CN104805124A

CN104805124A - 一种茵达霉素及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN104805124A
Application number: CN201410473209.XA
Authority: CN
Inventors: 易虹; 王敏; 杨文亮; 章丽; 崔希庆; 王世巍; 谷有芳; 张丽霞; 王印
Original assignee: DEQIANG BIOLOGICAL Co Ltd
Current assignee: DEQIANG BIOLOGICAL Co Ltd
Priority date: 2014-09-17
Filing date: 2014-09-17
Publication date: 2015-07-29

Abstract

本发明涉及一种茵达霉素及其制备方法和用途，该茵达霉素的菌种保藏号为CGMCC No.9268。该茵达霉素的制备方法包括制备无菌空气、处理设备表面、制备三角瓶中种子材料、菌种培养、茵达发酵、从原始发酵液中分离菌丝体、从菌丝体中分离茵达、从菌丝体中分离提取物、提取物浓缩和烘干样品。该茵达霉素的用途为对吸式口器害虫有明显的防治作用。本发明茵达霉素的制备方法步骤简单、操作方便，制备效率高、效果好，制得的茵达霉素成品对不同种蚜虫具有良好的防治效果。

Description

一种茵达霉素及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及微生物制备技术领域，尤其涉及一种由链霉菌发酵产生的茵达霉素的制备方法及其用途。

背景技术

刺吸式口器害虫，例如蚜虫、叶螨、飞虱等。它们亲缘中的分类地位差别很大，但危害方式十分相似。它们以细长针管状口器刺吸植物体表(包括叶、花、果、皮)中的营养汁液，使细胞受到破坏，生长失去平衡，严重时植株停止生长，甚至全株萎蔫枯死。刺吸式口器害虫大多体型较小，但繁殖速度快，数量极多，群体危害期长，全年发生世代多。同时还是是病毒的携带者和中间传媒，可以导致作物感染病毒病，严重影响农业生产。

实践中，多使用化学药剂防治刺吸式口器害虫，比如吡虫啉、啶虫脒、噻虫嗪等，有的易于产生抗性，有的农药残留时间长。农业生产中急需一种环境友好的防治刺吸式口器害虫的生物类药剂。

发明内容

为了解决以上问题，本发明提供了一种制备简单、效率高，疗效好，可对不同种蚜虫具有良好的防治效果的茵达霉素及其制备方法及其用途。

上述的茵达霉素，为链霉菌P56发酵产生的次生代谢产物，所述茵达霉素的菌种保藏号为CGMCC No.9268。

一种茵达霉素的制备方法，其包括以下步骤：

(1)制备无菌空气，即将空气通过无菌过滤器压缩机后，滤出杂质和灰尘，得到洁净空气；再将从压缩机压出来温度为25℃～30℃，压力为0.25±0.02Mpa的热空气进行二次过滤，通过过滤部件，最后到达发酵罐；

(2)处理设备表面，即对发酵罐进行消毒处理，用质量分数为1％的氯胺溶液处理发酵罐5～6h，再处理结束的氯胺倒入化学专用水渠内，用水冲洗发酵罐，在接种之前再用氯胺擦拭发酵罐的表面；

(3)制备三角瓶中种子材料

(3.1)制备瓶装培养基，即选用适量的葡萄糖、大豆粉、氯化钠、硫酸铵、碳酸钙和自然PH的水制备培养基；

(3.2)灭菌三角瓶培养基，即将上述步骤(3.1)制备的培养基放入三角瓶内，在温度为120℃～130℃下灭菌40min，pH值为7.1～7.2；

(3.3)菌种培养，即在无菌条件下把长有孢子的菌种接种到上述步骤(3.2)含有培养基的三角瓶中，再在转速为180～220rpm/min下培养36～48h，以得到优质种子液；

(4.0)菌种培养

(4.1)准备并检查种子罐，即选用大体积的种子罐，配置鼓泡搅拌器，提供消泡剂材料的驱动压缩机，通过进料口放入培养基，冷却发酵罐夹套体；接着，将种子罐内设置清洁水过滤器和空气过滤器，放空种子罐利用1％的氯胺溶液处理5h～6h；再用稀释三倍的氯胺彻底清洗种子罐；然后将发酵罐加压达到0.1Mpa观察发酵罐是否泄漏，同时用肥皂水检查所有阀门；

(4.2)灭菌种子罐和过滤器，即将上述步骤(4.1)检查后的种子罐以及过滤器在温度为126℃～128℃下，高压灭菌40min～60min；

(4.3)制备培养基并灭菌，即在上述步骤(4.2)灭菌后的种子罐中加入温度为40℃～50℃的水，然后在搅拌器工作下加入大豆粉和葡萄糖，并在80℃条件搅拌10min，然后加入氯化钠、硫酸铵和碳酸钙，持续搅拌30min制备培养基；

(4.4)茵达种子液转接，即将上述步骤(4.3)三角瓶内发酵的培养物转接到种子培养基内，按体积比5％～10％的接种量接种，再通过空消的装配机加入接种物质；

(4.5)转入接种物质，即将上述步骤(4.4)中培养液在转接过程中温度为28±1℃，设备压力为0.02Mpa～0.05Mpa，搅拌器转速在0h～24h为200rmp/min、24h～48h为250rmp/min、48h～96h为300rmp/min，空气输入量为7m³/min，加入消泡剂，制备发酵用种子物质；

(5)茵达发酵

(5.1)准备及检测发酵罐，即降低压力后放空发酵罐，用水彻底清洗，检测鼓泡口是否干净，通过水层进入1min～2min的空气，接着检测空气通路阀门的气密性，检测进气口和过滤器是否漏气，检查结束后，对发酵罐和过滤器进行灭菌；

(5.2)发酵罐与过滤器的空消，即将密封的发酵罐和过滤器在126℃～130℃条件下空消1h，发酵罐空消后降低压力，准备放入培养基；

(5.3)配制灭菌培养基，即将由葡萄糖、大豆粉、氯化钠、硫酸铵、碳酸钙和水配制好的培养基加入装有增加溶氧的发酵罐中，通入蒸汽0.1MPa下灭菌30min；

(5.4)发酵罐内茵达合成，即按5％～10％接种量，将种子罐的发酵液转接到发酵罐中，在发酵温度为27℃～29℃，压力为0.015Mpa～0.02Mpa，输入空气量为0.1L/min～0.3L/min，空气温度为25℃～30℃，发酵96h，以合成茵达霉素；

(6)从原始发酵液中分离菌丝体，即取出上述步骤(5.4)发酵罐中发酵液，利用离心机离心，在室温下且转速为5000rpm离心10min～15min，将提取含有杂质的菌丝体移至烧杯内，其余液体倒入另一烧杯内；

(7)从菌丝体中分离茵达，即将上述步骤(6)中的菌丝体放入甲醇或乙醇，在500rpm下搅拌15min提取茵达，提取结束后得到稳定的乳化液；

(8)从菌丝体中分离提取物，即利用离心机在转速为5000rpm，温度为20℃，时间为20min分离菌丝体的有机相即甲醇、乙醇和茵达，将回收的有机相加入旋转蒸发仪的烧瓶内，分离得到的菌丝体放入另一装置内；

(9)提取物浓缩，即在温度为50℃，绝对对压力为0.05Mpa～0.07Mpa条件下，利用旋转蒸发仪对提取物进行浓缩处理，蒸发开始前加入体积5％的蒸馏水，直到有机物完全蒸发为止，离心后将水溶性的提取物放进烘干装置内，蒸发后的甲醇可以循环利用；

(10)烘干样品，即利用烘干箱，在温度为80℃，负压0.05Mpa～0.07Mpa条件下将上述步骤(9)收集样品中的水分烘干，烘干后得到膏状有特殊气味物质，在膏状物中添加2％～5％的壬基酚聚氧乙烯醚和30％～40％的抗生素制剂。

所述茵达霉素的制备方法，其中：将所述步骤(5.4)制备的发酵液，添加助剂后直接喷雾干燥，得到含有抗生素和活孢子的原粉，再添加适当的润湿剂和分散剂制成可湿性粉剂，可直接应用于农业生产，原粉中活孢子的数量可以达到1.0×10⁸～1.0×10¹¹。

所述茵达霉素的制备方法，其中，所述步骤(3.1)、步骤(4.3)和步骤(5.3)中的培养基中均是葡萄糖0.8％～1.2％、大豆粉0.8％～1.2％、氯化钠0.4％～0.6％、硫酸铵0.4％～0.6％、碳酸钙0.2％～0.4％。

所述茵达霉素的制备方法，其中，所述步骤(3.3)三角瓶内发酵的培养物是通过三角瓶镜检检测和生物指标检测得出优质种子液；所述优质种子液指标为：培养物生长形态状况、原生质体分布均匀、显微镜下观察菌丝体网状、排列紧密、填充整个视野、pH值7.0～7.2之间、菌丝体有浅绿色-棕色、无杂菌，不符合以上一种或几种指标的种子液倒入废水处理装置中；所述优质种子液接种时，按5％～10％接种量进行，种子液在4℃～5℃条件下最多存放10天。

所述茵达霉素的制备方法，其中：所述步骤(5.1)在检测进气口和过滤器是否漏气时，设备的压力为0.05Mpa～0.08Mpa，通气30min，此时使链接处的阀门电气化，设备内的压力不能超过0.005Mpa；所述步骤(5.1)中的发酵罐是带有圆形盖的圆柱型容器，并安装有通风搅拌装置，以提高溶氧，另外还装有消泡器、取样口、视镜、冷却水夹套、温度计和压力表；所述步骤(5.3)的发酵罐在其内部空气压力降低到0.04Mpa～0.06Mpa时，打开出气口阀门，空气排出，以压力为标准检查所有密封口，同时把整个发酵罐用肥皂水洗涤，检查结束以后对密封装置预热；空气进去到整个发酵罐内，通过所述消泡器、温度计和取样口，此时设备内压力降到0.15Mpa～0.18Mpa，而提供热空气的温度到达126℃～130℃灭菌1h～1.5h；灭菌结束后，缓慢降低压力到0.02Mpa，空气进入所述消泡器内，温度降至27℃～30℃，设备内压强维持在0.02Mpa～0.025Mpa，此过程不能突然降低压力，以避免倒吸入外面空气；在发酵温度为30℃～31℃时取样测pH值，镜检观察菌体生长情况，测定生理指标。

所述茵达霉素的制备方法，其中：所述步骤(5.4)在整个发酵过程中开口组件、取样器、空气进样口处于高温蒸汽保护下完成，发酵结束由消耗营养物质所占比例OPB＝0∶1、氨氮质量分数1％和菌丝体生长形态学状态作为评判标准。

所述茵达霉素的制备方法，其中：所述步骤(6)的离心管在离心过程中，其内部上层为原始相，下层为菌丝体；所述步骤(7)中最终菌丝体与甲醇的重量比为1∶5。

一种茵达霉素的用途，其中对吸式口器害虫有明显的防治作用。

所述茵达霉素的用途，其中可用于防治豌豆蚜、棉蚜和桃蚜，还可用于防治蓟马、飞虱和叶螨。

有益效果：

本发明茵达霉素药效好，使用后没有化学农药残留，对人类无害，且无副作用。

本发明茵达霉素的制备方法步骤简单、操作方便，主要通过链霉菌进行发酵后产生，制备效率高、效果好，制得的茵达霉素质量好，药效好。减少农业生产中化学农药的使用。

本发明茵达霉素的生物制剂对不同种蚜虫具有良好的防效作用，即可用于防治刺吸式口器害虫，这种制剂防治效率高、效果好；使用后没有化学农药残留，对人类无害，对环境友好，生产出的粮食、果树、蔬菜等安全性高，适于推广与应用。

具体实施方式

链霉菌P56(拉丁名Streptomyces loidensis ∏-56)菌种由印度土样中分离筛选得到，其发酵产生的次生代谢产物暂定名为茵达霉素。其杀虫的作用方式是触杀，对蚜虫、飞虱、螨类等多种刺吸式口器害虫有明显的防治效果，是防治害虫的新一代生物制剂。

茵达是使用在农作物上的抗虫类药品，防治节肢类害虫对农作物危害(蚜虫、飞虱、螨类)；茵达是一类经济环保类农药，在链霉素P-56培养物基础上合成的生物类药剂。

本发明茵达霉素的菌种保藏号为CGMCC No.9268。

本发明茵达霉素的制备方法，其包括以下步骤：

S010、制备无菌空气

空气通过无菌过滤器压缩机后，滤出杂质和灰尘，得到洁净空气，从压缩机压出来温度为25℃～30℃，压力为0.25±0.02Mpa的热空气，再进行二次过滤，通过过滤部件，最后到达发酵罐，此空气为发酵罐内气体提供保障；

S020、处理设备表面

对发酵罐进行消毒处理，用质量分数为1％的氯胺溶液处理发酵罐5h～6h，处理结束的氯胺倒入化学专用水渠内，发酵罐用水冲洗，在接种之前再用氯胺擦拭发酵罐的表面；

S030、制备三角瓶中种子材料

S031、制备瓶装培养基

选用质量百分比为0.8％～1.2％的葡萄糖、0.8％～1.2％的大豆粉、0.4％～0.6％氯化钠、0.4％～0.6％硫酸铵、0.2％～0.4％碳酸钙，以及100ml水，PH自然，制备培养基；

S032、灭菌三角瓶培养基

将培养基放入750ml的三角瓶，每瓶放入150ml的液体在120℃～130℃灭菌40min，pH值7.1～7.2；

S033、菌种培养

在无菌条件下把长有孢子的菌种接种到含有培养基的三角瓶中，每个三角瓶内接入10x10cm的斜面种子；再将盛有种子材料的三角瓶，放在转速为180～220rpm/min，培养48h；接种三角瓶视觉检测和标准生物指标检测；(其中，优质种子液指标：培养物生长形态状况，原生质体分布均匀，显微镜下观察菌丝体网状，排列紧密，填充整个视野，pH值7.0～7.2之间，菌丝体有浅绿色-棕色，无杂菌；不符合以上一种或几种条件的摇瓶，倒入废水处理装中；制备好的种子液接种时，按5％～10％接种量进行，种子液在4℃～5℃条件下最多存放10天。)

S040、菌种培养

把种子液，转接到种子罐内依次进行种子罐灭菌、制备并灭菌种子培养基，最后将灭菌后的种子培养基转接到发酵罐内。

S041、准备并检查种子罐

选用体积10吨的立式种子罐，并配置鼓泡搅拌器进行搅拌，提供消泡剂材料的驱动压缩机，用于分点取样和降低成本，发酵工通过进料口放入培养基，发酵罐夹套体的冷却，种子罐内有清洁水过滤器和空气过滤器，放空的种子罐利用1％的氯胺溶液处理5h～6h，然后用稀释三倍的氯胺彻底清洗种子罐；观察发酵罐是否泄漏，为此使发酵罐加压达到0.1Mpa，同时用肥皂水检查所有阀门，然后对种子罐灭菌。

S042、灭菌种子罐和过滤器

高压灭菌126℃～128℃，灭菌时间40min～60min。

S043、制备培养基并灭菌

具体是在种子罐中收集必要质量的温度40℃～50℃的水，搅拌器工作下加入大豆粉和葡萄糖，80℃条件搅拌10min，然后加入氯化钠、硫酸铵和碳酸钙，持续搅拌30min，制备培养基(培养基中葡萄糖0.8％～1.2％大豆粉0.8％～1.2％、氯化钠0.4％～0.6％、硫酸铵0.4％～0.6％、碳酸钙0.2％～0.4％)；

S044、茵达种子液转接

将三角瓶内发育培养物转接到上述步骤S043中的种子培养基内，按体积比5％～10％的接种量接种，再通过空消的装配机加入接种物质。

S045、转入接种物质

在转接过程中必须满足以下参数：培养液的温度为28±1℃，设备压力为0.02Mpa～0.05Mpa，搅拌器正常工作状态，转速变化过程分：0h～24h为200rmp/min、24h～48h为250rmp/min、48h～96h为300rmp/min，空气输入量7m³/min，加入消泡剂，避免产生大量气泡，制备发酵用种子物质。

S050、茵达发酵

S51、准备及检测发酵罐

降低压力后放空发酵罐，打开设备后，用水彻底清洗，检测鼓泡口是否干净，通过水层进入1min～2min的空气，接着检测空气通路阀门的气密性；检测进气口和过滤器是否漏气，此时设备的压力为0.05Mpa～0.08Mpa，通气30min，此时使链接处的阀门电气化，设备内的压力不能超过0.005Mpa，检查结束后，对发酵罐和过滤器进行灭菌。(发酵罐是带有圆形盖的圆柱型容器，并安装有通风搅拌装置，提高溶氧，另外还装有消泡剂和取样口，视镜和冷却水夹套，及温度计和压力表。)

S052、发酵罐与过滤器的空消

将密封的发酵罐和过滤器在126℃～130℃条件下空消1h，设备内提供的热空气经过过滤器，从每个阀门排除的空气，进入到大气中，发酵罐空消后降低压力，准备放入培养基。

S053、配制灭菌培养基

将配制好的培养基加入装有增加溶氧的发酵罐中，由质量百分比为：0.8％～1.2％的葡萄糖、0.8％～1.2％的大豆粉、0.4％～0.6％的氯化钠、0.4％～0.6％的硫酸铵、0.2％～0.4％的碳酸钙组成；

发酵罐内空气压力降低到0.04Mpa～0.06Mpa时，打开出气口阀门，空气排出，以压力为标准检查所有密封口，同时把整个发酵罐用肥皂水洗涤，检查结束以后对密封装置预热；空气进去到整个发酵罐内，通过所有接口处(消泡，温度计，取样口)此时设备内压力降到0.15Mpa～0.18Mpa，而提供热空气的温度到达126℃～130℃灭菌1h～1.5h，此时认为灭菌最佳条件，灭菌结束后缓慢降低压力到0.02Mpa，空气进入消泡器内，温度降至27℃～30℃，设备内压强维持在0.02Mpa～0.025Mpa，此过程不能突然降低压力，避免倒吸入外面空气；在发酵温度为30℃～31℃时取样测pH值，镜检观察菌体生长情况，测定生指标。

S054、发酵罐内茵达合成

按5％～10％接种量，将种子罐的发酵液转接到发酵罐中合成菌达；

茵达合成过程中必要执行步骤：温控设备控制发酵温度27℃～29℃、压力器控制发酵罐压力为0.015Mpa～0.02Mpa、空气通风口输入空气量0.1L/min～0.3L/min、空气温度25℃～30℃、发酵时间96h，以合成茵达霉素，整个发酵过程中开口组件、取样器、空气进样口应该处于高温蒸汽保护下完成；

发酵结束由以下指标作为评判标准：消耗营养物质所占比例OPB＝0∶1、氨氮质量分数1％、菌丝体生长形态学状态。

S060、从原始发酵液中分离菌丝体

取出发酵罐中发酵液，利用离心机离心，在室温下转速5000rpm离心10min～15min(离心管内行成两相，即上层为原始相、下层为菌丝体)，再提取含有杂质的菌丝体进入一个装置内，其余液体进入到另一装置内。

S070、利用甲醇或乙醇从菌丝体中分离茵达

利用上述S060步骤中的菌丝体放入甲醇或乙醇1500rpm，搅拌下提取15min，最终菌丝体与甲醇的重量比为1∶5，提取结束后得到稳定的乳化液。

S080、从菌丝体中分离提取物

利用离心机分离菌丝体的有机相(甲醇+乙醇+茵达)，离心机工作指数：转速500rpm、温度20℃，时间20min(离心管内上层为甲醇或乙醇，下层为茵达)，回收的甲醇加入旋转蒸发仪的烧瓶内，分离得到菌丝体放入另一装置内。

S090、提取物浓缩

在温度50℃，绝对对压力为0.05Mpa～0.07Mpa条件下，利用旋转蒸发仪对提取物进行浓缩处理，蒸发开始前加入体积5％的蒸馏水，直到有机物完全蒸发为止，离心后水溶性的提取物进去烘干装置内，蒸发后的甲醇可以循环利用。

S0100、烘干样品

利用烘干箱，在温度为80℃，恒压0.05Mpa～0.07Mpa条件下将上述S090步骤收集样品中的水分烘干，烘干后得到膏状有特殊气味物质，在膏状物中添加2％～5％壬基酚聚氧乙烯醚和30％～40％的抗生素制剂。

其中，将步骤(5.4)制备的发酵液，添加助剂后直接喷雾干燥，得到含有抗生素和活孢子的原粉，再添加适当的润湿剂和分散剂制成可湿性粉剂，可直接应用于农业生产，原粉中活孢子的数量可以达到1.0×10⁸～1.0×10¹¹。

以下结合菌达的属性和质量对本发明作进一步描述：

本发明茵达霉素的制备方法步骤简单、操作方便，主要通过链霉菌进行发酵后产生，制备效率高、效果好。

本发明茵达霉素的生物制剂对不同种蚜虫具有良好的防效作用，即可用于防治豌豆蚜、棉蚜和桃蚜，这种制剂防止效率高、效果好且对人类无害，对生态是友好的，适于推广与应用。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作任何其他形式的限制，而依据本发明的技术实质所作的任何修改或等同变化，仍属于本发明所要求保护的范围。

Claims

1.一种茵达霉素，为链霉菌P56发酵产生的次生代谢产物，其特征在于：所述茵达霉素的菌种保藏号为CGMCC No.9268。

2.一种如权利要求1所述的茵达霉素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备无菌空气

将空气通过无菌过滤器压缩机后，滤出杂质和灰尘，得到洁净空气；再将从压缩机压出来温度为25℃～30℃，压力为0.25±0.02Mpa的热空气进行二次过滤，通过过滤部件，最后到达发酵罐；

(2)处理设备表面

对发酵罐进行消毒处理，用质量分数为1％的氯胺溶液处理发酵罐5～6h，再处理结束的氯胺倒入化学专用水渠内，用水冲洗发酵罐，在接种之前再用氯胺擦拭发酵罐的表面；

(3)制备三角瓶中种子材料

(4.0)菌种培养

(4.1)准备并检查种子罐

选用大体积的种子罐，配置鼓泡搅拌器，提供消泡剂材料的驱动压缩机，通过进料口放入培养基，冷却发酵罐夹套体；接着，将种子罐内设置清洁水过滤器和空气过滤器，放空种子罐利用1％的氯胺溶液处理5h～6h；再用稀释三倍的氯胺彻底清洗种子罐；然后将发酵罐加压达到0.1Mpa观察发酵罐是否泄漏，同时用肥皂水检查所有阀门；

(4.2)灭菌种子罐和过滤器

将上述步骤(4.1)检查后的种子罐以及过滤器在温度为126℃～128℃下，高压灭菌40min～60min；

(4.3)制备培养基并灭菌

在上述步骤(4.2)灭菌后的种子罐中加入温度为40℃～50℃的水，然后在搅拌器工作下加入大豆粉和葡萄糖，并在80℃条件搅拌10min，然后加入氯化钠、硫酸铵和碳酸钙，持续搅拌30min制备培养基；

(4.4)茵达种子液转接

将上述步骤(4.3)三角瓶内发酵的培养物转接到种子培养基内，按体积比5％～10％的接种量接种，再通过空消的装配机加入接种物质；

(4.5)转入接种物质

将上述步骤(4.4)中培养液在转接过程中温度为28±1℃，设备压力为0.02Mpa～0.05Mpa，搅拌器转速在0h～24h为200rmp/min、24h～48h为250rmp/min、48h～96h为300rmp/min，空气输入量为7m³/min，加入消泡剂，制备发酵用种子物质；

(5)茵达发酵

(5.2)发酵罐与过滤器的空消

将密封的发酵罐和过滤器在126℃～130℃条件下空消1h，发酵罐空消后降低压力，准备放入培养基；

(5.3)配制灭菌培养基

将由葡萄糖、大豆粉、氯化钠、硫酸铵、碳酸钙和水配制好的培养基加入装有增加溶氧的发酵罐中，通入蒸汽0.1MPa下灭菌30min；

(5.4)发酵罐内茵达合成

按5％～10％接种量，将种子罐的发酵液转接到发酵罐中，在发酵温度为27℃～29℃，压力为0.015Mpa～0.02Mpa，输入空气量为0.1L/min～0.3L/min，空气温度为25℃～30℃，发酵96h，以合成茵达霉素；

(6)从原始发酵液中分离菌丝体

取出上述步骤(5.4)发酵罐中发酵液，利用离心机离心，在室温下且转速为5000rpm离心10min～15min，将提取含有杂质的菌丝体移至烧杯内，其余液体倒入另一烧杯内；

(7)从菌丝体中分离茵达

将上述步骤(6)中的菌丝体放入甲醇或乙醇，在500rpm下搅拌15min提取茵达，提取结束后得到稳定的乳化液；

(8)从菌丝体中分离提取物

利用离心机在转速为5000rpm，温度为20℃，时间为20min分离菌丝体的有机相即甲醇、乙醇和茵达，将回收的有机相加入旋转蒸发仪的烧瓶内，分离得到的菌丝体放入另一装置内；

(9)提取物浓缩

在温度为50℃，绝对对压力为0.05Mpa～0.07Mpa条件下，利用旋转蒸发仪对提取物进行浓缩处理，蒸发开始前加入体积5％的蒸馏水，直到有机物完全蒸发为止，离心后将水溶性的提取物放进烘干装置内，蒸发后的甲醇可以循环利用；

(10)烘干样品

利用烘干箱，在温度为80℃，负压0.05Mpa～0.07Mpa条件下将上述步骤(9)收集样品中的水分烘干，烘干后得到膏状有特殊气味物质，在膏状物中添加2％～5％的壬基酚聚氧乙烯醚和30％～40％的抗生素制剂。

3.如权利要求1所述的茵达霉素的制备方法，其特征在于：将所述步骤(5.4)制备的发酵液，添加助剂后直接喷雾干燥，得到含有抗生素和活孢子的原粉，再添加适当的润湿剂和分散剂制成可湿性粉剂，可直接应用于农业生产，原粉中活孢子的数量可以达到1.0×10⁸～1.0×10¹¹。

4.如权利要求1所述的茵达霉素的制备方法，其特征在于，所述步骤(3.1)、步骤(4.3)和步骤(5.3)中的培养基中均是葡萄糖0.8％～1.2％、大豆粉0.8％～1.2％、氯化钠0.4％～0.6％、硫酸铵0.4％～0.6％、碳酸钙0.2％～0.4％。

5.如权利要求1所述的茵达霉素的制备方法，其特征在于，所述步骤(3.3)三角瓶内发酵的培养物是通过三角瓶镜检检测和生物指标检测得出优质种子液；

所述优质种子液指标为：培养物生长形态状况、原生质体分布均匀、显微镜下观察菌丝体网状、排列紧密、填充整个视野、pH值7.0～7.2之间、菌丝体有浅绿色-棕色、无杂菌，不符合以上一种或几种指标的种子液倒入废水处理装置中；

所述优质种子液接种时，按5％～10％接种量进行，种子液在4℃～5℃条件下最多存放10天。

6.如权利要求1所述的茵达霉素的制备方法，其特征在于：所述步骤(5.1)在检测进气口和过滤器是否漏气时，设备的压力为0.05Mpa～0.08Mpa，通气30min，此时使链接处的阀门电气化，设备内的压力不能超过0.005Mpa；

所述步骤(5.1)中的发酵罐是带有圆形盖的圆柱型容器，并安装有通风搅拌装置，以提高溶氧，另外还装有消泡器、取样口、视镜、冷却水夹套、温度计和压力表；

所述步骤(5.3)的发酵罐在其内部空气压力降低到0.04Mpa～0.06Mpa时，打开出气口阀门，空气排出，以压力为标准检查所有密封口，同时把整个发酵罐用肥皂水洗涤，检查结束以后对密封装置预热；空气进去到整个发酵罐内，通过所述消泡器、温度计和取样口，此时设备内压力降到0.15Mpa～0.18Mpa，而提供热空气的温度到达126℃～130℃灭菌1h～1.5h；灭菌结束后，缓慢降低压力到0.02Mpa，空气进入所述消泡器内，温度降至27℃～30℃，设备内压强维持在0.02Mpa～0.025Mpa，此过程不能突然降低压力，以避免倒吸入外面空气；在发酵温度为30℃～31℃时取样测pH值，镜检观察菌体生长情况，测定生理指标。

7.如权利要求1所述的茵达霉素的制备方法，其特征在于：所述步骤(5.4)在整个发酵过程中开口组件、取样器、空气进样口处于高温蒸汽保护下完成，发酵结束由消耗营养物质所占比例OPB＝0∶1、氨氮质量分数1％和菌丝体生长形态学状态作为评判标准。

8.如权利要求1所述的茵达霉素的制备方法，其特征在于：所述步骤(6)的离心管在离心过程中，其内部上层为原始相，下层为菌丝体；所述步骤(7)中最终菌丝体与甲醇的重量比为1∶5。

9.一种如权利要求1所述的茵达霉素的用途，其特征在于对吸式口器害虫有明显的防治作用。

10.如权利要求9所述的茵达霉素的用途，其特征在于可用于防治豌豆蚜、棉蚜和桃蚜，还可用于防治蓟马、飞虱和叶螨。