CN104823052A - 用于诊断和/或监测结核病的生物标记 - Google Patents

用于诊断和/或监测结核病的生物标记 Download PDF

Info

Publication number
CN104823052A
CN104823052A CN201380051264.3A CN201380051264A CN104823052A CN 104823052 A CN104823052 A CN 104823052A CN 201380051264 A CN201380051264 A CN 201380051264A CN 104823052 A CN104823052 A CN 104823052A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tuberculosis
biomarker
ltbi
sample
diagnosis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201380051264.3A
Other languages
English (en)
Inventor
J.库宁汉
A.贝茨
O.斯特格尔
A.利尔瓦尼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Albumen Ltd Logic Responsible Co
Original Assignee
Albumen Ltd Logic Responsible Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Albumen Ltd Logic Responsible Co filed Critical Albumen Ltd Logic Responsible Co
Publication of CN104823052A publication Critical patent/CN104823052A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G01N33/5695—Mycobacteria
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6866—Interferon
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6869—Interleukin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/555—Interferons [IFN]
    • G01N2333/57—IFN-gamma
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/26—Infectious diseases, e.g. generalised sepsis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及生物标记，所述生物标记用于同时在具有免疫活性的和免疫缺损的个体中诊断和/或监测结核病，监测个体对抗分枝杆菌化学治疗的反应，监测潜伏性结核病向活动性结核病的发展，区分活动性结核病与潜伏性结核病和类似结核病(TB)的其它临床病况。本发明还涉及使用所述生物标记来诊断、治疗和监测结核病的方法。以上在所有方面同时涉及肺部和肺外结核分枝杆菌感染，其中结核分枝杆菌是结核病的致病微生物。

Description

用于诊断和/或监测结核病的生物标记
发明领域
本发明涉及生物标记，所述生物标记用于同时在具有免疫活性的和免疫缺损的个体中诊断和/或监测结核病，监测个体对抗分枝杆菌化学治疗的反应，监测潜伏性结核病向活动性结核病的发展，区分活动性结核病与潜伏性结核病和类似结核病(TB)的其它临床病况。本发明还涉及使用所述生物标记来诊断、治疗和监测结核病的方法。以上在所有方面同时涉及肺部和肺外结核分枝杆菌感染，其中结核分枝杆菌是结核病的致病微生物。
发明背景
结核分枝杆菌可论证为世界范围的最成功的病原性微生物之一，并且是潜在致命的感染性疾病结核病的病原体。它也是全世界内从潜在可治愈的感染性疾病所致死亡的主要原因，估计每年有两百万相关死亡。
TB的发病机理复杂，最初发生感染是吸入气溶胶化感染性结核分枝杆菌的结果。针对杆菌损害的免疫应答影响了受感染个体是否将会继续发展局部肺部疾病、潜伏性疾病(LTBI)或作为血源性扩散的结果的散播性疾病。那些获得性潜伏性疾病保持无症状，但保留演变为活动性疾病的可能性(这在一生中在所有病例的大约10%中发生)。
估计大约三分之一的世界人口感染了潜伏性或活动性结核病。来自2011年的近来Health Protection Agency (HPA)数据报告在UK总共有9,042例活动性结核病。这代表了在上一年度有5.3%增加，并且表明在UK在流行率上呈上升趋势。耐受抗生素的结核分枝杆菌分离物的数量也在不断上升。
肺TB是结核分枝杆菌感染的最常见临床表现。症状典型地包括慢性咳嗽伴有或不伴有咯血、发热、盗汗和体重减轻。仅患有活动性肺病的个体才保持感染性，因为他们具有将杆菌气溶胶化的能力。几乎任何其他器官系统的感染都可能发生，并具有不同的伴随临床表现。免疫缺损个体可能具有非典型表现。
该病原体已经表现出极大的复燃，这部分地由在撒哈拉以南非洲地区的HIV流行所驱动，因为这些个体的免疫应答受损。这具有双重影响。首先，个体更可能从已有的潜伏性疾病发展为活动性疾病，第二，原发感染更可能表现为活动性疾病的形式，具有增加的感染性。随着增加的全球化，该气溶胶化病原体的检测、预防和早期合适治疗正在成为日益重要的公共卫生中优先考虑的问题。
尽管有广泛研究，但目前对结核分枝杆菌的免疫应答和发病机理的理解仍然不完全。此外，现有的诊断和治疗方法是欠佳的。结核病是通过在临床标本中的致病微生物(结核分枝杆菌)的鉴定而确诊。这通过长时间的微生物培养或通过PCR分析完成。确诊的辅助方法包括：诊断用成像(X射线或放射扫描)、结核菌素皮试(Mantoux/Heaf试验)和干扰素γ释放测定法(IGRA)。
对于快速确诊TB的现有障碍包括难以在实验室中培养这种生长缓慢的微生物，这会耗费大约3-12周，或难以获得用于PCR的含有分枝杆菌DNA的合适样品。后者在肺外TB的情况下可能需要有创性采样，这是昂贵的并且可能包括对患者的额外风险。
National Institute for Health and Clinical Excellence (NICE)目前正在评价基于PCR的测定法(称为“Xpert MTB/RIF试验”)，用于痰样品，以诊断疑似活动性肺结核病的病例，并检测利福平抗性突变，这类突变是多重耐药性结核病的标记。然而，该方法学取决于所获得的PCR-阳性样品。
作为欠佳的诊断工具的结果，抗微生物联合化学治疗的治疗通常是根据临床怀疑以及辅助诊断试验结果，凭经验进行。该方法的原理是双重的。患者接受抗微生物化学治疗的治疗试验，并且在肺结核病的情况下，通过降低痰中的杆菌载量而减少传播。
目前诊断的辅助方法包括：放射性成像、IGRA和结核菌素皮试(TST)。成像提供了典型特征是否出现的指导，而IGRA和TST通过查询针对TB-相关抗原的免疫应答，提供了可能之前暴露给结核分枝杆菌(M. tuberculosis)的相关信息。IGRA试验和TST试验的解释是复杂的并且混杂许多因素。这些包括若干其它因素：在暴露前(潜伏性疾病)，在用BCG接种前，和免疫抑制。然而，IGRA在TB低流行国家中已经日益成为可接受的辅助工具，用于评价存在结核病的可能性。可惜的是，成像、TST和IGRA试验都不能确诊活动性疾病的存在。
近来出版物已经强调了使用生物标记的组合作为结核病的诊断工具的潜力。WO 03/075016描述了在血中可检测的可溶性蛋白水平，即可溶性CD抗原(“sCD”) sCD15、sCD23、sCD27和sCD54，在结核病患者中可能被改变。来自美国胸科协会(American Thoracic Society，ATS) 2010国际会议的Medscape Medical News文章表明，IL-15和MCP-1的组合将84%患者准确地分类为具有活动性或潜伏性结核病。Chegou (第二届IGRA全球会议(2nd Global Symposium on IGRAs)，2009年5-6月)描述了相比单个分析物，分析物组合是更有希望的TB诊断学并提出测量EGF、sCD40L、MIP-1β、VEGF、TGF-α或IL-1α作为活动性TB的快速检验。Wu等人(2007) J Immunol 178, 3688-3694指出IL-8、FOXP3和IL-12β提供了区分潜伏性结核分枝杆菌感染和活动性结核病疾病的手段。
因为目前TB的诊断方法学欠佳，所以对于该病可用太多的治疗选项。作为该病原体的胞内性质的结果，以及在TB治疗学领域缺乏足够的创新的结果，TB治疗基础仍然是在最简单情况下在几个月的延长时间内的联合抗微生物化学治疗。然而，对治疗的部分依从性可导致抗微生物剂的欠佳治疗性水平，和抗生素抗性突变的微小进化。因此，患者可能在较长的期限内保持感染性，并且增加了传播频率。这些抗性突变的发展(其中有些对所有已知抗TB药物无反应(多重耐药性))近来在印度已经引起高度关注。
因此非常需要鉴定更有效的和高效的方法，用于同时确诊活动性和潜伏性TB，尤其是活动性和潜伏性TB的鉴别诊断。
发明概述
依据本发明的第一方面，提供sCD170作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病。
依据本发明的第二方面，提供IFN-γ和sCD170作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病。
依据本发明的进一步方面，提供诊断和/或监测结核病的方法，包括在采自试验受试者的临床样品中检测和/或定量测定sCD170，任选地与IFN-γ和/或本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合。
依据本发明的进一步方面，提供在个体中诊断结核病的方法，包括：
(a) 从个体获得试验生物样品；
(b) 定量测定sCD170的量，任选地与IFN-γ和/或本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合；
(c) 比较所述试验生物样品中的所述分析物生物标记的量与一种或多种对照样品中存在的量，使得所述试验生物样品中的所述分析物生物标记水平的差异表明结核病的诊断。
依据本发明的进一步方面，提供在患有或疑似患有结核病的受试者中监测抗微生物治疗功效的方法，包括在所述受试者的样品中检测和/或定量测定sCD170，任选地与IFN-γ和/或本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合。
依据本发明的进一步方面，提供在单个受试者中确定抗微生物结核病治疗功效的方法，包括：
(a) 从个体获得生物样品；
(b) 定量测定sCD170的量，任选地与IFN-γ和/或本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合；
(c) 比较所述试验生物样品中的所述分析物生物标记的量与一种或多种对照样品中存在的量，使得所述试验生物样品中的所述分析物生物标记水平的差异表明结核病的诊断。
依据本发明的进一步方面，提供在有需要的个体中治疗结核病的方法，其中所述方法包括以下步骤：
(a) 依据本文所述的方法在个体中诊断结核病；然后
(b) 在结核病阳性诊断的情况下将抗结核病药物给予所述个体。
本发明的进一步方面提供能够与分析物生物标记特异性结合的配体，例如天然发生的或化学合成的化合物。本发明的配体可包含能够与分析物生物标记特异性结合的肽、抗体或其片段、或适体或寡核苷酸。所述抗体可以是能够与分析物生物标记特异性结合的单克隆抗体或其片段。本发明的配体可以用可检测标记来标记，例如发光、荧光或放射性标记；或者或此外，本发明的配体可以用亲和标签来标记，所述标签例如生物素、抗生物素蛋白、链霉抗生物素或His(例如hexa-His)标签。
本发明的生物传感器可包含能够与针对分析物生物标记的抗体特异性结合的分析物生物标记或其结构/形状模拟物。还提供了阵列，其包含本文所述的配体或模拟物。
本发明还提供能够识别分析物生物标记的本文所述的一种或多种配体的用途，所述配体可以是天然存在的或化学合成的，并且适宜地为肽、抗体或其片段、适体或寡核苷酸、或任何其它天然或人工化学实体；或提供本发明生物传感器、本发明的阵列、或本发明的试剂盒的用途，用于检测和/或定量检测分析物。在这些用途中，可在生物样品上进行检测和/或定量测定，所述样品例如来自全血、血清、血浆、组织液、脑脊液(CSF)、滑液、滤泡液、精液、羊水、乳汁、尿、胸水、腹水、支气管肺泡灌洗液、唾液、痰、泪、汗水、淋巴液、吸出物、骨髓吸出物和粘液，或从其中的提取物或纯化物，或其稀释液。
提供诊断或监测试剂盒，以进行本发明的方法。这样的试剂盒将适宜地包含用于检测和/或定量测定分析物生物标记的本发明的配体，和/或本文所述的生物传感器和/或阵列，任选连同试剂盒使用说明书。
本发明的进一步方面是试剂盒，包括生物传感器，其能够检测和/或定量测定本文定义的一种或多种分析物生物标记，用于监测或诊断结核病。
结核病的生物标记是发现新靶标和药物分子的主要靶标，所述药物减少或预防所述病症相关症状的发展。因为分析物生物标记水平表明病症的诊断和药物反应的可能性，所以生物标记可用于在体外和/或在体内测定中鉴定新的治疗用化合物。本发明概述的生物标记可用于筛选调节分析物活性的化合物的方法。
因此，在本发明的进一步方面中，提供所述配体的用途，所述配体可以是本发明的肽、抗体或其片段或适体或寡核苷酸，或能够识别分析物生物标记的任何其它天然或人工化学实体；或提供本发明的生物传感器、或本发明的阵列、或本发明的试剂盒的用途，用于鉴定能够促进和/或抑制所述生物标记的产生的物质。
还提供在受试者中鉴定能够促进或抑制所述分析物的产生的物质的方法，包括将试验物质给予受试动物并检测和/或定量测定所述受试者的试验样品中存在的所述分析物生物标记水平。
附图简述
图1: IFN γ、TNF α、CD 222和IL-8的表达水平的散点图。
图2: CD5、CD120b、CD50和CD170的表达水平的散点图。
图3: IL-6、IL-10、CD106、CD26、CD56和CD85j的散点图。
图4: IFN γ相比TNF α的散点图。
图5: 用于活动性/潜伏性鉴别的ROC-曲线，使用联合模型以及所有考虑的抗原。
图6: 用于健康/活动性鉴别的ROC-曲线，使用联合模型以及所有考虑的抗原。
图7: 用于健康/潜伏性鉴别的ROC-曲线，使用联合模型以及所有考虑的抗原。
图8: 用于健康/TB鉴别的ROC-曲线，使用联合模型以及所有考虑的抗原。
图9: 用于疾病/活动性鉴别的ROC-曲线，使用联合模型以及所有考虑的抗原。
图10: 用于疾病/潜伏性鉴别的ROC-曲线，使用联合模型以及所有考虑的抗原。
图11: 用于疾病/TB鉴别的ROC-曲线，使用联合模型以及所有考虑的抗原。
图12: 用于活动性/潜伏性鉴别的ROC-曲线，使用联合模型以及图5中的所有考虑的抗原，但使用大得多的患者样品大小来重复。
图13: 用于活动性/潜伏性鉴别的ROC-曲线，使用联合模型以及图12中的所有考虑的抗原，但使用51个活动性TB样品和45个阳性IGRA试验的潜伏性TB样品的亚组来重复。
图14: IFN γ相比sCD170的散点图。
发明详述
依据本发明的第一方面，提供sCD170作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病。
本文提及的“sCD170”是指CD170 (分化簇170)的分泌的或可溶的或流出的形式。CD170也称为SIGLEC5 (唾液酸-结合Ig-样凝集素5)，其是由人体中的SIGLEC5基因所编码的蛋白。
然而，对于sCD170几乎没有什么可用的信息，本文提供的信息提供了sCD170和结核病诊断之间的第一个关联。
依据本发明的第二方面，提供IFN-γ和sCD170作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病。
具体地讲，诊断和/或监测结核病包括诊断结核病的存在或监测对结核病治疗干预的反应。
本文提及的“IFN-gamma”也包括“干扰素-γ”或“IFN-γ”，是二聚化的可溶性细胞因子，它是II型类别的干扰素的唯一成员。该干扰素的存在(在其历史上早期已知作为免疫干扰素)是在1970年被认识的，当时用PPD攻击结核菌素-敏化腹膜细胞并且所得上清液显示出抑制疱疹性口腔炎病毒生长。那份报告还包含目前广泛使用的用于测试TB的干扰素γ释放测定的基本观察结果。该干扰素后来被称为巨噬细胞-活化因子，该术语目前用于描述IFN-γ所属的更大的蛋白质家族。在人类中，IFN-γ蛋白是由IFNG基因所编码。
本文给出了数据，其描述了IFN-γ和sCD170组合在代表指示结核病诊断的高灵敏性和特异性诊断标记中的有效性。
依据可以提及的本发明的第三方面，提供IFN-γ和TNF-α作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病。
本文提及的“TNF-alpha”也包括“肿瘤坏死因子-α”、“TNF-α”、“cachexin”或“恶液质素”，是涉及全身性炎症的细胞因子并且是刺激急性期反应的细胞因子组的成员。它主要由活化的巨噬细胞产生，尽管它也可以由其它细胞种类产生。TNF的主要作用是调节免疫细胞。TNF，作为内源性热原质，能够诱导发热，诱导凋亡细胞死亡，诱导脓毒病(通过IL-1&IL-6的产生)，诱导恶病质，诱导炎症，并且抑制肿瘤发生和病毒复制。TNF生产的调节异常与各种人类疾病相关，包括阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、癌症、重性抑郁症和炎性肠病(IBD)。尽管仍有争议，但目前抑郁症和IBD的研究与TNF水平相关。肿瘤坏死因子-α可以在恶性肿瘤的情况下异位产生，并且在导致继发性高钙血症中和在与其过量产生相关的癌症中类似于甲状旁腺激素。
本文给出了数据，其描述了IFN-γ和TNF-α两者的组合在代表指示结核病诊断的高灵敏性和特异性诊断标记中的有效性。
在一个实施方案中，所述诊断包括以下任何一项的鉴别诊断：活动性结核病和潜伏性结核病；活动性结核病和健康对照；潜伏性结核病和健康对照；活动性结核病和疾病对照；和潜伏性结核病和疾病对照。在又一实施方案中，所述诊断包括活动性结核病和潜伏性结核病的鉴别诊断。本文给出了数据，其描述了本发明第一方面的sCD170单用和本发明第二方面的IFN-γ和sCD170的组合或本发明第三方面的IFN-γ和TNF-α的组合在代表指示这些关键区别的诊断的高灵敏性和特异性鉴别诊断标记中的有效性。具体地讲，IFN-γ和sCD170鉴别活动性和潜伏性结核病的能力。
尽管可以理解，本发明第一和第二方面的sCD170和IFN-γ或本发明第三方面的IFN-γ和TNF-α代表各发明的必要的分析物生物标记，但是也可使用用于诊断结核病的额外生物标记，以提高对于以下各项之间的区别的结核病诊断的统计显著性：活动性结核病和潜伏性结核病；活动性结核病和健康对照；潜伏性结核病和健康对照；活动性结核病和疾病对照；和潜伏性结核病和疾病对照。
因此，在一个实施方案中，本发明第一和第二方面的用途额外地包括选自以下的一种或多种另外的分析物：IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、sCD4、sCD25、sCD26、sCD32b/c、sCD50、sCD56、sCD66a、sCD83、sCD85j、sCD95、sCD106、sCD120b、sCD121b、sCD127、sCD154、sCD222、sCD226、sCDw329和TNF α。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、sCD4、sCD25、sCD26、sCD32b/c、sCD50、sCD56、sCD66a、sCD83、sCD85j、sCD95、sCD106、sCD120b、sCD121b、sCD127、sCD154、sCD222、sCD226、sCDw329和TNFα。
因此，在一个实施方案中，本发明第三方面的用途额外地包括选自以下的一种或多种另外的分析物：IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、sCD4、sCD25、sCD26、sCD32b/c、sCD50、sCD56、sCD66a、sCD83、sCD85j、sCD95、sCD106、sCD120b、sCD121b、sCD127、sCD154、sCD170、sCD222、sCD226和sCDw329。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、sCD4、sCD25、sCD26、sCD32b/c、sCD50、sCD56、sCD66a、sCD83、sCD85j、sCD95、sCD106、sCD120b、sCD121b、sCD127、sCD154、sCD170、sCD222、sCD226和sCDw329。
依据本发明的进一步方面，提供sCD66作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病。
在又一实施方案中，本发明第一和第二方面的用途额外地包括选自以下的一种或多种另外的分析物：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD222和TNF α。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD222和TNF α。
在又一实施方案中，本发明第三方面的用途额外地包括选自以下的一种或多种另外的分析物：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD170和sCD222。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD170和sCD222。
在又一实施方案中，本发明第一和第二方面的用途额外地包括选自以下的一种或多种另外的分析物：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD222和TNF α。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD222和TNF α。
在又一实施方案中，本发明第三方面的用途额外地包括选自以下的一种或多种另外的分析物：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD170和sCD222。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD170和sCD222。
在又一实施方案中，本发明的第一和第二方面的用途额外地包括每种以下的另外的分析物：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD222和TNF α。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD222和TNF α。
在又一实施方案中，本发明第三方面的用途额外地包括每种以下的另外的分析物：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD170和sCD222。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD170和sCD222。
在又一实施方案中，本发明第一和第二方面的用途额外地包括每种以下的另外的分析物：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD222和TNF α。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD222和TNF α。
在又一实施方案中，本发明第三方面的用途额外地包括每种以下的另外的分析物：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD170和sCD222。依据本发明的进一步方面，提供以下的一种或多种作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD170和sCD222。
可以理解，也可使用用于结核病的已知生物标记，以提高对于诊断结合病的统计显著性，以作出对如前所述的活动性和潜伏性疾病之间等的相关临床鉴别。例如，在一个实施方案中，本发明第一、第二或第三方面或本文提及的任何实施方案的用途额外地包括选自以下的一种或多种分析物生物标记：sCD15、sCD23、sCD27、sCD54、IL-15、MCP-1、EGF、sCD40L、MIP-1β、VEGF、TGF-α、FOXP3、IL-12β和IL-1α。
本发明的分析物生物标记具有提供优于现有的结核病诊断试验的许多关键优势的潜力。这些包括对血清学样品的快速诊断，所述样品可相对容易地获得，无需与RD1抗原过夜孵育。这在肺外TB的情况下和痰液经常被吞咽下去的儿科的情况下特别重要。它也在三类实验室准备缺乏时增加了TB诊断的可能性。数据还支持在免疫缺损个体中的增加的诊断能力。目前包括IGRA在内的基于免疫学的诊断辅助方法在HIV感染个体中具有诊断结核病的低灵敏性和特异性，主要因为相比HIV-阴性TB患者，HIV-感染的TB患者在响应TB-特异性抗原时产生更少量的γ干扰素(Tsiouris等人 (2006) J Clin Microbiol. 44(8): 2844–2850)。相比之下，根据本文显示的数据所证明的高水平的特异性和灵敏性，本发明的分析物生物标记在免疫缺损个体中在结核病(包括肺外结核病)诊断中可具有巨大用途。数据还支持关键临床区别之间的更灵敏和特异的区别，即：活动性结核病和潜伏性结核病；活动性结核病和健康对照；潜伏性结核病和健康对照；活动性结核病和疾病对照；以及潜伏性结核病和疾病对照。
本发明的分析物生物标记还提供了对于针对所述疾病的免疫应答的更大理解的潜力，和因此靶向免疫治疗的开发同时涉及活动性疾病的免疫治疗的开发，和暴露后预防的开发。
本文提及的“结核病”包括因存在病原体结核分枝杆菌所致的感染性疾病。关于结核病还包括关于活动性的有症状的结核病感染和潜伏性的无症状的结核病感染(LTBI)。结核病感染的大部分情况主要局限在肺部(即肺结核病)，然而，由大约四分之一的活动性结核病感染从肺部移动，导致其它类型的结核病，统称为肺外结核病。这在免疫抑制人群(即患有HIV或AIDS的那些)和幼儿中更经常发生。
在本发明的情况下，术语“'CD”是指被指定的单克隆抗体或一组单克隆抗体或多克隆抗体识别的细胞表面白细胞分子，其特异性地“簇集”所讨论的抗原/分子或多克隆抗体。许多(如果并非所有)这些CD分子产生可溶性形式，其通过可变剪接、蛋白水解裂解、离解或其它机制而从细胞表面释放出来。因此，在本发明的情况下，术语sCD(即可溶性CD分子)是术语分泌的或可溶的或流出的CD (sCD)的同义词并且是指白细胞分子的释放形式，其通常被发现在细胞表面表达并且其中该分子的至少一部分被指定单克隆抗体或一组单克隆抗体或多克隆抗体识别，如本文所述。然而应当注意，用于识别CD分子的抗体可能不是天然存在的单克隆抗体或多克隆抗体。它可以是工程化的、人工构建体，其由源自具有完整识别的抗体分子的表达片段组成，或它可以是非蛋白的分子识别剂，或蛋白识别剂，其并非抗体，或是抗体杂合体，例如通过将抗体结合位点引入不同架构中而制成。
有利的是，如WO 03/075016所定义，通过不同机制产生sCD的可溶性形式，所述机制包括但不限于选自以下的任一种：可变剪接、蛋白水解裂解和离解。
术语“生物标记”是指过程、事件或条件的独特的生物或生物衍生的指示剂。分析物生物标记可以用于诊断方法(例如临床筛选)，和预后评价和用于监测治疗结果，鉴定最可能对特定治疗性治疗有反应的患者，药物筛选和开发。生物标记及其用途对于鉴定新的药物治疗和对于发现药物治疗的新靶标是有价值的。具体地讲，本发明的生物标记具有有效监测对抗TB治疗的免疫应答的潜力。例如，可以容易地确定哪些患者具有缩短治疗过程的潜力(现有的对于敏感菌株的结核病治疗的范围为6-12个月)。
考虑到本发明主要涉及感染性疾病诊断的这一事实，结核病的药物抗性突变受到特别关注。例如，存在某些菌株的结核病，其对抗结核病治疗的特定形式具有抗性，例如利福平抗性结核病。以上提及的本发明的“监测”方面因此是至关重要的，因为对于治疗的无反应可以是所述结核病可能是利福平或多药抗性结核病的早期迹象。在这种情况下，可以在很早时期就使用替代治疗方案，这对于受治疗的个体会允许更大的生存可能性并减少传播。
依据本发明的进一步方面，提供在个体中诊断结核病的方法，包括：
a) 从个体获得试验生物样品；
b) 在所述试验生物样品中定量测定sCD170的量，任选地与IFN-γ和/或本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合；和
c) 比较在所述试验生物样品中的sCD170的量，任选地与IFN-γ和/或本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合，与一种或多种对照样品中存在的量，其中相比对照样品，在所述试验生物样品中sCD170的更高水平表明结核病的诊断。
依据本发明的进一步方面，提供在个体中诊断结核病的方法，包括：
a) 从个体获得试验生物样品；
b) 在所述试验生物样品中定量测定IFN-γ和TNF-α的量，任选地与本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合；和
c) 比较在所述试验生物样品中的IFN-γ和TNF-α的量，任选地与本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合，与一种或多种对照样品中存在的量，其中相比对照样品，在所述试验生物样品中IFN-γ和TNF-α的更高水平表明结核病的诊断。
在一个实施方案中，更高水平是相比对照样品的>1倍的差异，例如1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或介于其间任何范围的倍数差异。在一个实施方案中，更高水平是相比对照样品的介于1-75倍之间的差异，例如介于1.5-10之间，尤其是介于1.5-5之间。
在一个实施方案中，一种或多种生物标记可以被一种分子或分子的可检测片段取代，所述分子被发现在生物途径中的生物标记的上游或下游。
本文使用的术语“生物传感器”是指能够检测生物标记的存在的任何东西。生物传感器的实例描述于本文中。
本发明的生物传感器可包括本文所述的能够与分析物生物标记特异性结合的一种或多种配体。这样的生物传感器可用于检测和/或定量测定本发明的分析物。
用于诊断和监测结核病的诊断试剂盒描述于本文中。在一个实施方案中，所述试剂盒额外地含有能够检测和/或定量测定分析物生物标记的生物传感器。
本发明的监测方法可用于监测发作、发展、稳定、改善、缓解和/或对治疗干预的反应。也可以理解，监测还可以包括监测结核病的范围，以检测疾病的严重程度。本发明的标记可提供潜伏性结核病和活动性结核病的鉴别。例如，本发明在对于潜伏性疾病、活动性疾病的辅助诊断能力方面和确定具有可能发展为活动性疾病的潜伏性疾病的那些的方面发现了很大用途。
在本发明的诊断和/或监测方法中，在试验受试者的生物样品中检测和/或定量测定分析物生物标记可以在两次或更多次机会上进行。可在两次或更多次机会采集的样品中的生物标记水平之间进行比较。可以对在两次或更多次机会采集的样品中的分析物生物标记水平的任何变化进行评价。分析物生物标记水平的调节可用作结核病状态的指示剂。分析物生物标记水平随时间的下降可表示发作或发展，即所述病症的恶化，而分析物生物标记水平的增加则表示所述病症的改善或缓解，或反之亦然。
本发明的诊断或监测方法可包括在试验受试者的试验生物样品中定量测定分析物生物标记并比较所述试验样品中存在的分析物水平与一种或多种对照。
用于本文所定义的本发明方法的任一种的对照可包含选自以下的一种或多种对照样品：在健康个体的健康对照样品中发现的分析物生物标记水平、健康分析物生物标记水平；或健康分析物生物标记范围；患有其它呼吸道感染的患者；患有非TB分枝杆菌感染的患者；和已知患有活动性或潜伏性TB的患者。
在一个实施方案中，提供诊断结核病的方法，其包括：
(a) 在试验生物样品中定量测定sCD170的量，任选地与IFN-γ和/或本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合；和
(b) 比较所述试验样品中的所述分析物的量与一种或多种对照样品中存在的量。
在一个替代实施方案中，提供诊断结核病的方法，其包括：
(a) 在试验生物样品中定量测定IFN-γ和TNF-α的量，任选地与本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合；和
(b) 比较所述试验样品中的所述分析物的量与一种或多种对照样品中存在的量。
对于在结核病患者中增加的生物标记，相比健康对照水平，试验样品中的分析物生物标记的更高水平表明结核病的诊断；相比健康对照，试验样品中的分析物生物标记的相同或更低水平表明不存在结核病。对于在结核病患者中减少的生物标记，相比健康对照水平，试验样品中的分析物生物标记的更低水平表明结核病的诊断；相比健康对照，试验样品中的分析物生物标记的相同或更低水平表明不存在结核病。也可理解，其中对照样品包括得自活动性或潜伏性结核病患者的样品，活动性或潜伏性结核病的阳性诊断将会典型地需要与对照样品基本类似的分析物生物标记水平。
本文使用的术语“诊断”包括结核病的鉴定、证实和/或表征。本发明的监测和诊断方法可用于证实结核病的存在；通过评价发作和进展而监测所述病症的发展，或评价所述病症的改善或消退。监测和诊断方法也可用于临床筛选、预后、治疗选择、治疗益处的评价的评估方法，即用于药物筛选和药物开发。
高效的诊断和监测方法提供非常有力的“患者解决方案”并具有改善的预后的潜力，即通过建立准确的诊断，允许快速鉴定最合适的治疗(因此减少对有害的药物副作用的不必要的暴露)。
还提供的是在患有这类病症、疑似患有这类病症的受试者中监测结核病治疗功效的方法，包括检测和/或定量测定所述受试者的生物样品中存在的分析物生物标记。在监测方法中，试验样品可以在两次或更多次机会中采集。所述方法可进一步包括比较试验样品中存在的生物标记水平与一种或多种对照和/或与较早例如在开始治疗前采自相同试验受试者的一种或多种先前的试验样品，和/或在治疗的较早时期采自相同试验受试者的一种或多种先前的试验样品。所述方法可包括检测采自不同机会的试验样品中的生物标记水平的变化。
本发明提供在受试者中监测结核病治疗功效的方法，包括：
(a) 定量测定sCD170的量，任选地与IFN-γ和/或本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合；和
(b) 比较所述试验样品中的所述sCD170的量，任选地与IFN-γ和/或本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合，与一种或多种对照和/或较早采自相同试验受试者的一种或多种先前的试验样品中存在的量。
本发明还提供在受试者中监测结核病治疗功效的方法，包括：
(a) 定量测定IFN-γ和TNF-α的量，任选地与本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合；和
(b) 比较所述试验样品中的所述IFN-γ和TNF-α的量，任选地与本文中定义的一种或多种另外的分析物生物标记组合，与一种或多种对照和/或较早采自相同试验受试者的一种或多种先前的试验样品中存在的量。
对于在结核病患者中增加的生物标记，相比较早采自相同试验受试者的先前的试验样品的水平，试验样品中的分析物生物标记水平降低表明有益作用，例如所述治疗对所述病症的稳定或改善。对于在结核病患者中降低的生物标记，相比较早采自相同试验受试者的先前的试验样品的水平，试验样品中的分析物生物标记水平增加表明有益作用，例如所述治疗对所述病症的稳定或改善。
监测治疗功效的方法可用于监测现有治疗和新治疗在人类受试者和在非人类动物(例如动物模型)中的治疗有效性。可将这些监测方法合并到新药物质和物质组合的筛选中。
适宜地，从经历诊断或监测的受试者中采集样品的时间间隔将会是3天、5天、1周、2周、1个月、2个月、3个月、6个月、12个月、18个月或24个月。样品可在治疗之前和/或期间和/或之后采集。样品可以在受试者的剩余寿命或其部分中以一定间隔来采集。
本文使用的术语“检测”是指证实样品中存在的分析物生物标记的存在。定量测定样品中存在的生物标记的量可包括确定样品中存在的分析物生物标记的浓度。检测和/或定量检测可以在样品上直接进行，或在其提取物上或其稀释液上间接进行。
在本发明的替代方面，通过检测和/或定量测定能够特异性结合到生物标记的抗体或其片段来评价分析物生物标记的存在，所述抗体是由受试者身体在响应所述分析物时产生的并因此存在于患有结核病的受试者的生物样品中。
可通过合适鉴定患者的生物样品或生物样品的纯化物或提取物或其稀释液中特异性分析物生物标记的存在和/或量的任何方法，进行检测和/或定量测定。在本发明的方法中，可以通过测量一种或多种样品中的分析物生物标记的浓度，进行定量检测。在本发明方法中可以测试的生物样品包括全血、血清、血浆、组织液、脑脊液(CSF)、滑液、滤泡液、精液、羊水、乳汁、尿、胸水、腹水、支气管肺泡灌洗液、唾液、痰、泪、汗水、淋巴液、吸出物、骨髓吸出物和粘液、或其提取物或纯化物、或其稀释液。生物样品可包括来自活的受试者或来自验尸的组织匀浆、组织切片和活检标本。可以制备样品，例如其中以常规方法进行适当稀释或浓缩和贮存。在一个实施方案中，所述生物样品包括全血、血清或血浆。在又一实施方案中，所述生物样品包括血清，例如未活化的或未受刺激的血清。
可通过检测分析物生物标记或其片段，例如具有C-末端截短或具有N-末端截短的片段，进行分析物生物标记的检测和/或定量测定。片段适宜地为长度大于4个氨基酸，例如长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸。
所述生物标记可以例如通过SELDI或MALDI-TOF来直接检测。或者，所述生物标记可以经由与能够特异性结合所述生物标记的以下物质的相互作用而直接或间接测定：一种或多种配体例如抗体或其生物标记-结合片段、或其它肽、或配体例如适体、或寡核苷酸。所述配体可以具有可检测标记，例如发光、荧光或放射性标记、和/或亲和标签。
例如，可通过选自以下的一种或多种方法进行检测和/或定量测定：SELDI (-TOF)、MALDI (-TOF)、基于1-D凝胶的分析、基于2-D凝胶的分析、质谱(MS)、反相(RP) LC、大小渗透(凝胶过滤)、离子交换、亲和、HPLC、UPLC和其它基于LC或LC MS的技术。合适的LC MS技术包括ICAT? (Applied Biosystems, CA, USA)、或iTRAQ? (Applied Biosystems, CA, USA)。液相色谱(例如高压液相色谱(HPLC)或低压液相色谱(LPLC))、薄层色谱、NMR (核磁共振)光谱也可使用。
本发明的诊断和/或监测方法可包括通过夹心免疫测定法分析血浆、血清或全血样品，以检测分析物生物标记的存在或水平。这些方法也适合于临床筛选、预后、监测治疗结果、鉴定最可能对特定治疗性治疗有反应的患者，用于药物筛选和开发、以及鉴定药物治疗的新靶标。
可使用免疫学方法进行分析物生物标记的检测和/或定量测定，所述方法涉及能够与分析物生物标记特异性结合的抗体或其片段。合适的免疫学方法包括夹心免疫测定法，例如夹心ELISA，其中使用两种抗体进行分析物生物标记的检测，所述抗体识别分析物生物标记上的不同的表位；放射免疫测定法(RIA)，直接、间接或竞争性酶联免疫吸附测定法(ELISA)、酶免疫测定法(EIA)、荧光免疫测定法(FIA)、蛋白质印迹、免疫沉淀和任何基于颗粒的免疫测定法(例如使用金、银或乳胶颗粒、磁颗粒或Q-dots)。免疫学方法可以在例如微量滴定板或条形式上进行。
本发明的免疫学方法可以是基于例如任何以下方法。
免疫沉淀是最简单的免疫测定方法；该法测定沉淀量，所述沉淀是在试剂抗体与样品孵育并与其中存在的靶抗原反应后形成不可溶聚集物后形成的。免疫沉淀反应可以是定性或定量的。
在颗粒免疫测定法中，将若干抗体连接到颗粒上，并且该颗粒能够同时结合许多抗原分子。这极大地加速了可见反应速度。这允许快速和灵敏地检测生物标记。
在免疫浊度测定法中，抗体和生物标记上的靶抗原的相互作用导致形成免疫复合物，其太小而不能沉淀。然而，这些复合物将会散射入射光并且可使用浊度计对其进行测定。在反应的数分钟内可以测定抗原即生物标记的浓度。
放射免疫测定(RIA)方法使用放射性同位素例如I125来标记抗原或抗体。所用同位素发射γ射线，通常在去除未结合(游离)放射性标记后对其进行测量。相比其它免疫测定法，RIA的主要优势是更高的灵敏度，容易进行信号检测、和良好确定的快速测定。主要劣势是使用辐射所具有的健康和安全风险，以及维持被许可的辐射安全和处理程序相关的时间和花费。为此，RIA在很大程度上已被酶免疫测定法的常规临床实验室实践所替代。
已经开发酶(EIA)免疫测定法作为放射免疫测定法(RIA)的替代方案。这些方法使用酶来标记或抗体或靶抗原。EIA的灵敏度接近RIA，没有放射性同位素所具有的危险。一种最广泛使用的EIA检测方法是酶联免疫吸附测定法(ELISA)。ELISA方法可使用两种抗体，一种对靶抗原具有特异性，另一种与酶偶联，加入该酶的底物导致产生化学发光或荧光信号。
荧光免疫测定法(FIA)是指使用作用于底物以产生荧光产物的荧光标记或酶标记的免疫测定法。与比色法(分光光度法)测量相比，荧光测量固有地更灵敏。因此，相比利用吸光度(光密度)测量的EIA方法，FIA方法具有更高的分析灵敏性。
化学发光免疫测定法使用化学发光标记，其在受到化学能激发时产生光；使用光检测器检测发光。
因此可使用众所周知的方法进行本发明的免疫学方法。任何直接(例如使用传感器芯片)或间接程序都可用于本发明的分析物生物标记的检测。
生物素-抗生物素蛋白或生物素-链霉抗生物素系统是通用标记系统，其可适用于本发明的免疫学方法。一种结合配偶体(半抗原、抗原、配体、适体、抗体、酶等)用生物素标记，而另一种配偶体(表面，例如孔、珠、传感器等)用抗生物素蛋白或链霉抗生物素标记。这是用于免疫测定法、基因探针测定法和(生物)传感器的常规技术，但是是间接固定途径，而不是直接途径。例如可将对本发明的分析物生物标记具有特异性的生物素化配体(例如抗体或适体)固定在抗生物素蛋白或链霉抗生物素表面上，然后可将固定化配体暴露给含有或疑似含有分析物生物标记的样品，以检测和/或定量测定本发明的分析物生物标记。然后可以通过本文所述的免疫学方法进行固定化抗原的检测和/或定量测定。
本文使用的术语“抗体”包括但不限于：多克隆抗体、单克隆抗体、双特异性抗体、人源化抗体或嵌合抗体、单链抗体、片段(例如FAb、F(Ab')2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、双抗体)、Fab表达文库所产生的片段、抗独特型(抗Id)抗体和以上任何的表位-结合片段。本文使用的术语“抗体”也指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有与抗原特异性结合的抗原结合位点的分子。本发明的免疫球蛋白分子可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或亚类。
对疾病具有特异性的关键生物标记的鉴定对于诊断程序和治疗方案的整合而言是极为重要的。使用预测的生物标记，可以开发合适的诊断工具，例如生物传感器；因此，在本发明的方法和用途中，可以使用生物传感器、微量分析系统、微量工程(microengineered)系统、微量分离系统、免疫色谱系统或其它合适的分析设备，进行检测和定量测定。生物传感器可结合用于检测生物标记的免疫学方法、电、热、磁、光学(例如全息)或声学技术。使用这样的生物传感器，有可能检测生物样品中存在的预期浓度的靶生物标记。
因此，依据本发明的进一步方面，提供用于诊断和/或监测结核病的仪器，其包括生物传感器、微量分析系统、微量工程系统、微量分离系统和/或免疫色谱系统，所述系统经设计用于检测和/或定量检测本文所述的任何分析物生物标记。
适宜地，用于检测本发明的一种或多种生物标记的生物传感器将生物分子识别与合适方式结合，以便将样品中的生物标记的存在或量的检测转化为信号。生物传感器可以适合“交替地点”诊断试验，例如在病房、门诊部、手术室、家里、野外或工作场所。
检测本发明的一种或多种生物标记的生物传感器包括声音传感器、等离子体共振传感器、全息传感器和微量工程传感器。印迹识别元件(Imprinted recognition element)、薄膜晶体管技术、磁声谐振器装置和其它新的声-电系统可用于生物传感器，用于检测本发明的一种或多种生物标记。
本发明的第二和第三方面的分析物生物标记IFN-γ和TNF-α的水平可以依照上述任何技术来测量。在一个具体的实施方案中，可以依照以下测定法来测量IFN-γ和TNF-α水平：MSD?测定法，例如Human Pro-inflammatory 7-Plex Assay Ultra-Sensitive Kit (Mesoscale Discovery；Catalogue No. K15008C-1, K15008C-2或K15008C-4)。
该促炎测定法通过提供已用在空间独特点上的捕获抗体预先包被的板，以夹心免疫测定形式检测IFN-γ或TNF-α。然后将样品加入板中，连同含有用电化学发光化合物标记的抗IFN-γ或抗TNF-α 检测抗体的溶液，并孵育指定时间周期。样品中的IFN-γ或TNF-α将结合到固定在工作电极表面上的捕获抗体并且通过结合的IFN-γ分析物或TNF-α分析物的带标记的检测抗体的募集完成夹心。再加入MSD读数缓冲液以提供电化学发光的化学环境并将该板装载到MSD SECTOR?仪器中，进行分析。在SECTOR仪器内，将电压施加到板电极上，导致结合到电极表面的标记发光。仪器测量所发出的光的强度，以提供样品中存在的IFN-γ或TNF-α的定量测量。可以理解，按照上述用于IFN-γ和TNF-α的类似程序，可以定量测定其它细胞因子和趋化因子(例如IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12β、IL-15、IL-12p70、MCP-1、EGF、MIP-1β、VEGF、TGF-α和FOXP3)。
当分析物生物标记包括CD分子，例如sCD4、sCD15、sCD23、sCD25、sCD26、sCD27、sCD32b/c、sCD40L、sCD50、sCD54、sCD56、sCD66a、sCD83、sCD85j、sCD95、sCD106、sCD120b、sCD121b、sCD127、sCD154、sCD170、sCD222、sCD226或sCDw329时，可从血清或血浆或其它体液的样品测定水平，使用适于检测可溶性CD的试剂，其包括但不限于针对那些CD而产生的抗体。在一个实施方案中，单克隆抗体或工程抗体，包括针对sCD或它们的膜结合形式而产生的噬菌体抗体，用于它们的检测。然而，非蛋白试剂在原则上也可用于检测sCD。同样，检测分子可含有结合到另一分子的架构或工程架构中的抗体结合位点片段。市售的用于测量CD水平的试剂盒包括来自以下的那些：Diaclone 1, Bd A Fleming BP 1985 F-25020 Besancon Cedex-France and Medsystems Diagnostics GmbH, Rennweg 95b, A-1030 Vienna Austria。
用于测量sCD的合适技术包括但不限于免疫测定法，包括ELISA，使用市售的试剂盒例如上述的那些，本文所述的流式细胞术尤其是多路颗粒流式细胞术。本领域技术人员将会知道用于测量个体的样品中的CD水平的其它合适的技术，包括抗体“芯片”阵列类型技术或芯片技术，使用非经典抗体结合位点移植的分子。
在一个具体的实施方案中，测量sCD的方法包括在上文中定义的并在本文中修改的MSD?测定法。
涉及本发明的一种或多种分析物生物标记的检测和/或定量测定方法可在台式机上进行，或可以结合到一次性的、诊断或监测平台上，其可用于非实验室环境，例如在医生办公室或在患者床边。用于进行本发明方法的合适的生物传感器包括具有光或声阅读器的“信用”卡。生物传感器可被设计为允许所采集的数据经电子传输给医生，以进行解释并因此可形成电子-神经医学(e-neuromedicine)的基础。
任何合适的动物都可用作受试的非人类动物，例如非人类灵长类、马、牛、猪、山羊、绵羊、狗、猫、鱼、啮齿类例如豚鼠、大鼠或小鼠；昆虫(例如果蝇)、两栖类(例如爪蟾)或秀丽新小杆线虫(C. elegans)。
试验物质可以是已知化学物或药用物质，例如但不限于抗抑郁症治疗药；或试验物质可以是新的合成的或天然的化学实体，或两种或更多种上述物质的组合。
提供在受试者中鉴定能够促进或抑制分析物生物标记的产生的物质的方法，包括使试验细胞暴露给试验物质并监测所述试验细胞内的、或所述试验细胞分泌的分析物生物标记水平。
所述试验细胞可以是原核细胞，然而真核细胞将适宜地用于基于细胞的试验方法。适宜地，所述真核细胞是酵母细胞、昆虫细胞、果蝇细胞、两栖类细胞(例如爪蟾)、秀丽新小杆线虫(C. elegans)细胞或是人、非人灵长类、马、牛、猪、山羊、绵羊、犬、猫、鱼、啮齿类或鼠来源的细胞。
在鉴定潜在治疗用途的物质的方法中，可以使用能够表达分析物的非人类动物或细胞。
筛选方法还包括鉴定能够结合到本发明的分析物生物标记的配体的方法，包括在分析物生物标记存在时，在适合结合的条件下孵育试验物质，并检测和/或定量测定分析物与所述试验物质的结合。
基于本发明的生物标记、用途和方法的高通量筛选技术，例如设计为阵列形式，适用于监测生物标记特征(signature)，用于鉴定潜在有用的治疗用化合物，例如配体，例如天然化合物、合成的化合物(例如来自组合文库)、肽、单克隆抗体或多克隆抗体或其片段，其可以能够结合生物标记。
本发明的方法可以以阵列形式进行，例如在芯片上，或作为多孔阵列。方法可以适应平台，用于单一试验、或多个相同或或多个不同试验，并且可以以高通量形式进行。本发明的方法可包括进行一种或多种额外的、不同的试验，以证实或排除诊断，和/或进一步表征病症。
本发明还提供物质，例如通过本发明的鉴定或筛选方法或用途已鉴定或可鉴定的配体。这样的物质可以能够直接或间接地抑制分析物生物标记的活性，或抑制分析物生物标记的产生。术语“物质”包括这样的物质：其不直接结合分析物生物标记和直接调节分析物生物标记的功能，而是间接调节分析物生物标记的功能。配体也包括在该术语物质中；本发明的配体(例如天然的或合成的化合物、肽、适体、寡核苷酸、抗体或抗体片段)能够结合、适宜地特异性结合到分析物上。
本发明还提供用于治疗结核病的本发明的物质。
还提供的是本发明的物质在结核病治疗中的用途。
还提供的是本发明的物质作为药物的用途。
再进一步提供的是本发明的物质在制备用于治疗结核病的药物中的用途。
依据本发明的进一步方面，提供在有需要的个体中治疗结核病的方法，其中所述方法包括以下步骤：
(a) 依据本文所述的方法在个体中诊断结核病；然后
(b) 在结核病阳性诊断的情况下将抗结核病药物给予所述个体。
在一个实施方案中，所述抗结核病药物是：选自以下的一种或多种一线药物：乙胺丁醇、异烟肼、吡嗪酰胺、利福平；和/或选自以下的一种或多种二线药物：氨基糖甙类(例如，阿米卡星、卡那霉素)、多肽(例如，卷曲霉素、紫霉素、恩维霉素)、氟喹诺酮(例如，环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星)、硫代酰胺类(例如乙硫异烟胺、丙硫异烟胺)、环丝氨酸(closerin)或特立齐酮；和/或选自以下的一种或多种三线药物：利福布汀、大环内酯类(例如，克拉霉素)、利奈唑胺、胺苯硫脲、硫利达嗪、精氨酸、维生素D和R207910。
提供用于诊断和/或监测结核病的试剂盒。适宜地，本发明的试剂盒可含有选自以下的一种或多种组分：对分析物生物标记或分析物生物标记的结构/形状模拟物具有特异性的配体、一种或多种对照、一种或多种试剂和一种或多种消耗品；任选地连同按照本文所定义的任何方法的试剂盒的使用说明书。在一个实施方案中，所述试剂盒鉴别诊断活动性和潜伏性结核病。
结核病的生物标记的鉴定允许整合诊断程序和治疗方案。目前在确定有效治疗中有明显延迟并因此不能进行药物反应的快速评价。传统上，对于给定的治疗方法，许多结核病治疗需要治疗试验持续数周至数月。本发明的分析物生物标记的检测可用于在受试者参与临床试验之前筛选他们。所述生物标记提供了表明治疗反应、反应失败、不良副反应谱、药物依从性程度和足够血清或血浆药物水平实现的方法。所述生物标记可以用于提供不良药物反应的警告。生物标记可用于开发个性化治疗，因为对反应的评价可用于微调剂量，尽量减少处方药物的量，缩短达到有效治疗的延迟时间，并避免不良药物反应。因此通过监测本发明的生物标记，可以精确定制对患者的照顾，以满足由患者的病症和药物基因组特征所决定的需要，因此生物标记可用于滴定最佳剂量，预测阳性治疗反应并鉴定具有严重不良反应的高风险的那些患者。
基于生物标记的试验提供“新”患者的一线评价，并且在时间范围内且准确提供准确快速诊断的客观测定，而这是使用目前主观测定所不能达到的。
生物标记监测方法、生物传感器和试剂盒也是重要的患者监测工具，使医生能够确定复发是否是因为所述病症恶化、不良的患者依从性或药物耐受性引起。具体地讲，本发明也可用于监测患者服用特定药物(试剂)和/或经历特定治疗方案的依从性。
如果药物治疗被认为是不适当的，则可恢复或增加治疗；如果合适的话，可以指定对治疗的改动。因为生物标记对所述病症的状态是敏感的，所以它们提供了对药物治疗的影响的指示。
以下研究说明了本发明。
实施例1: IFN-γ和TNF-α作为TB生物标记的有效性
评价了IFN-γ、TNF-α和额外CD对于鉴别不同样品类型(健康、潜伏性TB、活动性TB、疾病)的有效性的用途。
1. IFN-γ和TNF-α的组合始终比这些抗原单用产生更好的鉴别性信号。
2. 鉴定了额外CD，对于某些预测任务而言，其进一步改善预测特征。
在n=92份人类样品上进行研究，以鉴定能够区分结核病受试者和无结核病的对照受试者的潜在标记。
每个患者的人口统计学资料概述于表1：
表1: 所分析的各样品的人口统计学和患者数据
组群分组 诊断分类 BCG史? TB位置 年龄 性别 共患病
A 4C 是 N/A 52 男 银屑病
A 4A 是 N/A 36 男 无
A 4C 是 N/A 43 男 糖尿病、癫痫、高血压
A 4B 是 N/A 34 女 无
A 4B 是 N/A 26 女 无
A 4B 是 N/A 43 男 无
A 4A 是 N/A 32 男 无
A 4B 是 N/A 37 男 无
A 4B 未知 N/A 61 男 无
A 4B 是 N/A 32 女 无
A 4B 否 N/A 26 男 无
A 4C 是 N/A 25 男 无
A 4C 否 N/A 30 女 无
A 4B 是 N/A 34 女 无
A 4B 未知 N/A 24 女 无
A 4B 否 N/A 48 男 无
A 4B 否 N/A 40 男 无
A 4B 否 N/A 27 女 无
A 4B 是 N/A 26 男 无
A 4B 未知 N/A 62 女 无
A 4B 否 N/A 33 女 无
A 4B 否 N/A 19 女 无
A 4B 是 N/A 77 女 淋巴瘤、乳癌、COPD
A 4B 是 N/A 62 男 糖尿病、银屑病
A 4B 是 N/A 35 男 无
A 4B 是 N/A 38 男 无
A 4B 否 N/A 65 男 无
A 4B 否 N/A 32 女 无
A 4C 是 N/A 34 女 无
A 4B 是 N/A 46 男 无
A 4B 是 N/A 30 女 无
A 4B 否 N/A 57 女 甲状腺机能亢进
A 4C 是 N/A 29 女 无
A 4C 是 N/A 32 男 无
A 4B 是 N/A 50 女 无
A 4C 是 N/A 36 女 无
A 4B 是 N/A 35 女 无
A 4B 是 N/A 34 女 无
A 4B 是 N/A 42 女 无
A 4B 是 N/A 23 男 无
B 1 未知 肺 47 男 无
B 1 未知 肺 34 男 无
B 1 未知 肺 40 男 无
B 2 是 肺 33 女 无
B 1 是 肺 48 女 无
B 1 是 肺 35 女 创伤后应激障碍
B 1 是 肺 26 男 无
B 1 是 肺 20 男 癫痫
B 2 是 肺 61 女 无
B 1 未知 肺 35 男 无
B 1 是 肺 31 男 无
B 1 是 肺 22 男 无
B 1 未知 肺 27 女 无
B 1 否 肺 30 男 无
B 1 是 肺 33 男 无
B 1 是 肺 28 女 无
B 2 未知 肺和腹部 32 男 无
B 1 是 肺 50 女 哮喘
B 2 是 肺和骨 42 男 糖尿病
B 1 否 肺 61 男 无
B 2 是 肺+葡萄膜炎 38 女 视网膜脉管炎
B 1 是 颈部淋巴结 40 男 HIV
B 1 是 肺 55 男 COPD
B 2 是 脊柱 41 女 无
B 2 是 肺 20 女 无
B 1 是 肺(Millary) 21 男 无
B 2 是 肺 43 男 无
B 1 是 肺 31 男 无
B 2 是 肺 36 女 无
B 1 是 肺 50 女 哮喘
B 1 是 肺 29 男 无
B 2 是 颈部淋巴结 54 女 无
B 1 是 肺 68 女 无
B 1 是 肺 22 男 无
B 2 否 肺 32 男 无
B 1 是 肺 28 女 无
B 2 是 肺 29 女 无
C 4D 是 N/A 34 女 无
C 4D 是 N/A 30 男 无
C 4D 是 N/A 38 女 无
C 4D 是 N/A 23 男 无
C 4D 是 N/A 35 男 无
C 4D 是 N/A 23 女 无
C 4D 是 N/A 33 男 无
C 4D 是 N/A 25 女 无
C 4D 是 N/A 28 女 无
C 4D 是 N/A 31 男 无
C 4D 是 N/A 24 女 无
C 4D 是 N/A 22 女 无
C 4D 是 N/A 23 女 无
C 4D 是 N/A 23 女 无
C 4D 是 N/A 23 女 无
NB: 组群A = 潜伏性TB，组群B = 活动性TB，组群C =对照。按照以下文献所述，根据表1计算诊断分类：Dosanjh等人(2008) Ann Int Med 148, 325-336。
使用Meso Scale Discovery? (MSD) Sector 6000仪器，通过检测大量潜在分析物的量进行分析。例如，本发明的生物标记检测如下：
IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10
使用Human Pro-inflammatory 7-Plex Assay (Meso Scale Discovery Catalogue Numbers K15008C-1, K15008C-2或K15008C-4)，完全依照制造商的说明书，定量测定这些标记。可以理解，按照上述用于IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10的类似程序，可以定量测定其它细胞因子和趋化因子(例如IL-1α、IL-1β、IL-12β、IL-15、IL-12p70、MCP-1、EGF、MIP-1β、VEGF、TGF-α和FOXP3)。
sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD170和sCD222
使用改良的Meso Scale Discovery Assay，通过使用以下试剂和方案，定量测定这些标记：
所用试剂
人IGF-IIR (DuoSet DY2447来自R&D系统 : 批号1272152 : 有效期至25.10.15)
捕获抗体
在PBS中稀释1:180 (19μl在3.5 ml中)
移液30μl/孔的MSD标准结合板
密封+ 在+4孵育过夜
用MSD洗涤缓冲液洗涤3次
用150μl MSD Blocker A封闭至少1小时
用MSD洗涤缓冲液洗涤1次
标准
用0.5 ml 1%BSA/PBS重配
=290 ng/ml = 290,000 pg/ml
在DELFIA Dil II中稀释1:5 = 58,000 pg/ml (50 + 200) = std 7
然后在DELFIA Dil II中系列稀释1:2 (100+100) = 29000、14500、7250、3625、1813, + 0 pg/ml
QC : 1 = 合并的血浆 1.2.11
　　2 = 稀释的(spiked)血浆 1.2.11
　　3 = 稀释的合并液26.7.10
测定
移液40μl DELFIA Dil II/孔+ 10μl std/QC/未知，一式两份
覆盖&在板振动器上在室温下孵育2小时
用MSD洗涤缓冲液洗涤3次
生物素化抗体
在MSD稀释剂100中稀释抗体1：180 (19μl在3.5 ml中)
加入25μl/孔
覆盖和在板振动器上在室温下孵育1小时
用MSD洗涤缓冲液洗涤3次
链霉抗生物素-SulphoTAG
在MSD稀释剂100中稀释1：1000 (3μl在3 ml中)
加入25μl/孔
覆盖和在板振动器上在室温下孵育30分钟
洗涤3次
150μl读数缓冲液+ 在MSD Sector 6000?读数器上读数
使用MSD Workbench software?包计算结果
可以理解，按照上述用于sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD170和sCD222的类似程序，可以定量测定其它可溶性分化簇(soluble cluster of differentiation，sCD)分子(例如sCD4、sCD15、sCD23、sCD27、sCD32b/c、sCD40L、sCD54、sCD66a、sCD83、sCD95、sCD121b、sCD127、sCD154、sCD226或sCDw329)。
结果
原始数据处理和标准化
抗原水平被差异地稳定化，以消除平均表达水平和技术重复差异之间的关系。该转化近似相当于用额外的偏移和数值范围来对数转化数据并且对于大部分微阵列分析而言是标准。
交叉验证分析，以评价预测表现
我们评价了抗原的替代组合对于区分不同样品类型的任务的预测能力。使用10倍交叉验证进行所有实验。对于每一倍数，数据的9/10部分用于训练非线性支持向量机(SVM)分类器，以预测剩余1/10样品的样品标记。使用接受者操作特征曲线下面积(AUC)评价和报告预测准确率。当样品组平衡时，完美的预测物得到的AUC为1.0，而随机预测物对应的AUC为0.5。始终失败的预测物得到的AUC为0.0。为了评价所得结果的可靠性，对于每次实验使用的替代随机种子，一式三份地重复所有实验。我们将跨越这些预测实验的平均表现和变异性报告为正负一个标准差的估计值。
图1显示对于所考虑的样品类型(健康、活动性、潜伏性、疾病)的IFN-γ和TNF-α的散点图。首先，在定性分析时可见IFN-γ和TNF-α得到补充特征。而IFN-γ看来最能区分活动性疾病样品，TNF-α区分健康样品和潜伏性疾病样品。
合并对于相同样品的TNF-α和IFN-γ测定，得到引人注目的不同疾病分组的2D-图谱(图4)，其相比任一抗原单用更能区分。第二，使用任一单个抗原或其组合进行计算机预测。
表2显示对于这些替代物和对于不同预测任务而言的预测表现。两种抗原的组合始终胜过基于单一抗原的方法。对于不同抗原的预测能力的这种定量评价与来自散点图(图1-3)的定性评价是一致的。
表2: 对于替代分类任务而言的不同的抗原组合的预测表现
表2的结果显示接受者操作特征曲线下面积(AUC)。正负一个标准差的误差棒在括号中给出并且是从3次重复实验中评价而来。从两个样品类型的相对大小中推断出随机预测物的表现。在任何分类中最好表现的抗原组合用粗体显示。如果若干组合表现得同样好，则它们都被标出。
表2所示的结果证明IFN-γ和TNF-α的组合始终是比任何抗原单用更好的预测物。
实施例2: 额外生物标记与IFN-γ和TNF-α组合的有效性
鉴定了额外抗原，其可补充从IFN-γ和TNF-α所观察到的鉴别模式。首先，图1-3显示对于所有抗原的散点图，所述抗原在至少两种所考虑的样品类型(健康、活动性、潜伏性、疾病)之间显著地差异性表达(pv=0.05)。若干sCD看来在样品类型之间加入额外的鉴别轴线，补充了IFN-γ和TNF-α。表3概述了当将这些CD与TNF-α和IFN-γ组合时的预测表现。这种“联合”预测物表现得至少与IFN-γ和TNF-α一样好并且对于预测任务健康/TB和健康/潜伏性而言通常改善了用两种抗原模型所得的结果。
表3: 对于替代分类任务而言的不同的抗原组合的预测表现
表3显示接受者操作特征曲线下面积(AUC)。正负一个标准差的误差棒在括号中给出并且是从3次重复实验中评价而来。从两个样品类型的相对大小中推断出随机预测物的表现。在任何分类中最好表现的抗原组合用粗体显示。如果若干组合表现得同样好，则它们都被标出。
最终，图5-11描绘了对于联合预测物和所有6个所考虑的预测任务的接受者操作曲线。
实施例3: 使用增加的患者样品大小的活动性/潜伏性模型的重复
本实验的目的是，对于在最初筛选中鉴定的并提供在实施例1和实施例2中所述的结果的活动性/潜伏性预测特征进行验证。为此，无关样品来自伦敦帝国理工学院(Imperial College London)。这些包括以下数量的活动性和潜伏性TB病例：
活动性TB: 94个样品(51: IGRA阳性)
潜伏性TB: 89个样品(45: IGRA阳性)
表4: 所分析的各样品的人口统计学和患者数据
性别 年龄 BCG? IGRA 诊断 诊断分类 组别
女 56 Y QFT+ 肺+葡萄膜炎TB 2 ATB
女 51 N QFT- LTBI 4B LTBI
女 21 Y NT 淋巴结TB 1 ATB
男 21 Y QFT- LTBI 4A LTBI
女 49 Y QFT+ 皮肤TB 2 ATB
女 33 Y QFT+ LTBI 4B LTBI
女 25 N QFT-, Tspot- 肺TB 2 ATB
女 34 Y QFT+ LTBI 4B LTBI
n/a n/a   QFT+ n/a 4B ATB*
女 55 N QFT- LTBI 4C LTBI
女 21 Y NT 腹TB 1 ATB
女 39 N QFT+ LTBI 4B LTBI
男 34 n/a QFN+ 肺TB 2 ATB
女 28 N NT LTBI 4B LTBI
男 35 Y QFT+, Tspot+ 胃肠道TB 2 ATB
女 56 Y Tspot+ LTBI 4B LTBI
男 34 Y NT 肺TB 1 ATB
男 57 Y Tspot+ LTBI 4A LTBI
女 39 Y QFT+ 淋巴结TB 2 ATB
男 38 Y Tspot+ LTBI 4C LTBI
男 48 Y NT 脊柱(骨/关节)TB 1 ATB
女 33 N QFN+ LTBI 4B LTBI
女 28 N QFT+ 淋巴结TB 2 ATB
女 38 Y QFN+ X2 LTBI 4C LTBI
男 18 N QFN-IND 肺TB 1 ATB
男 24 Y QFT+ LTBI 4B LTBI
男 23 Y QFN+ 肺TB 1 ATB
n/a n/a     LTBI?   LTBI*
女 27 Y Tspot+ 肺TB 2 ATB
女 34 Y Tspot+ LTBI 4B LTBI
女 68 n/a Tspot+ 淋巴结TB 2 ATB
男 25 N QFT+ LTBI 4B LTBI
女 79 N Tspot+ 皮肤TB 2 ATB
男 30 Y Tspot+ LTBI 4C LTBI
女 31 Y QFT+ TB葡萄膜炎 2 ATB
n/a n/a n/a 样品 LTBI 未用 LTBI*
男 27 n/a NT 肺TB 1 ATB
n/a n/a n/a n/a LTBI 4C LTBI*
女 41 Y NT 泌尿生殖道TB 1 ATB
女 78 N QFN+ LTBI 4B LTBI
女 28 Y NT 淋巴结TB 1 ATB
男 44 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 44 n/a NT 腹部+颈LN TB 2 ATB
女 40 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 68 n/a NT 肺TB 1 ATB
男 51 Y QFN-Tspot+ LTBI 4B LTBI
女 58 Y Tspot+ 淋巴结/葡萄膜炎TB 2 ATB
女 31 Y QFN-Tspot+ LTBI 4B LTBI
男 34 Y NT TB葡萄膜炎 2 ATB
男 37 Y Tspot+ LTBI 4C LTBI
女 20 Y Tspot+ 肺TB 1 ATB
男 34 Y QFN/Tspot+ LTBI 4A LTBI
女 20 N NT 肺TB 1 ATB
男 41 Y QFN/Tspot+ LTBI 4C LTBI
男 40 Y Tspot+ 肺TB 1 ATB
女 32 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
女 44 Y QFT+ 淋巴结TB 2 ATB
女 25 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 31 Y NT 咽后和脊柱TB 1 ATB
女 44 Y QFN-Tspot+ LTBI 4B LTBI
n/a n/a       4D ATB
女 31 Y QFN/Tspot+ LTBI 4C LTBI
n/a n/a         ATB*
女 23 n/a QFN-ve  Tspot+ LTBI 4B LTBI
男 33 Y QFT+ 淋巴结TB 2 ATB
男 29 N QFN+ LTBI 4B LTBI
女 38 N QFN+ 肺TB 1 ATB
男 43 N QFN+ LTBI 4B LTBI
男 35 Y NT 泌尿生殖道TB 2 ATB
女 30 N NT LTBI 4B LTBI
女 58 Y Tspot+ 淋巴结TB 1 ATB
女 43 Y NK LTBI 4B LTBI
男 29 Y QFN+ 淋巴结TB 1 ATB
女 62 n/a QFN+ LTBI 4B LTBI
女 53 Y NT 淋巴结TB 1 ATB
女 33 Y QFN+ LTBI 4C LTBI
女 34 Y QFN+ 淋巴结TB 1 ATB
男 46 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
女 18 N QFN+ Tspot+ 淋巴结TB 1 ATB
女 33 Y QFN+ LTBI 4A LTBI
男 24 Y QFN+ 肺 + LN TB 1 ATB
男 53 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
女 21 Y QFN+ 淋巴结TB 2 ATB
女 60 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 19 Y QFN+ 肺/脊柱TB 1 ATB
女 73 Y QFN+ LTBI 4A LTBI
女 29 Y QFN+ 肺TB 2 ATB
男 32 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 36 n/a NT 左颈部肿块TB 1 ATB
女 27 Y QFN+ LTBI 4C LTBI
男 24 n/a NT 淋巴结TB 1 ATB
男 55 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
女 20 n/a Tspot+ 肺TB 1 ATB
男 30 Y Tspot-QFN- LTBI 4A LTBI
女 33 Y NT 肺TB 1 ATB
男 59 Y Tspot+ LTBI 4B LTBI
女 59 Y QFN+ 淋巴结TB 2 ATB
女 49 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 52 N QFN+ 淋巴结TB 2 ATB
男 54 Y Tspot+ LTBI 4C LTBI
男 41 Y NT 肺TB 1 ATB
男 59 n/a Tspot+ LTBI 4C LTBI
女 41 Y QFN/Tspot- 右肘和腋窝LN TB 1 ATB
男 45 N QFN+ LTBI 4B LTBI
男 33 n/a QFN+ Tspot+ MLN/肺 1 ATB
男 32 Y QFN+ LTBI 4C LTBI
男 30 Y NT 肺TB 1 ATB
男 53 Y Tspot+ LTBI 4C LTBI
男 21 Y Tspot+ 肺TB 1 ATB
男 42 Y QFN+ Tspot+ LTBI 4B LTBI
n/a n/a         ATB*
男 37 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
女 29 Y NT 肺TB 2 ATB
男 60 n/a QFN+ LTBI 4B LTBI
n/a n/a n/a QFN+ n/a 4D ATB*
女 32 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 54 Y QFN+ 肺TB 1 ATB
男 25 N QFN+ LTBI 4B LTBI
女 45 Y QFN+ 淋巴结TB 1 ATB
男 36 N QFN+ Tspot+ LTBI 4B LTBI
女 31 Y NT 淋巴结TB 2 ATB
女 29 N QFN+ LTBI 4C LTBI
男 54 n/a QFN+ MLN/肺 1 ATB
女 32 Y QFN+ Tspot+ LTBI 4C LTBI
男 22 n/a T spot+ L. N TB (右下颌下) 1 ATB
男 41 N QFN+ LTBI 4B LTBI
男 23 n/a QFN+ 淋巴结TB 1 ATB
女 77 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
女 76 N QFN+ LN (左颈部) 2 ATB
女 48 Y T spot+ LTBI 4B LTBI
女 59 Y QFN+ 淋巴结TB (右腋下) 2 ATB
男 63 N T spot+ LTBI 4B LTBI
女 51 n/a T spot+ 淋巴结TB 1 ATB
女 48 N QFN+ LTBI 4B LTBI
女 27 Y QFN+ 肺 1 ATB
女 35 N QFN+ LTBI 4B LTBI
女 50 Y QFN+ 肺 1 ATB
女 31 N QFN+ LTBI 4B LTBI
男 30 N QFN+ 胸膜/LN腹 2 ATB
男 31 Y Tspot+ LTBI 4A LTBI
男 42 Y T spot+ 皮肤TB 2 ATB
女 32 N QFN+ LTBI 4B LTBI
女 33 N T spot+ 肺/腹TB 2 ATB
男 61 Y T spot+ LTBI 4B LTBI
男 42 Y T spot+ 胸骨TB 2 ATB
男 33 Y NK LTBI 4B LTBI
女 26 n/a QFN+ 淋巴结TB 1 ATB
男 83 n/a T spot+ LTBI 4C LTBI
男 22 N TSPOT+ 肺 1 ATB
男 24 Y T-spot + LTBI 4C LTBI
女 41 Y TSPOT+ 葡萄膜炎/LN TB 1 ATB
男 37 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 27 Y TSPOT+ Miliary/肺 1 ATB
男 64 N QFN+ LTBI 4B LTBI
男 68 Y T spot + MLN/肺 1 ATB
男 25 N NT LTBI 4B LTBI
男 43 Y T spot + LN (左颈部) 2 ATB
男 44 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
女 54 Y T spot+ 泛-葡萄膜炎 2 ATB
男 45 Y TSPOT+ LTBI 4B LTBI
男 40 Y T spot+ 右颈部腺 1 ATB
男 24 N NT LTBI 4B LTBI
男 40 n/a T spot+ 左腋窝脓肿 1 ATB
男 28 Y TSPOT -ve LTBI 4B LTBI
男 87 Y T spot+ 肺(牛分枝杆菌) 1 ATB*
女 18 Y NT LTBI 4B LTBI
n/a n/a   T spot-ve   4D ATB*
男 32 N NT LTBI 4B LTBI
男 24 N T spot+ 淋巴结TB 1 ATB
女 29 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
女 39 Y NT 肺TB 1 ATB
男 54 n/a QFN+ LTBI 4B LTBI
女 46 Y NT 淋巴结TB 1 ATB
男 23 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 54 Y NT 肺TB 1 ATB
女 69 Y T spot+/QFN - LTBI 4B LTBI
男 30 Y NT 肺TB 1 ATB
女 47 Y QFN+ LTBI 4B LTBI
男 44 Y NT 肺+葡萄膜炎TB 2 ATB
男 24 Y T spot- LTBI 4C LTBI
男 33 n/a NT 肺TB 1 ATB
女 47 Y T spot+ LTBI 4B LTBI
男 23 Y NT 肺TB 1 ATB
男 51 Y QFT+ LTBI 4B LTBI
男 25 n/a NT 颈LN TB 2 ATB
男 34 N QFT- LTBI 4B LTBI
男 68 Y NT 肺TB 1 ATB
女 19 Y NT LTBI 4B LTBI
女 50 Y NT 肺+颈LN TB 1 ATB
女 49 Y QFT+ LTBI 4A LTBI
男 34 N NT 淋巴结TB 2 ATB
女 27 N QFT+ LTBI 4B LTBI
男 29 Y NT TB葡萄膜炎 2 ATB
女 44 N NT LTBI 4B LTBI
男 30 N NT 心包炎/腹TB 1 ATB
男 55 Y QFT- LTBI 4B LTBI
男 18 Y QFT+ 肺TB 2 ATB
男 33 Y QFT- LTBI 4B LTBI
女 20 Y NT 肺TB 1 ATB
NB: 按照以下文献所述，根据表4计算诊断分类：Dosanjh等人(2008) Ann Int Med 148, 325-336。ATB*是指先前标记为TB、但随后发现不是TB的样品。LTBI*是指先前标记为LTBI、但随后发现不是LTBI的样品。
该重复研究的结果可见图12。发现用较大样品组，原则上可以证实区分活动性和潜伏性TB的鉴别联合特征。然而，ROC表现少量下降，从0.84 (如先前图5所示)降至0.75 (如图12所示)，然而在这样大得多的样品上证实了区分这两组的总体能力。
相比干扰素γ释放测定法(IGRA)，为了证明所提出的特征的优点，对于具有阳性IGRA诊断的样品亚组(即51个活动性样品和45个潜伏性样品)，重复预测实验。图13显示相应的ROC，相比使用所有样品，可见其具有改善，从0.75升至0.81。因此，相比图12所示的结果，预测的准确率增加，证明抗原特征对于IGRA状态而言同时是互补的和独立的。
实施例4: 单个抗原区分活动性/潜伏性TB的预测表现
区分活动性和潜伏性TB的能力主要基于捕获这些途径的IFN-γ和其它生物标记。下表4根据得自以下的值，列出单个抗原的预测能力：(A)表4所列的患者样品和(B)表4中的标记为IGRA阳性的患者样品亚组。结果见表5，其中以粗体表示的抗原被认为比随机更具有预测性。
表5: 单个抗原的预测表现
表5的结果证明了同时在IGRA阴性和阳性和IGRA阳性患者样品亚组中，sCD25、sCD120、sCD170和IFN-γ区分活动性和潜伏性TB的能力。
实施例5: IFN-γ和sCD170作为TB生物标记的有效性
根据实施例4的结果，评价IFN-γ和sCD170的使用对于其区分活动性和潜伏性TB的有效性。
以实施例1和表2所述的类似方式进行分析，使用表4所列的IGRA阳性样品。图14显示对于所考虑的样品类型(活动性和潜伏性TB)，组合IFN-γ和sCD170测定的散点图。首先，这些结果提供了引人注目的不同疾病分组的2D-图谱(图14)，其相比任一抗原单用更能区分。第二，使用任一单个抗原或其组合对相同样品进行计算机预测。
该分析结果见表6，其中可见IFN-γ和sCD170的组合得到相比这些抗原单用更好的区分信号。
表6: 对于替代分类任务而言不同的抗原组合的预测表现
。
实施例6: 额外生物标记与IFN-γ和sCD170组合的有效性
鉴定了额外抗原，其可补充从IFN-γ和sCD170所观察到的鉴别模式。以实施例2和表2所述的类似方式进行该分析，使用表4所列的IGRA阳性样品。表7概述了当将这些CD与sCD170和IFN-γ组合时的预测表现。这种“联合”预测物表现得至少与IFN-γ和sCD170一样好并且对于预测任务而言通常仅少量地改善了用两种抗原模型所得的结果，证明了IFN-γ和sCD170组合的有效性。
表7: 对于替代分类任务而言不同的抗原组合的预测表现
。

Claims (33)

1.sCD170作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病。
2.IFN-γ和sCD170作为生物标记的用途，用于诊断和/或监测结核病。
3.权利要求1或2的用途，其中所述诊断包括以下任何一项之间的鉴别诊断：活动性结核病和潜伏性结核病；活动性结核病和健康对照；潜伏性结核病和健康对照；活动性结核病和疾病对照；和潜伏性结核病和疾病对照。
4.权利要求1-3中任一项的用途，其中所述诊断包括活动性结核病和潜伏性结核病之间的鉴别诊断。
5.权利要求1-4中任一项的用途，其额外地包括选自以下的一种或多种另外的分析物：IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、sCD4、sCD25、sCD26、sCD32b/c、sCD50、sCD56、sCD66a、sCD83、sCD85j、sCD95、sCD106、sCD120b、sCD121b、sCD127、sCD154、sCD222、sCD226、sCDw329和TNFα。
6.权利要求1-5中任一项的用途，其额外地包括选自以下的一种或多种另外的分析物：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD222和TNFα。
7.权利要求1-6中任一项的用途，其额外地包括选自以下的一种或多种另外的分析物：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD222和TNFα。
8.权利要求1-7中任一项的用途，其额外地包括每种以下另外的分析物：IL-8、sCD25、sCD50、sCD120b、sCD222和TNFα。
9.权利要求1-8中任一项的用途，其额外地包括每种以下另外的分析物：IL-6、IL-8、IL-10、sCD25、sCD26、sCD50、sCD56、sCD85j、sCD106、sCD120b、sCD222和TNFα。
10.在个体中诊断结核病的方法，包括：
(a) 从个体获得试验生物样品；
(b) 定量测定sCD170的量，任选地与IFN-γ和/或权利要求5-9中任一项的一种或多种另外的分析物生物标记组合；
(c) 比较所述试验生物样品中的所述分析物生物标记的量与一种或多种对照样品中存在的量，使得所述试验生物样品中的所述分析物生物标记水平的差异表明结核病的诊断。
11.权利要求10的方法，其中相比对照样品，在所述试验生物样品中sCD170的更高水平表明结核病的诊断。
12.在患有或疑似患有结核病的受试者中监测抗微生物治疗功效的方法，包括在所述受试者的样品中检测和/或定量测定sCD170，任选地与IFN-γ和/或权利要求5-9中任一项的一种或多种另外的分析物生物标记组合。
13.权利要求10-12中任一项的方法，其是在两次或更多次机会自试验受试者采集的样品上进行。
14.权利要求10-13中任一项的方法，进一步包括比较在两次或更多次机会采集的样品中存在的生物标记水平。
15.权利要求10-14中任一项的方法，包括比较所述试验样品中的生物标记的量与在治疗开始前采自所述受试者的一种或多种样品中存在的量，和/或在治疗的较早时期采自所述受试者的一种或多种样品中存在的量。
16.权利要求10-15中任一项的方法，进一步包括检测在两次或更多次机会采集的样品中的生物标记的量的变化。
17.权利要求10-16中任一项的方法，包括比较所述试验样品中存在的生物标记的量与一种或多种对照。
18.权利要求10-17中任一项的方法，其中一种或多种对照包括选自以下的对照样品：在健康个体的健康对照样品中发现的分析物生物标记水平、健康分析物生物标记水平；或健康分析物生物标记范围；患有其它呼吸道感染的患者；患有非TB分枝杆菌感染的患者；和已知患有活动性或潜伏性TB的患者。
19.权利要求16-18中任一项的方法，包括比较试验样品中的生物标记的量与对照样品中存在的生物标记的量。
20.权利要求10-19中任一项的方法，其中样品在结核病治疗之前和/或期间和/或之后采集。
21.权利要求10-20中任一项的方法，其中样品在受试者的剩余寿命或其部分中以一定间隔来采集。
22.权利要求10-21中任一项的方法，其中通过测量各样品中的分析物生物标记的浓度，进行定量测定。
23.权利要求10-22中任一项的方法，其中使用免疫学方法进行检测和/或定量测定。
24.权利要求10-23中任一项的方法，其中使用生物传感器或微量分析系统、微量工程系统、微量分离系统或免疫色谱系统进行检测和/或定量测定。
25.权利要求10-24中任一项的方法，其中所述生物样品是全血、血清、血浆、组织液、脑脊液(CSF)、滑液、滤泡液、精液、羊水、乳汁、尿、胸水、腹水、支气管肺泡灌洗液、唾液、痰、泪、汗水、淋巴液、吸出物、骨髓吸出物和粘液，或从其中的提取物或纯化物，或其稀释液。
26.权利要求25的方法，其中所述生物样品是全血、血清或血浆。
27.权利要求26的方法，其中所述生物样品是血清，例如非活化的血清。
28.在有需要的个体中治疗结核病的方法，其中所述方法包括以下步骤：
(a) 依据权利要求10-11和13-27中任一项的方法在个体中诊断结核病；然后
(b) 在结核病阳性诊断的情况下将抗结核病药物给予所述个体。
29.权利要求28的方法，其中所述抗结核病药物是：选自以下的一种或多种一线药物：乙胺丁醇、异烟肼、吡嗪酰胺、利福平；和/或选自以下的一种或多种二线药物：氨基糖甙类(例如，阿米卡星、卡那霉素)、多肽(例如，卷曲霉素、紫霉素、恩维霉素)、氟喹诺酮(例如，环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星)、硫代酰胺类(例如乙硫异烟胺、丙硫异烟胺)、环丝氨酸(closerin)或特立齐酮；和/或选自以下的一种或多种三线药物：利福布汀、大环内酯类(例如，克拉霉素)、利奈唑胺、胺苯硫脲、硫利达嗪、精氨酸、维生素D和R207910。
30.权利要求10-29中任一项的方法，其中结核病是潜伏性结核病或活动性结核病。
31.权利要求30的方法，其中所述活动性结核病是肺外结核病。
32.试剂盒，包括生物传感器，其能够检测和/或定量测定sCD170，任选地与IFN-γ和/或权利要求5-9中任一项的一种或多种另外的分析物生物标记组合，用于诊断和/或监测结核病。
33.权利要求32的试剂盒，其鉴别诊断活动性和潜伏性结核病。
CN201380051264.3A 2012-07-31 2013-07-31 用于诊断和/或监测结核病的生物标记 Pending CN104823052A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1213567.9A GB201213567D0 (en) 2012-07-31 2012-07-31 Biomarkers
GB1213567.9 2012-07-31
PCT/GB2013/052055 WO2014020343A1 (en) 2012-07-31 2013-07-31 Biomarkers for diagnosing and/or monitoring tuberculosis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104823052A true CN104823052A (zh) 2015-08-05

Family

ID=46881405

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201380051264.3A Pending CN104823052A (zh) 2012-07-31 2013-07-31 用于诊断和/或监测结核病的生物标记

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20150192593A1 (zh)
EP (1) EP2880446A1 (zh)
CN (1) CN104823052A (zh)
GB (1) GB201213567D0 (zh)
WO (1) WO2014020343A1 (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105241986A (zh) * 2015-09-10 2016-01-13 首都医科大学附属北京儿童医院 区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者的蛋白特征谱
CN106339724A (zh) * 2016-08-30 2017-01-18 孟玲 一种用于诊断结核病的生物标记系统
CN107449909A (zh) * 2017-07-25 2017-12-08 深圳市星系生物科技有限公司 一种用于活动性结核诊断的蛋白芯片及试剂盒
CN107653308A (zh) * 2017-08-11 2018-02-02 深圳市星系生物科技有限公司 一组用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的引物对组合及试剂盒
CN110514841A (zh) * 2019-07-19 2019-11-29 广州瑞博奥生物科技有限公司 用于结核潜伏感染诊断的试剂盒及蛋白芯片
CN116376845A (zh) * 2023-02-28 2023-07-04 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 针对豚鼠IFN-γ的单克隆抗体及其用途
CN116466084A (zh) * 2023-06-15 2023-07-21 中国医学科学院北京协和医院 用于检测结核感染状态的试剂及其应用

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140349320A1 (en) * 2011-12-15 2014-11-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Using Adaptive Immunity to Detect Drug Resistance
GB201401603D0 (en) * 2014-01-30 2014-03-19 Proteinlogic Ltd Biomarkers
WO2015127029A1 (en) * 2014-02-20 2015-08-27 The Regents Of The University Of Michigan Biomarkers for tuberculosis infection
CN107076745A (zh) * 2014-08-29 2017-08-18 贝克顿·迪金森公司 在受试者中获得结核病评价的方法和组合物
WO2017068593A1 (en) * 2015-10-19 2017-04-27 Centre For Dna Fingerprinting And Diagnostics (Cdfd) A polypeptide for detection of pathogenic mycobacteria and uses thereof
GB201602305D0 (en) 2016-02-09 2016-03-23 Medical Res Council And Imp Innovations Ltd TB Biomarkers
WO2017179008A1 (en) * 2016-04-15 2017-10-19 Stellenbosch University Host biomarkers for immunodiagnosis and monitoring of tuberculosis disease
GB201900677D0 (en) * 2019-01-17 2019-03-06 Proteinlogic Ltd Biomarkers
GB201907157D0 (en) * 2019-05-21 2019-07-03 Pbd Biotech Ltd Methods
CN112143795A (zh) * 2020-09-30 2020-12-29 中国医学科学院病原生物学研究所 Clec2b基因做为结核病鉴别诊断的应用
CN116348767A (zh) * 2020-10-06 2023-06-27 西菲伊德公司 诊断结核病以及区分活动性和潜伏性结核病的方法
CN115266953A (zh) * 2021-04-13 2022-11-01 首都医科大学附属北京胸科医院 作为骨结核诊断的生物标志物组合及其应用
CN116519951A (zh) * 2023-05-23 2023-08-01 首都医科大学附属北京胸科医院 一种鉴别诊断结核潜伏感染和活动性结核病的标志物及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003075016A1 (en) * 2002-03-07 2003-09-12 Cambridge University Technical Services Limited (Cuts) Scd fingerprints
ZA200905156B (en) * 2008-06-25 2010-05-26 South African Medical Res Council Marker for the rapid differentiation of active TB disease from latent tuberculosis infection
WO2010115989A1 (en) * 2009-04-09 2010-10-14 Ajit Lalvani Diagnostic mycobacterium tuberculosis test
CN102150043A (zh) * 2008-06-25 2011-08-10 贝勒研究院 结核分枝杆菌感染的血液转录标签
CN102246040A (zh) * 2008-12-15 2011-11-16 开普敦大学 用于诊断结核病的方法和装置
WO2012085652A2 (en) * 2010-12-23 2012-06-28 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois Methods for differentiating between disease states

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003075016A1 (en) * 2002-03-07 2003-09-12 Cambridge University Technical Services Limited (Cuts) Scd fingerprints
ZA200905156B (en) * 2008-06-25 2010-05-26 South African Medical Res Council Marker for the rapid differentiation of active TB disease from latent tuberculosis infection
CN102150043A (zh) * 2008-06-25 2011-08-10 贝勒研究院 结核分枝杆菌感染的血液转录标签
CN102246040A (zh) * 2008-12-15 2011-11-16 开普敦大学 用于诊断结核病的方法和装置
WO2010115989A1 (en) * 2009-04-09 2010-10-14 Ajit Lalvani Diagnostic mycobacterium tuberculosis test
WO2012085652A2 (en) * 2010-12-23 2012-06-28 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois Methods for differentiating between disease states

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GARETH J. JONES等: "Simultaneous measurement of antigen-stimulated interleukin-1β and gamma interferon production enhances test sensitivity for the detection of Mycobaterium bovis infection in cattle.", 《CLIN VACCINE IMMUNOL》 *
KATHRYN L. KELLAR等: "Multiple cytokines are released when blood from patients with tuberculosis is stimulated with mycobacterium tuberculosis antigens.", 《PLOS ONE》 *
MARC JACOBSEN等: "Candidate biomarkers for discrimination between infection and disease caused by Mycobacterium tuberculosis.", 《J MOL MED》 *
NOVEL N. CHEGOU等: "Dependent antigen-stimylated cells for the diagnosis of tuberculosis in a highly endemic area.", 《PLOS ONE》 *
RAYBIOTECH INC: "RayBio Human Cytokine Antibody Array User Manual", 《豆丁网》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105241986A (zh) * 2015-09-10 2016-01-13 首都医科大学附属北京儿童医院 区分儿童潜伏结核感染者和活动性结核病患者的蛋白特征谱
CN106339724A (zh) * 2016-08-30 2017-01-18 孟玲 一种用于诊断结核病的生物标记系统
CN107449909A (zh) * 2017-07-25 2017-12-08 深圳市星系生物科技有限公司 一种用于活动性结核诊断的蛋白芯片及试剂盒
CN107653308A (zh) * 2017-08-11 2018-02-02 深圳市星系生物科技有限公司 一组用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的引物对组合及试剂盒
CN107653308B (zh) * 2017-08-11 2019-06-07 深圳市星系生物科技有限公司 一组用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的引物对组合及试剂盒
CN110514841A (zh) * 2019-07-19 2019-11-29 广州瑞博奥生物科技有限公司 用于结核潜伏感染诊断的试剂盒及蛋白芯片
CN116376845A (zh) * 2023-02-28 2023-07-04 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心 针对豚鼠IFN-γ的单克隆抗体及其用途
CN116466084A (zh) * 2023-06-15 2023-07-21 中国医学科学院北京协和医院 用于检测结核感染状态的试剂及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP2880446A1 (en) 2015-06-10
US20150192593A1 (en) 2015-07-09
GB201213567D0 (en) 2012-09-12
WO2014020343A1 (en) 2014-02-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104823052A (zh) 用于诊断和/或监测结核病的生物标记
CN106537146B (zh) 生物标志
Ashkenazi-Hoffnung et al. A host-protein signature is superior to other biomarkers for differentiating between bacterial and viral disease in patients with respiratory infection and fever without source: a prospective observational study
Cook et al. Commercial test kits for detection of Lyme borreliosis: a meta-analysis of test accuracy
CN104204803B (zh) 用于诊断感染的标记和决定因素和其使用方法
CN101523217B (zh) 基于ip-10的免疫学监测
Maas et al. Facts and dilemmas in diagnosis of tuberculosis in wildlife
Wang et al. Screening and identification of a six-cytokine biosignature for detecting TB infection and discriminating active from latent TB
Lim et al. Current laboratory diagnosis of coronavirus disease 2019
Comella-del-Barrio et al. A model based on the combination of IFN-γ, IP-10, ferritin and 25-hydroxyvitamin D for discriminating latent from active tuberculosis in children
Patel et al. Utility of a novel lipoarabinomannan assay for the diagnosis of tuberculous meningitis in a resource-poor high-HIV prevalence setting
Xu et al. Improved early detection of focal brucellosis complications with anti-Brucella IgG
Chen et al. Cytokine and antibody based diagnostic algorithms for sputum culture-positive pulmonary tuberculosis
Lee et al. Comparison of three serological chemiluminescence immunoassays for SARS-CoV-2, and clinical significance of antibody index with disease severity
Becker et al. Going beyond clinical routine in SARS-CoV-2 antibody testing-A multiplex corona virus antibody test for the evaluation of cross-reactivity to endemic coronavirus antigens
Khambati et al. Host-based biomarkers in saliva for the diagnosis of pulmonary tuberculosis in children: A mini-review
Ong et al. Validation of a phospholipase A2 receptor antibody ELISA in an Australian cohort with membranous glomerulonephritis
CN113748342A (zh) 生物标志物
RU2756314C2 (ru) Биомаркеры туберкулеза
Germain et al. Retrospective study of COVID-19 seroprevalence among tissue donors at the onset of the outbreak before implementation of strict lockdown measures in France
Reinhardt et al. The use of dried blood spot cards to assess serologic responses of individuals vaccinated against measles, hepatitis A, tetanus, influenza and varicella zoster
Cobb et al. Clinical Performance of a Lateral Flow SARS-CoV-2 Total Antibody Assay
KR102368216B1 (ko) 엘라이자 부스팅 검사법을 이용한 소 결핵병 잠복 감염우의 검출방법
Cai Study of the Clinical Presentation and Diagnostic Tests of Infectious Mononucleosis
US20210364530A1 (en) Double-multiplex assay for multiple immunoglobulin isotypes

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
EXSB Decision made by sipo to initiate substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150805

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication