CN104815058B - 龙葵萃取物在降低体脂肪、体重及治疗肥胖性肝炎中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种包含龙葵萃取物的组合物在降低体重和降低体脂肪中的用途，其中该组合物进一步用于治疗或预防肥胖性肝炎。

Description

龙葵萃取物在降低体脂肪、体重及治疗肥胖性肝炎中的用途

技术领域

本发明是关于一种使用龙葵萃取物用于降低体脂肪、体重及治疗肥胖性脂肪肝病的用途。

背景技术

根据台湾肝病防治学术基金会调查，发现脂肪肝已是台湾国人普遍的肝脏问题，其罹患比率高达40%。脂肪肝虽然不会对生命造成立即危害，不过却是健康的一个重要警讯，若未实时治疗可能进而造成肝硬化、肝癌。调查亦显示，酗酒、肥胖及高血脂控制等都是造成脂肪肝的危险因子，体重过重者，有76.3%有脂肪肝。此外脂肪肝罹患率亦和肥胖具显著相关性。

肝病基金会曾经对九千个上班族做超音波检查，发现罹患脂肪肝的比例高达43％，男性上班族更达49％。另有研究指出，台湾成人脂肪肝盛行率超过三成，每三至四个成人就有一人有脂肪肝，远高于过去被视为“国病”的Ｂ型肝炎和Ｃ型肝炎。脂肪肝已经成为台湾人最普遍的肝病。

在临床上所谓的“脂肪肝”是指肝脏内所屯积的脂肪(主要为三酸甘油脂)的重量超过全肝脏重量的百分之五，或是在肝组织切片中超果百分之十以上的肝细胞呈现脂肪空泡变性的现象而谓之；而轻度脂肪肝是含脂肪变性的肝细胞少于33%，中度为介于33-66%之间而重度则占66%。

肥胖性脂肪肝病，从单纯脂肪肝、脂肪肝炎、脂肪纤维化到脂肪肝硬化都包含在内。而病程中的脂肪变性及其所衍生成NASH的真正致病机转目前尚不明确，但近年来大量的临床实验及动物实验研究所得的假说，得知以氧压力、胰岛素抗性以及脂质过氧化作用(lipid peroxidation)导致肝脏发生弥漫性脂肪浸润、炎症反应、坏死、凋亡、再生损害以及肝星状细胞活化等一系列病理连锁性免疫攻击反应。

龙葵(Solanum nigrum)全草含甾类生物碱；茄边碱(澳洲茄边碱Solamargine[C₄₅H₇₃O₁₅N])、茄解碱(澳洲茄碱Solasonine[C₄₅H₇₃O₁₆N])、茄微碱(Solavilline[C₅₀H₈₁O₂₀N])、茄达碱(Solasodamine[C₅₁H₈₂O₂₀N])、醣苷类、醣蛋白、多酚及皂苷。龙葵在台湾民间俗称黑甜仔菜，属野生植物，为农田杂草，民间有取其幼苗，嫩叶炒熟当菜食用，也有取其成熟的果实食用。龙葵在医疗上的功能，具有防止自由基所造成的DNA伤害、保肝作用、保护肝脏免于四氯化碳诱导的肝损伤、诱导氮氧化物的产生。关于龙葵萃取物的研究包含在TPA所刺激的乳癌细胞MCF-7中，能抑制细胞内转录因子NF-κB和AP-1与DNA结核的活性；在墨西哥的传统医学中已被视为镇定神经的药物；具有抑制小鼠肉瘤S-180的活性；抑制乳癌细胞MCF-7的生长及诱导细胞凋亡；另外中国大陆亦有多项医学功能的报导，包含用于肺癌、膀胱癌治疗、辅助肿瘤治疗及抑制肠癌乙烯转移酵素活性。

发明内容

本发明是利用一种包含龙葵萃取物及其活性成分的组合物与高脂肪饲料合并喂食小鼠10周，结果证实该组合物具有潜力发展为健康食品以降低高脂肪诱导的体重，体脂肪及肥胖性肝炎。

因此，本发明是一种组合物在制备降低体脂肪或降低体重的医药组合物中的用途，其中该组合物包括：一龙葵萃取物；在一较佳实施例中，该医药组合物进一步用于治疗及预防肥胖性肝炎，而该龙葵萃取物为龙葵叶水萃物，其食用萃取物的有效剂量为每日总食量干重的0.5%～2%；而该龙葵萃取物进一步包含选自由酚酸、类黄酮及多酚所组成的群组的活性成分。

在一具体实施例中，该组合物可由榨取法、萃取法或蒸馏法所获得；在一较佳实施例中，本发明的龙葵萃取物是将龙葵叶干燥磨碎后，经溶解、过滤、离心及冷冻干燥方式获得。

在一具体实施例中，该组合物可降低肝功能指标，其中该肝功能指标包含丙胺酸转氨酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶，另一方面，该组合物更具有降低脂质过氧化作用、抗氧化或抑制发炎反应的功效。

在一具体实施例中，该组合物可增加血清中高密度脂蛋白胆固醇、减少血清中低密度胆固醇或降低血清中或肝脏中三酸甘油脂及总胆固醇含量，另一方面，该组合物具有抑制因高脂肪所诱导的肝脏脂肪堆积及发炎蛋白的功效。

在一具体实施例中，该组合物可包括一医药上可接受的载剂，在另一具体实施例中，该组合物可用于制备药品、膳食补充物、食品、保健食品。

本文中所使用的术语“医药上可接受的载剂”意指为了药物制造过程的需要、便于药物剂量调配，或不同投药剂型等需求，根据习知医药组合技术将医药组合物与医药可接受载剂混合，合适的医药可接受载剂为本领域技术人员所熟知，其中该载剂可有广范的形式。某些医药可接受载剂的处方可见于由美国医药协会及英国医药协会（AmericanPharmaceutical Association and the Pharmaceutical Society of Great Britain）所出版的医药赋形剂手册（The Hand Book of Pharmaceutical Excipients）中。举例而言，锭剂、胶囊、凝胶、溶液或悬浮液亦可包含下述成分：医药可接受赋形剂或载剂，其为无毒性、惰性固体或半固体、稀释剂、封装物质（encapsulating material）、凝胶基剂或任何形式的配方佐剂，例如：微晶纤维素（Microcrystalline cellulose）、葡萄糖、脱脂奶粉、淀粉、硅石、无水磷酸氢钙、磷酸镁、硬脂酸、硬脂酸镁，或人工香料等物质。

本文中的用语“一”或“一种”是用以叙述本发明的组件及成分。此术语仅为了叙述方便及给予本发明的基本观念。此叙述应被理解为包括一种或至少一种，且除非明显地另有所指，表示单数时亦包括复数。

本文中的用语“或”其意同“和/或”。

为了让本发明的上述和其他目的、特征、和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合所附图示，作详细说明如下。

附图说明

图1显示HPLC分析龙葵萃取物的多酚类组成比例；高效液相色谱的九种标准多酚色谱图；1:没食子酸(Gallic acid），2:原儿茶酸(Protocatechuic acid)，3:儿茶素(Catechin)，4:没食子儿茶素没食子酸酯(Gallocatechin gallates），5:咖啡酸(Caffeicacid)，6.表儿茶酚(Epicatechin)，7.对-香豆酸(P-counaric acid)，8.芦丁(Rutin)，12:槲皮素(Quercetin)，13:柚皮素(Naringenin)。

图2显示喂食SWE的高脂肪老鼠的体重有明显下降的表现；此数据是从每组12只C57BL/6小鼠的平均值+标准偏差；每组(不同符号代表:Control、HFD、HFD+0.5%SWE、HFD+1%SWE和HFD+2%SWE)平均值有显著的差别(p<0.05)，#p<0.05HFD和对照组别有显著差异；*p<0.05SWE和HFD组别有显著差异。

图3显示SWE显著的降低高脂肪老鼠的肾周边脂肪、睾丸脂肪和体脂肪；#p<0.05和HFD组别有显著差异；*p<0.05和对照组别有显著差异。

图4显示SWE降低高脂肪诱导肥胖的小鼠肝脏及脂肪的重量；数据显示每组12只C57BL/6小鼠的平均值+标准偏差；#p<0.05使用Student’s t检定和对照组别比较有显著差异；*p<0.05由ANOVA统计和HFD组别比较后有显著差异。

图5显示SWE减少高脂肪诱导肥胖的小鼠的肝脂肪空泡；利用肝脏切片以苏木紫＆伊红染色；肝脏切片光显微图片分别为(A)Control、(B)HFD组、(C)HFD+0.5%SWE组、(D)HFD+1%SWE组、(E)HFD+2%SWE组；(400X倍)黑色箭头指向白色肝脂肪空泡。

图6显示SWE减少肥胖小鼠发炎蛋白表现量；肝脏切片光显微图片分别为(A)Control、(B)HFD组、(C)HFD+0.5%SWE组、(D)HFD+1%SWE组、(E)HFD+2%SWE组；(400X倍)图6A为IL-6在肝脏过度表现量的结果；图6B为TNF-α在肝脏过度表现量的结果；黑色箭头在图6A代表IL-6表现位置而在图6B代表TNF-α表现位置；白色箭头为发炎反应表现位置。

图7显示利用HFD诱导脂质过氧化作用及抑制抗氧化酵素，经SWE处理后有增加抗氧化酵素的趋势；图六ABCD分别使用不同检测仪器如下:(A)MDA检测组、(B)超氧化物岐化酶(SOD)检测、(C)过氧化氢酶(Catalase)活性检测、(D)麸胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)检测；数据显示每组12只C57BL/6小鼠的平均值+标准偏差；#p<0.05使用Student’s t检定和对照组别比较有显著差异；*p<0.05由ANOVA统计和HFD组别比较后有显著差异。

图8显示SWE增加AMPK磷酸化及降低TG合成的蛋白质表现量；蛋白质由西方墨点法侦测；数据显示每组12只C57BL/6小鼠的平均值+标准偏差；#p<0.05使用Student’s t检定和对照组别比较有显著差异；*p<0.05由ANOVA统计和HFD组别比较后有显著差异。

图9显示SWE治疗降低胆固醇合成之蛋白质。蛋白质由西方墨点法侦测。数据显示每组12只C57BL/6小鼠之平均值+标准偏差。#,p<0.05使用Student’s t检定和对照组别比较有显著差异；*p<0.05由ANOVA统计和OA诱导组别比较后有显著差异。

图10显示SWE可以增加CPT-1及PPAR-α表现量；#p<0.05使用Student’s t检定和对照组别比较有显著差异；*p<0.05由ANOVA统计和OA诱导组别比较后有显著差异。

具体实施方式

以下将以图示及详细说明清楚说明本发明的精神，如熟悉此技术人员在了解本发明的实施例后，当可由本发明所教示的技术，加以改变及修饰，其并不脱离本发明的精神与范围。

实施例1

龙葵(S.nigrum Linn.)为茄科茄属一年生草本植物，收集于台湾中部苗栗山区，龙葵水萃取物(SWE)的制备方法为先将龙葵洗净并浸泡于水中30分钟后加热至100℃，连续加热40分钟。将所得到的水萃取液过滤并浓缩，放置于水浴槽中加热90℃直到成为乳状，随后放置烘箱中以70℃干燥。

SWE总多酚含量分析

取没食子酸(gallic acid)(5mg/mL)以甲醇溶解后，分别制成不同浓度(50,100,250,500μg/mL)的标准品，各取20μL的不同浓度的标准品以二次水补体积至1.6mL，接着加入2N Folin-Ciocalteu酚试剂100μL后，再加入20%Na2CO3300μL后混合均匀，在40℃下反应40分钟，以725nm测吸光值，同时处理ㄧ组以二次水代替标准品同样进行加试剂与加热步骤的组别进行归零，以吸光值为结果绘制标准曲线。取20μL待测样品(浓度为1mg/mL)以相同的方式进行处理，依回归方程式计算SWE中总多酚类的含量。

如表1所示为SWE的主要成分。

表1SWE的组成份

SWE	%
		多酚化合物	20.4±0.97
多糖	14.9±1.3
		蛋白质	4.8±0.4

SWE：龙葵叶水萃取物。以没食子酸和槲皮素为标准值。

SWE碳水化合物含量分析

此原理乃根据五碳糖(pentose)和六碳糖(hexose)在酸性、高温的条件之下会因脱水作用分解成喃甲醛(furfural)，喃甲醛进一步与酚(phenol)反应而生成橘黄色产物，最后，以吸光值变化换算出多醣类含量。配制10mg/mL的SWE，加入5%酚溶液0.5mL，再加入2.5mL浓硫酸混合均匀(待测液：5%酚：浓硫酸=1：1：5)，于100℃水浴20分钟，待温度冷却后，以490nm波长测定吸光值。利用0，10，20，30，40，50μg/ml glucose为标准品。

SWE蛋白质含量分析

蛋白质的定量采用Broadford蛋白质浓度检测方法。取30μL SWE，加入1mL蓝色染剂(Coomassie brilliant blue)，在室温下反应1分钟后，以波长595nm下测定吸光值，以0，0.2，0.4，0.8，1.6mg/mL BSA为标准品。

SWE酚分析

a.HPLC标准品溶液配制:以二次水配制0.05mg/mL标准品。b.HPLC使用的龙葵萃取物配制：以二次水配制10mg/mL SWE后，再以0.22μm filter过滤。c.HPLC分析:HPLC分析条件如下——使用Mightysil RP-18GP250管柱，侦测波长525nm，注射体积为10μL，最后以侦测器进行分析。龙葵主要的多酚类组成比例请见表2，如下表：

表2龙葵主要的多酚类组成比例

实施例2动物试验

高胆固醇饮食诱导小鼠形成体脂肪过量堆积的模式

待小鼠适应环境一周后，开始进入本试验。随机将动物分成四组，控制组(GroupA)、诱导组(Group B)、试验组I(SWE0.5%，Group C)与试验组II(SWE1%，Group D)，每组10只。其详细分组如下：(表3)

Group A:控制组，喂食标准配方饲料；

Group B:诱导组，喂食高油脂饲料(high fat diet,HFD)；

Group C:HFD饲料+SWE0.5%；

Group D:HFD饲料+SWE1%。

表3实验动物的HFD饲料配方组成

ND：正常饮食组；HFD：高脂肪饮食组。

动物血脂肪测定分析

动物抽取血液样品以及肝脏组织前，已先将动物空腹12-14小时为原则，采样后进行下列项目分析：

三酸甘油酯(serum triacylglycerol,TG)

三酸甘油酯经由酵素自解脂酶(lipase)水解后，生成甘油和脂肪酸，再透过一连串氧化还原作用产生过氧化氢，再加入4-氯苯酚与4-胺基安替比林(4-aminophenazone)作用，经过氧化氢酵素氧化后得醌亚胺(quinoneimine)产物，在波长500nm下，即可透过吸光值变化反映三酸甘油酯的浓度。取10μL血清加入反应溶液作用，在室温下反应10分钟，在波长500nm下测定吸光值Asample。取10μL的200mg/dL标准品，加入反应溶液作用，在室温下反应10分钟，在波长500nm下测定吸光值Astandard。欲求得血清中三酸甘油酯的浓度，则将Asample除以Astandard再乘以200即为血清中三酸甘油酯的浓度(mg/dL)。

总胆固醇(total cholesterol,TC)

平时生物体内的胆固醇是以乙酰态的胆固醇(cholesterol ester)方式储存于细胞中，故藉由胆固醇乙酰水解酶(cholesterol esterase)，将乙酰化胆固醇水解为胆固醇和脂肪酸，再经过胆固醇氧化酶氧化成胆烯(cholesterol-3-one)和过氧化氢，再加入酚与4-氨基安替吡啉(4-aminoantipyrine)作用，经过氧化酶氧化后得醌亚胺（quinoneimine）产物，在波长500nm下，即可透过吸光值变化反映胆固醇的浓度。取10μL血清加入反应溶液作用，在室温下反应10分钟，在波长500nm下测定吸光值Asample。取10μL的200mg/dL标准品，加入反应溶液作用，在室温下反应10分钟，在波长500nm下测定吸光值Astandard。欲求得血清中胆固醇的浓度，则将Asample除以Astandard再乘以200即为血清中胆固醇的浓度(mg/dL)。

高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)

利用低密度脂蛋白胆固醇(LDL)与高密度脂蛋白胆固醇(HDL)比重不同的特性，加入含有磷钨酸(phosphotungstic acid)与氯化镁(magneium chloride)溶液，经过离心后将低密度脂蛋白胆固醇(LDL)与极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL)沉淀，仅HDL存于上清液当中，藉由胆固醇乙酰水解酶，将乙酰化胆固醇水解为胆固醇和脂肪酸，再经过胆固醇氧化酶(cholesterol oxidase)氧化成胆烯(cholesterol-3-one)和过氧化氢，再加入酚与4-氨基安替吡啉(4-aminoantipyrine)作用，经过氧化酶氧化后得醌亚胺产物，在波长500nm下，即可透过吸光值变化反映胆固醇的浓度。取200μL血清加入分离溶液作用，在室温下反应10分钟，以4000rpm转速离心15分钟后，取100μL上清液加入反应溶液作用，在室温下反应10分钟，在波长500nm下测定吸光值Asample。取10μL的200mg/dL标准品，加入反应溶液作用，在室温下反应10分钟，在波长500nm下测定吸光值Astandard。欲求得血清中HDL-cholesterol的浓度，则将Asample除以Astandard再乘以200即为血清中HDL-cholesterol的浓度(mg/dL)。

低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)

利用LDL与HDL比重不同的特性，加入含有肝素(heparin)与柠檬酸钠(sodiumcitrate)溶液，经过离心后将VLDL与HDL沉淀，仅LDL存于上清液当中，藉由胆固醇乙酰水解酶，将乙酰化胆固醇水解为胆固醇和脂肪酸，再经过胆固醇氧化酶氧化成胆烯和过氧化氢，再加入酚与4-氨基安替吡啉作用，经过氧化酶氧化后得醌亚胺产物，在波长500nm下，即可透过吸光值变化反映胆固醇的浓度。取100μL血清加入分离溶液作用，在室温下反应10分钟，以4000rpm转速离心15分钟后，取50μL上清液加入反应溶液作用，在室温下反应10分钟，在波长500nm下测定吸光值Asample。取10μL的200mg/dL标准品，加入反应溶液作用，在室温下反应10分钟，在波长500nm下测定吸光值Astandard。欲求得血清中低密度胆固醇的浓度，则将Asample除以Astandard再乘以200即为血清中低密度胆固醇的浓度(mg/dL)。

体脂肪含量变化的测定

待实验结束后，将小鼠牺牲，取出实验动物肾(perirenal)周围、睾丸(epididymal)周围、腹壁后白色脂肪(retroperitoneal)及大肠中间(mesenteric)的脂肪组织后秤重并纪录之。

实施例3小鼠肝脏检测方法

肝脏中脂质分布变化

待实验期间结束后，将小鼠牺牲并摘取其0.5克的肝脏组织，再以0.5ml的己烷(hexane):异丙醇(isopropanol)(3:2,v/v)萃取肝脏所含的脂质，将脂质萃取物移至玻璃离心管中自然风干，再以200μL的异丙醇回溶，即可得细胞内脂质萃取液，利用市售的酵素测定法试剂，测定肝脏内脂质含量的变化，包含总胆固醇、三酸甘油酯。

肝脏脂质萃取

取定量的肝脏，加入20倍质量的三氯甲烷(chloroform)/甲醇methanol(2:1)，以均质机均质后利用滤纸过滤，取澄清液以减压真空浓缩机去除有机溶剂，再以三氯甲烷/甲醇(1:2)混合剂量回溶，并置于保存瓶中待测。

肝脏中总胆固醇、三酸甘油酯的测定

取出固定量的肝脏脂质萃取液，以酵素作用与比色测定原理，加入胆固醇或三酸甘油酯测定试剂，以分光亮度计在适当波长下测定吸光值，经计算后，可得肝脏中所含总胆固醇与三酸甘油酯含量。

肝功能的测定

以动物血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸转胺酶(ALT)为肝功能测定指针。在含有α-氧代戊二酸脂和L-丙胺酸的情况下，ALT可将之转变为L-谷氨酸和丙酮酸(pyruvate)，透过丙酮酸与NADH及H+作用下，会形成L-乳酸和NAD+，可在波长340nm下测得吸光值变化。取100μL血清加入反应溶液作用，在波长340nm下测定每分钟单位时间内吸光值变化，将每分钟单位时间内吸光值乘以1746即为ALT的活性(U/L)。

在有AST存在的情况下，α-氧代戊二酸脂会与L-天冬氨酸反应，经AST作用下，会形成L-谷氨酸和草酰乙酸盐(oxaloacetate)，再加入NADH经由酵素作用下，产生L-苹果酸酯和NAD+，藉由测定NADH的消耗可反映出AST的活性。取100μL血清加入反应溶液作用，在波长340nm下测定每分钟单位时间内吸光值变化，将每分钟单位时间内吸光值乘以1746即为AST的活性(U/L)。

肝组织病理切片观察

苏木紫-伊红染色法

将老鼠断头后，切小块肝脏置于6%福尔马林中固定，然后做苏木紫＆伊红染色，观察肝组织有无病变，并以倒立荧光显微镜拍照观察。

脂质过氧化分析

脂质过氧化分析是依据Buege和Aust的方法加以修改(Buege and Aust,1978)，脂质氧化过程中会产生脂质过氧化物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)，此时加入硫巴比妥酸(Thiobarbituric acid,TBA)会与MDA产生反应物硫巴比妥酸反应物(TBARS)，可利用吸光值(OD)测定反应物，以判定MDA形成量，而得知脂质过氧化程度。

抗氧化酵素活性分析

麸胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)

麸胱甘肽过氧化酶活性是根据Lawrence和Burk的方法，用分光亮度法测定。麸胱甘肽过氧化酶的活性可用NADPH在波长340nm下进行5分钟的吸光值变化情形来表示。

超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase,SOD)

超氧化物岐化酶检测是参照Marklund与Marklund（Marklund&Marklund,1974）的方法修改后的方法进行。以分光亮度计(Hitachi U-2900,Japan)波长420nm测量吸光值，每隔20秒测量一次，总共测量3分钟。

过氧化氢酶(Catalase)

过氧化氢酶活性检测是依据Aebi的方法加以修改，检测过氧化氢酶分解过氧化氢的能力，以分光亮度计波长240nm测量吸光值，每隔20秒测量一次，总共测量3分钟。

肝脏组织蛋白萃取及定量

蛋白萃取肝脏组织蛋白质，取0.1g组织块加入适量的RIPA缓冲液及蛋白酶抑制剂于冰上研磨避免温度过高，造成蛋白质的分解。研磨后将组织均质液取到离心管后于4℃冰箱中震荡30分钟，置入高速离心，并取上层液定量蛋白质浓度。

西方墨点法(Western blotting)

取定量后的肝脏组织均质液配置sample，取等量的sample进行SDS聚丙烯酰胺胶电泳，电泳结束后，将胶片取下，放置胶体转印器(gel sandwich)中，再将转印器(sandwich)置入蛋白质转移槽中，在400安培环境下转印4小时，取出转印器(sandwich)中的转印纸(NC paper)，以5%脱脂牛奶/缓冲溶液(PBST)(blocking buffer)摇晃1小时，之后以缓冲溶液摇晃15分钟，清洗完后加入一级抗体反应15分钟，放入4℃冰箱静置一晚后再以缓冲溶液每次10分钟，摇晃3次，加入二级抗体反应2小时再以缓冲溶液摇晃3次，清洗完毕后加山葵过氧化酵素(HRP)呈色剂(试剂A+试剂B以1:1比例)(ECL)反应1分钟，再利用冷光影像分析仪分析。

实施例4小鼠生理状况与体重变化

C57BL/6小鼠饲养10周期间，每隔两周测量体重一次，观察各组动物外观状态、活动力与毛色随饲育期增加皆正常无异状，摄食量与饮水状况也显示正常，各组小鼠活动力皆旺盛，反应敏捷。图2表示各组动物在饲养期间体重变化的情形，并以曲线图记录，结果显示各组体重随周龄逐渐增加，饲养到第6周时，发现处理0.5-2.0%SWE的组别的老鼠体重增加的幅度都比HFD组低，随着SWE剂量的增加，能够有意义的降低(p<0.05)因HFD高油脂食物所造成体重增加的现象。

实施例5小鼠脏器脂肪变化

各组老鼠牺牲之后取出肝脏、肾脏周边脂肪组织，以生理食盐水清洗后，沥除水分秤重并统计重量变化。

由脂肪组织的重量变化评估SWE对体脂肪是否具有调节的作用。图2显示各脏器其脂肪组织的重量。结果表现在透过高脂肪食物诱导的组别(HFD)，在睾丸、肾脏、外围的脂肪组织及体脂肪堆积情况和对照组(ND)相比都明显增加；而在体内器官外围组织脂肪和体脂肪的全部含量在利用HFD诱导的组别和对照组相比表现增加，然而在给予0.5%-2.0%SWE的组别分别为有显著意义的降低，显示SWE有助于减少体脂肪。

实施例6肝脏三酸甘油酯和总胆固醇含量分析

以HFD喂食的动物试验中，将各组动物肝脏检体进行均质，萃取油脂进行含量分析。各试验组别的肝脏总胆固醇与三酸甘油酯浓度示于图3。HFD诱导组中，其肝脏中所含的三酸甘油脂，LDL-C及胆固醇堆积的情形明显上升，均高于对照组，可证明高油、高胆固醇饮食确实会造成肝脏三酸甘油酯，LDL-C及胆固醇浓度增加。而在2%SWE的肝脏三酸甘油脂及LDL-C浓度较HFD诱导组则有下降趋势(p<0.05)，总胆固醇含量在SWE的作用下其分析结果0.5%SWE，可以有意义抑制对于高油脂所造成的影响；结果证实SWE确实有排除肝脏脂肪堆积的效果。

实施例7血清生化检查

血清中所含的脂肪，主要是指胆固醇、三酸甘油酯(又称中性脂肪)、磷脂质以及游离脂肪酸，胆固醇又分为总胆固醇、低密度胆固醇酯和高密度胆固醇酯，最后都到肝脏进行分解代谢，一旦肝脏对脂肪代谢发生异常，体内所有堆积的脂肪将全部都停留在血液中，因此血脂检查为重要的评估指标，分析结果显示于表4。

表4SWE降低肝指标功能

（1）总胆固醇(TCHO)与三酸甘油酯(TG):在各组动物血清中，0.5%，1.0和2.0%SWE的总胆固醇含量分别为135.41，118.54及102.88，相较于用HFD诱导的组别141.07，有下降的趋势，具有统计意义。0.5%，1.0和2.0%SWE的三酸甘油酯含量相较于诱导组均有显著降低(p<0.01)。此结果显示，SWE可降低血液中三酸甘油酯与胆固醇的堆积。

（2）肝脏功能指数：AST、ALT:一般脂肪肝患者，AST、ALT值会有升高的情形，故本试验进一步分析测定各组动物肝功能指针AST、ALT的表现变化。0.5%，1.0%及2.0%SWE的AST数值，相较于诱导组有下降的趋势，具有统计意义(p<0.05)，而SWE的使用对于ALT数值上的分析观察到数据有下降趋势且于2.0%组为有意义降低，显示SWE，能明显降低HFD所诱导肝脏功能损伤的作用。

（3）血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C):由表一比较发现，1.0%和2.0%SWE组别的血中LDL-C浓度相较于诱导组有明显下降的趋势(P<0.05)；2.0%SWE组别的HDL-C数值上的分析和诱导组相比有统计意义上升。

实施例8肝脏病理组织切片观察

将老鼠牺牲后，利用肝脏切片以苏木紫＆伊红染色，结果呈现于图5，以高油脂食物HFD诱导的组别，相对于ND组，可见细胞中有明显脂肪空泡产生，而于多加入0.5%、1.0及2.0%SWE的组别，在SWE的作用下，细胞中脂肪空泡明显减少。图6也显示处理SWE组显著的降低白血球的浸润，图6(A)显示IL-6及图6(B)显示TNF-α均显著的被抑制，因此SWE有抑制HFD诱导的脂肪肝炎。

实施例9SWE抑制过氧化作用

利用HFD诱导脂质过氧化作用及抑制抗氧化酵素，经SWE处理后有增加抗氧化酵素的趋势，图7显示2%SWE抑制MDA产生及增加过氧化氢酶(catalase)(p<0.05)，1%SWE有意义增加超氧化物岐化酶(SOD)，因此SWE有抑制HFD诱导的过氧化作用。

实施例10SWE调控动物肝脏中脂肪酸及三酸甘油酯合成相关蛋白的作用

由于细胞实验证明SWE具有抑制脂质相关蛋白的作用，所以利用老鼠牺牲后的肝脏萃取物做西方墨点法来观察相关蛋白的表现。图8中结果得知HFD诱导组别明显提升脂质生成酵素蛋白的表现，包含FAS，GPAT，AMPK-P及SREBP-1，可见高油饮食确实会促进肝脏脂肪合成蛋白的表现，再以SWE喂食小鼠10周之后，这些蛋白在动物体内都呈现减少的趋势。此实验的结果可以证明SWE具有抑制脂肪生成蛋白表现的能力，推测可能与SWE降低三酸甘油酯与总胆固醇的作用机制有关。

实施例11SWE调控动物肝脏中胆固醇合成相关蛋白的作用

图9中显示，HFD喂食小鼠的组别，HMGCoR蛋白表现为对照组的1.3倍。和对照组相较下，以1.0%和2%SWE喂食处理后蛋白表现量分别有意义降低。而SREBP-2蛋白受到HFD诱导之后与对照组相比为1.2倍。与对照组相比，以SWE喂食处理后蛋白表现量分别为有意义降低(p<0.05)。此结果显示，在SWE的作用下能抑制高油脂食物所诱导HMGCoR及SREBP-2蛋白的表现，抑制肝脏胆固醇。

实施例12SWE调控动物肝脏中β氧化相关蛋白的作用

图10显示HFD喂食的组别，PPARα蛋白表现为对照组的0.8倍，与对照组相较下，以SWE喂食处理后PPARα蛋白表现量均为有意义增加(p<0.05)。CPT-I蛋白表现与对照组相较下，以1.0%和2.0%SWE喂食处理后CPT-1蛋白表现量分别增加(p<0.05)。结果显示，CPT-I及PPARα蛋白的表达，相较于诱导组有明显因SWE浓度增加而促进脂肪利用。

Claims (10)

1.一种龙葵水萃取物在制备降低体脂肪或降低体重的医药组合物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其中该医药组合物进一步用于治疗或预防肥胖性脂肪肝病。

3.如权利要求1所述的用途，其中该龙葵水萃取物为龙葵叶水萃取物。

4.如权利要求1所述的用途，其中该医药组合物中龙葵水萃取物的重量百分比为0.5％-2％。

5.如权利要求1所述的用途，其中该龙葵水萃取物还包含选自多酚所组成的群组的活性成分。

6.如权利要求1所述的用途，所述龙葵水萃取物降低血液中丙氨酸转氨酶或天冬氨酸氨基转移酶。

7.如权利要求1所述的用途，所述龙葵水萃取物具有降低脂质、过氧化作用、抗氧化或抑制发炎反应。

8.如权利要求1所述的用途，所述龙葵水萃取物增加血清中高密度脂蛋白胆固醇、减少血清中低密度胆固醇、降低血清中或肝脏中三酸甘油脂及总胆固醇含量。

9.如权利要求1所述的用途，其中该医药组合物还包括一医药上可接受的载体。

10.如权利要求1所述的用途，所述龙葵水萃取物用于制备药品、膳食补充物或食品。