CN104777101A

CN104777101A - 一种观察细胞的方法

Info

Publication number: CN104777101A
Application number: CN201510198307.1A
Authority: CN
Inventors: 高柏松
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-04-24
Filing date: 2015-04-24
Publication date: 2015-07-15

Abstract

本发明涉及一种观察细胞的方法，特别是一种观察单层细胞的方法。在所述方法中涉及一种细胞池。该细胞池具有与细胞直径尺寸相适应的高度。这样的细胞池也同样可以用于其他微粒的观察。

Description

一种观察细胞的方法

技术领域

本发明涉及一种观察细胞的方法，该方法中使用微液池及微液池的制备方法。

背景技术

在生物领域观察单层细胞通常通过激光共聚焦的方式进行，其主要原因是由于难以获得单层细胞。当细胞在较大高度的液池中进行观察（如培养皿），细胞会进行上下游动，这样会难以观察不易聚焦。而当使用载玻片+盖玻片，虽然可以观察单层细胞，但载玻片和盖玻片会影响细胞的活动。通过使用微液池，可以给予细胞一个相对自由但又容易聚焦观察的环境。

树脂涂料是一种极细树脂粉末的在水性溶剂中形成的悬浊液涂料或在有机溶剂中所形成的溶液，其中配以一定的其他组分以满足特定的喷涂需求。当为树脂粉末涂料涂料时，涂料均匀的涂于工件表面，通过加热至树脂的熔点并恒温一段时间，使树脂粉末流平，冷却后在工件表面形成一层完整树脂膜。当为树脂有机溶剂溶液时，溶剂均匀的喷洒在工件表面。经过一段时间后有机溶剂挥发，在工件表面形成一层完整的树脂膜。由于树脂涂料或树脂有机溶剂溶液其中具有已知的浓度的树脂，且喷洒量可以精确控制，因此可以较为精确地控制喷涂后形成树脂膜的厚度，并可通过反复的喷涂步骤达到所需的膜厚度。

微液池是一种可以使液体形成极薄层的液池，通常微液池的高度在几微米至几百微米左右，而其长、宽不受限制。微液池通常与盖片一起使用，使盖片与基板之间形成极薄的液膜。而这个液膜的高度为微液池壁的高度。虽然在宏观上这样的方式与直接将两片平板直接接触所形成的虹吸液膜相似，但在微观上由于这样的液膜的成因是由于“池壁”的支撑形成，在对于液体中物质、液体内部压力、物理化学性质来说与虹吸液膜存在着巨大差别。例如在虹吸膜中如果溶液中存在长轴7微米、短轴3微米橄榄形颗粒时，由于上盖片的重力原因，颗粒被固定在了两平板之间，为静止状态。但将这样的颗粒放入壁厚（池深）为5微米的微液池中，我们可以清晰的观察到颗粒在进行布朗运动。

现有的微液池的制备方法通常是将模具通过激光蚀刻，制备得到中间凸出模具，通过倒模形成一个中间凹四周凸起的液池。这样的方法首先非常繁琐，不易操作；每一种高度的液池需要对应一种模具；模具制备困难；所制备得到的液池透明度差，难以通过光学显微镜观察。还有一种微液池的制备方法，是直接通过激光蚀刻的方式在平板上刻出微液池，但这样的方式所制备得到的微液池高度不易控制，蚀刻面易出现纹路，制备成本高。

由于上述问题，制备微液池难以轻松实现。

发明内容

发明人克服上述现有方法的缺陷，通过一种简便的方法制备得到微液池。

具体来说，一种制备微液池的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

A，在平板上覆盖目标微液池长、宽尺寸的覆盖物；

B，向A步骤所制备得到平板喷涂树脂粉末涂料；

C，将B步骤所制备得到平板烘干；

D，将C步骤所制备得到平板放入烤箱加热，加热温度使树脂熔融并维持一段时间；

E，将D步骤所制备得到平板冷却。

如上述方法，其特征在于覆盖物在D步骤放入烤箱前去除或E步骤冷却后去除。

如上述方法，其特征在于在第一次进行完E步骤后重复进行一次或多次B至E步骤，使液池高度达到预期高度。

一种制备微液池的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

A，在平板上覆盖一个目标微液池长、宽尺寸的覆盖物；

B，向A步骤所制备得到平板喷涂树脂涂料；

C，将B步骤所制备得到平板烘干，使平板表面树脂涂料溶剂挥发，成树脂膜；

D，去除覆盖物；

如上述方法，其特征在于在第一次进行完C步骤后重复进行一次或多次B至C步骤，使液池高度达到预期高度。

如上述方法，其特征在于所述树脂为PE、PLA、PS或PTFE。

如上述方法，其特征在于所述覆盖物为一个或多个。

如上述方法，其特征在于所述平板为金属板、玻璃板或石英板。

本发明还提供了一种微液池：

所述微液池如上述方法制备得到，其特征在于在所述平板上形成微液池的树脂组分不通过粘接剂与平板结合。

如上述述微液池，其特征在于所述微液池的长、宽由覆盖物与平板结合面的长、宽决定，微液池的高度由树脂粉末于D步骤加热熔融、并于E步骤冷却后所形成树脂涂层的厚度决定，所述微液池的高度为1μm-1000μm，优选是1μm-200μm，更优选是1μm-100μm，最优选是1μm-50μm。

使用本发明所涉及平板进行细胞观察时，可以使用玻璃基材的透明平板制备的微液池，也可以采用不透名材质制备微液池对于进行免疫荧光操作后的细胞进行观察。观察时通过调整浓度使细胞容易在液池中形成单层结构，并观察。

本发明的有益效果在于：

1，对于基材的普适性：可以在任何形状、任何基材上制备微液池，特别是在玻璃基材上制备微液池，使其具备极好的可观察性和稳定性。

2，微液池高度可精细控制：以喷涂方式将树脂均匀铺撒在平板表面可以精细控制。可通过喷涂在平板表面的树脂的量控制微液池高度，而这个量对于所属领域技术人员来说是极易控制的。在实际的生产中其厚度的差异通常在±1μm。如果使用自动化喷涂设备，其厚度将更加容易控制。

3，制备成本低：喷涂是工业化生产最基本的技术，其设备很容易得到，且设备成本低廉。并且这样的方式并不会产生单一设备对应单一产品的情况，可以通过一套设备制备不同基材的、不同壁厚、不同尺寸的微液池。

4，使得观察单层微颗粒更加容易：使用微液池观察溶液中的微颗粒，如细胞、微粒等，微颗粒在近乎于一个平面内移动，显微镜聚焦更加容易，观察更加方便。

附图说明

图1：覆盖有覆盖物的基板。

图2：涂覆树脂后的覆盖物及基板，其中覆盖物表面被树脂膜遮盖。

图3：去除覆盖物，得到微液池。

具体实施方式

实施例1：PTFE粉末悬浊乳液涂料制备微液池

A，在平板上覆盖胶纸，胶纸尺寸为1cm×1cm；

B，向A步骤所制备得到平板板喷涂PTFE乳液，喷涂厚度为6μm；

C，将B步骤所制备得到平板板烘干，使玻璃板表面仅有均匀的PTFE树脂粉末；

D，将C步骤所制备得到平板板放入烤箱加热，温度为340℃，恒温25分钟；

E，将D步骤所制备得到平板板冷却。

通过实施例1的方式可以制备得到高度为5μm的PTFE液池。

实施例2：PE溶剂型涂料制备微液池

A，在平板上覆盖胶纸，胶纸尺寸为1cm×1cm；

B，向A步骤所制备得到平板板喷涂PE溶剂型涂料；

C，将B步骤所制备得到平板板烘干，烘干温度为100℃，使平板表面树脂涂料溶剂挥发，成树脂膜；

D，重复进行喷涂-烘干步骤，使树脂涂料膜厚度达到10μm

E，去除覆盖物。

通过实施例1的方式可以制备得到高度为5μm的PTFE液池。

实施例3：培养基中单个细胞观察

将含有经过消解成为单细胞的细胞培养基滴加至微液池中，表面覆盖一透明平板，使培养基形成液池相应厚度的液膜。通过普通光学显微镜进行观察。

在本发明提及的所有文献都在本发明中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本发明所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种观察细胞的方法，所述方法使用微液池作为容器。

2.一种制备微液池的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

A，在平板上覆盖目标微液池长、宽尺寸的覆盖物；

B，向A步骤所制备得到平板喷涂水性树脂粉末悬浊液涂料；

C，将B步骤所制备得到平板烘干;

D，将C步骤所制备得到平板放入烤箱加热，加热温度为使树脂熔融温度并维持一段时间；

E，将D步骤所制备得到平板冷却。

3.如权利要求2所述方法，其特征在于覆盖物在D步骤放入烤箱前去除或E步骤冷却后去除。

4.如权利要求2-3所述方法，其特征在于在第一次进行完E步骤后重复进行一次或多次B至E步骤，使液池高度达到所需高度。

5.一种制备微液池的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

A，在平板上覆盖目标微液池长、宽尺寸的覆盖物；

B，向A步骤所制备得到平板喷涂有机溶剂型树脂涂料；

C，将B步骤所制备得到平板烘干，使平板表面树脂涂料有机溶剂挥发，成树脂膜；

D，去除覆盖物。

6.如权利要求5所述方法，其特征在于在第一次进行完C步骤后重复进行一次或多次B至C步骤。

7.如权利要求2-6所述方法，其特征在于所述树脂为PE、PLA、PS、PFA、FEP或PTFE。

8.如权利要求2-7所述方法，其特征在于所述覆盖物为一个或多个。

9.如权利要求2-8所述方法，其特征在于所述平板为金属板、玻璃板或石英板。

10.一种微液池，所述微液池如权利要求2-9所述方法制备得到，其特征在于在所述平板上形成微液池的树脂组分不通过粘接剂与平板结合。