CN104838909B - 甘蔗实生苗大田移栽前褐条病接种胁迫方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种甘蔗实生苗大田移栽前褐条病接种胁迫方法，从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，当假植在苗床的甘蔗实生苗生长至4片真叶后，用褐条病菌浓度为100倍显微镜下每个视野有40‑50个孢子的悬浮液对实生苗叶片进行喷雾接种，使褐条病病菌侵入实生苗幼嫩的叶片，接种后每天对实生苗进行喷水，保持温度为18~38℃，湿度50~90%，50‑60天后，每10天调查一次，清除病苗和死苗，调查三次，90天后，淘汰组合发病率大于25%的组合，从而初步筛选出抗褐条病的实生苗及组合。

Description

甘蔗实生苗大田移栽前褐条病接种胁迫方法

技术领域

本发明涉及抗甘蔗褐条病品种选育领域，具体来说是一种甘蔗实生苗大田移栽前褐条病接种胁迫方法，是一种达到早期选择抗褐条病组合及单株的方法。

背景技术

甘蔗褐条病是属一种气传真菌病害，该病已成为我国蔗区最主要的真菌性病害之一，曾先后淘汰了一些丰产高糖的当家品种，造成感病品种蔗茎产量和糖分的严重损失，一般减产18～35%，重的可达40%以上，蔗糖分降低15～30%；侵染途径—田间病株残叶是初次侵染菌源；发病条件—瘦瘠或缺磷土壤发病重；长期阴雨天易暴发流行；台糖134、选3、桂11等易感病；川糖61-408、云蔗89-151、89-7、桂糖17及新台糖系列等抗病，尤其是雨水丰富的蔗区更为严重。公认为控制该病最经济有效的途径是种植抗病品种，世界各国主要蔗区均把抗褐条病作为甘蔗育种的主要目标之一，选育抗褐条病甘蔗品种对促进产业健康稳步发展，保障食糖安全具有重要意义。甘蔗抗褐条病育种途径有（1）通过常规的育种途径，将筛选出的抗病优良甘蔗种质材料进行有性杂交，并对其后代进行抗病性鉴定，“五圃”制筛选后获得优良品种（系）鉴定为抗病品种后推广应用，所需时间较长；（2）通过生物技术手段，获得抗病基因，将抗病的外源基因导入甘蔗材料中，但还需要解决转入的外源基因是否达到预期功能表达的问题。迄今，甘蔗抗褐条病育种时间上采用的育种的早代，利用自然侵染法淘汰感病株；在育种的高代，采用人工接种进行田间抗病性鉴定试验的方法，进一步淘汰感病材料。其不足是育种周期长，选育抗褐条病品种需要8-10年时间，且由于前期施加的抗褐条病选择压力小，后期采用人工接种田间抗病性鉴定，很多材料感染褐条病，浪费了大量的人力、物力，选育效率低。为了提高抗褐条病甘蔗品种选育效率，云南甘蔗研究所开展了实生苗早期筛选抗褐条病材料的研究工作，形成了再甘蔗实生苗大田移栽前甘蔗褐条病接种胁迫方法，淘汰抗病性差的组合和单株，使抗褐条病筛选关口提前，提高选育效率，缩短育种年限。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术中存在的不足，提供一种甘蔗实生苗大田移栽前进行甘蔗褐条病接种胁迫方法，为甘蔗育种提供一种早期选择抗褐条病甘蔗组合及单株的技术方案。

本发明通过如下技术方案予以实现：

一种甘蔗实生苗大田移栽前进行褐条病接种胁迫方法，步骤如下：

（1）从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，当假植在苗床的甘蔗实生苗生长至4片真叶后，用褐条病菌浓度为100倍显微镜下每个视野有40-50个孢子的悬浮液对实生苗叶片进行喷雾接种，使褐条病病菌侵入实生苗幼嫩的叶片；

（2）接种后每天对实生苗进行喷水，保持温度为18~38℃，湿度50~ 90%；

（3）50-60天后，每10天调查一次，清除病苗和死苗，调查三次，90天后，淘汰组合发病率大于25%的组合，从而初步筛选出抗褐条病的实生苗及组合。

本发明提供的方法，从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，收集甘蔗褐条病病原菌孢子，模拟了湿润蔗区高温多雨的自然发病条件，达到接种甘蔗褐条病胁迫甘蔗实生苗的效果，将组合发病大于25%的组合淘汰，通过淘汰感病的实生苗单株及大量感病组合，从而初步筛选出抗褐条病的实生苗组合及单株，缩短选育抗褐条病新品种的育种年限，提高育种效率，有效节约选育甘蔗新品种试验用地和后期资金投入，本发明接种褐条病菌后发病显著、重演性好、试验周期短、可操作性强、缩短选育抗甘蔗褐条病新品种的育种年限、提高育种效率，该方法可服务于甘蔗品种选育机构，用于甘蔗抗褐条病的甘蔗新品种选育。

申请人近年来用于品种选育的杂交组合为900个左右，实生苗数量为20万苗，占地3.5-4.0公顷，由于杂交组合量大，以传统的鉴定方法要耗费大量资金和劳动力投入，通过采用创新的筛选方法，通过淘汰抗性差的组合和单株，节约了土地、资金和劳动力，提高了抗褐条病甘蔗品种选育效率。

假植实生苗接种褐条病菌孢子后，当环境条件适宜时，病斑大量产生分生孢子后，借助气流传播蔓延，分生孢子在湿润的叶片上萌发，一般从气孔侵入，或从泡状细胞直接侵入，然后再从新的病斑上长出分生孢子，进行重复侵染。

试验研究表明，甘蔗抗褐条病性状属于遗传力较高的性状，适合于有性世代选择。其试验选择两个亲本为抗病，后代褐条病感病百分率最低，其杂种后代的抗病能力强；两个亲本为感病，后代褐条病感病百分率最高，其杂种后代的抗病能力差，两个亲本之一为抗病，后代褐条病感病百分率中等，在育种实践中，即可淘汰杂交后代中抗性差的组合，且通过淘汰感病株系可以较大程度提高后一阶段育种群体的抗病水平。

在甘蔗实生苗移栽大田前，进行褐条病菌接种胁迫，抗性差的组合，子代发病多，根据植株感病表现，在甘蔗选育程序的第一阶段就淘汰感病组合及单株，从而初步筛选出抗褐条病的实生苗组合及单株，缩短抗病品种及材料育种年限，提高抗病育种选择效率。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

1、甘蔗实生苗移栽大田前的假植

用常规方法培育实生苗，待甘蔗实生苗生长至2片真叶后，在假植盘里进行假植，假植盘大小可选择50孔54cm×28cm的育苗盘或者200孔68cm×34 cm×5.6 cm漂浮盘，或根据实际需要进行选择合适规格。

2、搜集和配制褐条病病菌孢子悬浮液

从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，收集甘蔗褐条病病原菌孢子，用无菌水配制成孢子悬浮液，并于每100ml水中加入3-4滴Tween-20，以增加孢子的附着力，孢子浓度为100倍显微镜下每视野有40-50个孢子。

3、接种胁迫方法

待假植后的甘蔗实生苗生长至4片真叶后，用褐条病菌浓度为100倍显微镜下每视野有40-50个孢子的悬浮液对实生苗进行喷施，使褐条病病菌侵入幼嫩叶片，达到接种褐条病病菌胁迫甘蔗实生苗的效果。接种后每天对实生苗利用喷雾器喷水，保持温度为18~38℃，湿度50~ 90%。

4、实生苗对褐条病抗性评价

假植实生苗接种50-60天后，开始调查发株的发病组合及单株，并做记录，以后每各10天调查一次，待发病状况稳定，清除病苗和死苗，计算组合发病率。整株褐条病严重程度参照杨子林（2010）标准进行评价，如下表

甘蔗褐条病叶片病情的分级标准

分级	描述	抗性评价
			0级	叶片上无可见病斑	免疫
1级	病斑面积占叶面积的5％ 以下	高抗（HR）
			2级	病斑面积占叶面积的6％～10％	抗（R）
3级	病斑面积占叶面积的l1％一25％	中抗（MR）
			4级	病斑面积占叶面积的26％～40％	感（S）
5级	病斑面积占叶面积的41％～65％	中感（MS）
			6级	病斑面积占叶面积的66％～100％，发病叶片枯死	高感（HS）

5、抗褐条病实生苗组合及单株的选择方法

淘汰发病率大于25%的组合，余下组合表现为抗病的健康实生苗单株即可移栽大田。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种甘蔗实生苗大田移栽前进行褐条病接种胁迫方法，其特征在于，步骤如下：

（1）从蔗区采集表现甘蔗褐条病典型症状的新鲜病叶，当假植在苗床的甘蔗实生苗生长至4片真叶后，用褐条病菌浓度为100倍显微镜下每个视野有40-50个孢子的悬浮液对实生苗叶片进行喷雾接种，使褐条病病菌侵入实生苗幼嫩的叶片；

（2）接种后每天对实生苗进行喷水，保持温度为18~38℃，湿度50~ 90%；

（3）50-60天后，每10天调查一次，清除病苗和死苗，调查三次，90天后，淘汰组合发病率大于25%的组合，从而初步筛选出抗褐条病的实生苗及组合。

2.根据权利要求1所述的甘蔗实生苗大田移栽前进行褐条病接种胁迫方法，其特征在于，所述步骤（1）是用无菌水配制成浓度为100倍显微镜下每视野有40-50个孢子的孢子悬浮液，在温室用喷雾器对甘蔗实生苗叶片进行均匀喷雾接种，接种后盖上薄膜保湿过夜。