CN104777119A - 微量测量母乳的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种微量测量母乳的方法，本发明微量测量母乳的方法，仪器的测量原理为：利用物质对不同波长光的吸收现象，对物质进行定性和定量分析，它符合朗伯—比耳定律，包括以下步骤，1)仪器的定标；2)样品离心：将母乳样品放入离心管中备用，母乳样品需要在16000转的高速离心机上离心15分钟，将离心后的离心管小心取出不要倒立或摇动，以免使得样品出现混浊，一次性针管从离心管的管壁刺入离心管中吸出离心管中间澄清的母乳上清液并注入试管中备用；3)样品检测；采用这种方法，所用母乳数量少，减少母乳的浪费，而且检测方法简便。
Description
技术领域
本发明涉及一种微量测量母乳的方法，以较小的量检测母乳成分，属于母乳检测领域。
背景技术
婴儿期是小儿生长发育最快的时期，需要摄入适量的营养素，才能保证正常的生长发育，母乳含有新生儿生长发育所需的各种营养物质，适合新生儿胃肠功能的消化和吸收，而且其质和量会不断变化，以适应婴儿的生长发育所需，但是母乳营养不够均衡，影响婴儿发育。因此，有必要对婴儿的主要食物来源进行营养成分分析。
现在很多医院妇幼保健院等需要母乳检测的机构还没有相应的技术，分析母乳中的营养物质，特别是微量元素，为哺乳期妈妈补充营养提供依据，为婴儿更好的补充营养，但目前有的母乳分析所需要的母乳量是5毫升到20毫升，母乳采用量大。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明微量测量母乳的方法利用物质对不同波长光的吸收现象，对物质进行定性和定量分析，它符合朗伯—比耳定律；一种微量测量母乳的方法，包括以下步骤，
1)分光光度计仪器的定标；
2)样品离心：
a)将300ul-800ul母乳样品放入离心管中，每个样品做2-3个离心管备用，
b)母乳样品需要在12000转至20000转的高速离心机上离心10-20分钟，
c)将离心后的离心管取出，不要倒立或摇动，以免使得样品出现混浊，
d)用一次性针管从离心管的管壁刺入离心管中，吸出离心管中间澄清的母乳上清液并注入试管中备用；
3)采用分光光度计仪器检测母乳中微量元素的含量。
所述母乳样品量优选为500ul。
所述高速离心机的离心速度优选为16000转。
所述母乳样品离心时间优选为15分钟。
测量的微量元素为锌时，所述的锌试剂1为Tris缓冲液，所述的锌试剂2为锌贡(Zincon)，标准液为硫酸锌。
锌的定标包括以下工序：
a)取1700ul锌试剂1与100ul锌试剂2放入试管中混匀作为空白管；
b)取1500ul锌试剂1与100ul锌试剂2再加入200ul锌标准液放入试管中混匀作为标准管；
c)将以上两支试管放入温度为37℃的恒温水浴箱中预温5分钟；
d)使用630nm波长，将锌的标准浓度及范围预先输入仪器、吸液量调整为800-1000ul；
e)按下调零键并吸入预温好的空白管中液体待仪器提示调零结束；
f)调零之后按仪器上的定标键并吸入预温后的标准管中的标准液，待仪器提示结束会在定标因子处显示此次定标的值、按确定完成锌测量定标。
锌元素的测量包括以下工序：
a)取1500ul锌试剂1、100ul锌试剂2、200ul母乳离心上清液将之混匀放入37℃恒温水浴箱中预温5分钟；
b)在仪器锌测量项目中按测量键进入测量界面，将预温好的样品液吸入仪器中等待测量结束。
测量的微量元素为铁时，所述的铁试剂1为甘氨酸或盐酸羟胺，所述的铁试剂2为菲洛嗪(Ferrospectral)，标准液为硫酸亚铁。
铁的定标包括以下工序：
a)取2000ul铁试剂1与100ul铁试剂2放入试管中混匀作为空白管；
b)取2000ul铁试剂1与100ul铁试剂2再加入200ul铁标准液放入试管中混匀作为标准管；
c)将以上两支试管放入温度调整为37℃的恒温水浴箱中预温10分钟；
d)使用578nm波长，将铁的标准浓度及范围预先输入仪器、吸液量调整为800-1000ul；
e)按下调零键并吸入预温好的空白管中液体待仪器提示调零结束；
f)调零之后，按仪器上的定标键并吸入预温后的标准管中的标准液，待仪器提示结束会在定标因子处显示此次定标的值、按确定完成铁测量定标。
铁元素的测量包括以下工序：
a)取2000ul铁试剂1、100ul铁试剂2、200ul母乳离心上清液将之混匀放入37℃恒温水浴箱中预温10分钟；
b)在仪器铁测量项目中，按测量键进入测量界面，将预温好的样品液吸入仪器中等待测量结束。
测量的微量元素为钙时，所述的钙试剂1为2-氨基-二甲基-1-丙醇，钙试剂2为邻甲酚酞络合酮或8-羟基喹啉，标准液为碳酸钙。
钙的定标包括以下工序：
a)先把钙测试液1与钙测试液2等量取出放置在试管中混匀做为工作液；
b)取1500ul钙工作液放入试管中作为空白管；
c)取1500ul钙试剂1与20ul钙标准液放入试管中混匀作为标准管；
d)将以上两支试管在室温条件下放置3分钟；
e)使用578nm波长，将钙的标准浓度及范围预先输入仪器、吸液量调整为800-1000ul；
f)按下调零键并吸入预温好的空白管中液体，待仪器提示调零结束；
g)调零之后按仪器上的定标键，并吸入标准管中的标准液，待仪器提示结束会在定标因子处显示此次定标的值，按确定完成钙测量定标。
钙元素的测量包括以下工序：
a)取1500ul钙工作液、20ul母乳离心上清液将之混匀在室温条件下放置3分钟，
b)在仪器钙测量项目中，按测量键进入测量界面，将预温好的样品液吸入仪器中等待测量结束。
本发明微量测量母乳的方法，利用物质对不同波长光的吸收现象，对物质进行定性和定量分析，
采用这种方法，所用母乳数量少，为500ul，仅是现有方法的1/10，减少母乳的浪费，而且检测方法简便。
具体实施方式
本发明微量测量母乳的方法，仪器的测量原理为：利用物质对不同波长光的吸收现象，对物质进行定性和定量分析，它符合朗伯—比耳定律，T═I/I。
A═Log(I。/I)
其中：T——透光度
I——透射光强度
I。——入射光强度
A——吸收率
包括以下步骤，
(1)仪器定标
1、锌的定标方法
锌试剂主要组成成份：
锌试剂1：Tris缓冲液
锌试剂2：锌贡(Zincon)
标准液：硫酸锌
定标步骤：
a)空白管：取1700ul锌试剂1与100ul锌试剂2放入试管中混匀；
b)标准管：取1500ul锌试剂1与100ul锌试剂2再加入200ul锌标准液放入试管中混匀；
c)将以上两支试管放入温度为37℃的恒温水浴箱中预温5分钟；
d)使用630nm波长，将锌的标准浓度及范围预先输入仪器、吸液量调整为800-1000ul；
e)此时按下调零键并吸入预温好的空白管中液体待仪器提示调零结束；
f)调零之后按仪器上的定标键并吸入预温后的标准管中的标准液待仪器提示结束会在定标因子处显示此次定标的值、按确定完成锌测量定标；
g)单位：umol/L。
2、铁的定标方法
铁试剂主要组成成份：
铁试剂1：甘氨酸、盐酸羟胺
铁试剂2：菲洛嗪(Ferrospectral)
铁准液：硫酸亚铁
定标步骤：
①空白管：取2000ul铁试剂1与100ul铁试剂2放入试管中混匀；
②标准管：取2000ul铁试剂1与100ul铁试剂2再加入200ul铁标准液放入试管中混匀；
③将以上两支试管放入温度调整为37℃的恒温水浴箱中预温10分钟；
④使用578nm波长，将铁的标准浓度及范围预先输入仪器、吸液量调整为800-1000ul；
⑤此时按下调零键并吸入预温好的空白管中液体待仪器提示调零结束；
⑥调零之后按仪器上的定标键并吸入预温后的标准管中的标准液待仪器提示结束会在定标因子处显示此次定标的值、按确定完成铁测量定标；
⑦单位：umol/L。
3、钙的定标方法
钙试剂主要组成成份：
钙试剂1：2-氨基-二甲基-1-丙醇
钙试剂2：邻甲酚酞络合酮、8-羟基喹啉
钙准液：碳酸钙
先把钙测试液1与钙测试液2等量取出放置在试管中混匀做为工作液(按照测量人数进行合理控制)
①空白管：取1500ul钙工作液放入试管中；
②标准管：取1500ul钙试剂1与20ul钙标准液放入试管中混匀；
③将以上两支试管在室温条件下放置3分钟；
④使用578nm波长，将钙的标准浓度及范围预先输入仪器、吸液量调整为800-1000ul；
⑤此时按下调零键并吸入预温好的空白管中液体待仪器提示调零结束；
⑥调零之后按仪器上的定标键并吸入标准管中的标准液待仪器提示结束会在定标因子处显示此次定标的值、按确定完成钙测量定标；
⑦单位：mmol/L。
(2)样品离心
1)将500ul母乳样品放入离心管中(500ul的离心管)，每个样品做2-3个离心管备用；
2)母乳样品需要在16000转的高速离心机上离心15分钟；
3)将离心后的离心管小心取出不要倒立或摇动，以免使得样品出现混浊；
4)用一次性针管从离心管的管壁刺入离心管中吸出离心管中间澄清的母乳上清液并注入试管中备用；
(3)样品检测
1、锌的测量方法
①、取1500ul锌试剂1、100ul锌试剂2、200ul母乳离心上清液将之混匀放入37℃恒温水浴箱中预温5分钟；
②、在仪器锌测量项目中按测量键进入测量界面将预温好的样品液吸入仪器中等待测量结束。
2、铁的测量方法
①、取2000ul铁试剂1、100ul铁试剂2、200ul母乳离心上清液将之混匀放入37℃恒温水浴箱中预温10分钟；
②、在仪器铁测量项目中按测量键进入测量界面将预温好的样品液吸入仪器中等待测量结束；
3、钙的测量方法
①取1500ul钙工作液、20ul母乳离心上清液将之混匀在室温条件下放置3分钟；
②在仪器钙测量项目中按测量键进入测量界面将预温好的样品液吸入仪器中等待测量结束。
采用这种方法测量母乳成分，所用母乳量少。
下面结合具体样品的测定进行说明：
分别对样品1、样品2、样品3的微量元素浓度进行测定，测量数据如下：
| 序号 | 名称 | 样品1 | 样品2 | 样品3 | 范围 |
| 1 | 铁 | 21.02 | 22.81 | 20.23 | 3.6-26umol/L |
| 2 | 铁 | 21.48 | 23.18 | 20.15 | |
| 3 | 铁 | 21.73 | 23.12 | 20.34 | |
| 4 | 铁 | 21.93 | 23.72 | 20.56 | |
| 5 | 铁 | 23.81 | 23.21 | 21.54 | |
| 6 | 铁 | 22.7 | 23.64 | 20.79 |
| 7 | 铁 | 22.61 | 23.87 | 20.43 | |
| 序号 | 名称 | 样品1 | 样品2 | 样品3 | 范围 |
| 1 | 锌 | 7.845 | 8.193 | 7.233 | 7.6-80umol/L |
| 2 | 锌 | 7.738 | 8.282 | 7.345 | |
| 3 | 锌 | 7.729 | 8.273 | 7.431 | |
| 4 | 锌 | 7.903 | 8.222 | 7.240 | |
| 5 | 锌 | 7.865 | 8.322 | 7.401 | |
| 6 | 锌 | 7.933 | 8.342 | 7.335 | |
| 序号 | 名称 | 样品1 | 样品2 | 样品3 | 范围 |
| 1 | 钙 | 4.6 | 4.858 | 4.787 | 4.5-8.2umol/L |
| 2 | 钙 | 4.6 | 4.877 | 4.770 | |
| 3 | 钙 | 4.277 | 4.872 | 4.789 | |
| 4 | 钙 | 4.54 | 4.858 | 4.656 | |
| 5 | 钙 | 4.533 | 4.841 | 4.675 | |
| 6 | 钙 | 4.719 | 4.82 | 4.658 | |
| 7 | 钙 | 4.587 | 4.808 | 4.682 |
采用这种办法测量母乳成分，测量结果准确度高，有可重现性，测量简单方便，所用母乳量少。
需要注意的是，以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施方式仅限于此，在本发明的上述指导下，本领域技术人员可以在上述实施例的基础上进行各种改进和变形，而这些改进或者变形落在本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.一种微量测量母乳的方法，包括以下步骤，
1)分光光度计仪器的定标；
2)样品离心：
a)将300ul-800ul母乳样品放入离心管中，每个样品做2-3个离心管备用，
b)母乳样品需要在12000转至20000转的高速离心机上离心10-20分钟，
c)将离心后的离心管取出，不要倒立或摇动，以免使得样品出现混浊，
d)用一次性针管从离心管的管壁刺入离心管中，吸出离心管中间澄清的母乳上清液并注入试管中备用；
3)采用分光光度计仪器检测母乳中微量元素的含量。
2.根据权利要求1所述的微量测量母乳的方法，其特征在于，所述母乳样品量优选为500ul。
3.根据权利要求1所述的微量测量母乳的方法，其特征在于，所述高速离心机的离心速度优选为16000转。
4.根据权利要求1所述的微量测量母乳的方法，其特征在于，所述母乳样品离心时间优选为15分钟。
5.根据权利要求1所述的微量测量母乳的方法，其特征在于，测量的微量元素为锌，采用Tris缓冲液为锌试剂1，锌贡为锌试剂2，标准液为硫酸锌；
锌的定标包括以下工序：
a)取1700ul锌试剂1与100ul锌试剂2放入试管中混匀作为空白管，
b)取1500ul锌试剂1与100ul锌试剂2再加入200ul锌标准液放入试管中混匀作为标准管，
c)将以上两支试管放入温度为37℃的恒温水浴箱中预温5分钟，
d)使用630nm波长，将锌的标准浓度及范围预先输入仪器、吸液量调整为800-1000ul，
e)按下调零键并吸入预温好的空白管中液体待仪器提示调零结束，
f)调零之后按仪器上的定标键并吸入预温后的标准管中的标准液，待仪器提示结束会在定标因子处显示此次定标的值、按确定完成锌测量定标；
锌元素的测量包括以下工序：
a)取1500ul锌试剂1、100ul锌试剂2、200ul母乳离心上清液将之混匀，放入37℃恒温水浴箱中预温5分钟，
b)在分光光度计仪器锌测量项目中，按测量键进入测量界面，将预温好的样品液吸入仪器中等待测量结束。
6.根据权利要求1所述的微量测量母乳的方法，其特征在于，测量的微量元素为铁，采用甘氨酸或盐酸羟胺为铁试剂1，菲洛嗪为铁试剂2，标准液为硫酸亚铁；
铁的定标包括以下工序：
a)取2000ul铁试剂1与100ul铁试剂2放入试管中混匀作为空白管，
b)取2000ul铁试剂1与100ul铁试剂2再加入200ul铁标准液放入试管中，混匀作为标准管，
c)将以上两支试管放入温度调整为37℃的恒温水浴箱中预温10分钟，
d)使用578nm波长，将铁的标准浓度及范围预先输入仪器、吸液量调整为800-1000ul，
e)按下调零键并吸入预温好的空白管中液体待仪器提示调零结束，
f)调零之后，按仪器上的定标键并吸入预温后的标准管中的标准液，待仪器提示结束，在定标因子处显示此次定标的值、按确定完成铁测量定标；
铁元素的测量包括以下工序：
a)取2000ul铁试剂1、100ul铁试剂2、200ul母乳离心上清液将之混匀，放入37℃恒温水浴箱中预温10分钟，
b)在仪器铁测量项目中，按测量键进入测量界面，将预温好的样品液吸入仪器中等待测量结束。
7.根据权利要求1所述的微量测量母乳的方法，其特征在于，测量的微量元素为钙，采用2-氨基-二甲基-1-丙醇为钙试剂1，邻甲酚酞络合酮或8-羟基喹啉为钙试剂2，标准液为碳酸钙；
钙的定标包括以下工序：
a)把钙测试液1与钙测试液2等量取出放置在试管中混匀做为工作液，
b)取1500ul钙工作液放入试管中作为空白管，
c)取1500ul钙试剂1与20ul钙标准液放入试管中混匀作为标准管，
d)将以上两支试管在室温条件下放置3分钟，
e)使用578nm波长，将钙的标准浓度及范围预先输入仪器、吸液量调整为800-1000ul，
f)按下调零键并吸入预温好的空白管中液体，待仪器提示调零结束，
g)调零之后按仪器上的定标键，并吸入标准管中的标准液，待仪器提示结束，在定标因子处显示此次定标的值，按确定完成钙测量定标；
钙元素的测量包括以下工序：
a)取1500ul钙工作液、20ul母乳离心上清液将之混匀在室温条件下放置3分钟；
b)在仪器钙测量项目中，按测量键进入测量界面，将预温好的样品液吸入仪器中等待测量结束。
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