CN104820028A

CN104820028A - 一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法

Info

Publication number: CN104820028A
Application number: CN201510188349.7A
Authority: CN
Inventors: 代广会; 陈志锋; 张道林
Original assignee: Chongqing Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Current assignee: Chongqing Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Priority date: 2015-04-21
Filing date: 2015-04-21
Publication date: 2015-08-05
Anticipated expiration: 2035-04-21
Also published as: CN104820028B

Abstract

本发明涉及一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，该方法包括采用表面涂敷手性多聚物的球形硅胶为手性色谱柱，以烷烃-不同浓度的极性有机溶剂为流动相，其中极性有机溶剂由第一有机溶剂和第二有机溶剂组成，所述烷烃选自正己烷、正庚烷、环己烷和二氯甲烷，所述第一有机溶剂为异丙醇，所述第二有机溶剂相选自甲醇、乙醇和乙腈。该方法解决了分离测定阿普斯特与其对映异构体难分离的问题，从而保证了阿普斯特及其制剂的质量可控。

Description

一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法。

背景技术

阿普斯特是一种磷酸二酯酶-4(PDE-4)的抑制剂，是由美国celgene公司开发，其分子式为C₂₂H₂₄N₂O₇S，化学结构式见下式（I）化合物，其化学名为：N-{2-[(1S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-（甲基磺酰基）乙基]-2，3-二氢-1,3-二氧代-1H-异吲哚-4-基}乙酰胺。在合成阿普斯特的过程中，会产生阿普斯特对映异构体（（R）-N-{2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-（甲基磺酰基）乙基]-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基}乙酰胺，其化学结构式见下式（II）化合物。

采用常规一般手性柱和常规流动相的HPLC的测定方法难以将阿普斯特与其对应异构体有效分离，峰形很差，柱效很低。

为了有效控制阿普斯特的质量，有必要寻找一种能将阿普斯特与其对应异构体有效分离的HPLC测定方法，实现阿普斯特与其对映异构体的分离在阿普斯特的合成和制剂的质量控制中具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，该方法能将阿普斯特与其对映异构体的有效分离测定测定，实现阿普斯特的质量控制。

在一实施方案中，本发明的一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，包含采用表面涂敷手性多聚物的球形硅胶为手性色谱柱，以烷烃-极性有机溶剂为流动相，其中，所述极性有机溶剂由第一有机溶剂和第二有机溶剂组成，所述烷烃选自正己烷、正庚烷、环己烷和二氯甲烷，所述第一有机溶剂为异丙醇，所述第二有机溶剂相选自甲醇、乙醇和乙腈。流动相中，极性有机溶剂的浓度（V/V）为乙腈50%~100%，甲醇50%~100%，乙醇为50%~100%，异丙醇为5%~50%。

在上述实施方案中，本发明的方法，所述手性多聚物色为直链淀粉或纤维素衍生物，所述直链淀粉为直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)或直链淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]，优选为直链淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]，所说烷烃优选为正己烷、或所述第二有机溶剂优选为甲醇，烷烃与第一有机溶剂和第二有机溶剂的体积比为100：900：100。

在上述实施方案中，本发明的方法，进一步包含以下步骤：

a) 取阿普斯特或其制剂，精密称量，置10ml量瓶，加稀释剂2ml使溶解，用流动相稀释至刻度，制成每1ml含阿普斯特0.1至10mg的样品溶液作为供试品溶液；精密量取0.5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；

b) 设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为200nm至270nm或者320至360nm，色谱柱的柱温为20℃至60℃；进样量为5ml至100ml；

c) 取相同体积的步骤a）的供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，完成阿普斯特与其对映异构体的分离测定。

上述的方法，步骤a）中所述稀释剂选自乙腈、二甲亚砜、丙酮、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯，优选稀释剂为乙腈；步骤b）中所述流动相的流速为1.0ml/min，所述检测波长为230nm，所述色谱柱的柱温为35℃，所述进样量为10ml。

在上述实施方案中，本发明的方法，所述色谱柱选择牌号为CHIRALPAK AD、CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK AS和CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL CA-1、CHIRALCEL OB/OB-H的色谱柱。

在一具体实施方案中，本发明的一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，包含采用表面涂敷手性多聚物的球形硅胶为手性色谱柱，以烷烃-极性有机溶剂为流动相，其中，所述极性有机溶剂由第一有机溶剂和第二有机溶剂组成，所述手性多聚物色为直链淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]，所述烷烃为正己烷，所述第一有机溶剂为异丙醇，所述第二有机溶剂为甲醇，烷烃与第一有机溶剂和第二有机溶剂（即正己烷：甲醇：异丙醇）的体积比为100：900：100,该方法包括以下步骤：

a) 取阿普斯特或其制剂，精密称量，置10ml量瓶，加稀释剂乙腈2ml使溶解，用流动相稀释至刻度，制成每1ml含阿普斯特0.1至10mg的样品溶液作为供试品溶液；精密量取0.5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；

b) 设置流动相的流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，色谱柱的柱温为35℃；进样量为10ml；

在上述具体实施方案中，本发明的方法，所述色谱柱选择牌号为CHIRALPAK AD、CHIRALPAK AD-H、CHIRALPAK AS和CHIRALPAK AS-H、CHIRALCEL CA-1、CHIRALCEL OB/OB-H的色谱柱。

上述本发明的方法，优选的，

仪器：Agilent 1100 高效液相色谱仪

色谱柱：CHIRALPAK AS-H（5μm，250×4.6mm）

检测波长：230nm

流速：1.0ml/min

进样量：10μl 。

本发明的方法的有益效果：本发明的方法可以将阿普斯特及其对映异构体有效分离，能准确测定对映异构体，而且峰形对称，柱效较高，从而可以准确控制阿普斯特的质量，简单、快速、准确地分离检测出阿普斯特的对映异构体。

特别是优选的具体实施方案，本发明的方法采用CHIRALPAK AS-H色谱柱，能够有效的分离检测阿普斯特对映异构体，选用乙腈作为稀释剂先溶解样品，避免样品在流动相中析出，采用2ml的量既能保证样品溶解，又避免了产生较大的溶剂峰干扰；柱温为35℃，让阿普斯特对映异构体快速出峰，峰形较好，又能让分离度达到最佳。流动相中加入一定比例的异丙醇，能使甲醇与正己烷更好的融合，起到增容的作用。本发明解决了分离测定阿普斯特与其对映异构体难分离的问题，从而保证了阿普斯特及其制剂的质量可控。

附图说明

图1 阿普斯特的液相色谱图；

图2 阿普斯特对映异构体的液相色谱图；

图3 阿普斯特与对映异构体混合的液相色谱图；

图4 空白溶剂的液相色谱图；

图5 供试品溶液的液相色谱图；

图6 0.5%对照溶液的液相色谱图。

具体实施方式

以下实施例用于进一步说明和理解本发明的精神，但不以任何方式限制本发明的范围。

实施例1

仪器与条件

美国Agilent 1100型液相色谱仪及Instrument工作站；自动进样；仪器：以CHIRALPAK AS-H（5μm，250×4.6mm）为分离色谱柱；以正己烷-甲醇-异丙醇（体积比100：900：100）流动相；检测波长：230nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl ；柱温：35℃。

实验步骤：

称量阿普斯特工作对照品100.57mg、对映异构体对照品100.79mg，分别置10ml量瓶，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.5ml，分别置100ml量瓶，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为阿普斯特贮备液和对映异构体贮备液，分别精密量取1.0ml置10ml量瓶，用流动相稀释至刻度，摇匀，得到阿普斯特对照液、对映异构体对照液及阿普斯特与对映异构体混合对照液。

分别取空白溶剂、阿普斯特对照液、对映异构体对照液及混合对照溶液，按上述色谱条件进行液相色谱分析，记录色谱图；结果见图1、图2、图3、图4。

图1中保留时间为12.163min的色谱峰为阿普斯特色谱峰，

图2中保留时间为6.562min的色谱峰为阿普照斯特对映异构体的色谱峰，

图4证明，流动相不干扰测定，

图3表明，本法可以有效分离阿普斯特与其对映异构体，可以用于阿普斯特中对映异构体的测定。

实施例2

用液相色谱法测定阿普斯特对映异构体。

取本品约10mg，精密称量，置10ml量瓶，加乙腈2ml使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取0.5ml，置100ml量瓶，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按照实施例1的色谱条件进行液相色谱分析，供试品溶液除溶剂峰和系统峰外，在阿普斯特相对保留时间约为0.54处如有对映异构体，按照自身对照法计算其含量，如果在相对保留时间约为0.54处没有出现色谱峰，则无需计算含量。结果见图5、图6。

Claims

1.一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对映异构体的方法，其特征在于：采用表面涂敷手性多聚物的球形硅胶为手性色谱柱，以烷烃-不同浓度的极性有机溶剂为流动相，其中极性有机溶剂由第一有机溶剂和第二有机溶剂组成，所述烷烃选自正己烷、正庚烷、环己烷和二氯甲烷，所述第一有机溶剂为异丙醇，所述第二有机溶剂相选自甲醇、乙醇和乙腈。

2.根据权利要求1所述的方法，所述手性多聚物色为直链淀粉或纤维素衍生物，所述直链淀粉为直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)或直链淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]。

3.根据权利要求2所述的方法，所述直链淀粉为直链淀粉-三[(S)-α-甲苯基氨基甲酸酯]。

4.根据权利要求2所述的方法，所述烷烃为正己烷、或所述第二有机溶剂为甲醇。

5.根据权利要求1所述的方法，烷烃-第一有机溶剂-第二有机溶剂的体积比为100：900：100。

6.根据权利要求1所述的方法，包含以下步骤：

取阿普斯特或其制剂，精密称量，置10ml量瓶，加稀释剂2ml使溶解，用流动相稀释至刻度，制成每1ml含阿普斯特0.1至10mg的样品溶液作为供试品溶液；精密量取0.5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；

设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，检测波长为200nm至270nm或者320至360nm，色谱柱的柱温为20℃至60℃；进样量为5ml至100ml；

取相同体积的步骤a）的供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，完成阿普斯特与其对映异构体的分离测定。

7.根据权利要求6所述的方法，步骤a）所述稀释剂选自乙腈、二甲亚砜、丙酮、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯。

8.根据权利要求7所述的方法，步骤a）所述稀释剂为乙腈。

9.根据权利要求6所述的分离测定方法，步骤b）中所述流动相的流速为1.0ml/min，所述检测波长为230nm。

10.根据权利要求6所述的分离测定方法，步骤b）中所述色谱柱的柱温为35℃，所述进样量为10ml。