并[d]异噻唑-3-羧酸(4.35g,16.9mmol)和N,O-二甲基羟胺盐酸盐(2.14g,21.9mmol)的DMF(100mL)溶液。该反应在室温下搅拌2小时。将该混合物在水和EtOAc之间分开。有机层用NaHCO3水溶液和盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物通过柱色谱法(己烷:EtOAc,3:1)纯化以得到6-溴-N-甲氧基-N-甲基苯并[d]异噻唑-3-甲酰胺(4.60g,91％)固体。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.12(m,2H),8.59(d,J＝8.8Hz,1H),3.83(s,3H),3.49(s,3H).
步骤4：将4-氯苯基溴化镁(1.0N于THF中,16mL,16mmol)加入搅拌的6-溴-N-甲氧基-N-甲基苯并[d]异噻唑-3-甲酰胺(3.5g,12mmol)的THF(100mL)溶液。反应混合物在0℃下搅拌1小时。将反应倒入1N HCl并萃取至醚中。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。将粗产物悬浮于醚并搅拌15分钟。通过过滤收集固体以得到(6-溴苯并[d]异噻唑-3-基)(4-氯苯基)甲酮(3.3g,81％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.60(d,J＝8.8Hz,1H),8.23(d,J＝8.4Hz,2H),8.19(s,1H),7.68(d,J＝8.8Hz,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H).
步骤5：将NaH(60％矿物油分散体,0.060g,1.5mmol)和DMSO(3mL)的混合物在70℃下搅拌45分钟。然后将该溶液用冷水冷却，并滴加在DMSO(3mL)中的甲基三苯基溴化膦(0.58g,1.6mmol)。继续搅拌15分钟。然后加入一份6-溴苯并[d]异噻唑-3-基)(4-氯苯基)甲酮(0.300g,0.850mmol)。该混合物在室温下搅拌1.5小时，然后倒入冰水中。该混合物用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。所得残余物通过柱色谱法(己烷:DCM,10:1至6:1)纯化以得到6-溴-3-(1-(4-氯苯基)乙烯基)苯并[d]异噻唑(0.26g,87％)固体。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.22(d,J＝8.8Hz,1H),8.12(s,1H),7.51(d,J＝8.8Hz,1H),7.30(m,4H),5.97(s,1H),5.81(s,1H).
步骤6：将6-溴-3-(1-(4-氯苯基)乙烯基)苯并[d]异噻唑(600mg,1.71mmol)、DMF(3mL)和丙烯胺(3mL)的混合物在室温下搅拌3天。将反应在EtOAc与水之间分开。有机相用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物通过柱色谱法(DCM:MeOH,20:1)纯化以得到N-(2-(6-溴苯并[d]异噻唑-3-基)-2-(4-氯苯基)乙基)丙-2-烯-1-胺(464mg,66％)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ8.06(d,J＝1.6Hz,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,1H),7.41(dd,J＝8.8Hz,J＝1.6Hz,1H),7.25(m,4H),5.86(m,1H),5.16(dd,J＝17.2Hz,J＝1.6Hz,1H),5.08(d,J＝10.4Hz,1H),4.72(t,J＝7.2Hz,1H),3.62(dd,J＝12.0Hz,J＝8.0Hz,1H),3.31(m,2H),3.20(dd,J＝12.0Hz,,J＝6.8Hz,1H).
步骤7：在35℃、N2下，将N-(2-(6-溴苯并[d]异噻唑-3-基)-2-(4-氯苯基)乙基)丙-2-烯-1-胺(0.441g,1.08mmol)、1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1H,3H,5H)-三酮(0.507g,3.24mmol)、Pd(PPh3)4(0.013g,0.011mmol)和DCM(4mL)的混合物加热4小时。冷却后，蒸发DCM。所得残余物被溶解在醚中，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，干燥并浓缩。将粗产物溶于THF(8mL)。加入Boc2O(0.28g,1.3mmol)和Et3N(0.23mL,1.6mmol)。该混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，然后将残余物在EtOAc与水之间分配。将有机相分离并用盐水洗涤，干燥并浓缩。所得残余物通过柱色谱法(己烷:EtOAc,6:1)纯化以得到2-(6-溴苯并[d]异噻唑-3-基)-2-(4-氯苯基)乙基氨基甲酸叔丁酯(0.39g,77％)固体。LCMS(APCI+)m/z 467,469[M+H]+；Rt＝3.71min.
步骤8：将双(频哪醇合)二硼(0.25g,1.0mmol)、2-(6-溴苯并[d]异噻唑-3-基)-2-(4-氯苯基)乙基氨基甲酸叔丁酯(0.39g,0.83mmol)和乙酸钾(0.25g,2.5mmol)加入DMF(4mL)。将反应液去氧，然后加入[1,1'-双(二苯基膦)-二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(34mg,0.042mmol)。将该混合物加热至80℃，持续4小时。将该混合物冷至室温并在EtOAc与水之间分配。水相用EtOAc萃取，合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。所得残余物通过柱色谱法(己烷:EtOAc,8:1)纯化以得到2-(4-氯苯基)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊-2-基)苯并[d]异噻唑-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯(0.36g,84％)固体。LCMS(APCI+)m/z 515,517[M+H]+；Rt＝4.96min.
步骤9：将DMF(3mL)和2M Na2CO3水溶液(0.38mL,0.76mmol)加入氮气冲刷的烧瓶，该烧瓶含有2-(4-氯苯基)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊-2-基)苯并[d]异噻唑-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯(150mg,0.291mmol)、(5R,7R)-4-氯-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(117mg,0.350mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)-二茂铁]二氯化钯(II)二氯甲烷加合物(12mg,0.015mmol)。将该混合物在80℃下加热1小时。将该混合物冷至室温并在EtOAc与水之间分配。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱，用己烷:EtOAc(4:1至1:1)洗脱纯化以得到油状的(5R,7R)-4-(3-(2-(叔丁氧羰基氨基)-1-(4-氯苯基)乙基)苯并[d]异噻唑-6-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-基4-硝基苯甲酸酯(102mg,51％)。LCMS(APCI+)m/z 630,632[M+H]+；Rt＝4.68min.
步骤10：将1N LiOH水溶液(0.30mL,0.30mmol)加入搅拌的(5R,7R)-4-(3-(2-(叔丁氧羰基氨基)-1-(4-氯苯基)乙基)苯并[d]异噻唑-6-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-4-硝基苯甲酸酯(102mg,0.149mmol)的THF(3mL)溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂。将所得残余物在EtOAc与水之间分配。水层用EtOAc萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。所得残余物通过柱色谱法(DCM:MeOH,60:1)纯化以得到油状的2-(4-氯苯基)-2-(6-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯并[d]异噻唑-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯(62mg,78％)。LCMS(APCI+)m/z 537,539[M+H]+；Rt＝3.99min.
步骤11：将2-(4-氯苯基)-2-(6-((5R,7R)-7-羟基-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-4-基)苯并[d]异噻唑-3-基)乙基氨基甲酸叔丁酯(41mg,0.076mmol)的DCM溶液用4N在二噁烷(0.5mL)中的HCl处理。使反应在室温下搅拌过夜。将反应浓缩并用醚研磨(两次)以得到(5R,7R)-4-(3-(2-氨基-1-(4-氯苯基)乙基)苯并[d]异噻唑-6-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇三盐酸盐(32mg,77％)。LCMS(APCI+)m/z 437,439[M+H]+；Rt＝2.48min.
步骤12：将DIEA(0.035mL,0.20mmmol)加入搅拌的(5R,7R)-4-(3-(2-氨基-1-(4-氯苯基)乙基)苯并[d]异噻唑-6-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇三盐酸盐(22mg,0.050mmol)在DCE(1.5mL)中的悬浮液。摇动该悬浮液直至溶解。加入丙酮(0.022mL,0.30mmol)的THF(0.3mL)溶液。允许反应在室温下搅拌15分钟，此时加入Na(OAc)3BH(27mg,0.13mmol)。允许反应在室温下搅拌1小时。反应混合物用DCM稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，干燥并浓缩。所得残余物通过柱色谱法(DCM:7N氨水于MeOH中,30:1)纯化以得到游离碱，将其溶解在DCM中并用2N在醚中的HCl酸化。减压下除去溶剂得到(5R,7R)-4-(3-(1-(4-氯苯基)-2-(异丙基氨基)乙基)苯并[d]异噻唑-6-基)-5-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[d]嘧啶-7-醇三盐酸盐。LCMS(APCI+)m/z 479,481[M+H]+；Rt＝2.69min.
虽然结合列举的实施方案描述了本发明，但应当理解，它们不意图将本发明限制于那些实施方案。相反，本发明意图涵盖所有可选方案、改良方案和等同方案，这些可包含在如由权利要求书所定义的本发明范围内。因此，先前的描述被视为仅说明本发明的原理。
词语“包括”(“comprise”)、“包括”(“comprising”)、“包含”(“include”)、“包含”(“including”)和“包含”(“includes”)当在本说明书和在以下的权利要求书中使用时，意图指定所陈述的特征、整数、组分或步骤的存在，但它们不排除其一种或多种其他特征、整数、组分、步骤或组的存在或加入。
本发明涉及以下方面：
1.一种化合物，所述化合物选自式I及其立体异构体和药学上可接受的盐：
其中：
R1和R1a独立地选自氢、甲基、乙基、-CH＝CH2、-CH2OH、CF3、CHF2或CH2F；
R2选自氢、OH、OCH3或F；
R2a选自氢、甲基或F，或
R2和R2a是氧代；
L选自：
其中单波形线是L连接至A的位置，并且双波形线是L连接至嘧啶的位置；
A是：
X是从L至Y的直连键、CH2、O、C＝O、NH或C(＝O)NH；
Y是CH或N；
Z为不存在、CH2或O，其中选择L、X、Y、Z和b以致任何氮均不与另一个氮直接键合；
G是用1至4个Ra基团任选取代的苯基或由卤素任选取代的5-6元杂芳基；
R3和R4独立地选自氢或甲基；
R5和R6独立地选自氢或C1-C4烷基；
a是0或1；
b是0、1或2；并且
每个Ra独立地是卤素、C1-C6-烷基、C3-C6-环烷基、-O-(C1-C6-烷基),CF3、-OCF3、S(C1-C6-烷基)、CN、-OCH2-苯基、NH2、-NO2、-NH-(C1-C6-烷基)、-N-(C1-C6-烷基)2、哌啶、吡咯烷、CH2F、CHF2、-OCH2F、-OCHF2、-OH、-SO2(C1-C6-烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1-C6-烷基)和C(O)N(C1-C6-烷基)2；或
b是1，R3是氢，并且R4和R5与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的5-6元杂环，并且R6选自由H或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组，以致A具有如下结构：
Rc和Rd独立地选自氢和甲基；并且
c是1或2；或
b是1，Z是CH2，并且R5和Y与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的6元杂环，并且R6选自由氢或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组，以致A具有如下结构：
2.如1所述的化合物，其中式I选自：
3.如2所述的化合物，其中式I选自：
4.如1至3中任一项所述的化合物，其中L是：
5.如1至3中任一项所述的化合物，其中L是：
6.如1至3中任一项所述的化合物，其中L是：
7.如1至3中任一项所述的化合物，其中L是：
8.如1至3中任一项所述的化合物，其中L是：
9.如1至3中任一项所述的化合物，其中L是：
10.如1至3中任一项所述的化合物，其中L是：
11.如1至3中任一项所述的化合物，其中L是：
12.如1至3中任一项所述的化合物，其中L是：
13.如1至12中任一项所述的化合物，其中X是从L至Y的直连键，Y是CH2并且Z是O。
14.如1至12中任一项所述的化合物，其中X是C(＝O)NH，Y是CH并且Z不存在。
15.如1至12中任一项所述的化合物，其中X是从L至Y的直连键，Y是CH并且Z不存在。
16.如1至12中任一项所述的化合物，其中X是从L至Y的直连键，Y是CH并且Z不存在。
17.如1至12中任一项所述的化合物，其中X是NH，Y是CH并且Z不存在。
18.如1至12中任一项所述的化合物，其中X是C＝O，Y是N，Z不存在并且b是1或2。
19.如1至12中任一项所述的化合物，其中X是C＝O，Y是CH并且Z不存在。
20.如1至19中任一项所述的化合物，其中R3是氢。
21.如1至19中任一项所述的化合物，其中R3是甲基。
22.如1至21中任一项所述的化合物，其中R4是氢。
23.如1至21中任一项所述的化合物，其中R4是甲基。
24.如1至23中任一项所述的化合物，其中R5是氢。
25.如1至23中任一项所述的化合物，其中R5是C1-C4烷基。
26.如25所述的化合物，其中R5选自甲基、异丙基和叔丁基。
27.如1至26中任一项所述的化合物，其中R6是氢。
28.如1至26中任一项所述的化合物，其中R6是甲基。
29.如1至12中任一项所述的化合物，其中b是1，R3是氢并且R4和R5与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的5-6元杂环，以致A具有A8结构：
其中c是1或2；
Rc和Rd独立地选自氢和甲基；并且
R6选自由H或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组。
30.如29所述的化合物，其中c是1。
31.如1至12中任一项所述的化合物，其中b是1，Z是CH2，并且R5和Y与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的6元杂环，并且R6选自由氢或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组，以致A具有A9结构：
32.如1至32中任一项所述的化合物，其中G选自4-氯苯基、4-溴苯基、4-三氟甲基苯基和2,4-二氯苯基。
33.一种如1所述的和本文实施例1至20中的任一个所述的式I化合物或其药学上可接受的盐。
34.一种药物组合物，所述药物组合物包含1至33中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。
35.一种预防或治疗由AKT调节的疾病或疾患的方法，所述方法包括将有效量的1至33中任一项所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐施用于需要这种治疗的哺乳动物。
36.如35所述的方法，其中所述疾病是癌症。
37.一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括将有效量的1至33中任一项所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐单独地施用于需要这种治疗的哺乳动物，或与具有抗癌性的一种或多种另外的化合物组合施用于需要这种治疗的哺乳动物。
38.一种抑制哺乳动物中AKT蛋白激酶产生的方法，所述方法包括将1至33中任一项所述的化合物或其对映体或药学上可接受的盐以有效抑制AKT蛋白激酶产生的量施用于所述哺乳动物。
39.一种治疗哺乳动物中过度增殖疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的1至33中任一项所述的化合物施用于所述哺乳动物。
40.1至33中任一项所述的化合物在制备用于治疗过度增殖疾病的药物中的用途。
41.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗过度增殖疾病的1至33中任一项所述的化合物。
42.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗癌症的1至33中任一项所述的化合物。

Claims (10)

1.一种化合物，所述化合物选自式I及其立体异构体和药学上可接受的盐：
其中：
R1和R1a独立地选自氢、甲基、乙基、-CH＝CH2、-CH2OH、CF3、CHF2或CH2F；
R2选自氢、OH、OCH3或F；
R2a选自氢、甲基或F，或
R2和R2a是氧代；
L选自：
其中单波形线是L连接至A的位置，并且双波形线是L连接至嘧啶的位置；
A是：
X是从L至Y的直连键、CH2、O、C＝O、NH或C(＝O)NH；
Y是CH或N；
Z为不存在、CH2或O，其中选择L、X、Y、Z和b以致任何氮均不与另一个氮直接键合；
G是用1至4个Ra基团任选取代的苯基或由卤素任选取代的5-6元杂芳基；
R3和R4独立地选自氢或甲基；
R5和R6独立地选自氢或C1-C4烷基；
a是0或1；
b是0、1或2；并且
每个Ra独立地是卤素、C1-C6-烷基、C3-C6-环烷基、-O-(C1-C6-烷基),CF3、-OCF3、S(C1-C6-烷基)、CN、-OCH2-苯基、NH2、-NO2、-NH-(C1-C6-烷基)、-N-(C1-C6-烷基)2、哌啶、吡咯烷、CH2F、CHF2、-OCH2F、-OCHF2、-OH、-SO2(C1-C6-烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1-C6-烷基)和C(O)N(C1-C6-烷基)2；或
b是1，R3是氢，并且R4和R5与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的5-6元杂环，并且R6选自由H或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组，以致A具有如下结构：
Rc和Rd独立地选自氢和甲基；并且
c是1或2；或
b是1，Z是CH2，并且R5和Y与它们连接的原子一起形成具有一个环氮原子的任选取代的6元杂环，并且R6选自由氢或用OH或O(C1-C3烷基)任选取代的C1-C4烷基组成的组，以致A具有如下结构：
2.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。
3.一种预防或治疗由AKT调节的疾病或疾患的方法，所述方法包括将有效量的权利要求1所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐施用于需要这种治疗的哺乳动物。
4.一种预防或治疗癌症的方法，所述方法包括将有效量的权利要求1所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐单独地施用于需要这种治疗的哺乳动物，或与具有抗癌性的一种或多种另外的化合物组合施用于需要这种治疗的哺乳动物。
5.一种抑制哺乳动物中AKT蛋白激酶产生的方法，所述方法包括将权利要求1所述的化合物或其对映体或药学上可接受的盐以有效抑制AKT蛋白激酶产生的量施用于所述哺乳动物。
6.一种治疗哺乳动物中过度增殖疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的权利要求1所述的化合物施用于所述哺乳动物。
7.权利要求1所述的化合物在制备用于治疗过度增殖疾病的药物中的用途。
8.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗过度增殖疾病的权利要求1所述的化合物。
9.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗癌症的权利要求1所述的化合物。
10.化合物，其选自：
其中，R1、R1a、R2a、R2、A、L、Hal和G如前述权利要求所定义，Pg为保护基。
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