CN104770319A

CN104770319A - 深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法

Info

Publication number: CN104770319A
Application number: CN201510206489.2A
Authority: CN
Inventors: 魏振禄; 王春德; 李春茂
Original assignee: Changhai Dalian Zhen Lu Aquatic Products Co Ltd
Current assignee: Changhai Dalian Zhen Lu Aquatic Products Co Ltd
Priority date: 2015-04-28
Filing date: 2015-04-28
Publication date: 2015-07-15
Anticipated expiration: 2035-04-28
Also published as: CN104770319B

Abstract

深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，第一步亲贝：选深海扇贝和栉孔扇贝，分别将两种扇贝的雌雄分开，按常规亲贝培育方法促熟，使其达到同步成熟后用于杂交试验；第二步产卵和杂交：分别将两种扇贝的雌雄群体催产，将获得的卵子分别用同种的或异种的精子受精，获得深海扇贝和栉孔扇贝的纯种自交后代，以及深海扇贝♀×栉孔扇贝♂、栉孔扇贝♀×深海扇贝♂两种杂交受精卵；将所获得的受精卵在13-14℃孵化，在出现D型幼虫后定时观察测定D型幼虫的比例，达到最大孵化率；第三步扇贝的养成：在幼虫期，杂交扇贝的平均壳高生长速度为6-6.3 m/天，在养成期的壳高、壳长、壳宽和体重的生长。本发明通过种间杂交有效利用深海扇贝，扩大扇贝养殖种类。

Description

深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法

技术领域

本发明涉及海产品养殖方法，特别是深海扇贝的杂交养殖方法。

背景技术

我国北方海域养殖的大型扇贝目前只有虾夷扇贝一种。虾夷扇贝由于个体大，味道鲜美，成为目前高档酒店消费的主要扇贝品种，深受市场欢迎。近年来，虾夷扇贝养殖中较高的死亡率使得产品的供应不够稳定，虾夷扇贝的不规则的可边缘使其容易失去水分，因而货架寿命短，而且单一的品种不能满足市场的多样化需求。因此，扇贝养殖业需要更多口味上佳、货架寿命长和供应稳定的大规格扇贝来支撑其持续发展。

大西洋深海扇贝（Placopecten magellanicus）是产于美国和加拿大北大西洋沿岸的大型扇贝，凭借其极佳的味道和完美的形态（大小、形状和色泽）而成为大西洋海域养殖扇贝的最佳选择之一。因贝壳边缘十分光滑，所以其货架寿命长，而且其温度适应范围大体上与我国大连海域的水温条件相近。因此，这种扇贝可能适合于在我国大连海域养殖，但养殖方法尚属空白。

近年来，大海海域的养殖扇贝接连遭遇大规模的死亡现象，使扇贝养殖业对新品种的要求更加迫切。

发明内容

本发明的目的是克服是上述不足问题，提供一种深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，方法简单，成活率高，生长快，产品的品质优良。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，包括亲贝、产卵和杂交、扇贝的养成，具体如下：

第一步、亲贝：

选用深海扇贝和栉孔扇贝，分别将两种扇贝的雌雄分开，按常规亲贝培育方法促熟，使其达到同步成熟后，用于杂交试验；

第二步、产卵和杂交：

分别将两种扇贝的雌雄群体催产，将获得的卵子分别用同种的或异种的精子受精，获得深海扇贝和栉孔扇贝的纯种自交后代，以及深海扇贝♀×栉孔扇贝♂、栉孔扇贝♀×深海扇贝♂两种杂交受精卵；将所获得的受精卵在13-14℃孵化，在出现D型幼虫后定时观察测定D型幼虫的比例，达到最大孵化率；

第三步、扇贝的养成：

在幼虫期，杂交扇贝的平均壳高生长速度为6-6.3 m/天，在养成期的壳高、壳长、壳宽和体重的生长。其杂交苗种主要用于浮筏养殖，次年4-5月份笼养成，一般养成周期为10-12个月，达到商品规格7cm以上，养殖水温从低温5-6℃——高温23-25℃——低温0-1℃过程。

所述第一步、亲贝：深海扇贝的亲贝方法如下：

深海扇贝的引种：

深海扇贝种贝引进放入隔离场暂养30天，经检验检疫合格后暂时挂养于海区；

深海扇贝的人工育苗和养殖：

（1）亲贝促熟：

将雌雄亲贝分开，分别放在不同的池中进行促熟，培育过程中使用未经加热的过滤海水，亲贝开始促熟培育时自然水温约为3.5-4.5℃，在催产孵化以前，促熟培育水温逐步自然升高至9-11℃，亲贝经45-50天的促熟达到成熟，

亲贝促熟期间喂食单胞藻饵料，单胞藻饵料选自下述中的一种或多种：新月菱形藻，三角褐指藻，牟氏角毛藻；叉鞭金藻，巴福藻；亚心形扁藻；

（2）产卵和孵化：

亲贝经促熟达到成熟后，进行产卵，催产时先阴干20-25分钟，然后放到12-14℃的水中，雄性亲贝在处理后45-50分钟、雌性60-65分钟后均大量排放，表明促熟效果很好；雌贝产卵移走亲贝后向池中加入适量精液并搅动，直至在显微镜下观察卵膜周围可见5-6个精子；稍后测定的受精率接近100%；水温在14-15度进行孵化，在受精后24-26小时首次观察到膜内旋转，45-47小时开始出现D形幼虫，D形幼虫最初的平均规格为88.9±3.7μm（N=30），受精后约48-50小时，当大部分幼虫都发育到D形幼虫后，用筛绢网箱将幼虫选优到新池中培育；

（3）幼虫培育：

在幼虫培育期间每日倒池换水一次，培育水温范围为14-15.6℃；培育第3天到第16天每日投喂1-3次金藻混合饵料，投喂量0.5-3L/m³，第17-29日投喂3.5~5 L/m³，混合单胞藻饵料的平均密度为4×10⁶细胞/mL；

（4）幼虫生长：

培育的幼虫生长率远高于同期在加拿大魁北克育苗场培育的幼虫，幼虫的平均壳高生长率为5.7-6μm/天，壳长生长率为5.6-5.9μm/天，幼虫在受精后16-17天大部分出现眼点，第18天投附着基；

（5）附着变态：

将聚乙烯网片附着基投放到眼点幼虫培育池中，网片被裁成30×100cm大小（网径1cm），在一端绑一块小坠石以保证附着基可垂直漂浮在水中，网线的直径为0.5mm；幼虫投池以后换水时均采用滤鼓虹吸法以保证附着基不会移动，幼虫在6-10天内附着，投附着基10天后，将附着基取出，挂到海域保苗；

（6）自然海区保苗：

将附着基上的坠石去掉，先放入25-60目的网袋中，每8-15袋一串挂到海区筏架上，在5月中旬水温15℃情况下，60-70天分苗到30目和18目的网袋中，养殖水深约为3-5米；

稚贝在初夏下海初期的壳长生长速度为35-39μm/天，以后生长速度大幅度提高，为壳长90-92μm/天，在夏季高温期稚贝的平均生长速度略降，为45-48μm/天，在秋初然后随着水温的降低，生长速度再次提高，9月初到11月中旬的壳长平均生长速度达到160-168μm/天，在整个冬季生长速度均很低，平均为20-25μm/天；

（7）深海扇贝在养成阶段的生长和存活：

深海扇贝在养成两年后平均规格达到杂交规格。

所述第一步中（1）亲贝促熟：单胞藻饵料以250ml烧瓶保存藻种，然后扩种到20L的大瓶中，最后扩种到5000L的开放水泥池中；在促熟培育的最初6天每日投喂2次，其后每日投喂4次。

所述第一步中（3）幼虫培育：金藻混合饵料是叉鞭金藻和巴福藻混合饵料。

所述第一步中（6）自然海区保苗，采用底播方式，苗种暂养规格达到2.5-3厘米，10月中旬到12月中旬，向海底投放苗种，播放密度5500-6000枚/亩。

所述第一步中（6）自然海区保苗，前期采取筏式养殖一年，扇贝规格达到4-5厘米时再底播。

所述第一步中（7）深海扇贝在养成阶段的生长和存活：深海扇贝在养成第一年壳高的平均生长速度分别为117.4μm/天，第二年则降为98.8μm/天，养成两年后平均规格达到杂交规格。

所述第二步、产卵和杂交：两种纯系和深海扇贝♀×栉孔扇贝♂的孵化比较接近，均在60-62小时时达到90-95%的最大孵化率，50%受精卵达到D型幼虫期的时间为60-62小时；而栉孔扇贝♀×深海扇贝♂在64-66小时时达到75-78%的最大孵化率，50%受精卵达到D型幼虫期的时间为62-64小时。

本发明与同类技术相比，具有显著的优点：由于深海扇贝与栉孔扇贝的染色体数均为2N=38，因此二者有可能进行种间杂交，培育出具有显著杂种优势的新品种。为此，我们进行了深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交试验。本发明首次成功的将大西洋深海扇贝引进中国海域，建立了适合于大西洋深海扇贝的人工促熟、产卵、孵化、幼虫培育及中间保苗的技术与工艺，并成功进行大西洋深海扇贝规模化育苗；建立了大西洋深海扇贝筏式养殖和底播增养殖模式，引进改良更新种质，提高苗种培育质量，解决病害及抗逆性差等问题，确保种源质量和纯度，长期保障苗种繁育优良的供给；杂交育种提供了使深海扇贝快速适应本发海域条件的有效途径，杂交后代的生长速度比深海扇贝明显提高，已接近虾夷扇贝的生长速度，通过种间杂交的方法来有效利用深海扇贝这一有利种质资源，扩大扇贝养殖种类，对稳定产业持续发展，促进渔民增产增收，提高增长方式的转变，推动现代海洋牧场建设。

本发明分别采用了筏式养殖和底播增殖两种方法，均获得成功，筏式养殖结果表明：大西洋深海扇贝能够适应大连海域的自然条件，并能够达到性成熟，前期在本地区的生长速度与本地品种栉孔扇贝和虾夷扇贝相当，后期生长变缓，养殖三年到扇贝达到8厘米左右时收获。底播增殖可以使扇贝有效避免夏季高温期的高死亡率，而且扇贝生长较快，壳型完整美观。筏式养殖和底播增殖相结合，不仅提高养殖速度，而且存活率也有所提高。

附图说明

图1是幼虫期生长曲线与同期加拿大培育的幼虫生长的比较图。

图2是保苗期稚贝的生长曲线图。

图3 是深海扇贝养成期的壳高生长曲线图。

图4 是深海扇贝与栉孔扇贝和虾夷扇贝体重增长的比较图。

图5是深海扇贝养成期的存活率曲线图。

图6是深海扇贝、栉孔扇贝及其正反杂交后代的发育比较曲线图。

图7 是深海扇贝♀×栉孔扇贝♂与深海扇贝纯系在幼虫期的生长图。

图8 是杂交扇贝与同期的深海扇贝生长的比较图；其中（a）为壳重随年度生长曲线；（b）为壳长随年度生长曲线；（c）为壳宽随年度生长曲线；（d）为总重量随年度生长曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施例。

实施例1

第一步、亲贝：

深海扇贝的人工育苗和养殖

（1）亲贝促熟：

将雌雄亲贝分开，分别放在不同的池中进行促熟，培育过程中使用未经加热的过滤海水。亲贝开始促熟培育时自然水温约为4℃。在催产孵化以前，促熟培育水温逐步自然升高至11℃。

亲贝促熟期间的单胞藻饵料种类主要包括新月菱形藻 Nitaschia closterium minutissima，三角褐指藻 Phaeodactylum tricornutum，牟氏角毛藻 Chaetoceros muelleri（硅藻 Diatoms）；叉鞭金藻 Isochrysis zhanjianggensis（ISO），巴福藻Pavlova viridis （PAV）（金藻 Chrysophyta）；and Dunaliella sp.，亚心形扁藻 Platymonas subcordiformis，Chlorella spp.（绿藻 Chlorophyta）。以250ml烧瓶保存藻种，然后扩种到20L的大瓶中，最后扩种到5000L的开放水泥池中。在促熟培育的最初6天每日投喂2次，其后每日投喂4次。

（2）产卵和孵化：

亲贝经50天的促熟达到成熟，此时培育水温为11度。催产时先阴干20分钟，然后放到14℃的水中，雄性亲贝在处理后50分钟、雌性65分钟后均大量排放，表明促熟效果很好。雌贝产卵移走亲贝后向池中加入适量精液并搅动，直至在显微镜下观察卵膜周围可见5-6个精子。稍后测定的受精率接近100%。孵化的水温在14-15度，大约在受精后25.5小时首次观察到膜内旋转，47小时开始出现D形幼虫。D形幼虫最初的平均规格为88.9±3.7μm（N=30）。受精后约50小时，当大部分幼虫都发育到D形幼虫后，用筛绢网箱将幼虫选优到新池中培育。

（3）幼虫培育：

在幼虫培育期间每日倒池换水一次，培育水温范围为14℃-15.6℃。第3天到第16天每日投喂1-3次金藻混合饵料（ISO和PAV），投喂量0.5-3L/m³，第17-29日投喂3.5~5 L/m³。混合单胞藻饵料的平均密度为4×10⁶细胞/mL。

（4）幼虫生长：

图1为幼虫生长曲线。从图中可以看出，本项目培育的幼虫生长率远高于同期在加拿大魁北克育苗场培育的幼虫。本项目幼虫的平均壳高生长率为5.93μm/day，壳长生长率为5.81μm/day，幼虫在受精后17天大部分出现眼点，第18天投附着基，而同期在加拿大魁北克育苗场培育的幼虫壳高平均生长率为4.09μm/day，大约在受精后23天出现眼点，24天投附着基。

（5）附着变态：

将聚乙烯网片附着基投放到眼点幼虫培育池中。网片被裁成30×100cm大小（网径1cm）。在一端绑一块小坠石以保证附着基可垂直漂浮在水中，网线的直径为0.5mm。幼虫投池以后换水时均采用滤鼓虹吸法以保证附着基不会移动。大部分幼虫在6天内附着，投附着基10天后，将附着基取出，挂到长海县海洋岛海域保苗。

（6）自然海区保苗：

将附着基上的坠石去掉，先放入60目的网袋中，每10袋一串挂到海区筏架上。以后大约每20天分苗一次，依次分苗到30目和18目的网袋中，养殖水深约为3米。

下海后稚贝的生长结果见图2。从图中可以看出，稚贝在初夏下海初期的壳长生长速度为38.3μm/天，以后生长速度大幅度提高，为壳长92.0μm/天，在夏季高温期稚贝的平均生长速度略降，为46.7μm/天。在秋初然后随着水温的降低，生长速度再次提高，9月初到11月中旬的壳长平均生长速度达到167.9μm/天。在整个冬季生长速度均很低，平均为23.0μm/天。2013 500万 2014 450万

（7）深海扇贝在养成阶段的生长和存活：深海扇贝在养成阶段的生长曲线如图3所示。在养成第一年壳高的平均生长速度分别为117.4μm/天，第二年则降为98.8μm/天，养成两年后达到性成熟。

图4比较了深海扇贝与栉孔扇贝和虾夷扇贝的体重生长率。由图中可以看出，深海扇贝在第一年的生长速度远小于栉孔扇贝和虾夷扇贝，第二年的体重生长率与栉孔扇贝及虾夷扇贝相当，而第三年的生长率明显低于虾夷扇贝，且其在第四年的生长速度显著降低。

养成期的存活曲线如图4所示。到育苗的当年年底，成活率仅为29.1%，此时的平均壳高约为2.6厘米。此后扇贝的存活率较为稳定，养成第二年的平均存活率为60.2%。深海扇贝养成的高死亡期为第一年的夏季高温期，需要进一步降低保苗水深来提高成活率。

试验所用的深海扇贝和栉孔扇贝均为海洋岛海域养殖的二龄贝，平均规格如表1所示。将两种扇贝的雌雄分开，按上述常规亲贝培育方法促熟，使其达到同步成熟后，用于杂交试验。

表1深海扇贝与栉孔扇贝种间杂交试验所用亲贝规格（N=20）

第二步、产卵和杂交：

分别将两种扇贝的雌雄群体催产，将获得的卵子分别用同种的或异种的精子受精，获得深海扇贝和栉孔扇贝的纯种自交后代和深海扇贝♀×栉孔扇贝♂及栉孔扇贝♀×深海扇贝♂两种杂交受精卵。将所获得的受精卵在14度下孵化，在出现D型幼虫后定时观察测定D型幼虫的比例，得到各组的孵化曲线如图6所示。两种纯系和深海扇贝♀×栉孔扇贝♂的孵化比较接近，均在62小时时达到约95%的最大孵化率，50%受精卵达到D型幼虫期的时间约为60.8小时，而栉孔扇贝♀×深海扇贝♂约在66小时时达到77.0%的最大孵化率，50%受精卵达到D型幼虫期的时间约为63.8小时。

第三步、扇贝的养成：

幼虫期的生长比较：

图7比较了深海扇贝♀×栉孔扇贝♂与深海扇贝纯系在幼虫期的生长情况。在幼虫期，杂交扇贝的平均壳高生长速度为6.26μm/天，而同期深海扇贝自交后代的平均壳高生长速度为5.81μm/天。杂交扇贝比深海扇贝自交后代初步表现出生长优势。

养成阶段的生长比较

图8分别比较了杂交扇贝和深海扇贝在养成期的壳高、壳长、壳宽和体重的生长。结果表明，杂交扇贝的壳高、壳长、壳宽和体重生长均显著高于同期的深海扇贝，而与同期的栉孔扇贝相当。实际上，从壳色和形态上看，杂交扇贝与栉孔扇贝均十分相近，因此未来需要用分子生物学的方法来确定所获得的杂交扇贝是否真正的杂交后代。

Claims

1.深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，包括亲贝、产卵和杂交、扇贝的养成，其特征是，具体如下：

第一步、亲贝：

第二步、产卵和杂交：

第三步、扇贝的养成：

在幼虫期，杂交扇贝的平均壳高生长速度为6-6.3 m/天，在养成期的壳高、壳长、壳宽和体重的生长。

2.根据权利要求1所述的深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，其特征是，所述第一步、亲贝：深海扇贝的亲贝方法如下：

深海扇贝的引种：

深海扇贝的人工育苗和养殖：

（1）亲贝促熟：

（2）产卵和孵化：

（3）幼虫培育：

（4）幼虫生长：

（5）附着变态：

（6）自然海区保苗：

（7）深海扇贝在养成阶段的生长和存活：

深海扇贝在养成两年后平均规格达到杂交规格。

3.根据权利要求1所述的深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，其特征是，所述第一步中（1）亲贝促熟：单胞藻饵料以250ml烧瓶保存藻种，然后扩种到20L的大瓶中，最后扩种到5000L的开放水泥池中；在促熟培育的最初6天每日投喂2次，其后每日投喂4次。

4.根据权利要求1所述的深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，其特征是，所述第一步中（3）幼虫培育：金藻混合饵料是叉鞭金藻和巴福藻混合饵料。

5.根据权利要求1所述的深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，其特征是，所述第一步中（6）自然海区保苗，采用底播方式，苗种暂养规格达到2.5-3厘米，10月中旬到12月中旬，向海底投放苗种，播放密度5500-6000枚/亩。

6.根据权利要求1所述的深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，其特征是，所述第一步中（6）自然海区保苗，前期采取筏式养殖一年，扇贝规格达到4-5厘米时再底播。

7.根据权利要求1所述的深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，其特征是，所述第一步中（7）深海扇贝在养成阶段的生长和存活：深海扇贝在养成第一年壳高的平均生长速度分别为117.4μm/天，第二年则降为98.8μm/天，养成两年后平均规格达到杂交规格。

8.根据权利要求1－8任一所述的深海扇贝与栉孔扇贝的种间杂交与增养殖方法，其特征是，所述第二步、产卵和杂交：两种纯系和深海扇贝♀×栉孔扇贝♂的孵化比较接近，均在60-62小时时达到90-95%的最大孵化率，50%受精卵达到D型幼虫期的时间为60-62小时；而栉孔扇贝♀×深海扇贝♂在64-66小时时达到75-78%的最大孵化率，50%受精卵达到D型幼虫期的时间约为62-64小时。