CN104792980B - 一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用 - Google Patents
一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104792980B CN104792980B CN201510213393.9A CN201510213393A CN104792980B CN 104792980 B CN104792980 B CN 104792980B CN 201510213393 A CN201510213393 A CN 201510213393A CN 104792980 B CN104792980 B CN 104792980B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antigen
- ceric oxide
- oxide nanorod
- antibody
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 28
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 229910052684 Cerium Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 14
- GWXLDORMOJMVQZ-UHFFFAOYSA-N cerium Chemical compound [Ce] GWXLDORMOJMVQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 14
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 12
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 239000002073 nanorod Substances 0.000 claims abstract description 100
- 229910000422 cerium(IV) oxide Inorganic materials 0.000 claims abstract description 97
- CETPSERCERDGAM-UHFFFAOYSA-N ceric oxide Chemical compound O=[Ce]=O CETPSERCERDGAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 95
- 229940044927 ceric oxide Drugs 0.000 claims abstract description 95
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 69
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 62
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 62
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 69
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 19
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 16
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 12
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 11
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 8
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 8
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 8
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid group Chemical group S(O)(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical group CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 claims description 6
- 238000005253 cladding Methods 0.000 claims description 6
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 claims description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 5
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 108010008629 CA-125 Antigen Proteins 0.000 claims description 4
- 102000007269 CA-125 Antigen Human genes 0.000 claims description 4
- 102000007298 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- -1 diamine salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 230000012447 hatching Effects 0.000 claims description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Substances OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- QNQMSFZGUQJRMC-UHFFFAOYSA-N N1=CC=CC2=CC(=C3C=CC=NC3=C12)S(=O)(=O)O.C(C)C=1SC2=C(N1)C=CC=C2 Chemical compound N1=CC=CC2=CC(=C3C=CC=NC3=C12)S(=O)(=O)O.C(C)C=1SC2=C(N1)C=CC=C2 QNQMSFZGUQJRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DBLXOVFQHHSKRC-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid;2-piperazin-1-ylethanol Chemical compound CCS(O)(=O)=O.OCCN1CCNCC1 DBLXOVFQHHSKRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 31
- 229910000420 cerium oxide Inorganic materials 0.000 abstract description 6
- BMMGVYCKOGBVEV-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoceriooxy)cerium Chemical class [Ce]=O.O=[Ce]=O BMMGVYCKOGBVEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 6
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 abstract description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 9
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 9
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 9
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 6
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000010335 hydrothermal treatment Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- WFCSWCVEJLETKA-UHFFFAOYSA-N 2-piperazin-1-ylethanol Chemical compound OCCN1CCNCC1 WFCSWCVEJLETKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 229910002492 Ce(NO3)3·6H2O Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021281 Co3O4In Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- UPWPBIUUSLIWAI-UHFFFAOYSA-N [4-(4-aminophenyl)sulfonylphenyl]urea Chemical compound C1=CC(NC(=O)N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 UPWPBIUUSLIWAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- HSJPMRKMPBAUAU-UHFFFAOYSA-N cerium(3+);trinitrate Chemical compound [Ce+3].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O HSJPMRKMPBAUAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CQGVSILDZJUINE-UHFFFAOYSA-N cerium;hydrate Chemical compound O.[Ce] CQGVSILDZJUINE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UBEWDCMIDFGDOO-UHFFFAOYSA-N cobalt(II,III) oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[Co+2].[Co+3].[Co+3] UBEWDCMIDFGDOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 238000001027 hydrothermal synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54346—Nanoparticles
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J23/00—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00
- B01J23/10—Catalysts comprising metals or metal oxides or hydroxides, not provided for in group B01J21/00 of rare earths
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J35/00—Catalysts, in general, characterised by their form or physical properties
- B01J35/60—Catalysts, in general, characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用，属于纳米材料技术领域。该多孔二氧化铈纳米棒复合结构由二氧化铈纳米棒及包被于其外表面的抗原或抗体组成；该氧化铈纳米棒复合结构制备的模拟酶溶液对抗体或抗原的检测响应范围宽、灵敏度高，检测限能够达到10pg/mL的水平，制备方法简单易行，Elisa检测方法易操作、环境适应性好、不受环境温度影响。
Description
技术领域
本发明属于纳米材料技术领域，涉及多孔二氧化铈纳米棒及其应用，具体涉及一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用。
背景技术
酶联免疫分析(Elisa)是一种被广泛认可的强有力的检测蛋白的方法。该方法具有高灵敏度及标准的操作程序，通常使用辣根过氧化物酶(HRP)标记的免疫试剂产生信号来检测目标分子。尽管具有方法多样及灵敏度较高等优点，但其也有一些缺点。比如需要复杂且昂贵的提取工艺、蛋白酶的温度及pH稳定性差，反应过程对温度依赖性强等缺点。过去的十年里，研究者都希望出现一种易于大量制备并且易于储运，反应条件要求不高的Elisa模拟酶，同时该体系具有足够的灵敏度和准确性。
纳米粒子参与的Elisa有以下几种方式：纳米颗粒修饰生物大分子后可以为传统的Elisa体系提供更强大的检测能力。在直接的目视化分析中(许多的胶体金法试纸条)，纳米粒子本身可以作为显色物参与检测，这种检测体系的主要机制是纳米粒子的尺寸发生变化(主要是团聚)带来颜色的变化(NatProtoc.2013Sep；8(9):1759-64.)。基于这一理念，前列腺特异抗原(prostatespecificantigen,PSA)和HIV-1衣壳抗原p24在全血样本中的检测限可低至2pg(NatNanotechnol.2012Dec；7(12):821-4.)。此外，鉴于纳米粒子具有很高的比表面积，相对于传统的体系中的微孔板可以提供更多的抗原/抗体结合位点，具有增强检测信号的作用(ChemCommun.2012Nov11；48(87):10784-6)，可以大大提高检测限。最重要的是，许多种纳米颗粒自身具有过氧化物模拟酶活性，可以直接取代传统Elisa反应中的HRP酶，近年来越来越多的研究者进入到这一领域开展研究，以期望克服传统Elisa体系成本昂贵，保存条件相对较高的缺点。
近些年来，Fe3O4、TiO2、Co3O4和Au/rGO等纳米颗粒相继发现具有过氧化物模拟酶活性，可以取代传统Elisa中的HRP，实现对目标分子的高灵敏度检测。如利用Fe3O4的过氧化物模拟酶活性开发出的多种Elisa检测体系，可以实现对乙型肝炎病毒表面抗原和肌钙蛋白的检测(NatNanotechnol.2007Sep；2(9):577-83)。Co3O4纳米颗粒发挥其过氧化物模拟酶活性取代传统的Elisa体系中HRP酶的作用，实现了对肿瘤组织中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的检测(ACSApplMaterInterfaces.2014Feb12；6(3):1959-70)。前面所研究的材料都存在模拟酶催化能力受温度影响比较大的缺点，这给实际应用带来很大困难。
发明内容
为了克服上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫应用，该氧化铈纳米棒复合结构制备的模拟酶溶液对抗体或抗原的检测响应范围宽、灵敏度高，检测限能够达到10pg/mL的水平，制备方法简单易行，Elisa检测方法易操作、环境适应性好、不受环境温度影响。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种多孔二氧化铈纳米棒-抗原或抗体复合结构，由二氧化铈纳米棒及包被于其外表面的抗原或抗体组成；该复合结构中每0.1～10mg的二氧化铈纳米棒加入的抗原或抗体的量为0.5～20μg。
所述二氧化铈纳米棒为圆柱状，且表面密布介孔。
所述抗体为兔抗人IgG、羊抗鼠IgG、羊抗兔IgG和小鼠白介素抗体中的一种或几种；所述的抗原为人乳腺癌的特异性抗原CA15-3、卵巢癌抗原CA125、胃癌抗原CA72-4或前列腺癌抗原PSA。
一种二氧化铈纳米棒模拟酶溶液的制备方法，先将二氧化铈纳米棒、抗原或抗体及包被缓冲液，混合均匀后，恒温孵育；然后离心去除游离的抗原或抗体，制得抗原或抗体包覆后的二氧化铈纳米棒；最后经重悬处理，制得二氧化铈纳米棒模拟酶溶液。
一种二氧化铈纳米棒模拟酶溶液的制备方法，将1～10mg的二氧化铈纳米棒和0.5～20μg抗原或抗体分散到10～50mL包被缓冲液中，混合均匀后，恒温孵育；然后在10000～12000rpm下离心并清洗处理，制得抗原或抗体包覆后的二氧化铈纳米棒，最后经重悬处理，制得二氧化铈纳米棒模拟酶溶液。
所述包被缓冲液为含有BSA的缓冲溶液，该缓冲溶液选用三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸缓冲液或4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中的一种或几种。
恒温孵育是在25～38℃下进行，孵育时间为6～12h。
本发明制得的二氧化铈纳米棒模拟酶溶液在酶联免疫分析中的应用。
采用本发明制得的二氧化铈纳米棒模拟溶液检测抗体或抗原的方法，包括以下步骤：
1)将75～200μL的二氧化铈纳米棒模拟酶溶液加入抗原或抗体包被的微孔板中，在4～44℃孵育30～120min后用缓冲溶液进行清洗；
2)然后加入含有显色底物的磷酸-柠檬酸缓冲溶液反应10～45min，磷酸-柠檬酸缓冲溶液的pH值为3～6；
3)最后加入终止液终止反应，并使用酶标仪监测其吸光度的变化。
所述显色底物为3,3',5,5'-四甲基联苯胺、2,2'-联氨-双(3一乙基苯并噻唑啉-6磺酸)二胺盐或邻苯二胺；所述终止液为硫酸溶液或十二烷基磺酸钠溶液。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明公开的多孔二氧化铈纳米棒-抗原或抗体复合结构中含有两部分结构：作为催化场所的二氧化铈纳米棒外表面和作为免疫结合位点的抗体或抗原，其包被于二氧化铈纳米棒外表面。该复合结构由于二氧化铈纳米棒的比表面积大，为免疫反应提供更多的结合位点，因此信号的放大，增强灵敏度；可以实现结合位点与催化位点的互不干扰，共存的抗原或抗体蛋白对纳米结构的催化活性没有明显的影响。表面的Ce3+具有类似于HRP酶的过氧化物模拟酶活性，能够替代传统的HRP酶实现Elisa检测，并且具有更好的反应稳定性，易于储运。
本发明还公开二氧化铈纳米棒模拟酶溶液的制备方法，使用的纳米颗粒成本低廉、易于制备和储运、反应环境适应性好、不受环境温度影响，同时具有极高的灵敏度和准确性。该氧化铈纳米棒模拟酶溶液对抗体或抗原的检测响应范围宽、灵敏度高，检测限能够达到10pg/mL的水平。
附图说明
图1是本发明实施例1所制备的二氧化铈纳米棒的透射电子显微镜照片；
图2为本发明实施例1所制备的二氧化铈纳米棒的比表面积和Ce3+比例数据图；
图3为本发明实施例2中二氧化铈纳米棒作为过氧化物模拟酶的反应动力学分析即底物浓度与催化氧化反应速度的关系；
其中，A、B分别为以TMB为底物时，HRP酶和二氧化铈纳米棒模拟酶的反应动力学曲线；C、D分别为以H2O2为底物时，HRP酶和二氧化铈纳米棒模拟酶的反应动力学曲线；
图4-1为本发明实施例3中经过不同温度处理后的二氧化铈纳米棒的相对反应活性；
图4-2为本发明实施例3中经过不同pH值处理后的二氧化铈纳米棒的相对反应活性；
图4-3为本发明实施例4中在不同的反应温度下二氧化铈纳米棒的相对反应活性；
图5为本发明实施例6中二氧化铈纳米棒参与Elisa反应的流程示意图；
图6为本发明检测体系检测灵敏度的待测抗原和吸光度之间指数关系图；
图7为本发明检测体系对待测物的专一性分析柱状分析图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理解，以下实施例仅为本发明的优选实施例，以便于更好地理解本发明，因而不应视为限定本发明的范围。对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂厂商购买得到的。
为实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：
第一点，本发明提供一种多孔二氧化铈纳米棒-抗原或抗体复合结构，由二氧化铈纳米棒及包被于其外表面的抗原或抗体组成，二氧化铈纳米棒为圆柱状，且表面密布介孔；该复合结构中每0.1～10mg的二氧化铈纳米棒加入的抗原或抗体的量为0.5～20μg。
本发明的多孔二氧化铈纳米棒-抗原或抗体复合结构含有两部分结构：作为催化场所的二氧化铈纳米棒外表面和作为免疫结合位点的抗体或抗原，其包被于所述圆柱状二氧化铈纳米棒外表面。上述结构的复合结构由于圆柱状二氧化铈纳米棒的比表面积大，为免疫反应提供更多的结合位点，因此信号的放大，增强灵敏度；表面的Ce3+具有类似于HRP酶的过氧化物模拟酶活性，能够替代传统的HRP酶实现Elisa检测，并且具有更好的反应稳定性，易于储运。当使用二氧化铈纳米棒时，可以实现结合位点与催化位点的互不干扰，共存的抗原或抗体蛋白对纳米结构的催化活性没有明显的影响。
第二点，本发明提供一种二氧化铈纳米棒模拟酶溶液的制备方法，包括：
先将二氧化铈纳米棒、抗原或抗体及包被缓冲液，混合均匀后，恒温孵育；然后离心去除游离的抗原或抗体，制得抗原或抗体包覆后的二氧化铈纳米棒；最后经重悬处理，制得二氧化铈纳米棒模拟酶溶液。
其中，可以用去离子水或包被缓冲液重悬沉淀。重悬所得的二氧化铈纳米棒模拟酶溶液中的二氧化铈纳米棒浓度为0.1-10mg/mL，如0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.5mg/mL、lmg/mL、5mg/mL或10mg/mL，更优选为1mg/mL。
优选地，所述步骤中包被缓冲液选自含牛血清蛋白(BSA)的缓冲溶液；其中，缓冲溶液可以是三羟甲基氨基甲烷缓冲液(Tris)、磷酸缓冲液(PBS)和羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液中的一种或者多种，更优选为三羟甲基氨基甲烷缓冲液(Tris)。
优选地，所述步骤中恒温孵育的温度为37℃，当然也可以是其它适合温度，比如25℃、30℃、35℃、40℃、35-39℃或33-38℃等。
优选地，所述步骤中恒温孵育的时间为6～12h。
优选地，所述步骤中抗体为兔抗人IgG、羊抗鼠IgG、羊抗兔IgG和小鼠白介素抗体中的一种或者多种，更优选为兔抗人IgG；所述的抗原为人乳腺癌的特异性抗原CA15-3、卵巢癌抗原CA125、胃癌抗原CA72-4或前列腺癌抗原PSA。
优选地，所述步骤中相对于0.1～10mg的二氧化铈纳米棒，抗体的加入量为0.5～20μg；当然，本领域的技术人员能够理解二氧化铈纳米棒和抗体的用量并非仅限于上述数值范围，也可以在上述比例的基础上适当扩大或者缩小。
第三点，本发明提供一种使用二氧化铈纳米棒模拟酶溶液检测抗原或者抗体的方法，包括：
(1)将将二氧化铈纳米棒模拟酶溶液加入抗原或抗体对微孔板进行包被并封闭未结合位点；
(2)加入不同浓度的待测抗原进行吸附；
(3)加入含有显色底物的磷酸-柠檬酸缓冲溶液进行反应；
(4)最后加入终止液终止反应，并使用酶标仪监测其吸光度的变化。
优选地，微孔板为96孔的微孔板；96孔的微孔板是ELISA中最常用的微孔板，但是也不排除其它类型的微孔板应用于本发明的情况。
优选地，所述微孔板上的抗体选自能与所述待测抗原免疫识别的鼠抗兔IgG、羊抗兔IgG、牛抗兔IgG和小鼠白介素抗体中的一种或者多种，更优选为羊抗兔IgG。
优选地，孵育的温度为4-44℃，如5℃、7℃、9℃、10℃、12℃、15℃、20℃、25℃、35℃、40℃、或43℃，更优选为37℃。
优选地，孵育的时间为30-120min，如40min、60min、90min、100min、110min、120min，更优选为60min。
优选地，模拟酶溶液的加入量为75-200μL，例如80μL、90μL、100μL、120μL、130μL、150μL、170μL或190μL，更优选为100μL。
优选地，显色底物为3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)、2,2'-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6磺酸)二胺盐(ABTS)或邻苯二胺(OPD)，更优选为3,3',5,5'-四甲基联苯胺。
优选地，磷酸-柠檬酸缓冲溶液的pH值为3-6，例如3.5、4.0、4.5、5.0、5.5或6.0，更优选为4.0。
优选地，加入含有显色底物的磷酸-柠檬酸缓冲溶液反应的时间为10-45min，如12min、15min、18min、20min、25min、30min或40min，更优选为15min。
优选地，终止液为硫酸溶液或十二烷基磺酸钠(SDS)溶液，其中硫酸溶液的浓度可以是1.5M、2M或3M，十二烷基磺酸钠溶液的质量浓度可以是0.1％、0.5％、1％或2％。
在第四点，本发明提供如二氧化铈纳米棒模拟酶溶液在酶联免疫分析中的应用。
以下实施例中，所述试剂如下所示：六水合硝酸铈Ce(NO3)3·6H2O，氢氧化钠(NaOH)，辣根过氧化物酶(HRP)，人IgG(HumanIgG)，兔抗人IgG(RabbitAnti-HumanIgGFractionPolyclonalAntibody)，3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)，三羟甲基氨基甲烷(Tris)。
测试仪器有:酶标仪(Bio-Rad)，UV-Vis(PerkinElmer)，TEM(HatchieHT-7700)，X射线光电子能谱分析仪(ThermoElectronModelK-Alpha)，化学吸附仪(ChembetTPR/TPD)。
实施例1：二氧化铈纳米棒的制备纯化
本发明中所述二氧化铈纳米棒可以用本领域技术人员所熟知的方法获得。在本发明中，我们先制备氧化铈纳米棒前驱体，之后通过水热法得到纯的二氧化铈纳米棒。
二氧化铈纳米棒的制备：取5mL的硝酸铈水溶液(0.8M)与75mL的NaOH水溶液(6.4M)室温下混合30min后，100℃水热处理24h。水和乙醇反复清洗三次干燥后，重新分散到水中(2mg/mL)，180℃水热处理12h。12000rpm离心10min，去除上清后，60℃过夜干燥备用。
二氧化铈纳米棒的TEM形貌图及相应的比表面积及Ce3+比例图谱如图1和图2所示。从图1可以看出所制备的氧化铈纳米棒表面带有大量微孔大大增加了材料的比表面积。图2显示纳米材料相对于其它形貌的氧化铈纳米而言具有更高的比表面积和Ce3+比例。
一种多孔二氧化铈纳米棒-抗原或抗体复合结构，由二氧化铈纳米棒及包被于其外表面的抗原或抗体组成；该复合结构中每1mg的二氧化铈纳米棒加入的抗原或抗体的量为10μg。
所述抗体为兔抗人IgG、羊抗鼠IgG、羊抗兔IgG和小鼠白介素抗体中的一种或几种；所述的抗原为人乳腺癌的特异性抗原CA15-3、卵巢癌抗原CA125、胃癌抗原CA72-4或前列腺癌抗原PSA。
一种二氧化铈纳米棒模拟酶溶液的制备方法，将mg的二氧化铈纳米棒和10μg抗原或抗体分散到20mL包被缓冲液中，混合均匀后，恒温孵育；然后在12000rpm下离心并清洗处理3次，制得抗原或抗体包覆后的二氧化铈纳米棒，最后经重悬处理，制得二氧化铈纳米棒模拟酶溶液。
采用制得的二氧化铈纳米棒模拟溶液检测抗体或抗原的方法，包括以下步骤：
1)将100μL的二氧化铈纳米棒模拟酶溶液加入抗原或抗体包被的微孔板中，在37℃孵育60min后用缓冲溶液进行清洗；
2)然后加入含有显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺的磷酸-柠檬酸缓冲溶液反应15min，磷酸-柠檬酸缓冲溶液的pH值为4.0；
3)最后加入终止液终止反应，并使用酶标仪监测其吸光度的变化。
实施例2：酶动力学参数分析
通过监测3,3',5,5'-四甲基联苯胺氧化产物吸收峰吸光度的变化来考察其反应动力学。使用连续监测模式，每隔1s间隔测量一次。测试条件为：二氧化铈纳米棒的浓度为0.2μg/mL，作为对照的HRP浓度为1ng/mL，1.0mL的0.2M的pH4.0的醋酸缓冲溶液，反应温度设定为25℃。以3,3',5,5'-四甲基联苯胺为底物时，H202的浓度固定在100mM；当以H2O2为底物时，TMB的浓度固定在0.8mM。表观动力学参数参照Lineweaver-Burk方程：l/V＝(Km/Vmax)(1/[C])+1/Vmax获得。其中，V是反应速度，Vmax是最大反应速度，[C]是底物浓度，Km是米氏常数。
得到的动力学参数如表1和图3所示：
表1二氧化铈纳米棒(PN-Ceria)作为过氧化物模拟酶和作为对照的HRP酶的表观动力学参数
其中，[E]是酶的浓度，Vmax是最大反应速率，Km是米氏常数。
联合表1和图3，比较以TMB为底物时二氧化铈纳米棒(PN-Ceria)过氧化物模拟酶和HRP酶的Km值和Kcat值，二氧化铈纳米棒过氧化物模拟酶的Km值远小于HRP，Kcat值则是HRP酶的4倍。表明该模拟酶对底物TMB有更好的亲和能力以及更快的催化速度，可以更快的催化底物的氧化。从而缩短反应时间，提高反应的灵敏度，从而对下游的生化分析检测带来了巨大的优势。
实施例3：储运稳定性分析
取10mL的10mg/mL二氧化铈纳米棒溶液和0.1μg/mL的HRP溶液各在4-200℃下保存7天。同时另一组10mg/mL二氧化铈纳米棒溶液和0.1μg/mL的HRP溶液则各在0-14的pH环境处理6小时。之后参照实施例2的条件，比较其相对活性。
二氧化铈纳米棒溶液和作为对照的HRP溶液经过不同温度和pH值处理后的相对活性如图4-1和图4-2所示。可以看到经过不同温度和pH值处理后，二氧化铈纳米棒模拟酶依旧保持了很高的相对催化活性。而传统的天然过氧化物酶HRP则相对活性下降严重。这一结果显示了二氧化铈纳米棒模拟酶优秀的储运稳定性，方便日常的储存和运输。
实施例4：反应温度稳定性分析
参照实施例2的条件，只改变反应温度。对比二氧化铈纳米棒溶液和作为对照的HRP溶液在反应温度4-60℃之间的相对反应活性。
二氧化铈纳米棒溶液和作为对照的HRP溶液在不同的反应温度下相对活性如图4-3所示，可以看到在不同的反应温度下，二氧化铈纳米棒模拟酶依旧保持了很高的相对催化活性。而传统的天然过氧化物酶HRP则相对活性下降严重。这一结果显示了二氧化铈纳米棒模拟酶对反应温度不敏感，适用于不同温度下的检测环境，这一特性对下游的应用有着重要意义。
实施例5:二氧化铈纳米棒表面进行兔抗人IgG抗体修饰
取lmL的1mg/mL二氧化铈纳米棒溶液，分散在lmL含0.05％BSA的Tris缓冲溶液(0.05M，pH＝8)中。加入5μL的1mg/mL兔抗人IgG溶液，混合均匀后放入37℃恒温箱中，孵育30min之后，于12000rpm转速下离心5分钟去掉游离的兔抗人IgG分子。弃掉上清液，将沉淀物分散在1mL含0.05％BSA的Tris缓冲液(50mM，pH＝8)中备用。
实施例6：免疫识别反应
将透明的平底聚乙烯96孔板先用0.05MpH7.4的PBS清洗。之后向孔中分别加入100μL不同浓度的分散在0.05MpH7.4的PBS羊抗兔IgG溶液。其中羊抗兔IgG浓度范围从1pg-10μg/mL，4℃下包被过夜。之后用50mM的Trisbuffer(含0.05％Tween-20，pH＝8.0)清洗3次，最后用50mM的Trisbuffer(pH＝8.0)再次清洗。然后用含有1％BSA的Trisbuffer于37℃封闭2小时。最后再用Trisbuffer(0.05M，pH＝8.0)清洗3次。加入50μL人IgG(浓度1pg-100μg/mL)，37℃孵育2小时，弃去上清，之后用50mM的Trisbuffer(含0.05％Tween-20，pH＝8.0)清洗3次。然后向每个孔中加入100μL兔抗人IgG修饰的二氧化铈纳米棒溶液，于37℃孵育1小时。之后用含0.05％Tween-20的Trisbuffer(50mM，pH＝8.0)清洗，最后再用50mM的Trisbuffer(pH＝8.0)清洗一次。图5显示了本发明中二氧化铈纳米棒参与Elisa检测的流程示意图。
实施例7：以TMB为显色底物时的检测反应
向实施例5的微孔板的每个孔中加入100μLTMB底物溶液(1mg/mLTMB的DMSO溶液溶解于9mL0.05M的磷酸-柠檬酸缓冲溶液(pH＝4.2)中，并加入2μL30％H202)。反应15min后加入50μL2MH2S04终止反应，检测450nm处的吸光度。整个实验设立了阳性对比(BSA)、阴性对比(H2O)。
结果如图6所示，可以看出待测抗原和吸光度之间存在很好的指数关系，响应范围为10pg/mL-100μg/mL，最低检测限达到了10pg/mL。同时，图7显示出该Elisa检测体系具有很好的专一性和抗干扰能力，可以适用于多种复杂的检材。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细特征以及详细方法，但本发明并不局限于上述详细特征以及详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细特征以及详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明选用组分的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (8)
1.一种多孔二氧化铈纳米棒-抗原或抗体复合结构，其特征在于，由二氧化铈纳米棒及包被于其外表面的抗原或抗体组成；该复合结构中每0.1～10mg的二氧化铈纳米棒加入的抗原或抗体的量为0.5～20μg；所述二氧化铈纳米棒为圆柱状，且表面密布介孔；所述二氧化铈纳米棒的外表面作为催化场所，抗体或抗原作为免疫结合位点，所述的抗体或抗原包被于所述圆柱状的二氧化铈纳米棒的外表面。
2.根据权利要求1所述的种多孔二氧化铈纳米棒-抗原或抗体复合结构，其特征在于，所述抗体为兔抗人IgG、羊抗鼠IgG、羊抗兔IgG和小鼠白介素抗体中的一种或几种；所述的抗原为人乳腺癌的特异性抗原CA15-3、卵巢癌抗原CA125、胃癌抗原CA72-4或前列腺癌抗原PSA。
3.一种二氧化铈纳米棒模拟酶溶液的制备方法，其特征在于，先将二氧化铈纳米棒、抗原或抗体及包被缓冲液，混合均匀后，恒温孵育；然后离心去除游离的抗原或抗体，制得抗原或抗体包覆后的二氧化铈纳米棒；最后经重悬处理，制得二氧化铈纳米棒模拟酶溶液；将1～10mg的二氧化铈纳米棒和0.5～20μg抗原或抗体分散到10～50mL包被缓冲液中，混合均匀后，恒温孵育；然后在10000～12000rpm下离心并清洗处理，制得抗原或抗体包覆后的二氧化铈纳米棒，最后经重悬处理，制得二氧化铈纳米棒模拟酶溶液,所述二氧化铈纳米棒的外表面作为催化场所，抗体或抗原作为免疫结合位点，所述的抗体或抗原包被于圆柱状的二氧化铈纳米棒的外表面。
4.根据权利要求3所述的一种二氧化铈纳米棒模拟酶溶液的制备方法，其特征在于，所述包被缓冲液为含有BSA的缓冲溶液，该缓冲溶液选用三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸缓冲液或4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液中的一种或几种。
5.根据权利要求4所述的一种二氧化铈纳米棒模拟酶溶液的制备方法，其特征在于，恒温孵育是在25～38℃下进行，孵育时间为6～12h。
6.根据权利要求5所述方法制备的二氧化铈纳米棒模拟酶溶液在酶联免疫分析中的应用。
7.采用权利要求3-5中任意一项所述方法制得的二氧化铈纳米棒模拟酶溶液检测抗体或抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将75～200μL的二氧化铈纳米棒模拟酶溶液加入抗原或抗体包被的微孔板中，在4～44℃孵育30～120min后用缓冲溶液进行清洗；
2)然后加入含有显色底物的磷酸-柠檬酸缓冲溶液反应10～45min，磷酸-柠檬酸缓冲溶液的pH值为3～6；
3)最后加入终止液终止反应，并使用酶标仪监测其吸光度的变化。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述显色底物为3,3',5,5'-四甲基联苯胺、2,2'-联氨-双(3一乙基苯并噻唑啉-6磺酸)二胺盐或邻苯二胺；所述终止液为硫酸溶液或十二烷基磺酸钠溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510213393.9A CN104792980B (zh) | 2015-04-29 | 2015-04-29 | 一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510213393.9A CN104792980B (zh) | 2015-04-29 | 2015-04-29 | 一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104792980A CN104792980A (zh) | 2015-07-22 |
| CN104792980B true CN104792980B (zh) | 2016-07-27 |
Family
ID=53557958
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510213393.9A Expired - Fee Related CN104792980B (zh) | 2015-04-29 | 2015-04-29 | 一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104792980B (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108489921B (zh) * | 2018-05-02 | 2020-08-11 | 天津科技大学 | 一种免双氧水快速检测半胱氨酸的方法 |
| CN110702837A (zh) * | 2019-09-19 | 2020-01-17 | 上海工程技术大学 | 一种简单低成本的二氧化铈催化性能表征方法 |
| CN111579515A (zh) * | 2020-05-26 | 2020-08-25 | 山东理工大学 | 一种以纳米二氧化铈为模拟氧化酶氧化tmb的方法 |
| CN112813060B (zh) * | 2020-12-31 | 2023-08-18 | 华南理工大学 | 一种磁性纳米核-壳结构载蛋白酶的光酶催化剂及其制备方法和应用 |
| CN114716817B (zh) * | 2022-03-02 | 2023-05-02 | 西北工业大学深圳研究院 | 一种二氧化铈纳米棒杂化多功能水凝胶、制备方法及应用 |
| CN114544614B (zh) * | 2022-04-25 | 2022-07-19 | 中国农业大学 | 一种重金属Fe3+和Cr6+的快速检测试剂盒及其应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60211339D1 (de) * | 2001-06-22 | 2006-06-14 | Argonide Corp | Submikron filter |
| WO2003106589A1 (en) * | 2002-06-13 | 2003-12-24 | Lyotropic Therapeutics, Inc. | A nanoporous particle with a retained target |
| US7271896B2 (en) * | 2003-12-29 | 2007-09-18 | Intel Corporation | Detection of biomolecules using porous biosensors and raman spectroscopy |
| CN103645315B (zh) * | 2013-12-18 | 2015-07-01 | 国家纳米科学中心 | 一种铂基合金结构的纳米棒模拟酶溶液及在elisa中的应用 |
-
2015
- 2015-04-29 CN CN201510213393.9A patent/CN104792980B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104792980A (zh) | 2015-07-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104792980B (zh) | 一种多孔二氧化铈纳米棒复合结构及基于该结构的酶溶液的制备方法和酶联免疫分析应用 | |
| Wang et al. | Nanozymes in bionanotechnology: from sensing to therapeutics and beyond | |
| Gao et al. | High-index {hk 0} faceted platinum concave nanocubes with enhanced peroxidase-like activity for an ultrasensitive colorimetric immunoassay of the human prostate-specific antigen | |
| CN103645315B (zh) | 一种铂基合金结构的纳米棒模拟酶溶液及在elisa中的应用 | |
| Zhang et al. | Highly stable and reusable imprinted artificial antibody used for in situ detection and disinfection of pathogens | |
| Zheng et al. | Integration of nanomaterials for colorimetric immunoassays with improved performance: a functional perspective | |
| CN101923088B (zh) | 一种金纳米棒免疫探针及其制备方法与应用 | |
| Song et al. | Facile colorimetric detection of alkaline phosphatase activity based on the target-induced valence state regulation of oxidase-mimicking Ce-based nanorods | |
| CN108663525A (zh) | 一种心梗心衰磁微粒微流控生物芯片、检测方法 | |
| CN104034881B (zh) | 高通量多通道低丰度生物分子的磁传感识别方法 | |
| Wang et al. | Nanobody and nanozyme‐enabled immunoassays with enhanced specificity and sensitivity | |
| Zuo et al. | An integrated platform for label-free fluorescence detection and inactivation of bacteria based on boric acid functionalized Zr-MOF | |
| CN105242047B (zh) | 黄曲霉毒素b1氧化石墨烯免疫层析试纸条及其应用 | |
| CN108982834A (zh) | 纳米酶免疫夹心新技术检测生物分子的方法 | |
| Ha et al. | Recent developments in innovative magnetic nanoparticles-based immunoassays: from improvement of conventional immunoassays to diagnosis of COVID-19 | |
| Taebi et al. | A novel method for sensitive, low-cost and portable detection of hepatitis B surface antigen using a personal glucose meter | |
| CN108072763A (zh) | 一种检测水中微囊藻毒素的微流控芯片及检测方法 | |
| Guo et al. | Highly sensitive fluorescence-linked immunosorbent assay for the determination of human IgG in serum using quantum dot nanobeads and magnetic Fe3O4 nanospheres | |
| Zuo et al. | Rapid detection of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus via colloidal gold immunochromatography assay | |
| CN109061207A (zh) | 一种用于心梗标志物检测的生物芯片、检测方法 | |
| CN108344869A (zh) | 一种乙肝表面抗原化学发光免疫检测试剂盒及其应用 | |
| CN102243237A (zh) | 肠道病毒71型抗原检测试纸条(胶体金法) | |
| CN103575875A (zh) | 一种新的功能化金纳米棒免疫探针及金纳米棒生物芯片的制备方法及应用 | |
| Khoris et al. | Pt-embodiment ZIF-67-derived nanocage as enhanced immunoassay for infectious virus detection | |
| Hu et al. | Magnetic separation and enzymatic catalysis conjugated colorimetric immunosensor for Hepatitis B surface antigen detection |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160727 Termination date: 20190429 |