CN104777292B - 肌理的评价方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的课题在于提供不是外科摘取皮肤而对皮肤带来刺激等的方法，而是可简便且确实地测定或评价肌理状态的使用生物化学指标的新颖的测定或评价方法。一种皮肤肌理的评价方法，其特征在于，以皮肤角质层中的白细胞介素‑1受体拮抗剂的表达量作为指标。

Description

肌理的评价方法
技术领域
本发明涉及肌理的评价方法。
背景技术
在人皮肤的表面存在被称为“肌理”的细小纹路。具体而言，为网眼状的沟，将沟的部分叫做“皮沟(sulcus cutis)”。此外，将被“皮沟”包围的部分叫做“皮嵴(cristacutis)”。
据说肌理细小的肌肤是美丽的肌肤。此外，为了看上去是肌理细小的肌肤开发了各种的粉底。为了看上去是美丽且健康的肌肤，使肌理细小、不明显是重要的要点。
作为肌理的评价技术，开发了以下装置，即通过强调皮肤表面的明暗分布而进行拍摄，并将皱纹、肌理的视觉粗糙度客观地进行数值化，从而评价皱纹、肌理，进而评价化妆品涂布后的皱纹、肌理的隐蔽效果(专利文献1：日本特开平6-189942号公报)。
此外，还开发了用于根据使用者的肌理来选择粉底的由目视观察进行的肌理测试片(专利文献2：日本特开平9-262135号公报)等具备简便的对比样本的化妆用具等。
由于每个人本来具有的肌肤各不相同，所以即使与其他人的肌肤状态进行对比并进行相对地评价，也不能正确地判断肌理的好坏，基于上述观点，还开发了以下技术：将肌理的复制品用显微镜放大进行目视观察，并将肌肉疲劳度低的“嘴边”的肌理与肌肉疲劳度高的“脸颊”的肌理进行对比(专利文献3：日本特开2005-58756号公报)。
此外，着眼于肌理细小时，皮肤的明亮度、光泽度少，开发了通过复制法评价肌理的细小度，并对皮肤的明亮度、光泽度的评价有效的技术(专利文献4：日本特开2010-273736号公报)。
通常，制作将皮肤的肌理分数化为4阶段(肌理分数化)的皮肤复制品模型，将其作为参照，或者直接目视肌肤，由专家对肌理进行评价较为普遍。
由于肌理的个体差异较大，作为用于选择粉底的有益信息，而且，作为肌肤美丽度的指标，肌理的评价尤为重要，但是直接用肉眼观察存在困难，使用复制品来详细观察放大图像时需要技术，而且操作也繁琐。此外，关于肌理的目视评价，存在因评价者而产生偏差之虞。因此，期望有简便的肌理的客观评价方法。
现有技术文献
专利文献
专利文献1日本特开平6-189942号公报
专利文献2日本特开平9-262135号公报
专利文献3日本特开2005-58756号公报
专利文献4日本特开2010-273736号公报
发明内容
如上所述，期望有客观地评价肌理的方法。本发明的课题在于提供不是外科摘取皮肤而对皮肤带来刺激等的方法，而是可简便且确实地评价肌理的新颖的评价方法。
本发明为以下的构成。
(1)一种皮肤肌理的评价方法，其特征在于，以皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量作为指标。
(2)根据(1)所述的方法，其特征在于，皮肤角质层通过胶带剥离法进行采集。
(3)一种皮肤肌理的评价方法，其特征在于，由以下工序构成：
采集角质层的采集工序、
测定所述采集工序中所采集的角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量的测定工序，和
将所述测定工序中所测定的白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量与预先测定的集体角质层中的肌理分数和白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量分布进行对比的对比工序。
根据本发明，可通过测定皮肤角质层的白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量来客观地评价皮肤的肌理，从而代替由专家进行的视觉评价方法。
此外，由于本发明的评价方法可通过胶带剥离法等简便的操作方法来采集评价试样，所以受试者的负担少，无论谁均可简单地进行评价。此外，由于其为生物化学的试验方法，无论谁测定均可得到相同的结果，所以不需要像以往那样由专家进行目视判定。
此外，由于根据本发明的方法可客观数值化简便地评价化妆品调整肌理的效果，所以可进一步客观地评价化妆品等的效果。
附图说明
图1为将用于肌理评价的皮肤复制品模型与肌理分数进行对比的图。
图2为对用肌理分数分为1～4类的皮肤肌理状态进行拍摄的图像。
图3为表示从用肌理分数分类的皮肤中采集的角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂量的测定结果的箱线图。
图4为表示将横轴作为肌理分数、将纵轴作为角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂量的散点图。
图5为表示30～39岁女性的肌理分数的人数分布图。
具体实施方式
本发明为以皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量作为指标的皮肤肌理的评价方法。
以下，关于本发明进行详细说明。
本发明的肌理评价方法的特征在于，以皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂(以下，叫做IL-1Ra。)的表达量作为指标。
本发明中的肌理是指人皮肤表面的细小纹路，具体而言，为网眼状的沟。将沟的部分叫做“皮沟”。此外，将被“皮沟”包围的部分叫做“皮嵴”。据说，肌理细小的肌肤，即皮沟的网眼细小、规则端正、清晰的肌肤是美丽的肌肤。
肌理形状的个体差异大，可以说是每个人与生俱来的皮肤状态。伴随着年龄增加，存在肌理变粗糙，变得不规则、不清晰的趋势，然而，由于形态的个体差异大，即使是年轻人也有肌理不清晰的情况，所以并不应该总将老化与肌理的粗糙度直接对应。
肌理的细小度可如下进行判定，即准备图1所示的成为标准的肌理复制品图像，并将该标准图像与皮肤表面的图像进行对比来目视判定肌理的细小度。发现这样判定的肌理的细小度与皮肤角质层中的IL-1Ra表达量相关。
IL-1Ra是单核细胞、巨噬细胞等产生的抗炎症性的细胞因子，炎症时增加并使皮肤正常化。IL-1Ra拮抗性地阻碍白细胞介素-1的功能。在细胞水平IL-1Ra增加时，作为分解并片段化胶原蛋白的酶的基质金属蛋白酶-1减少。
角质层是位于皮肤最上层的组织，具有保护皮肤不受来自体外的异物、刺激的功能。
本发明中的评价对象部位只要是可取得角质层的部分，则还可包含任意部位，作为主要的部位，可列举作为评价对象部位的面部、颈部、上臂部。特别优选评价对肌理的评价尤为重要的面部的角质层。可根据以往的方法得到来自上述部位皮肤的角质层。然而，如前所述，由于外科摘取皮肤等的方法会给使用者带来负担，所以优选胶带剥离法、刮擦等可简便地得到角质层的方法。特别优选胶带剥离法。
这样准备的各试样中的IL-1Ra表达量可用以往已知的方法进行测定。例如，可使用基于针对IL-1Ra的抗体的反应的酶联免疫测定法、放射免疫测定法、蛋白质印迹测定法等的方法。这样的测定手段已有市售，作为代表性的IL-1Ra的酶联免疫测定试剂盒，可例示R&D Systems公司制的Human IL-1Ra/IL-1F3Quantikine ELISA Kit、Life Technologies公司制的IL-1Ra Human ELISA Kit。
从各试样中将IL-1Ra经过其自身已知的生物化学方法，例如冻融法、超声波破碎法、均质法等作为可溶性组分进行提取。提取后迅速地进行测定。
由于肌理细小的人的角质层中的IL-1Ra表达量显著高于肌理粗糙的人的角质层中的IL-1Ra表达量，所以可将角质层中的IL-1Ra表达量的多寡替换成肌理分数作为肌理的指标。
角质层可通过胶带剥离法或者同样的用角质层胶带仅采集皮肤角质层的表层部分的简单方法进行采集。
由于胶带剥离法不会给受试者带来负担而可简便地采集试样，所以特别优选。
本发明的评价方法由以下工序构成：采集角质层的采集工序、测定所述采集工序中所采集的角质层中的IL-1Ra表达量的测定工序和将所述测定工序中所测定的IL-1Ra表达量与预先测定的集体角质层中的IL-1Ra表达量分布进行对比的对比工序。将受试者的IL-1Ra表达量与预先测定的集体角质层中的IL-1Ra表达量分布进行对比，当表达量多时，判定为肌理细小，当表达量少时，判定为肌理粗糙。
以下，关于具体的实施例进行说明，但本发明不限定于下述实施例。
实施例
试验例
受试者集体的肌理评价与IL-1Ra表达量的关系确认试验
＜受试者＞
将172名健康女性(18岁～65岁、平均年龄40岁)作为受试者。
＜脸颊肌理的评价＞
将受试者脸颊的放大照片用安装了Pocket Micro(Scalar株式会社)的iPhone(商品名：Apple Inc.)进行拍摄，并由专业的美容研究员对肌理进行目视判定，按以下标准将分数记载为4阶段。
4阶段的标准为1：皮沟、皮嵴不清晰、2：皮沟、皮嵴呈流淌状，粗糙、3：存在皮沟、皮嵴，但杂乱、4：存在皮沟、皮嵴，整齐。
各标准的皮肤复制品照片如图1所示。
此外，被评价为各分数的代表性的脸颊放大照片如图2所示。
＜角质层样品提取方法、蛋白质定量＞
在受试者的脸颊贴上角质层测试片(ASAHIBIOMED公司制)来采集角质层。从角质层测试片用珠磨法(在容器中加入受试物、直径约2mm的玻璃珠和提取液进行振荡提取的方法)使用500μl的T-PER提取缓冲液(Tissue Protein Extraction Reagent ThermoScientific制(product#78510)来进行角质层蛋白质的提取。各样品的蛋白质量通过Pierce BCA protein Assay Kit(Thermo Scientific#23225)进行测定。测定时，在10μl所述角质层蛋白质提取液中加入200μl Pierce BCA protein Assay Kit的反应试剂液，在60℃孵育30分钟后，测定562nm处的吸光度。同时，用BSA制作标准曲线，从吸光度的值计算蛋白质量。
＜角质层中的IL-1Ra的测定＞
同样地将从胶带提取的角质层蛋白质提取液使用R&D systems公司制的ELISA试剂盒[Human IL-1Ra/IL-1F3Quantikine ELISA Kit]来测定IL-1Ra的表达量。首先，在costar制的96孔板(#3590)中将成为初次抗体的固相化抗体用试剂盒指定的浓度在20℃过夜进行固相化。接着，用1％BSA在37℃下放置1小时来封闭培养板，并用0.01％Tween-PBS洗净培养板后，将各100μl成为标准曲线的标准品及样品进行加样，在25℃孵育2小时。用0.01％Tween-PBS洗净培养板后，将2次抗体用试剂盒指定浓度在25℃下孵育2小时。进而，用0.01％Tween-PBS洗净培养板后，将Streptavidin-HRP用试剂盒指定浓度在25℃下孵育30分钟。最后，用0.01％Tween-PBS洗净培养板后，按照100μl/well加入作为显色基质的TMBsolution(Promega,G7431))，经过试剂盒指定的时间后，加入100μl终止液(0.5M硫酸)，测定450nm处的吸光度，并从标准曲线来计算表达量。
将所得到的IL-1Ra值用肌理分数进行分类，并制作箱线图及散点图进行解析。
＜结果＞
图3表示从横轴为4阶段的肌理分数值、纵轴为受试者角质层中的IL-1Ra值求得结果的利用箱线图的分布。
图3表明，IL-1Ra表达量高的受试者的肌理细小(肌理分数4)、IL-1Ra表达量少的人的肌理粗糙(肌理分数1)。
此外，横轴为肌理分数、纵轴为IL-1Ra表达量的散点图如图4所示。该散点图表明IL-1Ra的表达量与肌理分数的增加呈正相关，可作为替换成肌理分数的指标进行活用。
＜参考例＞
从受试者选取30～39岁的女性，并确认肌理分数的分布(30名)。
如图5所示，可知即使为相同年龄段，肌理分数也不能用特定的分数代表，而分布广泛。
从图2所示的照片可确认，与复制品对比从而用肉眼对皮肤肌理进行评价非常不鲜明且难以判断。从图3判明，皮肤角质层的IL-1Ra值与专家评价的肌理分数高度一致。因此，通过测定皮肤角质层的IL-1Ra，即使不是专家也可评价皮肤的肌理。

Claims (3)

1.一种皮肤肌理的评价方法，其特征在于，以皮肤角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量作为指标。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，皮肤角质层通过胶带剥离法进行采集。
3.一种皮肤肌理的评价方法，其特征在于，由以下工序构成：采集角质层的采集工序、测定所述采集工序中所采集的角质层中的白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量的测定工序和将所述测定工序中所测定的白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量与预先测定的集体角质层中的肌理分数和白细胞介素-1受体拮抗剂的表达量分布进行对比的对比工序。
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