CN104784241A - 一种橄榄树叶粗提物的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种橄榄树叶粗提物的新用途。本发明公开了一种橄榄树叶粗提物在制备治疗癌症药物或保健品中的用途，其特征在于所述橄榄树叶粗提物为经反复煮沸的橄榄树叶粗提物。本发明首次发现在抑制肿瘤细胞增殖方面经反复煮沸的橄榄树叶粗提物更加有效，且体内实验也证实其抑制肿瘤生长作用，同时未观察到细胞毒副作用，是一种理想的抗肿瘤植物药。

Description

一种橄榄树叶粗提物的新用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种橄榄树叶粗提物的新用途。

背景技术

近年来，随着医学的进步，现代人类的平均寿命增长至80岁，肿瘤的发病率明显增高。肿瘤与心脑血管病成为人类健康的两大杀手，肿瘤的高发病率和高致死率成为威胁人类健康的重要因素。

随着对肿瘤发病机制的研究，人们对肿瘤有了进一步的认识。研究表明，肿瘤细胞为生长失控的异常细胞，会由肿瘤原发部位迁移至其它部位，如果不能够控制肿瘤的这种扩散作用，肿瘤将侵犯人体的重要器官，引起器官衰竭，最终导致死亡。目前临床上治疗肿瘤的常用方法有外科手术切除肿瘤、放射治疗、化学治疗和中医治疗等。

在地中海沿岸国家里，橄榄树叶用于预防和治疗疾病的实践在民间已存在数千年，如用于治疗腹部绞痛，脱发，麻痹瘫痪，关节疼痛以及疟疾引起的发热等，但有关其治疗作用的首次正式科学文献报道只可以追溯到1854年。在上世纪中叶的1955年，有人报道其抽提物对高血压有明显治疗作用。随后的几十年里，人们逐渐注意到，地中海沿岸国家的心血管疾病发生率和肿瘤发生率为全世界最低。在过去的近二十年里，通过和其它地区人群的大规模流行病学对比研究，以及体内外细胞和动物研究正式确认：橄榄树产品如橄榄，橄榄油和橄榄树叶在地中海沿岸居民食物中的大量使用，是导致这种差异的原因。在最近的十年时间里，人们进一步确认橄榄树的药用功能与其富含抗氧化的植物化学分子有直接关系，这些分子主要是橄榄苦苷(oleuropein)，羟基酪醇(hydroxytyrosol)，对羟苯基乙醇(tyrosol)，咖啡酸(caffeic acid)，对羟基肉桂酸(p-coumaric acid)，香草酸(vanillic acid)，香草醛(vanillin)，毛地黄黄酮(luteolin)，香叶木素(diosmetin)，芸香苷(rutin)，毛蕊花苷(verbascoside)，木犀草素-7-葡糖苷(luteolin-7-glucoside)，芹菜甙元-7-葡糖苷(apigenin-7-glucoside)和香叶木素-7-葡糖苷(diosmetin-7-glucoside)。所有这些药用植物化学分子在橄榄树的各个部分如橄榄和橄榄油中都有分布，但尤以在树叶中含量最高，其中橄榄苦苷占树叶干重，根据产地不同，低的可以在6％-9％之间，高的可到达19％，，其它各种黄酮类的分子最多占到1.8％，各种葡糖苷类的分子最多占到0.8％。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为提供一种治疗癌症药物或保健品。

本发明公开了一种橄榄树叶粗提物在制备治疗癌症药物或保健品中的用途，其特征在于所述橄榄树叶粗提物为经反复煮沸的橄榄树叶粗提物。

所述橄榄树叶粗提物为橄榄树叶水提物。

所述反复煮沸为100℃，7次。

所述癌症，包括但不限于如骨癌类，包括：尤因肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤等；脑和CNS肿瘤，包括：听神经瘤、神经母细胞瘤、神经胶瘤和其他脑肿瘤，脊髓肿瘤；内分泌癌类，包括：肾上腺皮质癌、胰癌、脑垂体癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、胸腺癌、多发性内分泌肿瘤；胃肠癌类，包括：胃癌、食道癌、小肠癌、肝癌、肝外胆管癌、胃肠类癌性肿瘤、胆囊癌；泌尿生殖器癌类，包括：睾丸癌、阴茎癌、前列腺癌；妇科癌类，包括：子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、子宫／子宫内膜癌、阴部癌、妊娠滋养细胞肿瘤、输卵管癌、子宫肉瘤；头和颈部肿瘤类，包括：口腔癌、唇癌、唾腺癌、喉头癌、下咽癌、正咽癌、鼻癌、鼻窦癌、鼻咽癌；血癌类，包括：儿童白血病、急性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、发状细胞性白血病、急性早幼粒细胞白血病、血浆细胞性白血病；骨髓癌血液病症，包括：骨髓分化不良症候群、骨髓增生性病症、再生障碍性贫血、范禾尼贫血、特发性巨球蛋白血症；肺癌类，包括：小细胞肺癌、非小细胞肺癌；淋巴癌类，包括：霍奇金病、非霍奇金氏淋巴瘤、皮肤型T-细胞淋巴瘤、周围T-细胞林巴瘤、AIDS相关性淋巴瘤；眼癌类，包括：视网膜母细胞瘤、葡萄膜黑色素瘤；皮肤癌类，包括：黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、梅克尔细胞癌、软组织肉瘤类，例如：儿童软组织肉瘤、成人软组织肉瘤、卡波希肉瘤、泌尿系统癌症，包括：肾癌维尔姆斯肿瘤、膀肤癌、尿道癌和转移性细胞癌。其中优选神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、宫颈癌、或卵巢癌。

本发明首次发现在抑制肿瘤细胞增殖方面经反复煮沸的橄榄树叶粗提物更加有效，且体内实验也证实其具有抑制肿瘤生长作用，同时未观察到细胞毒副作用，是一种理想的抗肿瘤植物药。

附图说明

图1.1％橄榄树叶粗提物水溶液抑制人肺腺癌A549细胞增殖(高浓度细胞情况)。

图2.1％橄榄树叶粗提物水溶液抑制人肺腺癌A549细胞增殖(低浓度细胞情况)。

图3.荷瘤小鼠肿瘤增殖试验。

图4.荷瘤小鼠肿瘤增殖试验。

具体实施方式

本发明所使用的部分术语定义如下：

“癌症”一般是指广泛的以细胞的失控性异常生长为特征的病症。包括但不限于如骨癌类，包括：尤因肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤等；脑和CNS肿瘤，包括：听神经瘤、神经母细胞瘤、神经胶瘤和其他脑肿瘤，脊髓肿瘤；内分泌癌类，包括：肾上腺皮质癌、胰癌、脑垂体癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、胸腺癌、多发性内分泌肿瘤；胃肠癌类，包括：胃癌、食道癌、小肠癌、肝癌、肝外胆管癌、胃肠类癌性肿瘤、胆囊癌；泌尿生殖器癌类，包括：睾丸癌、阴茎癌、前列腺癌；妇科癌类，包括：子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、子宫／子宫内膜癌、阴部癌、妊娠滋养细胞肿瘤、输卵管癌、子宫肉瘤；头和颈部肿瘤类，包括：口腔癌、唇癌、唾腺癌、喉头癌、下咽癌、正咽癌、鼻癌、鼻窦癌、鼻咽癌；血癌类，包括：儿童白血病、急性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、发状细胞性白血病、急性早幼粒细胞白血病、血浆细胞性白血病；骨髓癌血液病症，包括：骨髓分化不良症候群、骨髓增生性病症、再生障碍性贫血、范禾尼贫血、特发性巨球蛋白血症；肺癌类，包括：小细胞肺癌、非小细胞肺癌；淋巴癌类，包括：霍奇金病、非霍奇金氏淋巴瘤、皮肤型T-细胞淋巴瘤、周围T-细胞林巴瘤、AIDS相关性淋巴瘤；眼癌类，包括：视网膜母细胞瘤、葡萄膜黑色素瘤；皮肤癌类，包括：黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、梅克尔细胞癌、软组织肉瘤类，例如：儿童软组织肉瘤、成人软组织肉瘤、卡波希肉瘤、泌尿系统癌症，包括：肾癌维尔姆斯肿瘤、膀肤癌、尿道癌和转移性细胞癌。其中优选神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、宫颈癌、或卵巢癌。

药物组合物

用于本发明或者含有本发明所述橄榄树叶粗提物的药物组合物。通常，当本发明药物组合物用于上述用途时，所述橄榄树叶粗提物可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合制成不同给药途径的药物剂型，如片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、口服液、醑剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、注射剂、注射用无菌粉末、栓剂等。

“药学上可接受的”成分是适用于人和／或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益／风险比的物质。“药学上可接受的载体”是用于将本发明的融合体蛋白传送给动物或人的药学上或食品上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。

本发明的橄榄树叶粗提物可经过口服、静脉内、肌内或皮下途径给药。

上述剂型中可经口服给药的剂型为：片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、醑剂。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖、白陶土、微粉硅胶、滑石粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮。而液态载体包括：无菌水、乙醇、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制备药物组合物的过程中通常使用的佐剂包括：调味剂、着色剂、防腐剂(如羟苯烷基丁酯、苯甲酸钠、山梨酸)和抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠和二丁基羟基甲苯)。

上述剂型中可用于注射途径给药的剂型包括：注射剂、注射用无菌粉末，它们是将药物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合制成以供注射给药的形式。溶剂包括：无菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，还需加入抑菌剂(如苯甲醇、羟苯丁酯、硫柳汞)、等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖)、助悬剂(如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素)、增溶剂(吐温-80、卵磷酯)、抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠)和填充剂(如乳糖、甘露醇)。

从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是液态组合物。

本发明的药物组合物可根据熟知的及公认的制药生产要求的方法制备。药物组合物适宜包含本发明的橄榄树叶粗提物以及药学上可接受的载体，并适宜为单位剂量形式。

用途

公开了所述橄榄树叶粗提物可用于治疗肿瘤。

所用的活性成分的有效剂量可随给药模式和待治疗疾病的严重程度而变化。对大部分大型哺乳动物而言，每天施以有效成分的总剂量约为0.01-1000mg。通常，成人临床给药量的范围为0.01-200mg／日，优选为0.05-100mg／日。

通常，当本发明组合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合制成不同给药途径的药物剂型，如片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、口服液、醑剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、注射剂、注射用无菌粉末、栓剂等。

“药学上可接受的”成分是适用于人和／或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益／风险比的物质。“药学上可接受的载体”是用于将本发明的橄榄树叶粗提物传送给动物或人的药学上或食品上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。

本发明的化合物可经过口服、静脉内、肌内或皮下途径给药。

上述剂型中可经口服给药的剂型为：片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、醑剂。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖、白陶土、微粉硅胶、滑石粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮。而液态载体包括：无菌水、乙醇、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制备药物组合物的过程中通常使用的佐剂包括：调味剂、着色剂、防腐剂(如羟苯烷基丁酯、苯甲酸钠、山梨酸)和抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠和二丁基羟基甲苯)。

上述剂型中可用于注射途径给药的剂型包括：注射剂、注射用无菌粉末，它们是将药物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合制成以供注射给药的形式。溶剂包括：无菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，还需加入抑菌剂(如苯甲醇、羟苯丁酯、硫柳汞)、等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖)、助悬剂(如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素)、增溶剂(吐温-80、卵磷酯)、抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠)和填充剂(如乳糖、甘露醇)。

从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。优选口服给药。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

以下结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分比和份数均按重量计。

材料与方法

橄榄树叶粗提物水溶液的制备：

称取橄榄树叶50g，加水500ml煎煮20min，取上清，渣重复上述操作，提取7次，合并上清液。然后真空浓缩至膏状，再冷冻干燥至恒重，称量，得棕色干粉，即为粗提物。称取粗提物2g，加入200ml去离子水室温浸泡过夜，电动搅拌2小时，普通滤纸过滤后，在超净台中再用0.22μM的滤膜过滤除菌，即为1％橄榄树叶粗提物水溶液。以只煎煮1次得到的干粉粗提物为对照样品，按同样浓度和过滤方法制备待用。

实施例1、体外细胞试验

DMEM高糖培养基，10％胎牛血清，100U／100μg／ml青链霉素，5％CO₂，37℃细胞培养箱培养。

1.1高密度细胞实验

对数生长期的人肺腺癌A549细胞按10000个细胞／孔／200μl铺96孔板，贴壁6小时后，加浓度为1％的橄榄树叶抽提物水溶液20μl，10μl，5μl和2μl于总体积为200μl的培养液中，对应样品稀释的倍数分别为10倍，20倍，40倍和100倍。作用20小时后，MTT法测定细胞增殖抑制情况。

实验结果：如图1所示，可见经反复煎煮的粗提物水溶液对A549细胞的增殖抑制作用在20倍到100倍稀释时均明显高于对照组(P＜0.05)，尤其在100倍稀释时，这种作用的差距更大。数据是三次试验的均值，每次试验中每个值均为3个复孔的平均数。统计采用成对的t检验，*：表示与相同稀释倍数对照组相比，统计有显著性差异。

1.2低密度细胞实验

对数生长期的人肺腺癌A549细胞按5000个细胞／孔／200μl铺96孔板，贴壁6小时后，加浓度为1％的橄榄树叶抽提物水溶液20μl，10μl，5μl和2μl于总体积为200μl的培养液中，对应样品稀释的倍数分别为10倍，20倍，40倍和100倍。作用20小时后，MTT法测定细胞增殖抑制情况。

实验结果：从图2可知：反复煎煮处理的粗提物水溶液对A549细胞的增殖抑制作用在100倍稀释时明显高于对照组(P＜0.05)。数据是三次试验的均值，每次试验中每个值均为3个复孔的平均数。统计采用成对的t检验，*：表示与相同稀释倍数对照组相比，统计有显著性差异

实施例2、体内荷瘤小鼠试验

处于对数生长期的鼠源S180腹水瘤细胞1000万／200μlPBS接种于8周龄Balb／c雄性小鼠右侧腋下，共接种8只，其中4只在肿瘤细胞接种后8天给与腹腔注射经反复煎煮的1％橄榄树叶粗提物水溶液，每天2次，每次250μl，两次间隔为8小时，连续14天。对照组为注射相同体积的生理盐水。最后一次注射后24小时断颈处死，解剖剥离肿瘤组织块，称瘤组织重量。

抑瘤率＝[(对照组平均瘤重-试验组平均瘤重)／对照组平均瘤重]×100％

实验结果：如图3和图4所示，经反复煎煮处理的橄榄树叶粗提物水溶液组小鼠肿瘤的重量低于对照组，差异有显著性(p＜0.05)，药物的抑瘤率达到51.69％，说明经反复煎煮处理的橄榄树叶粗提物水溶液能够明显抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长。

实施例3片剂的制备

利用常规技术，混合以下组分，然后直接压片，制备片剂形式的药物组合物，其配方如下：

本发明的范围不受所述具体实施方案的限制，所述实施方案只欲作为阐明本发明各个方面的单个例子，本发明范围内还包括功能等同的方法和组分。实际上，除了本文所述的内容外，本领域技术人员参照上文的描述和附图可以容易地掌握对本发明的多种改进。所述改进也落入所附权利要求书的范围之内。上文提及的每篇参考文献皆全文列入本文作为参考。

Claims (5)

1.一种橄榄树叶粗提物在制备治疗癌症药物或保健品中的用途，其特征在于所述橄榄树叶粗提物为经反复煮沸的橄榄树叶粗提物。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述橄榄树叶粗提物为橄榄树叶水提物。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述反复煮沸为100℃，煎煮7次。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述癌症为尤因肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、听神经瘤、神经母细胞瘤、神经胶瘤或其他脑肿瘤、脊髓肿瘤、肾上腺皮质癌、胰癌、脑垂体癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、胸腺癌、多发性内分泌肿瘤、胃癌、食道癌、小肠癌、肝癌、肝外胆管癌、胃肠类癌性肿瘤、胆囊癌、睾丸癌、阴茎癌、前列腺癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、子宫／子宫内膜癌、阴部癌、妊娠滋养细胞肿瘤、输卵管癌、子宫肉瘤、口腔癌、唇癌、唾腺癌、喉头癌、下咽癌、正咽癌、鼻癌、鼻窦癌、鼻咽癌、儿童白血病、急性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、发状细胞性白血病、急性早幼粒细胞白血病、血浆细胞性白血病、骨髓分化不良症候群、骨髓增生性病症、再生障碍性贫血、范禾尼贫血、特发性巨球蛋白血症、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、霍奇金病、非霍奇金氏淋巴瘤、皮肤型T-细胞淋巴瘤、周围T-细胞林巴瘤、AIDS相关性淋巴瘤、视网膜母细胞瘤、葡萄膜黑色素瘤、黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、梅克尔细胞癌、儿童软组织肉瘤、成人软组织肉瘤、卡波希肉瘤、肾癌维尔姆斯肿瘤、膀肤癌、尿道癌或转移性细胞癌。

5.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述癌症为肺癌。