CN104755477A - 2-氨基吡啶化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供根据式(I)的新型取代2-氨基吡啶化合物、它们的制备和用于治疗过度增殖性疾病，如癌症、炎性或退行性疾病的用途。

Description

2-氨基吡啶化合物
发明领域
本发明涉及可用于治疗哺乳动物的过度增殖性疾病，如癌症，以及炎性或退行性疾病的一系列新型的取代2-氨基吡啶化合物。本发明还包括此类化合物在哺乳动物，尤其是人类的过度增殖性、炎性或退行性疾病的治疗中的用途和含有此类化合物的药物组合物。
相关技术概述
Wnt蛋白包含一大类在物种间高度保守的富含半胱氨酸的分泌配体。目前，Wnt信号传导据信激活三种不同的通路：经典Wnt/β-连环蛋白级联、非经典平面细胞极性通路和Wnt/Ca2+通路。在这三种中，经典通路最被了解并具有最高的癌症相关性。因此，这一项目以经典Wnt/β-连环蛋白信号传导为焦点。
在经典通路中，β-连环蛋白是Wnt信号传导的关键中介体。在不存在Wnt配体的情况下，含有Axin、腺瘤性结肠息肉病蛋白（APC）、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）和酪蛋白激酶1（CK1）的蛋白质复合体在β-连环蛋白的磷酸化中发挥作用并由此标记其以通过泛素化和降解被蛋白酶体破坏。在Wnt结合到由Frizzled（Fz）家族的七个跨膜蛇形受体的成员和低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6（LRP5/6）构成的受体复合体上后，Disheveled（Dsh）和Axin被招募到质膜上。随后，Axin-APC-GSK3β复合体受到抑制，未磷酸化的β-连环蛋白积聚在细胞质中，然后易位到细胞核中，在此其与DNA-结合T细胞因子/淋巴增强因子（TCF/LEF）家族的成员一起调节靶基因表达。已经描述了经典Wnt/β-连环蛋白信号传导的许多不同的靶基因（例如c-Myc、Cyclin D1、VEGF、存活素），它们参与细胞生长、迁移和存活（Logan & Nusse, Annu Rev Cell Dev Biol. 2004；20:781-810）。
Wnt/β-连环蛋白信号级联在不同的肿瘤类型中常常过度激活，该通路的几种蛋白质充当致癌基因或抑癌基因（Giles等人, Biochim Biophys Acta. 2003 Jun 5；1653(1):1-24, van Es等人, Curr Opin Genet Dev. 2003 Feb；13(1):28-33）。
最显著地，在几乎60%的结肠癌中，抑癌基因APC突变。此外，许多结肠癌表达无法被磷酸化并因此稳定的突变β-连环蛋白。此外，在肝细胞癌、肺癌和结肠癌中已经检测到抑癌基因Axin的功能丧失突变。
因此，对Wnt/β-连环蛋白信号传导的干扰是可想到的癌症治疗策略（综述在Dihlmann & von Knebel Doeberitz, Int. J. Cancer: 113, 515–524 (2005), Luu等人, Curr Cancer Drug Targets. 2004 Dec；4(8):653-71中）。
WO 2010/041054公开了作用于Wnt通路的一系列化学化合物。
但是，由于指向这一通路的疗法还有待商业化，仍然存在明显未满足的医疗需求，因此必须识别和开发更有希望的Wnt通路抑制剂。
例如，WO 2010/041054的第73页中公开的化合物“E60”在表现出有希望的抑制活性（参见第93页中的表A）的同时具有高的人肝微粒体固有清除率（CLint）。这是对药物活性成分不利的性质，因为其与具有低CLint的化合物相比需要更高剂量和/或更频繁的给药。
发明描述
因此本发明的目的是提供可用于治疗哺乳动物的炎性或过度增殖疾病，如癌症的新型Wnt通路抑制剂，其在它们的活性以及它们的可溶性、代谢清除率和生物利用率特征方面都具有优异的药理性质。
因此，本发明提供新型的取代2-氨基吡啶化合物或它们的立体异构体或互变异构体或可药用盐，它们是Wnt通路抑制剂并可用作药物，尤其是在上下文中提到的疾病的治疗中。
该化合物由式(I)定义:
其中:
R1是H、LA、Hal、CN、S(LA)、CA，
R2是H、NH2、LA、NH(LA)、Hal、X-Cyc，
R3是LA、Hal、CN、CONH2、CONH(LA)
或
R2、R3与它们所连接的C原子一起形成具有1-3个选自O、S和N的杂原子的5或6元脂族杂环，其被1或2个氧代基团取代，所述杂环可进一步被LA单取代，且所述杂环可以与苯基或吡啶基形成稠环体系
R4是H、LA、CONH(LA)或X-Cyc，
R5是H、F，
或
R4、R5与它们所连接的原子一起形成具有1-3个选自O、S和N的杂原子的5或6元杂环，其任选独立地被氧代、LA、NH2、NH(LA)、N(LA)2、HO(LA)-单取代、二取代或三取代，或其任选被CA单取代，
R6是H、LA、OH或F，
Cyc是具有1-3个选自O、S和N的杂原子的5或6元单环的、脂族或芳族碳环或杂环，其可以被氧代、LA、NH2、NH(LA)、N(LA)2、HO(LA)-单取代或二取代或被CA单取代，
X是-CH­2-、-C2H4-、-NH-、-O-或键，
LA是具有1、2、3、4或5个碳原子的直链或支链烷基，其可以是饱和或部分不饱和的，其中1、2或3个H原子可以被Hal替代，和/或
　　1个CH2基团可以被-O-、-NH-或-SO2-替代，和/或
　　1个CH基团可以被N替代，
CA是具有3、4、5或6个碳原子的环烷基，或具有3、4、5或6个环碳原子和1或2个非环碳原子的环烷基烷基，在所述环烷基或环烷基烷基中，1个CH2基团可以被-O-替代，或1个CH基团可以被N替代，
Hal是F、Cl、Br或I。
一般而言，出现一次以上的所有残基可以相同或不同，即彼此独立。在上下文中，除非另行明示，残基和参数具有对式(I)指示的含义。
相应地，本发明特别涉及其中至少一个所述残基具有下示优选含义之一的式(I)的化合物。
Hal是指氟、氯、溴或碘，特别是氟、氯或溴。
“LA”是指例如甲基、乙基、三氟甲基、二氟甲基、1,1,1-三氟乙基、丙基、异丙基、甲氧基乙基、二甲基氨基甲基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基、异丙烯基、乙烯基、乙炔基或丙-1-炔基。
“CA”是指例如环丙基、(环丙基)甲基、环丁基、(环戊基)乙基、四氢吡喃基、吡咯烷-1-基-乙基、哌啶基或氧杂环丁烷基。
“Cyc”是指例如苯基、噁唑烷-2-、3-、4-或5-基、异噁唑烷-2-、3-、4-或5-基、2,3-二氢-2-、-3-、-4-或-5-呋喃基、2,5-二氢-2-、-3-、-4-或-5-呋喃基、四氢-2-或-3-呋喃基、四氢-1-、-2-或-4-咪唑基、2,3-二氢-1-、-2-、-3-、-4-或-5-吡唑基、四氢-1-、-3-或-4-吡唑基、1,4-二氢-1-、-2-、-3-或-4-吡啶基、1,2,3,4-四氢-1-、-2-、-3-、-4-、-5-或-6-吡啶基、1-、2-、3-、1-、5-或6-哌啶基、2-、3-或4-吗啉基、四氢-2-、-3-或-4-吡喃基、六氢-1-、-3-或-4-哒嗪基、六氢-1-、-2-、-4-或-5-嘧啶基、1-、2-或3-哌嗪基、2-或3-呋喃基、1-、2-或3-吡咯基、1-、2-或3-吡咯烷基、1-、2、4-或5-咪唑基、1-、3-、4-或5-吡唑基、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-、5-或6-嘧啶基、吡嗪-2-或3-基、哒嗪-3-或4-基、1,2,3-三唑-1-、-4-或-5-基、1,2,4-三唑-1-、-3-或5-基、1-或5-四唑基。
在一个优选实施方案中，本发明的化合物符合式(I)的子式1至13，其中
在子式1中
R2、R3与它们所连接的哌啶环一起形成(2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮)-8-基、(2,8-二氮杂-螺[4.5]癸烷-1,3-二酮)-8-基、(1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮)-8-基、(1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮)-8-基、(1,4,9-三氮杂-螺[5.5]十一烷-5-酮)-9-基、(4-氧代-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-8-基，
R6是H，
在子式2中
R2、R3与它们所连接的C原子一起形成1,3-二氢-吲哚-2-酮-3-基或氮杂-1,3-二氢-吲哚-2-酮-3-基，
R6是H，
在子式3中
R4是吗啉-4-基、哌嗪-1-基、1H-吡唑-3-基、吡啶-3-基、1H-吡唑-4-基，它们各自可以未取代或被LA、OH、NH2、HO(LA)-或NH2(LA)-单取代，
R5是H，
在子式4中
R4、R5与它们所连接的苯基环一起形成1H-吲唑-5-基、1H-吲唑-6-基、2-氧代-2,3-二氢-苯并噁唑-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基、(3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮)-6-基、1H-吲哚-6-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基、(3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮)-6-基、2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基、2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-6-基、1,1-二氧代-2,3-二氢-1H-1l6-苯并[b]噻吩-5-基、1-二氧化-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基，
它们各自可以未取代或被LA、OH、NH2、HO(LA)-或NH2(LA)-取代，
在子式6中
R1是Hal或C(Hal)3，
在子式7中
R4是吗啉-4-基、4-甲基-哌嗪-1-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、6-氨基-吡啶-3-基、1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-4-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基，
R5是H，
在子式8中
R4、R5与它们所连接的苯基环一起形成1-甲基-1H-吲唑-5-基、1H-吲唑-5-基、1-甲基-1H-吲唑-6-基、1-乙基-1H-吲唑-5-基、1-乙基-1H-吲唑-6-基、1-异丙基-1H-吲唑-6-基、2-氧代-2,3-二氢-苯并噁唑-5-基、(3H-苯并噁唑-2-酮)-5-基、1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基、1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基、(3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮)-6-基、1H-吲哚-6-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基、(1-甲基-3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮)-6-基、3-氨基-1H-吲唑-6-基、1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基、1-乙基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基、2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-6-基、1,1-二氧代-2,3-二氢-1H-1l6-苯并[b]噻吩-5-基、2-乙基-1,1-二氧化-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基，
在子式9中
R1是F、Cl或CF3，
在子式10中
R2、R3与它们所连接的哌啶环一起形成(2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮)-8-基、(1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮)-8-基、(1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮)-8-基，
R6是H，
在子式11中
R1是F、Cl或CF3，
R2、R3与它们所连接的哌啶环一起形成(2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮)-8-基、(1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮)-8-基、(1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮)-8-基，
R6是H，
在子式12中
R2是H，
R3是CN、CONH2，
R6是H，
在子式13中
R2是H，
R3是CN，
R6是OH，
且其余残基具有如对式(I)指示的含义。
式(I)的化合物可具有一个或多个手性中心。它们可因此以各种对映体形式存在并且为外消旋或旋光形式。本发明因此还涉及这些化合物的旋光形式、对映体、外消旋物、非对映体，统称为：立体异构体。
由于本发明的化合物的外消旋物或立体异构体的药物活性可能不同，可能希望使用对映体。在这些情况下，最终产物或甚至中间体可通过本领域技术人员已知的化学或物理手段分离成对映体化合物或甚至就这样用于合成。
在外消旋胺的情况下，由该混合物通过与旋光拆分剂反应形成非对映体。合适的拆分剂的实例是旋光酸，如酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸、适当地N-保护的氨基酸（例如N-苯甲酰脯氨酸或N-苯磺酰脯氨酸）或各种旋光樟脑磺酸的R和S形式。借助旋光拆分剂（例如二硝基苯甲酰苯基甘氨酸、三乙酸纤维素或其它碳水化合物衍生物或固定在硅胶上的手性衍生甲基丙烯酸酯聚合物）的色谱对映体拆分也有利。适用于此用途的洗脱剂是水性或醇类溶剂混合物，例如己烷/异丙醇/乙腈，例如比率为82:15:3。
用于拆分含酯基团（例如乙酰酯）的外消旋物的一种精细方法是使用酶，特别是酯酶。
众所周知，原子可能具有与自然界中通常存在的该原子的原子质量或质量数不同的原子质量或质量数。容易商购获得并可通过公知方法并入本发明的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别例如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。更重同位素，尤其是氘（2H）并入本发明的化合物中由于这种同位素标记化合物的较高代谢稳定性而具有治疗优点。较高代谢稳定性直接意味着体内半衰期延长或较低的剂量。因此，在如本发明的化学化合物中所用的原子H、C、N等的定义中包括这些同位素。
本发明的化合物可以是前药化合物的形式。“前药化合物”是指在活体内的生理条件下例如通过氧化、还原、水解等（它们各自利用酶或在没有酶参与下进行）转化成本发明的生物活性化合物的衍生物。前药的实例是下述化合物：其中本发明的化合物中的氨基被酰化、烷基化或磷酸化，例如二十烷酰基氨基、丙氨酰氨基、新戊酰氧基甲基氨基，或其中羟基被酰化、烷基化、磷酸化或转化成硼酸盐，例如乙酰氧基、棕榈酰氧基、新戊酰氧基、琥珀酰氧基、富马酰氧基、丙氨酰氧基，或其中羧基被酯化或酰胺化，或其中巯基与选择性地向靶和/或向细胞的胞质溶胶递送药物的载体分子，例如肽形成二硫桥键。这些化合物可以由本发明的化合物根据公知方法制备。前药的其它实例是下述化合物：其中本发明的化合物中的羧酸酯例如被转化成烷基-、芳基-、胆碱-、氨基、酰氧基甲基酯、亚麻酰基-酯。
如果存在本发明的化合物或它们的前药的互变异构，例如酮-烯醇互变异构，各独立形式，例如酮或烯醇形式，单独地和作为任何比率的混合物一起要求保护。这同样适用于立体异构体，例如对映体、顺式/反式异构体、构象异构体等。
如果需要，可通过本领域中公知的方法，例如通过液相色谱法分离异构体。这同样适用于对映体，例如通过使用手性固定相。另外，可通过将对映体转化成非对映体，即与对映体纯的辅助化合物偶联、随后分离所得非对映体和裂解辅助残基来分离对映体。或者，可以使用光学纯的起始材料由立体选择性合成获得本发明的化合物的任何对映体。
本发明的化合物可以是可药用盐、可药用溶剂合物、或可药用盐的可药用溶剂合物的形式。
术语“可药用盐”是指由可药用的碱或酸，包括无机碱或酸和有机碱或酸制成的盐。在本发明的化合物含有一个或多个酸性或碱性基团的情况下，本发明还包含它们相应的可药用盐。因此，含有酸性基团的本发明的化合物可以以盐形式存在并可根据本发明使用，例如作为碱金属盐、碱土金属盐或作为铵盐。这样的盐的更确切实例包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或与氨或有机胺，例如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸的盐。含有一个或多个碱性基团，即可以质子化的基团的本发明的化合物可以以盐形式存在并可根据本发明以它们与无机或有机酸的加成盐的形式使用。合适的酸的实例包括盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、特戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡糖酸、抗坏血酸、异烟酸、柠檬酸、己二酸和本领域技术人员已知的其它酸。如果本发明的化合物在分子中同时含有酸性和碱性基团，本发明除所提到的盐形式外还包括内盐或内铵盐（两性离子）。各盐可通过本领域技术人员已知的常规方法获得，例如通过在溶剂或分散剂中使这些与有机或无机酸或碱接触或通过与其它盐阴离子交换或阳离子交换。本发明还包括由于低生理相容性而并非直接适用于药品但可例如用作化学反应或可药用盐的制备中的中间体的本发明的化合物的所有盐。
术语“可药用溶剂合物”是指与可药用溶剂的加成形式，其含有化学计算量或非化学计算量的溶剂。一些化合物具有在结晶固态中截留固定摩尔比的溶剂分子由此形成溶剂合物的趋势。如果该溶剂是水，所形成的溶剂合物是水合物，例如单-或二水合物。如果该溶剂是醇，所形成的溶剂合物是醇化物，例如甲醇化物或乙醇化物。如果该溶剂是醚，所形成的溶剂合物是醚合物，例如乙醚合物。
因此，下列项目也符合本发明：
a) 所述化合物的所有立体异构体或互变异构体，包括它们的所有比率的混合物，
b) 所述化合物的前药或这些前药的立体异构体或互变异构体，
c) 所述化合物和(a)和(b)下提到的项目的可药用盐，
d) 所述化合物和(a)、(b)和(c)下提到的项目的可药用溶剂合物。
应该理解的是，上下文中所有提到化合物之处意在包括这些项目，特别是该化合物的可药用溶剂合物或它们的可药用盐的可药用溶剂合物。
本发明还涉及包含本发明的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物作为活性成分，以及可药用载体的药物组合物。
“药物组合物”是指一种或多种活性成分和构成载体的一种或多种惰性成分，以及直接或间接地由任何两种或更多种成分的组合、络合或聚集或由一种或多种成分的离解或由一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用产生的任何产物。因此，本发明的药物组合物包括通过混合本发明的化合物和可药用载体制成的任何组合物。
本发明的药物组合物可另外包含一种或多种其它化合物作为活性成分，如一种或多种另外的本发明的化合物或其它Wnt通路抑制剂。
该药物组合物包括适合经口、直肠、局部、肠胃外（包括皮下、肌肉内和静脉内）、经眼（眼药）、肺部（经鼻或口腔吸入）或经鼻给药的组合物，尽管在任何给定情况下最合适的途径取决于治疗的病症的性质和严重性和活性成分的性质。它们可便利地以单位剂型呈现并通过制药业中公知的任何方法制备。
在一个实施方案中，所述化合物和药物组合物用于治疗癌症，如脑癌、肺癌、结肠癌、表皮样癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、肾癌、肾脏癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、食管癌、睾丸癌、妇科癌、甲状腺癌、黑素瘤以及恶性血液病，如急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、慢性骨髓性白血病、髓样细胞白血病、卡波西肉瘤或任何其它类型的实体或液体瘤。要治疗的癌症优选选自结肠、肺、乳腺和血液肿瘤类型。
此外，所述化合物和药物组合物用于治疗炎性疾病，如多发性硬化症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、炎性肠病或退行性疾病，如骨关节炎和阿尔茨海默氏症。
本发明还涉及用于抑制哺乳动物中的异常细胞生长的化合物或药物组合物，其包含一定量的本发明的化合物以及一定量的另一抗癌治疗剂，其中该化合物的量和其它抗癌治疗剂的量一起有效抑制异常细胞生长。许多抗癌治疗剂是本领域中目前已知的。在一个实施方案中，该抗癌治疗剂选自下列试剂：
烷基化剂，如六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氮芥、环磷酰胺、达卡巴嗪、异环磷酰胺、英丙舒凡、对苯磺酸盐（tosilate）、环己亚硝脲、美法仑、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、尼莫司汀、雷莫司汀、替莫唑胺、噻替派、苏消安、mechloretamine、卡波醌；阿帕齐醌（apaziquone）、福莫司汀、葡磷酰胺、帕利伐米（palifosfamide）、哌泊溴烷、曲洛磷胺、尿嘧啶氮芥、TH-302、VAL-083。
铂化合物，如卡铂、顺铂、依铂、miriplatine hydrate、奥沙利铂、洛铂、奈达铂、吡铂、沙铂；洛铂、奈达铂、吡铂、沙铂。
DNA 改变剂，如氨柔比星、比生群、地西他滨、米托蒽醌、丙卡巴肼、曲贝替定、氯法拉滨；安吖啶、brostallicin、匹杉琼、拉罗莫斯汀（laromustine）。
拓扑异构酶抑制剂，如依托泊苷、伊立替康、雷佐生、索布佐生、替尼泊苷、拓扑替康；氨萘非特、贝洛替康、依利醋铵、voreloxin。
微管调节剂，如卡巴他赛、多西紫杉醇、艾日布林、伊沙匹隆、紫杉醇、长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛、长春氟宁；fosbretabulin、tesetaxel。
抗代谢物，如天冬酰胺酶、阿扎胞苷、左亚叶酸钙、卡培他滨、克拉屈滨、阿糖胞苷、依诺他滨、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、吉西他滨、巯基嘌呤、氨甲喋呤、奈拉滨、培美曲塞、普拉曲沙、硫唑嘌呤、硫鸟嘌呤、卡莫氟；去氧氟尿苷、艾西拉滨、雷替曲塞、sapacitabine、喃氟啶、三甲曲沙；
抗癌抗生素，如博来霉素、放线菌素、多柔比星、表阿霉素、伊达比星、左旋咪唑、米替福新、丝裂霉素C、罗米地辛、链脲菌素、戊柔比星、净司他丁、佐柔比星、道诺霉素（daunurobicin）、光神霉素；阿柔比星、培洛霉素、吡柔比星。
激素 / 拮抗剂，如阿巴瑞克、阿比特龙、比卡鲁胺、布舍瑞林、卡普睾酮、氯烯雌醚、地加瑞克、地塞米松、雌二醇、氟可龙、氟甲睾酮、氟他米特、氟维司群、戈舍瑞林、组氨瑞林、亮丙瑞林、甲地孕酮、米托坦、那法瑞林、诺龙、尼鲁米特、奥曲肽、强的松龙、雷洛昔芬、三苯氧胺、促甲状腺素α、托瑞米芬、曲洛司坦、曲普瑞林、己烯雌酚；acolbifene、达那唑、德舍瑞林、环硫雄醇、orteronel、恩杂鲁胺。
芳香酶抑制剂，如氨鲁米特、阿那曲唑、依西美坦、法倔唑、来曲唑、睾内酯；福美坦。
小分子激酶抑制剂，如克唑替尼、达沙替尼、埃罗替尼、伊马替尼、拉帕替尼、尼洛替尼、帕唑帕尼、瑞格非尼、鲁索替尼、索拉非尼、舒尼替尼、凡德他尼、威罗菲尼、博舒替尼、吉非替尼、阿昔替尼；阿法替尼、阿利吉仑、达拉菲尼、达可替尼（dacomitinib）、dinaciclib、多韦替尼、enzastaurin、尼达尼布（nintedanib）、乐伐替尼（lenvatinib）、linifanib、linsitinib、马赛替尼、米哚妥林、莫替沙尼、来那替尼、orantinib、哌立福辛、帕纳替尼、拉多替尼、rigosertib、替吡法尼、tivantinib、tivozanib、曲美替尼、pimasertib、丙氨酸布立尼布、西地尼布、阿帕替尼4、S-苹果酸卡博替尼、依鲁替尼、埃克替尼、buparlisib、西帕替尼（cipatinib）、cobimetinib、idelalisib、fedratinib、XL-647。
光敏剂，如甲氧沙林；卟吩姆钠、他拉泊芬、替莫泊芬；
抗体，如阿仑单抗、贝索单抗（besilesomab）、brentuximab vedotin、西妥昔单抗、狄诺塞麦、伊匹单抗（ipilimumab）、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、贝伐单抗、帕妥珠单抗；卡妥索单抗、elotuzumab（人源化CS-1单抗）、依帕珠单抗、farletuzumab、mogamulizumab、necitumumab、尼妥珠单抗、obinutuzumab、ocaratuzumab、奥戈伏单抗（oregovomab）、雷莫芦单抗（ramucirumab）、rilotumumab、西妥昔单抗（siltuximab）、托珠单抗（tocilizumab）、扎芦木单抗（zalutumumab）、扎木单抗（zanolimumab）、马妥珠单抗、dalotuzumab、onartuzumab、racotumomab、tabalumab、EMD-525797、nivolumab。
细胞因子，如阿地白介素、干扰素α2、干扰素α2a3、干扰素α2b；西莫白介素、他索纳明、替西白介素、奥普瑞白介素1,3、重组干扰素β-1a。
药物偶联物，如denileukin diftitox（白喉毒素-IL-2融合蛋白）、替伊莫单抗（ibritumomab tiuxetan）、碘苄胍I123、泼尼莫司汀、trastuzumab emtansine、雌莫司汀、吉妥珠单抗、奥佐米星、阿柏西普；cintredekin besudotox（IL13-PE38QQR）、依多曲肽（edotreotide）、奥英妥珠单抗（inotuzumab ozogamicin）、naptumomab estafenatox、oportuzumab monatox、technetium (99mTc) arcitumomab（锝(99mTc)阿西莫单抗）、vintafolide。
疫苗，如sipuleucel；vitespen、emepepimut-S、oncoVAX（结肠癌疫苗）、rindopepimut3、troVax、MGN-1601、MGN-1703。
杂项 : 阿利维A酸、贝沙罗汀、硼替佐米、依维莫司、伊班膦酸、咪喹莫特、来那度胺、香菇多糖、甲酪氨酸、米伐木肽、帕米膦酸、培门冬酶、喷司他丁、sipuleucel、西佐喃、他米巴罗汀、坦西莫司（temsirolimus）、沙利度胺、维甲酸、vismodegib、唑来膦酸、伏立诺他；塞来昔布、西仑吉肽、恩替诺特、依他硝唑、ganetespib、idronoxil、iniparib、ixazomib、氯尼达明、尼莫拉唑、帕比司他（panobinostat）、peretinoin、plitidepsin、泊马度胺、procodazol、ridaforolimus、他喹莫德（tasquinimod）、telotristat、胸腺法新、替拉扎明、托舍多特（tosedostat）、trabedersen、乌苯美司、伐司朴达、今又生（gendicine）、溶链菌制剂（picibanil）、reolysin、瑞他霉素盐酸盐、trebananib、维鲁利秦（virulizin）、卡非佐米、内皮抑素、immucothel、贝利司他（belinostat）、MGN-1703。
本发明还涉及抑制哺乳动物中的异常细胞生长或治疗过度增殖障碍的方法，其包括与放射疗法联合给予该哺乳动物一定量的本发明的化合物或药物组合物，其中该化合物或药物组合物的量与放射疗法一起有效抑制哺乳动物中的异常细胞生长或治疗哺乳动物中的过度增殖障碍。实施放射疗法的技术是本领域中已知的，这些技术可用在本文所述的联合疗法中。可以如本文所述确定在这种联合疗法中施用本发明的化合物或药物组合物。据信，本发明的化合物可以使异常细胞对用于杀灭和/或抑制此类细胞生长的放射治疗更敏感。
因此，本发明还涉及使哺乳动物中的异常细胞对放射治疗敏感的方法，其包括给予该哺乳动物一定量的本发明的化合物或药物组合物，所述量有效地使异常细胞对放射治疗敏感。可根据本文所述的确定此类化合物的有效量的手段确定该化合物在这种方法中的量。
在实际使用中，本发明的化合物可作为活性成分与药物载体根据常规药物配混技术混合为密切混合物。该载体可根据给药，例如口服或肠胃外（包括静脉内）所需的制剂形式呈多种多样的形式。在口服剂型的组合物的制备中，可以使用任何常见药物介质，例如，水、二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等。在口服液体制剂的情况下，可以使用任何常见药物介质，例如，悬浮液、酏剂和溶液；或载体，如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。在口服固体制剂的情况下，该组合物可呈例如粉剂、硬和软胶囊和片剂的形式，固体口服制剂优于液体制剂。
由于它们易给药，片剂和胶囊代表最有利的口服单位剂型，在这种情况下明显使用固体药物载体。如果需要，片剂可通过标准水性或非水技术包衣。这样的组合物和制剂应含有至少0.1%的活性化合物。活性化合物在这些组合物中的百分比当然可变并方便地为该单位剂型的重量的大约2%至大约60%。此类治疗有效组合物中活性化合物的量导致获得有效剂量。活性化合物还可以以例如液体滴剂或喷雾剂的形式鼻内给药。
片剂、丸剂、胶囊等还可含有粘合剂，如黄蓍树胶、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸氢钙；崩解剂，如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸；润滑剂，如硬脂酸镁；和甜味剂，如蔗糖、乳糖或糖精。当单位剂型是胶囊时，其除上述类型的材料外还可含有液体载体，如脂肪油。
各种其它材料可作为包衣存在或改变单位剂型的物理形式。例如，片剂可以用虫胶、糖或两者包衣。糖浆或酏剂除活性成分外还可含有蔗糖作为甜味剂、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯作为防腐剂、染料和调味剂，如樱桃或橙调味剂。
本发明的化合物还可肠道外给药。可以在适当地与表面活性剂，如羟基-丙基纤维素混合的水中制备这些活性化合物的溶液或悬浮液。也可以在甘油、液体聚乙二醇和它们在油中的混合物中制备分散体。在普通储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物生长。
适合注射用的药物形式包括无菌水溶液或分散体和用于当场制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉剂。在所有情况下，该形式必须无菌且流度必须达到容易注射的程度。其必须在制造和储存条件下稳定并必须防止受到微生物如细菌和真菌的污染作用。该载体可以是溶剂或分散介质，含有例如水、乙醇、多元醇（例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇）、它们的合适混合物和植物油。
任何合适的给药途径可用于为哺乳动物，尤其是人类提供有效剂量的本发明的化合物。例如，可以使用口服、直肠、局部、肠胃外、经眼、经肺、经鼻等。剂型包括片剂、锭剂、分散体、混悬剂、溶液、胶囊、乳膏、软膏、气雾剂等。本发明的化合物优选口服给药。
所用活性成分的有效剂量可随所用的特定化合物、给药模式、治疗的病症和治疗病症的严重性而变。本领域技术人员容易确定这样的剂量。
在治疗本发明的化合物适用的炎性、退行性或过度增殖性疾病时，在本发明的化合物以大约0.01毫克至大约100毫克/公斤动物体重的每日剂量给药时（优选作为每日单剂量给出），获得通常令人满意的结果。对大多数大型哺乳动物而言，总每日剂量为大约0.1毫克至大约1000毫克，优选大约0.2毫克至大约50毫克。在70公斤成年人的情况下，总每日剂量通常为大约0.2毫克至大约200毫克。可以调节这种给药方案以提供最佳治疗反应。
本发明还涉及一种套盒（药盒），其由
a) 有效量的本发明的化合物或其立体异构体或互变异构体，或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物，和
b) 有效量的其它药物活性成分
的单独包装构成。
该套盒包括合适的容器，如盒、独立瓶、袋或安瓿。
例如，该套盒可包括分立的安瓿，各自含有有效量的本发明的化合物，和有效量的溶解或冻干形式的其它药物活性成分。
实验部分
本申请中出现的一些缩写如下：
缩写
名称
aq. 水性
ATP 三磷酸腺苷
b 宽峰
Boc 氨基甲酸叔丁酯
Boc2O 二碳酸二叔丁酯
calc 计算的
cHex 环己烷
CDCl3 氘氯仿
d 双重峰
dba 二亚苄基丙酮
DCM 二氯甲烷
DME 乙二醇二甲基醚
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
dppf 双(二苯基膦基)二茂铁
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
ESI 电喷雾电离
h 小时
HPLC 高压液相色谱法
HRMS 高分辨率质谱法
LC/MS 液相色谱-质谱联用
m 多重峰
m/z 质荷比
min 分钟
MS 质谱法
N Normal（浓度单位）
nd 未测定
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR，1H 核磁共振，质子
PMB 对甲氧基苄基
q 四重线（或四重峰）
Rf 保留因子
RT 室温
Rt 保留时间
s 单峰
sat. 饱和
t 三重峰
tert 叔
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
UV 紫外线
Xphos 2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯
本发明的化合物可以根据下列方案和实施例的程序使用适当的材料制备并进一步由下列具体实施例例示。
此外，通过与本领域中的普通技术结合使用本文所述的程序，容易制备本文中要求保护的另外的本发明的化合物。无论如何，实施例中所示的化合物不应被解释为构成被视为本发明的仅有类属。实施例进一步例示本发明的化合物的制备的细节。本领域技术人员容易理解，下列制备程序的条件和方法的已知变动可用于制备这些化合物。
本化合物通常以它们的可药用盐（如上述那些）的形式分离。可通过用合适的碱，如碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠和氢氧化钾的水溶液中和并将释放的胺游离碱萃取到有机溶剂中、接着蒸发来生成与分离的盐对应的胺游离碱。以此方式分离的胺游离碱可通过溶解在有机溶剂中、接着添加适当的酸和随后蒸发、沉淀或结晶来进一步转化成另一可药用盐。
参照下列实施例中描述的具体实施方案例示，但不限制本发明。除非方案中另行指明，变量具有与上文所述相同的含义。
除非另行规定，所有起始材料获自商业供应商并且不经进一步提纯使用。除非另行规定，所有温度以℃表示且所有反应在室温下进行。通过硅胶色谱法或制备HPLC提纯化合物。
本发明还涉及式(I)的化合物的制备方法，其中使式(V)的化合物
与式(IV)的化合物
反应产生式(III)的化合物
其然后进一步与式(II)的化合物
反应产生式(I)的化合物。
LG1是亲核芳香取代中常用的离去基，优选Hal，如F、Cl或Br。LG2是能在金属-催化剂反应（例如Suzuki反应）中反应的反应性基团，如Cl、Br或I。
X是H，或在反应条件下裂解掉的典型的胺保护基，如BOC。Y是硼酸（boronic acid）或硼酸酯（boronic ester）。
实施例
HPLC 方法 (A)
溶剂A：水 + 0.1 %三氟乙酸
溶剂B：乙腈 + 0.1 %三氟乙酸
流速：2 mL/min, 波长: 220nm
梯度：0.0 min 1 % B
　　　0.2 min 1 % B
　　　3.8 min 100 % B
　　　4.2 min 100% B
柱：Chromolith Speed ROD RP-18e 100-3.0 mm (Merck KGaA)
HPLC 方法 (B)
溶剂A：水 + 0.1%甲酸
溶剂B：甲醇 + 0.1%甲酸
流速：1.5 mL/min, 波长: 254nm
梯度：0.0 min 10 % B
　　　2.5 min 90 % B
　　　3.5 min 90 % B
　　　3.8 min 10 % B
　　　4.0 min 10 % B
柱：Purospher STAR RP-18e 30 x 4 mm (Merck KGaA)
HPLC 方法 (C)
溶剂A：水 + 0.1%甲酸
溶剂B：甲醇 + 0.1%甲酸
流速：1.5 mL/min, 波长: 220nm
梯度：0.0 min 10 % B
　　　2.5 min 90 % B
　　　3.5 min 90 % B
　　　3.8 min 10 % B
　　　4.0 min 10 % B
柱：Purospher STAR RP-18e 30 x 4 mm (Merck KGaA)
HPLC 方法 (D)
溶剂A：水 + 0.05%甲酸
溶剂B：乙腈 + 0.04%甲酸
流速：2 mL/min, 波长: 220nm
梯度：0.0 min 4 % B
　　　2.8 min 100 % B
　　　3.3 min 100 % B
柱：Chromolith Performance RP18e 100-3。
下列实施例旨在例示本发明的具体实施方案并且无意以任何方式限制说明书或权利要求书的范围。
化学合成
在这一节中提供根据式(I)的许多实施例化合物的实验细节及其合成中间体。
1. 8-(2- 氨基 -3- 氯 -5- 苯基 ) 吡啶 -4- 基 )-2,8- 二氮杂螺 [4.5] 癸 -1- 酮衍生物 (22, 7, 16)
。
1a. 5-溴-4-氯吡啶-2-胺
在室温下在氮气气氛下将N-溴琥珀酰亚胺（10.9克，61.3毫摩尔）添加到4-氯-2-氨基-吡啶（7.50克，58.3毫摩尔）在乙腈（130毫升）中的溶液中。将该黄色溶液搅拌3小时。在减压下蒸发溶剂，残留物通过硅胶上的色谱法提纯（环己烷/乙酸乙酯）以产生浅黄色固体形式的标题化合物（10.0克，83%）。
1b. 5-溴-3,4-二氯吡啶-2-胺
在室温下在氮气气氛下将N-氯琥珀酰亚胺（6.11克，45.8毫摩尔）逐份添加到5-溴-4-氯吡啶-2-胺（10.0克，48.2毫摩尔）在乙腈（180毫升）中的溶液中并将反应混合物在95℃下搅拌3小时。将该混合物冷却至室温，滤出结晶固体并用冷乙腈洗涤。残留物从热乙腈中重结晶以产生浅棕色固体形式的标题化合物（10.0克，83%）。
1c. 8-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮
在微波管瓶中装载5-溴-3,4-二氯吡啶-2-胺（300毫克，1.24毫摩尔）、8-boc-2,8-二氮杂-螺-[4.5]癸-1-酮（347毫克，1.36毫摩尔）和氟化钾（144毫克，2.48毫摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入三乙胺（0.48毫升，3.72毫摩尔）和NMP（3毫升），该混合物用高真空脱气并用氮气吹扫三次。反应混合物在微波中在220℃下加热2小时，冷却，然后加入乙酸乙酯和水并分离有机层。水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发溶剂。所得沉淀物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇）以产生含有5% NMP的白色固体形式的标题化合物（260毫克，60%）。
1d1. 8-(2-氨基-3-氯-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)苯基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(22)
在微波管瓶中装载8-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮（30.0毫克，0.083毫摩尔）、1-甲基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑（23.7毫克，0.083毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（3.05毫克，4.17微摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入乙腈（0.7毫升）和碳酸钠水溶液（0.5M, 0.23毫升，0.12毫摩尔），该混合物再用高真空脱气并再用氮气吹扫（各三次）。该混合物在微波中在120℃下加热1小时，然后借助氯仿/甲醇将其转移到烧瓶中并通过与甲苯共沸脱除两次来蒸发水。所得残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇），通过制备HPLC（Gilson，乙腈/水）进一步提纯并从乙酸乙酯中重结晶以产生白色固体形式的标题化合物（6.00毫克，16%）。
1d2. 6-(6-氨基-5-氯-4-(1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡啶-3-基)吲哚啉-2-酮(7)
在微波管瓶中装载8-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮（15.0毫克，0.042毫摩尔）、6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吲哚啉-2-酮（11.9毫克，0.046毫摩尔）和四(三苯基膦)钯(0)（2.41毫克，2.09微摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入乙腈（0.4毫升）和碳酸钠水溶液（0.5M, 0.18毫升，0.058毫摩尔），该混合物再用高真空脱气并用氮气吹扫三次。该混合物在微波中在120℃下加热1小时，然后借助氯仿/甲醇将其转移到烧瓶中并通过与甲苯共沸脱除两次来蒸发水。所得残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇）并从乙酸乙酯/乙醚中重结晶以产生白色固体形式的标题化合物（6.0毫克，35%）。
1d3. 8-(2-氨基-3-氯-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(16)
在微波管瓶中装载8-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮（30.0毫克，0.083毫摩尔）、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑（24.9毫克，0.088毫摩尔）和四(三苯基膦)钯(0)（4.82毫克，4.17微摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入乙腈（0.77毫升）和碳酸钠水溶液（0.5M, 0.23毫升，0.117毫摩尔），该混合物用高真空脱气并用氮气吹扫三次。该混合物在微波中在120℃下加热1小时，然后将其冷却并借助氯仿/甲醇转移到烧瓶中，并通过与甲苯共沸脱除两次来蒸发水。所得残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇），接着使用SCX2柱进一步提纯（用二氯甲烷/甲醇中的1N NH3洗脱）。从乙酸乙酯/乙醚中重结晶产生白色固体形式的标题化合物（10.0毫克，27%）。
另一方法是在置换反应的过程中保护吡啶的2-氨基官能。
2. 8-[2- 氨基 -3- 氯 -5-(1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 吡啶 -4- 基 ]-2,8- 二氮杂 - 螺 [4.5] 癸 -1- 酮 (25)
。
2a. 5-溴-3,4-二氯-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡啶
5-溴-3,4-二氯吡啶-2-胺（500毫克，2.07毫摩尔）、乙酰基丙酮（0.27毫升，2.27毫摩尔）和对甲苯磺酸一水合物（39.3毫克，0.21毫摩尔）在甲苯（3.5毫升）中的溶液在回流下搅拌5小时。将该混合物冷却至室温并在减压下蒸发溶剂。将残留物溶解在乙酸乙酯中并用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发溶剂。所得棕色油通过硅胶上的色谱法提纯（环己烷/乙酸乙酯）以产生浅棕色油形式的标题化合物（360毫克，55%）。
2b. 8-(5-溴-3-氯-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮
在微波管瓶中装载5-溴-3,4-二氯-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡啶（225毫克，0.70毫摩尔）和8-boc-2,8-二氮杂-螺-[4.5]癸-1-酮（197毫克，0.77毫摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入三乙胺（0.27毫升，2.11毫摩尔）和NMP（2.3毫升），该混合物用高真空脱气并用氮气吹扫三次。反应混合物在微波中在220℃下加热1小时，然后将其冷却并滴在剧烈搅拌的水（8毫升）中。滤出所得沉淀物，残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇）以产生浅棕色固体形式的标题化合物（153毫克，50%）。
2c. 8-(3-氯-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮
在微波管瓶中装载8-(5-溴-3-氯-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮（140毫克，0.32毫摩尔）、1-甲基-1H-吲唑-5-硼酸（61.9毫克，0.35毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（11.7毫克，0.016毫摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入乙腈（3毫升）和碳酸钠水溶液（0.5M, 0.895毫升，0.448毫摩尔），该混合物再用高真空脱气并再用氮气吹扫（各三次）。该混合物在微波中在120℃下加热1小时，然后借助氯仿/甲醇将其转移到烧瓶中并通过与甲苯共沸脱除两次来蒸发水。所得残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇）以产生浅棕色固体形式的标题化合物（126毫克，81%）。
2d. 8-(2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(25)
8-(3-氯-2-(2,5-二甲基-1H-吡咯-1-基)-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮（50.0毫克，0.102毫摩尔）和羟基胺盐酸盐（249毫克，3.58毫摩尔）在乙醇（0.6毫升）和水（0.3毫升）中的悬浮液在回流下搅拌8小时。将该混合物冷却至室温，然后加入二氯甲烷和饱和Na2CO3溶液并分离有机层。水层用二氯甲烷萃取两次。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发溶剂。残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇）并使用SCX2柱进一步提纯（用二氯甲烷/甲醇中的1N NH3洗脱）以产生白色固体形式的标题化合物（10.0毫克，24%）。
也可以以双(4-甲氧基苄基)衍生物而非2,5-二甲基-吡咯并衍生物的形式保护该吡啶的2-氨基官能。
3. 8-(2- 氨基 -3- 氯 -5-(4-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 苯基 ) 吡啶 -4- 基 )-2,8- 二氮杂螺 [4.5] 癸烷 -1,3- 二酮 (38) 和 8-[2- 氨基 -3- 氯 -5-(1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )- 吡啶 -4- 基 ]-2,8- 二氮杂 - 螺 [4.5] 癸 -1- 酮 (25)
。
3a. 5-溴-3,4-二氯-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-2-胺
将5-溴-3,4-二氯-吡啶-2-基胺（7.50克，31.0毫摩尔）溶解在DMF（75毫升）中并加入4-甲氧基苄基氯（12.4克，77.5毫摩尔）。在搅拌下，缓慢加入氢化钠（3.70克，93.0毫摩尔，在石蜡油中的60%溶液）并将该混合物在室温下搅拌2小时。加入600毫升饱和NaHCO3溶液并将该混合物用二氯甲烷（300毫升）萃取两次。合并有机层，用盐水洗涤，干燥并蒸发。残留物使用快速色谱法（石油醚/乙酸乙酯）提纯以获得灰白色固体（12.5克，25.9毫摩尔，84%）。
3b. 8-(2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-3-氯吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1,3-二酮
在微波管瓶中装载5-溴-3,4-二氯-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-2-胺（200毫克，0.415毫摩尔）、2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1,3-二酮（77.0毫克，0.456毫摩尔）和氟化钾（48.2毫克，0.830毫摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入三乙胺（0.16毫升，1.24毫摩尔）和NMP（1毫升），该混合物再用高真空脱气并再用氮气吹扫（各三次）。反应混合物在微波中在220℃下加热2小时，冷却，然后加入乙酸乙酯和水并分离有机层。水层用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发溶剂。残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇）以产生无色油形式的标题化合物。产物混合物不经进一步提纯即用于下一步骤。
3c. 8-(2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-3-氯-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1,3-二酮
在微波管瓶中装载8-(2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-溴-3-氯吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1,3-二酮（90.0毫克，0.110毫摩尔）、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑（34.4毫克，0.121毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（4.02毫克，5.50微摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入乙腈（0.8毫升）和碳酸钠水溶液（0.5M, 0.308毫升，0.154毫摩尔），该混合物再用高真空脱气并再用氮气吹扫（各三次）。该混合物在微波中在120℃下加热1小时，然后将其冷却并借助氯仿/甲醇转移到烧瓶中，通过与甲苯共沸脱除两次来蒸发水。所得残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇）以产生浅黄色油形式的标题化合物（35.0毫克，46%），其不经进一步提纯即用于下一步骤。
3d. 8-(2-氨基-3-氯-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1,3-二酮(38)
将8-(2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-3-氯-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-1,3-二酮（35.0毫克，0.051毫摩尔溶解在三氟乙酸（1毫升）中，并将该橙色溶液在室温下搅拌1小时。将该混合物逐滴添加到饱和NaHCO3中，然后加入二氯甲烷并分离有机层。水层用二氯甲烷萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发溶剂。滤出所得沉淀物，残留物通过硅胶上的色谱法提纯（环己烷/乙酸乙酯），接着使用SCX2柱提纯（用二氯甲烷/甲醇中的1N NH3洗脱）。所得白色固体最后通过制备HPLC（Gilson, 乙腈/水）提纯以产生白色固体形式的标题化合物（5.00毫克，经3个步骤为7%）。
3e. 8-{2-[双-(4-甲氧基-苄基)-氨基]-5-溴-3-氯-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
在微波管瓶中将(5-溴-3,4-二氯-吡啶-2-基)-双-(4-甲氧基-苄基)-胺（1.60克，3.32毫摩尔）、1-氧代-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯（1.52克，5.97毫摩尔）和三乙胺（0.755克，7.47毫摩尔）在NMP（10毫升）中在220℃下加热60分钟。将该混合物倒在水（600毫升）中，将形成的沉淀物过滤并洗涤。残留物使用快速色谱法（石油醚/乙酸乙酯）提纯。获得1.08克（1.80毫摩尔，54%）无色固体。
3f. 8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(25)
将8-{2-[双-(4-甲氧基-苄基)-氨基]-5-溴-3-氯-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮（500毫克，0.768毫摩尔）和1-甲基吲唑-5-硼酸（165毫克，0.94毫摩尔）悬浮在0.5 M碳酸钠溶液（2.5毫升）和乙腈（10毫升）中。将该混合物脱气，加入(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯二氯甲烷络合物（25.5毫克，0.031毫摩尔）并将该混合物在氮气气氛下在120℃下微波60分钟。将反应混合物蒸发至干并使用快速色谱法提纯。为了除去保护基，将残留物溶解在5毫升三氟乙酸中并在室温下搅拌2小时。将该溶液蒸发至干，加入20毫升水并添加固体碳酸氢钠以调节弱碱性pH，水层用二氯甲烷萃取两次。有机层经硫酸钠干燥，蒸发并使用快速色谱法（甲醇/二氯甲烷）提纯。获得无色油形式的143毫克（0.348毫摩尔，45%（2步骤））标题化合物。
已通过上述方法之一制备化合物1、3、7、12、13、14、15、16、17、18、19、22、23、24、25、26、28、32、33、35、38、39、43、44、49、58、59、62、67、69、70、71、72和73。
使用相同反应级联使1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮或2,4-二氧代-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯与未保护或保护的5-溴-3,4-二氯-吡啶-2-基胺反应，如果适用，接着Suzuki反应和脱保护，以产生2、4、5、6、8、9、10、20、21、29、34、36、37、41、42、54、55、60和63。
4. 1'-(2- 氨基 -3- 氯 -5-(1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 ) 吡啶 -4- 基 ) 螺 [ 吲哚啉 -3,4'- 哌啶 ]-2- 酮 (31) 和 1'-(2- 氨基 -3- 氯 -5-(4-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 苯基 ) 吡啶 -4- 基 ) 螺 [ 吲哚啉 -3,4'- 哌啶 ]-2- 酮 (11)
。
4a. 1'-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮
在微波管瓶中装载5-溴-3,4-二氯-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-2-胺（100毫克，0.413毫摩尔）、螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮（92.0毫克，0.455毫摩尔）和氟化钾（48.0毫克，0.827毫摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入三乙胺（0.159毫升，1.24毫摩尔）和NMP（1毫升），该混合物再用高真空脱气并再用氮气吹扫（各三次）。反应混合物在微波中在220℃下加热1.5小时，然后将该混合物逐滴添加到剧烈搅拌的水（20毫升）中。滤出所得沉淀物并通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇）。从乙酸乙酯/乙醚中重结晶产生白色固体形式的标题化合物（45.5毫克，27%）。
4b1. 1'-(2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)吡啶-4-基)螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮(31)
在微波管瓶中装载1'-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮（20.0毫克，0.049毫摩尔）、1-甲基-1H-吲唑-5-基硼酸（8.63毫克，0.049毫摩尔）和四(三苯基膦)钯(0)（2.83毫克，2.45微摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入乙腈（0.5毫升）和碳酸钠水溶液（0.5M, 0.137毫升，0.069毫摩尔），该混合物再用高真空脱气并再用氮气吹扫（各三次）。该混合物在微波中在120℃下加热1小时，然后借助氯仿/甲醇将其转移到烧瓶中并通过与甲苯共沸脱除两次来蒸发水。所得残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇），接着使用SCX2柱提纯（用二氯甲烷/甲醇中的1N NH3洗脱）。从乙酸乙酯/乙醚中重结晶产生白色固体形式的标题化合物（10.0毫克，44%）。
4b2. 1'-(2-氨基-3-氯-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)吡啶-4-基)螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮(11)
在微波管瓶中装载1'-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮（22毫克，0.054毫摩尔）、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑（15.3毫克，0.054毫摩尔）和四(三苯基膦)钯(0)（3.12毫克，2.70微摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入乙腈（0.6毫升）和碳酸钠水溶液（0.5M, 0.151毫升，0.076毫摩尔），该混合物再用高真空脱气并再用氮气吹扫（各三次）。该混合物在微波中在120℃下加热1小时，然后借助氯仿/甲醇将其转移到烧瓶中并通过与甲苯共沸脱除两次来蒸发水。所得残留物通过硅胶上的色谱法提纯（二氯甲烷/乙醇），接着通过制备HPLC（Gilson，乙腈/水）进一步提纯以产生白色固体形式的标题化合物（10.0毫克，38%）。
5. 8-(2- 氨基 -5-(1- 甲基 -1H- 吲唑 -5- 基 )-3-( 三氟甲基 ) 吡啶 -4- 基 )-2,8- 二氮杂螺 [4.5] 癸 -1- 酮 (39)
。
5a. 5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯
在0℃下在氮气气氛下将NaH（0.398克，9.96毫摩尔）添加到5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺（1.00克，4.15毫摩尔）在THF（40毫升）中的溶液中。该反应在室温下搅拌60分钟，此后将该反应冷却至0℃并加入在THF（10毫升）中的Boc2O（0.906克，4.15毫摩尔）。将该反应升温至室温并搅拌16小时。用饱和NaHCO3（水溶液）淬灭该反应并用乙醚萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发溶剂。通过快速色谱法（EtOAc/环己烷）提纯不成功，产物仍被大约4%的未反应起始材料污染。升华整夜（30毫巴，110℃）提供无色晶体形式的产物（0.54克，38%）。
5b.5-溴-4-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯
在–78℃下在氮气气氛下将丁基锂（1.6 M在己烷中，0.766毫升，1.23毫摩尔）添加到在THF（3.5毫升）中的二异丙基胺（0.189毫升，1.34毫摩尔）中。在30分钟后逐滴加入在THF（1.5毫升）中的5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯（190毫克，0.557毫摩尔），以产生深黄色溶液。在1小时后，将在THF（1毫升）中的六氯乙烷（343毫克，1.448毫摩尔）逐滴添加到该黄褐色悬浮液中，以产生深褐色溶液。在–78℃下搅拌80分钟后，使该反应经15分钟升温至室温，然后用饱和NH4Cl（水溶液）淬灭。用乙醚（3x）萃取该反应混合物，合并的有机层用水（2x）和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱法（EtOAc/环己烷）提纯以产生乳膏固体形式的产物（157毫克，75%）。
5c. 5-溴-4-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将5-溴-4-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯（150毫克，0.399毫摩尔）溶解在DCM（2毫升）中并在室温下加入TFA（2毫升）。在2.5小时后，反应完成并蒸发溶剂。将粗产物再溶解在DCM中并用Na2CO3水溶液（0.5 M）和盐水洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发溶剂以产生浅黄色固体形式的产物（109毫克，99%）。
5d. 8-(2-氨基-5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮
使5-溴-4-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-胺（87.0毫克，0.316毫摩尔）、1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯（241毫克，0.948毫摩尔）和三乙胺（0.044毫升，0.316毫摩尔）在2-甲氧基-2-异丙醇（1毫升）中的混合物在氮气气氛下在微波中在220℃下反应2小时。蒸发溶剂，粗产物通过快速色谱法（DCM/MeOH）提纯以产生浅黄色固体形式的标题化合物（35.0毫克，28%）。
5e. 8-(2-氨基-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(39)
在微波管瓶中装载8-(2-氨基-5-溴-3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮（22.0毫克，0.056毫摩尔）、1-甲基-1H-吲唑-5-基硼酸（10.8毫克，0.062毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（2.30毫克，2.80微摩尔），将其密封并用氮气吹扫。加入乙腈（0.7毫升）和碳酸钠水溶液（0.5 M，0.154毫升，0.077毫摩尔），除去橡胶隔片并将管瓶加盖。反应混合物在微波中在120℃下加热75分钟，然后浓缩。通过快速色谱法（DCM/MeOH），接着制备TLC（MeOH/DCM）提纯提供白色固体形式的标题化合物（3.30毫克，13%）。
6. 1-(2- 氨基 -3- 氯 -5-(4-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 苯基 ) 吡啶 -4- 基 ) 哌啶 -4- 甲腈 (30) 和 1-(2- 氨基 -3- 氯 -5-(4- 吗啉苯基 ) 吡啶 -4- 基 ) 哌啶 -4- 甲腈 (27)
。
6a. 1-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)哌啶-4-甲腈
将5-溴-3,4-二氯吡啶-2-胺（400毫克，1.65毫摩尔）溶解在NMP（2.5毫升）中并加入4-氰基哌啶（911毫克，8.27毫摩尔）。将该管瓶密封并置于高真空下直至冒泡停止。在5次真空/氮气循环后，除去隔片，将管瓶加盖并在微波中在氮气气氛下在200℃下加热3小时。将该反应倒入水中并用EtOAc/cHex（1:1, 3x）萃取。合并的有机层用水（2x）和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱法（EtOAc/环己烷/DCM）提纯以产生白色固体形式的产物（0.393克，75%）。
6b. 1-(2-氨基-3-氯-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)吡啶-4-基)哌啶-4-甲腈(30)
在微波管瓶中装载1-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)哌啶-4-甲腈（50.0毫克，0.158毫摩尔）、4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基硼酸（36.6毫克，0.166毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（6.47毫克，7.92微摩尔），将其密封并用氮气吹扫，加入乙腈（1毫升）和碳酸钠水溶液（0.5 M，0.437毫升，0.219毫摩尔），将管瓶加盖，并在微波中在120℃下加热1小时。蒸发溶剂并通过快速色谱法（"在MeOH中的1M NH3"/DCM）提纯。少量杂质与产物共洗脱，随后通过从热EtOAc中重结晶除去以产生白色固体形式的标题化合物（20.0毫克，31%）。
6c. 1-(2-氨基-3-氯-5-(4-吗啉苯基)吡啶-4-基)哌啶-4-甲腈(27)
根据上文使用的程序使1-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)哌啶-4-甲腈（50.0毫克，0.158毫摩尔）与4-吗啉苯基硼酸（34.4毫克，0.166毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2（6.47毫克，7.92微摩尔）在乙腈（1毫升）中反应。通过快速色谱法（"在MeOH中的1M NH3"/DCM）提纯，接着从热EtOAc中重结晶提供白色固体形式的标题化合物（20.0毫克，32%）。
以类似方式，可以使4-哌啶甲酰胺（isonipecotamide）或其衍生物代替4-氰基哌啶反应。这些中间体还发生Pd催化的反应以形成最终化合物47和48。
7. 8-(2- 氨基 -3- 氯 -5-(1- 甲基 -2,2- 二氧化 -1,3- 二氢苯并 [c] 异噻唑 -5- 基 ) 吡啶 -4- 基 )-2,8- 二氮杂螺 [4.5] 癸 -1- 酮 (26)
。
7a. (2-氯苯基)甲磺酰胺
将2-氯苄基磺酰氯（1.86克，8.26毫摩尔）溶解在丙酮（27毫升）中，然后加入氢氧化铵（18.0毫升，158毫摩尔）。将该反应在室温下搅拌2.5小时并蒸发溶剂。反应混合物用乙酸乙酯稀释并加入水。分离这两层，用乙酸乙酯萃取水层。合并的有机层经硫酸镁干燥并在真空下浓缩。粗产物通过柱色谱法（DCM/EtOH）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（1.50克，88%）。
7b. 1,3-二氢苯并[c]异噻唑2,2-二氧化物
在微波管瓶中装载(2-氯苯基)甲磺酰胺（450毫克，2.19毫摩尔）、三(二亚苄基丙酮)二钯（100毫克，0.109毫摩尔）、2-二-叔丁基膦基-2′,4′,6′-三-异丙基联苯（186毫克，0.438毫摩尔）和碳酸钾（605毫克，4.38毫摩尔）并加入THF（8.8毫升）。反应混合物在80℃下搅拌13小时，然后用饱和氯化铵溶液淬灭。然后蒸发溶剂，残留物通过柱色谱法（环己烷/丙酮）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（296毫克，80%）。
7c. 1-甲基-1,3-二氢苯并[c]异噻唑-2,2-二氧化物
向1,3-二氢苯并[c]异噻唑-2,2-二氧化物（280毫克，1.655毫摩尔）和碳酸钾（229毫克，1.66毫摩尔）在DMF（5毫升）中的悬浮液中加入碘甲烷（414微升，6.62毫摩尔）。将该反应在室温下搅拌6小时，然后用饱和氯化铵溶液淬灭。将反应混合物浓缩并通过柱色谱法（环己烷/丙酮）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（270毫克，89%）。
7d. 5-溴-1-甲基-1,3-二氢苯并[c]异噻唑-2,2-二氧化物
将1-甲基-1,3-二氢苯并[c]异噻唑-2,2-二氧化物（272毫克，1.49毫摩尔）溶解在DMF（1.5毫升）中，然后加入N-溴琥珀酰亚胺（264毫克，1.49毫摩尔）。将反应混合物在室温下搅拌4小时。在加入水后，将反应混合物浓缩。残留物通过柱色谱法（环己烷/丙酮）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（330毫克，85%）。
7e. 1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3-二氢苯并[c]异噻唑2,2-二氧化物
在微波管瓶中装载5-溴-1-甲基-1,3-二氢苯并[c]异噻唑-2,2-二氧化物（267毫克，1.02毫摩尔）、双联频哪醇硼酸酯（388毫克，1.53毫摩尔）、乙酸钾（300毫克，3.06毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（42.0毫克，0.051毫摩尔）并加入DME（7.4毫升）。该反应在油浴中在80℃下搅拌整夜。浓缩该反应并通过柱色谱法（环己烷/丙酮）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（290毫克，92%）。
7f. 8-(2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-2,2-二氧化-1,3-二氢苯并[c]异噻唑-5-基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮(26)
在微波管瓶中装载8-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮（40.0毫克，0.111毫摩尔）、1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3-二氢苯并[c]异噻唑-2,2-二氧化物（41.0毫克，0.133毫摩尔）和四(三苯基膦)钯(0)（6.40毫克，5.56微摩尔），然后加入脱气乙腈（2毫升）和脱气0.5 M碳酸钠水溶液（310微升，0.156毫摩尔）。该反应在微波辐射下在120℃下加热60分钟。然后，将反应混合物浓缩并通过柱色谱法（DCM/EtOH）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（22毫克，43%）。
另一些硼酸（boronic acids）或酯的制备:
1- 甲基 -4-(4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 ) 苯基 )-1H- 吡唑的制备
。
7g. 4-(4-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑
在烧瓶中装载1-氯-4-碘苯（6.39克，26.8毫摩尔）、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑（5.58克，26.8毫摩尔）、碳酸钠（6.25克，59.0毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（2.20克，2.68毫摩尔），然后加入THF/H2O 3/1混合物（117毫升）。反应混合物在油浴中在80℃下加热整夜。其然后在真空下浓缩，残留物通过柱色谱法（环己烷/EtOAc）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（3.80克，74%）。
7h. 1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑
在烧瓶中装载4-(4-氯苯基)-1-甲基-1H-吡唑（3.30克，17.1毫摩尔）、双联频哪醇硼酸酯（5.20克，20.6毫摩尔）、乙酸钾（5.00克，51.4毫摩尔）、Xphos（650毫克，1.37毫摩尔）和Pd2dba3（310毫克，0.343毫摩尔），然后加入二氧杂环己烷（34.3毫升）。反应混合物在油浴中在85℃下搅拌整夜。蒸发溶剂，粗产物通过柱色谱法（环己烷/EtOAc）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（3.9克，被10% 1-甲基-4-苯基-1H-吡唑污染，校正收率75%）。
7i. 6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吲哚啉-2-酮
如下装载四个微波管瓶：将6-溴吲哚啉-2-酮（500毫克，2.36毫摩尔）、双联频哪醇硼酸酯（898毫克，3.54毫摩尔）、乙酸钾（694毫克，7.07毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（96.0毫克，0.118毫摩尔）溶解在DME（17毫升）中。该反应在80℃下加热整夜。然后合并四个管瓶的内容物，浓缩并通过柱色谱法（环己烷/EtOAc）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（2.27克，75%，纯度80%）。
7j. 1-甲基-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑
3-(4-溴苯基)-1-甲基-1H-吡唑（500毫克，2.11毫摩尔）、双联频哪醇硼酸酯（876毫克，3.45毫摩尔）、乙酸钾（621毫克，6.33毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（86毫克，0.105毫摩尔）在微波管瓶中装载，然后加入DME（15毫升）。将反应混合物在油浴中在80℃下搅拌整夜，然后浓缩。残留物通过柱色谱法（环己烷/EtOAc）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（551毫克，92%）。
7k. 5-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-吡啶-2-基胺
将5-溴-吡啶-2-基胺（98%，500毫克，2.89毫摩尔）和1,4-苯二硼酸双(频哪醇)酯（1.40克，4.25毫摩尔）悬浮在1M碳酸钠溶液（5.7毫升）和乙腈（10毫升）中。将该混合物脱气，加入(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯二氯甲烷络合物（116毫克，0.143毫摩尔）并将该混合物在氮气气氛下在120℃下微波60分钟。过滤反应混合物，浓缩滤液并使用快速色谱法提纯。获得534毫克（1.80毫摩尔，64%）无色油。
1-[2-( 四氢 - 吡喃 -2- 基氧基 )- 乙基 ]-4-[4-(4,4,5,5- 四甲基 -[1,3,2] 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )- 苯基 ]-1H- 吡唑的制备
。
7l. 4-(4-溴-苯基)-1-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙基]-1H-吡唑
将4-(4-溴苯基)吡唑（2.00克，8.97毫摩尔）溶解在乙腈（300毫升）中。加入碳酸铯（4.38克，13.4毫摩尔）和2-(2-溴-乙氧基)-四氢-吡喃（96%，2.54克，11.7毫摩尔）并将该混合物在室温下搅拌整夜。随后，将该混合物在70℃下搅拌24小时。该浅黄色反应混合物经硅藻土过滤并用乙酸乙酯洗涤。将滤液蒸发至干并且不经进一步提纯即用于下一步骤以产生黄色油（94%纯度，3.10克，8.31毫摩尔，93%）。
7m. 1-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙基]-4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-1H-吡唑
将4-(4-溴-苯基)-1-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙基]-1H-吡唑（93%, 3.10克，8.31毫摩尔）溶解在THF（100毫升）中，加入双联频哪醇硼酸酯（4.22克，16.6毫摩尔）、乙酸钾（2.45克，24.9毫摩尔）和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯二氯甲烷络合物（664毫克，0.83毫摩尔）并将该混合物在氮气气氛下在70℃下搅拌整夜。反应混合物用乙酸乙酯稀释，过滤并蒸发。该深褐色残留物通过快速色谱法（二氯甲烷/甲醇）提纯以产生2.35克（94%纯度，5.55毫摩尔，67%）黄色粘性油。
在如3f中所述的使用TFA将吡啶的氨基官能脱保护的条件下裂解掉THP保护基。
(3- 氨基 -1H- 吲唑 -6- 基 ) 硼酸的制备
。
7n. 3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-吲唑-1-甲酸叔丁酯
将6-溴-1H-吲唑-3-胺（500毫克，2.36毫摩尔）溶解在THF（10毫升）中。加入二碳酸二叔丁酯（2.52毫升，11.8毫摩尔）和三乙胺（3.27毫升，23.6毫摩尔）并将该反应在室温下搅拌3天。将反应混合物倒入100毫升水中。该混合物用乙酸乙酯萃取两次。有机层用水洗涤，干燥，过滤并蒸发至干以产生1.42克（73%纯度，2.02毫摩尔，86%）棕色油。
7o. 3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吲唑-1-甲酸叔丁酯
将3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-溴-吲唑-1-甲酸叔丁酯（86 %、1.14克，1.91毫摩尔）溶解在四氢呋喃（16毫升）中。加入双联频哪醇硼酸酯（486毫克，1.91毫摩尔）和乙酸钾（375毫克，3.83毫摩尔）。将该混合物脱气，加入(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯二氯甲烷络合物（78.1毫克，0.096毫摩尔）并将该混合物在氮气气氛下在70℃下搅拌整夜。加入另外的双联频哪醇硼酸酯（486毫克，191毫摩尔）、乙酸钾（130毫克，1.33毫摩尔）和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)-二氯化钯二氯甲烷络合物（78.1毫克，0,096毫摩尔）并将反应混合物在氮气气氛下在70℃下搅拌4小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，过滤并蒸发。该深褐色残留物通过快速色谱法（庚烷/二氯甲烷）提纯以产生1.00克（1.79毫摩尔，94%）黄色玻璃状固体。
7p. (3-氨基-1H-吲唑-6-基)硼酸
在二氧杂环己烷（25毫升）中用氯化氢溶液（4M在二氧杂环己烷中，5毫升，20.0毫摩尔）处理3-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吲唑-1-甲酸叔丁酯（1克，1.79毫摩尔）。该浅黄色溶液在室温下搅拌整夜。将该溶液蒸发至干，残留物用乙醚处理以获得灰白色固体。过滤该混合物并用乙醚洗涤。将该残留物干燥整夜以产生浅棕色固体（370毫克，1.73毫摩尔，97%），其被确定为是HCl盐。
8. 8. 9-(2- 氨基 -3- 氯 -5-(4-(1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 苯基 ) 吡啶 -4- 基 )-1,4,9- 三氮杂螺 [5.5] 十一烷 -5- 酮 (40)
。
8a. 9-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮
在微波管瓶中装载5-溴-3,4-二氯吡啶-2-胺（450毫克，1.86毫摩尔）、5-氧代-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸叔丁酯（501毫克，1.86毫摩尔）和氟化钾（216毫克，3.72毫摩尔）。加盖的管瓶用高真空排空并用氮气吹扫（各三次）。加入三乙胺（0.715毫升，5.58毫摩尔）和NMP（4.5毫升），该混合物再用高真空脱气并再用氮气吹扫（各三次）。反应混合物在微波中在220℃下加热2小时。该深褐色溶液用水和EtOAc稀释并分离有机层。水层用EtOAc萃取两次。合并的有机层用水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发溶剂。所得棕色油通过硅胶上的色谱法提纯（CH2Cl2/EtOH）以产生白色固体形式的产物（380毫克，55%）。
8b. 9-(2-氨基-3-氯-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)吡啶-4-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮(40)
在微波管瓶中装载1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑（45.5毫克，0.16毫摩尔）、9-(2-氨基-5-溴-3-氯吡啶-4-基)-1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-5-酮（50.0毫克，0.133毫摩尔）和四(三苯基膦)钯(0)（7.70毫克，6.67微摩尔），然后加入脱气乙腈（2.4毫升）和脱气0.5 M碳酸钠水溶液（374微升，0.156毫摩尔）。该反应在微波辐射下在120℃下加热60分钟。然后反应混合物在减压下浓缩并通过柱色谱法（DCM/EtOH）提纯。所得固体用热EtOAc研磨并滤出。然后将该固体溶解在DCM和MeOH的混合物中并在SCX-2柱上过滤。用MeOH中的1M氨释放产物以提供白色固体形式的标题化合物（29.0毫克，50%）。
根据这一程序，还合成化合物45和46。
9. 8-[2- 氨基 -3- 氟 -5-(1- 甲基 -2,2- 二氧代 -2,3- 二氢 -1H-2l6- 苯并 [c] 异噻唑 -5- 基 )- 吡啶 -4- 基 ]-2,8- 二氮杂 - 螺 [4.5] 癸 -1- 酮 (61) 和 8-[2- 氨基 -3- 氟 -5-(1- 甲基 -2,2- 二氧代 -2,3- 二氢 -1H-2l6- 苯并 [c] 异噻唑 -5- 基 )- 吡啶 -4- 基 ]-1- 氧杂 -3,8- 二氮杂 - 螺 [4.5] 癸 -2- 酮 (60)
。
9a. 4,5-二氯-3-氟吡啶-2-胺
在-78℃下向LDA（8.0毫升，15.93毫摩尔）在THF（31毫升）中的溶液中加入5-氯-3-氟吡啶-2-胺（934毫克，6.37毫摩尔）在THF（9.0毫升）中的溶液。在-78℃下50分钟后，加入六氯乙烷（1.40毫升，12.75毫摩尔）在THF（9.0毫升）中的溶液。将反应混合物搅拌40分钟，然后用NH4Cl淬灭。分离各层，水层用DCM萃取两次。合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发溶剂。粗制混合物通过硅胶上的色谱法（DCM）提纯以产生白色固体形式的标题化合物（950毫克，82%）。
9b. 8-(2-氨基-5-氯-3-氟吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮
在微波管瓶中引入4,5-二氯-3-氟吡啶-2-胺（100毫克，0.55毫摩尔）和1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-甲酸叔丁酯（211毫克，0.83毫摩尔），然后加入NMP（1.4毫升）。将该管瓶密封并置于高真空下直至冒泡停止。在3次真空/氩气循环后，加入三乙胺（230微升，1.69毫摩尔）并将反应混合物在微波中在220℃下加热2小时。将反应混合物浓缩，粗产物通过硅胶上的色谱法（DCM/EtOH）提纯以产生白色固体形式的标题化合物（105毫克，64%）。
9c. 8-[2-氨基-3-氟-5-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(61)
在微波管瓶中装载8-(2-氨基-5-氯-3-氟吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮（20毫克，6.7微摩尔）、1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3 二氢苯并[c]异噻唑2,2-二氧化物（27毫克，8.7微摩尔）和反式-二氯双(三环己基膦)钯（2.50毫克，3.35微摩尔），然后加入脱气乙腈（1.1毫升）和脱气0.5 M碳酸钠水溶液（187微升，9.4微摩尔）。反应混合物在微波辐射下在150℃下加热30分钟。蒸发溶剂，产物通过柱色谱法（DCM/EtOH）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（17毫克，57%）。
根据这一程序，还合成化合物64。
9d. 8-(2-氨基-5-氯-3-氟吡啶-4-基)-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-酮
在微波管瓶中引入4,5-二氯-3-氟吡啶-2-胺（100毫克，0.55毫摩尔）和1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-酮乙酸盐（178毫克，0.83毫摩尔），然后加入NMP（1.4毫升）。将该管瓶密封并置于高真空下直至冒泡停止。在3次真空/氩气循环后，加入三乙胺（233微升，1.66毫摩尔）并将反应混合物在微波中在220℃下加热5小时。将反应混合物浓缩，固体用DCM，然后用MeOH洗涤，以产生白色固体形式的标题化合物（60毫克，36%）。
9e. 8-[2-氨基-3-氟-5-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮(60)
在微波管瓶中装载8-(2-氨基-5-氯-3-氟吡啶-4-基)-1-氧杂-3,8-二氮杂螺[4.5]癸-2-酮（30毫克，0.10毫摩尔）、1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3二氢苯并[c]异噻唑2,2-二氧化物（62.0毫克，0.20毫摩尔）和反式-二氯双(三环己基膦)钯（3.7毫克，4.99微摩尔）。然后加入脱气乙腈（1.7毫升）和脱气0.5 M碳酸钠水溶液（280微升，0.14毫摩尔）。该反应在微波辐射下在150℃下加热30分钟。然后将反应混合物浓缩并通过柱色谱法（DCM/EtOH）提纯以提供白色固体形式的标题化合物（15毫克，34%）。
根据这一程序，还合成化合物63。
10. 8-[2- 氨基 -3- 氯 -5-(2- 乙基 -1,1- 二氧代 -2,3- 二氢 -1H-1l6- 苯并 [d] 异噻唑 -5- 基 )- 吡啶 -4- 基 ]-2,8- 二氮杂 - 螺 [4.5] 癸 -1- 酮 (68)
。
10a. 4-溴-N-(叔丁基)-2-甲基苯磺酰胺
在-20℃（含有CH3CN的干冰浴）下在含有溶解在无水DCM（50毫升）中的3-溴甲苯（3.55毫升，29.2毫摩尔）的在N2下的100毫升三颈烧瓶中经15分钟逐滴加入氯磺酸（13.7毫升，205毫摩尔）。将反应混合物在N2下在0℃下搅拌2小时并在室温下搅拌4小时。将反应混合物小心倒在冰上，所得悬浮液用DCM萃取（3次，80毫升）。合并的有机相用冷饱和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并浓缩直至达到50毫升。
在室温下向含有溶解在无水DCM（30毫升）中的三乙胺（4.27毫升，30.7毫摩尔）和叔丁基胺（3.23毫升，30.7毫摩尔）的在N2下的100毫升三颈烧瓶中加入如上制成的磺酰氯溶液。经20分钟进行添加，使温度保持在20℃以下。将反应混合物在室温下搅拌15小时直至完成。
该混合物用HCl（0.1 N，100毫升）、NaHCO3饱和溶液和盐水洗涤。然后经MgSO4干燥、过滤和浓缩产生淡黄色固体形式的标题化合物（8.09克，90 %）。
10b. 5-溴-2-叔丁基-2,3-二氢-1,2-苯并异噻唑1,1-二氧化物
在室温下在含有在CHCl3（40毫升）中的4-溴-N-(叔丁基)-2-甲基苯磺酰胺（8.09克，26.4毫摩尔）的150毫升烧瓶中，一次性加入N-溴琥珀酰亚胺（4.70克，26.4毫摩尔），接着α,α'-偶氮异丁腈（86.8毫克，0.53毫摩尔）。反应混合物在回流下搅拌16小时。
浓缩和在MeOH（40毫升）中稀释后，加入氢氧化钠（2.11克，52.8毫摩尔）并将反应混合物在室温下在剧烈搅动下搅拌3小时。将该混合物倒入水中并将所得悬浮液过滤以产生白色固体，其用乙醚洗涤并干燥产生白色固体形式的标题化合物（1.72克，21.4 %）。
10c. 5-溴-2,3-二氢-苯并[d]异噻唑1,1-二氧化物
在螺旋盖管瓶中，将5-溴-2-叔丁基-2,3-二氢-苯并[d]异噻唑1,1-二氧化物（388毫克，1.28毫摩尔）溶解在三氟乙酸（6毫升）中并在50℃下搅拌16天。将该混合物蒸发至干。该浅米色残留物通过快速色谱法（正庚烷/DCM）提纯以产生316毫克（1.28毫摩尔，100%）灰白色固体。Rt = 2.063 min (HPLC方法A)。
10d. 5-溴-2-乙基-2,3-二氢-苯并[d]异噻唑1,1-二氧化物
在12毫升螺旋盖容器中，将5-溴-2,3-二氢-苯并[d]异噻唑1,1-二氧化物（316毫克，1.28毫摩尔）溶解在DMF（8毫升）中，加入碳酸钾（0.44克，3.20毫摩尔）和碘乙烷（399毫克，2.56毫摩尔）并将反应混合物在室温下搅拌2天。用50毫升水处理该混合物。所形成的白色沉淀物在真空下过滤并用水洗涤。将该固体溶解在DCM中，经相分离器过滤并蒸发至干以产生246毫克（60%）灰白色固体形式的标题化合物。Rt = 2.477 min (HPLC方法A)。
10e. 5-二羟基硼烷基-2-乙基-2,3-二氢-苯并[d]异噻唑1,1-二氧化物
在50毫升螺旋盖容器中将5-溴-2-乙基-2,3-二氢-苯并[d]异噻唑1,1-二氧化物（246毫克，0.89毫摩尔）溶解在四氢呋喃（最多0.0075% H2O，15毫升）中。加入双联频哪醇硼酸酯（339毫克，1.34毫摩尔）、乙酸钾（262毫克，2.67毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（72.7毫克，0.089毫摩尔）。该红色反应混合物在70℃下搅拌16小时。该深褐色反应混合物用乙酸乙酯处理，过滤并蒸发。粗制残留物通过快速色谱法（正庚烷/DCM）提纯以产生107毫克（45%）白色固体形式的标题化合物。Rt = 1.82 min (HPLC方法A)。
10f. 8-[2-[双-(4-甲氧基-苄基)-氨基]-3-氯-5-(2-乙基-1,1-二氧代-2,3-二氢-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
在微波管瓶中将8-{2-[双-(4-甲氧基-苄基)-氨基]-5-溴-3-氯-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮（188毫克，0.25毫摩尔）悬浮在乙腈（4毫升）中。加入5-溴-2,3-二氢-苯并[d]异噻唑1,1-二氧化物（67.0毫克，0.25毫摩尔）、碳酸钠溶液（1毫升，0.50毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（18.3毫克，0.025毫摩尔）。将该封闭管瓶抽空，用氮气吹扫3次并在微波炉（Emrys Optimizer）中在120℃下搅动1小时。该反应混合物用乙酸乙酯处理，过滤并蒸发。该粗制棕色残留物通过快速色谱法（正庚烷/DCM/MeOH）提纯以产生167毫克（67%）白色固体形式的标题化合物。Rt = 2.953 min (HPLC方法A)。
10g. 8-[2-氨基-3-氯-5-(2-乙基-1,1-二氧代-2,3-二氢-1H-1l6-苯并[d]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(68)
在100毫升圆底烧瓶中将8-[2-[双-(4-甲氧基-苄基)-氨基]-3-氯-5-(2-乙基-1,1-二氧代-2,3-二氢-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮（167毫克，0.168毫摩尔）溶解在三氟乙酸（3毫升）中。该深红色反应溶液在室温下搅拌整夜。将反应混合物蒸发。将红色残留物溶解在DCM中。添加水和固体碳酸钠以调节pH= 9。其经相分离器过滤并蒸发DCM层。该棕色残留物用乙腈处理以获得白色沉淀物。在真空下过滤反应混合物，用乙腈和乙醚洗涤并在真空中干燥2小时以产生43毫克（53%）白色固体形式的标题化合物。
11. 外消旋反式 -2'- 氨基 -3'- 氯 -3- 羟基 -5'-(1- 甲基 -2,2- 二氧代 -2,3- 二氢 -1H-2l6- 苯并 [c] 异噻唑 -5- 基 )-3,4,5,6- 四氢 -2H-[1,4'] 联吡啶 -4- 甲腈 (57)
。
11a. 外消旋反式-5'-溴-3'-氯-3-羟基-2'-(4-甲氧基-苄基氨基)-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲腈
在15毫升微波合成管中将5-溴-3,4-二氯-吡啶-2-基)-双-(4-甲氧基-苄基)-胺（1.00克，2.07毫摩尔）和外消旋反式-4-氰基-3-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（493毫克，2.18毫摩尔）溶解在1-甲基-2-吡咯烷酮（5毫升）中并在室温下加入三乙胺（0.57毫升，4.15毫摩尔）。密封该管，抽空并用氮气吹扫。该反应混合物在微波中在220℃下搅拌2小时。HPLC/MS显示所需产物质量和单保护的PMB产物以及起始材料的质量。将该混合物在微波炉中在220℃下进一步加热8小时：没有检测到起始材料，只有单-PMB产物的质量。蒸发溶剂，将残留物溶解在乙酸乙酯中，有机层用水洗涤三次，然后用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱法提纯以产生205毫克（13%）灰白色固体形式的标题化合物。
11b. 外消旋反式-3'-氯-3-羟基-2'-(4-甲氧基-苄基氨基)-5'-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2λ6-苯并[c]异噻唑-5-基)-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲腈
在微波合成容器中装入外消旋反式-5'-溴-3'-氯-3-羟基-2'-(4-甲氧基-苄基氨基)-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲腈（100毫克，0.133毫摩尔）、1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3-二氢-苯并[c]异噻唑2,2-二氧化物（50.3毫克，0.159毫摩尔）、碳酸钾（36.7毫克，0.266毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（5.42毫克，0.007毫摩尔），然后加入乙腈（5毫升）和水（2毫升）。将该混合物在微波炉中在120℃下搅拌1小时。蒸发溶剂，将残留物溶解在乙腈中并滤出不溶盐。蒸发滤液且粗产物通过制备色谱法提纯。合并清澈级分并蒸发产生32.3毫克（42%）无色固体形式的所需产物。
11c. 外消旋反式-2'-氨基-3'-氯-3-羟基-5'-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲腈(57)
将外消旋反式-3'-氯-3-羟基-2'-(4-甲氧基-苄基氨基)-5'-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2λ6-苯并[c]异噻唑-5-基)-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲腈（32.3毫克，0.055毫摩尔）溶解在三氟乙酸（3毫升）中并在室温下搅拌1小时（黄色溶液变成红色）。使该混合物在室温下搅拌16小时。在减压下蒸发三氟乙酸，残留物通过制备色谱法提纯。将残留物再溶解在乙酸乙酯中并用饱和Na2CO3溶液洗涤一次以产生游离碱，用硫酸钠干燥，蒸发并冻干以获得17.3毫克（72%）无色固体形式的所需产物。
根据这一程序合成化合物56。
通过手性HPLC在标准条件下分离对映体：
机器：SFC MiniGram®
柱：Chiralpak AS-H, 250x4.6 mm
洗脱剂：CO2 + 30%甲醇 + 0.5%二乙胺
流速：5 mL/min.
λ = 220 nm
样品注射：100 µL/次运行 (溶解在5毫升甲醇中的50毫克样品)
Rt (化合物65) = 4.20 min, 19.9 mg
Rt (化合物66) = 5.90 min, 21.2 mg。
新型硼酸酯
12. 1- 乙基 -4-(4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 ) 苯基 )-1H- 吡唑和 1- 异丙基 -4-(4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 ) 苯基 )-1H- 吡唑的制备
。
12a. 4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑
在烧瓶中装载4-(4-溴苯基)-1H-吡唑（1.00克，4.48毫摩尔）、双联频哪醇硼酸酯（bis(pinacolate)diborane）（1.70克，6.72毫摩尔）、乙酸钾（1.32克，13.45毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（183毫克，0.224毫摩尔）并加入DME（32.5毫升）。该反应在80℃下加热整夜。加入另外170毫克Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2并将反应混合物加热另外30小时。在加入水和DCM后，用DCM萃取水层。有机层经MgSO4干燥，过滤并在减压下蒸发溶剂。粗产物通过硅胶上的色谱法提纯（环己烷/乙酸乙酯）以产生白色固体形式的标题化合物（820毫克，68%）。
12b. 1-乙基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑
向4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑（430毫克，1.60毫摩尔）在DMF（8.0毫升）中的溶液中加入碳酸钾（576毫克，4.17毫摩尔）和碘乙烷（340微升，4.17毫摩尔）。反应混合物在室温下搅拌整夜，然后过滤并浓缩。粗产物通过硅胶上的色谱法提纯（环己烷/乙酸乙酯）以产生白色固体形式的标题化合物（300毫克，63%）。
12c. 1-异丙基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑
向4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-1H-吡唑（390毫克，1.43毫摩尔）在DMF（7.1毫升）中的溶液中加入碳酸钾（515毫克，3.72毫摩尔）和2-碘丙烷（180微升，1.80毫摩尔）。该反应在室温下搅拌整夜。加入另外180微升2-碘丙烷并将反应混合物在室温下搅拌一天。在此阶段转化不完全，因此加入另外360微升2-碘丙烷并将反应混合物在室温下搅拌2天。然后将其过滤并在减压下浓缩。粗产物通过硅胶上的色谱法提纯（环己烷/乙酸乙酯）以产生白色固体形式的标题化合物（150毫克，34%）。
13. 1- 乙基 -5-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )-1,3- 二氢苯并 [c] 异噻唑 2,2- 二氧化物、 1- 异丙基 -5-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )-1,3- 二氢苯并 [c] 异噻唑 2,2- 二氧化物和 1-( 环丙基甲基 )-5-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )-1,3- 二氢苯并 [c] 异噻唑 2,2- 二氧化物的制备
。
13a. 5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3-二氢苯并[c]异噻唑2,2-二氧化物
在微波管瓶中装载5-溴-1,3-二氢苯并[c]异噻唑2,2-二氧化物（500毫克，2.02毫摩尔）、双联频哪醇硼酸酯（768毫克，3.02毫摩尔）、乙酸钾（593毫克，6.05毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（82毫克，0.10毫摩尔）并加入DME（14.6毫升）。反应混合物在80℃下加热整夜。蒸发溶剂，粗产物通过硅胶上的柱色谱法提纯（环己烷/丙酮）以产生白色固体形式的标题化合物（580毫克，被23%频哪醇污染，校正收率75%）。
13b. 1-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3-二氢苯并[c]异噻唑2,2-二氧化物
向在DMF（7.0毫升）中的5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3-二氢苯并[c]异噻唑2,2-二氧化物（330毫克，1.12毫摩尔）中加入碳酸钾（386毫克，2.80毫摩尔）和碘乙烷（180微升，2.24毫摩尔）。将反应混合物在室温下搅拌整夜。蒸发溶剂，粗产物通过硅胶上的色谱法提纯（环己烷/丙酮）以产生白色固体形式的标题化合物（300毫克，83%）。
14. 1- 乙基 -6-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )-1H- 吲唑的制备
。
14a. 6-溴-1-乙基-1H-吲唑
6-溴-1H-吲唑（500毫克，2.54毫摩尔）、溴-乙烷（0.379毫升，5.08毫摩尔）和碳酸钾（1052毫克，7.61毫摩尔）在DMF（8毫升）中的混合物在75℃下加热2小时。该混合物用水和EtOAc稀释并分离各层。水层用EtOAc萃取三次。合并的有机层经MgSO4干燥并在真空中浓缩。所得棕色油通过柱色谱法（环己烷/EtOAc）提纯以提供白色固体形式的产物（336毫克，59%）以及相应的N2-吲唑烷基化副产物（210毫克，37%）。
14b. 1-乙基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑
6-溴-1-乙基-1H-吲唑（325毫克，1.444毫摩尔）、双联频哪醇硼酸酯（bis(pinacolate)diborane）（440毫克，1.733毫摩尔）、Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（52.8毫克，0.072毫摩尔）和乙酸钾（425毫克，4.33毫摩尔）在脱气DME（10毫升）中的混合物在80℃下加热3小时。该混合物在减压下浓缩并通过柱色谱法（环己烷/EtOAc）提纯以提供白色固体形式的产物（332毫克，84 %）。
15. 1- 异丙基 -5-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )-1H- 吲唑的制备
在微波管瓶中装载5-溴-1-异丙基吲唑（400毫克，1.673毫摩尔）、双联频哪醇硼酸酯（bis(pinacolate)diborane）（552毫克，2.175毫摩尔）、Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（61.2毫克，0.084毫摩尔）和乙酸钾（493毫克，5.02毫摩尔），加入脱气DME（12毫升）并将该混合物在油浴中在80℃下加热整夜。将该混合物浓缩并通过柱色谱法（环己烷/EtOAc）提纯以产生无色油形式的产物（382毫克，80%）。
16. 1- 异丙基 -6-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )-1H- 吲唑的制备
1H-吲唑-6-硼酸频哪醇酯（500毫克，2.048毫摩尔）、2-溴丙烷（0.352毫升，4.10毫摩尔）和碳酸钾（849毫克，6.15毫摩尔）在DMF（8毫升）中的混合物在80℃下加热24小时。加入另外的2-溴丙烷（0.352毫升，4.10毫摩尔）并将该悬浮液在85℃下加热48小时，然后该混合物用水和EtOAc稀释并分离各层。水层用EtOAc萃取三次。合并的有机层经MgSO4干燥并在减压下浓缩。所得棕色油通过柱色谱法（环己烷/EtOAc）提纯以提供白色固体形式的产物（232毫克，40%）以及相应的N2-吲唑烷基化副产物（99毫克，17%）。
17. 2- 甲基 -1-{4-[4-(4,4,5,5- 四甲基 -[1,3,2] 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )- 苯基 ]- 吡唑 -1- 基 }- 丙 -2- 醇的制备
。
17a. 1-[4-(4-溴-苯基)-吡唑-1-基]-2-甲基-丙-2-醇
在厚壁反应管中将4-(4-溴-苯基)-1H-吡唑（500毫克，2.24毫摩尔）溶解在DMF（5毫升）中。加入碳酸钾（435毫克，3.14毫摩尔）和2,2-二甲基-环氧乙烷（0.40毫升，4.48毫摩尔），用聚四氟乙烯螺旋盖密封该管并加热至100℃ 16小时。在冷却至室温后，该反应用水稀释并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发产生660毫克（100%）白色晶体。
17b. 2-甲基-1-{4-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-吡唑-1-基}-丙-2-醇
在螺旋盖容器中，称入1-[4-(4-溴-苯基)-吡唑-1-基]-2-甲基-丙-2-醇（660毫克，2.24毫摩尔）、双联频哪醇硼酸酯（1.12克，4.50毫摩尔）、乙酸钾（660毫克，6.74毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（168毫克，0.224毫摩尔，10摩尔%）并悬浮在乙腈（30毫升）中。该混合物在70℃下搅拌整夜。将反应混合物过滤并蒸发至干。粗制残留物通过快速色谱法提纯。将含产物的级分蒸发以产生280毫克（25%）无色固体形式的标题化合物。Rt = 2.298 min (HPLC方法A)。
18. 1-(2- 甲磺酰基 - 乙基 )-4-[4-(4,4,5,5- 四甲基 -[1,3,2] 二氧杂硼杂环戊烷 -2- 基 )- 苯基 ]-1H- 吡唑的制备
在10毫升螺旋盖容器中，将4-溴-1-(2-甲磺酰基-乙基)-1H-吡唑（200毫克，0.751毫摩尔）、1,4-苯二硼酸双(频哪醇)酯97%（379毫克，1.13毫摩尔）、碳酸钾（207毫克，1.50毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（30.7毫克，0.038毫摩尔）悬浮在乙腈（10毫升）和水（2毫升）中。该混合物在微波炉中在100℃下加热1小时。蒸发溶剂，残留物在乙腈中声处理并滤出不可溶部分。蒸发滤液，粗产物通过制备色谱法（乙腈/水）提纯。合并级分并蒸发产生108毫克（38%）无色固体。
19. 2-(1,1- 二氧代 -2,3- 二氢 -1H-1 λ 6- 苯并 [b] 噻吩 -5- 基 )-4,4,5,5- 四甲基 -[1,3,2] 二氧杂硼杂环戊烷的制备
。
19a. 5-溴-苯并[b]噻吩1,1-二氧化物
在100毫升螺旋盖容器中将5-溴苯并[b]噻吩（2.30克，10.8毫摩尔）溶解在丙酮（46毫升）中。加入Oxone®，单过硫酸盐（过氧单硫酸钾）（27.0克，43.2毫摩尔）和水并在70℃下搅拌整夜。向反应混合物中加入水和乙酸乙酯。分离有机层，干燥，过滤并将溶剂蒸发至干。该黄色残留物通过快速色谱法（正庚烷/DCM）提纯以产生769毫克（29%）白色固体形式的标题化合物。Rt = 2.393 min (HPLC方法A)。
19b. 2-(1,1-二氧代-1H-1λ6-苯并[b]噻吩-5-基)-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷
在100毫升螺旋盖容器中将5-溴-苯并[b]噻吩1,1-二氧化物（767毫克，3.13毫摩尔）溶解在四氢呋喃（50毫升）中。加入双联频哪醇硼酸酯（1.19克，4.69毫摩尔）、乙酸钾（921毫克，9.39毫摩尔）和Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2（256毫克，0.31毫摩尔）。该红色反应混合物在70℃下搅拌整夜。粗制残留物通过快速色谱法（正庚烷/DCM）提纯以产生870毫克（95%）无色固体形式的标题化合物。Rt = 1.599 min (HPLC方法A)。
19c. 2-(1,1-二氧代-2,3-二氢-1H-1λ6-苯并[b]噻吩-5-基)-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷
将2-(1,1-二氧代-1H-1λ6-苯并[b]噻吩-5-基)-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷（463毫克，1.59毫摩尔）溶解在四氢呋喃（10毫升）中，加入Pd/C（5% E101R, 54%水, 0.10克）并将该混合物在氢气下在室温下搅拌2小时。过滤反应混合物，在减压下除去溶剂以产生454毫克（97%）白色固体形式的标题化合物。Rt = 1.437 (HPLC方法A)。
生物活性
为了评估该化合物对Wnt通路的抑制潜力，如下表1中所示测定IC50值。还显示了人肝微粒体固有清除率（CLint），由此使用下列分类：
。
1. 对 Wnt 通路活性的细胞检测
LS174T-shl-fLuc Clone 5 (LS174T-L5) 报告基因检测原理 :
这一检测基于体外荧光素酶活性读数。人克隆癌细胞系LS174T用编码短半衰期荧光素酶的慢病毒转导（具有失稳定的PEST序列构建体；构建体F1756）: 16 x TCF/LEF转录位点 - 在基本pTA启动子上的短半衰期萤火虫荧光素酶 – 在EF-1-α启动子上的嘌呤霉素抗性基因)。使用慢病毒基础载体：来自System Biosciences的pCDF1-MCS2-EF1-Puro（cat. # CD110B-1）制造这一构建体。该荧光素酶具有大约60分钟的T1/2。
利用1µg/mL嘌呤霉素选择，选择稳定的表达荧光素酶的克隆体并使该克隆体胀大。常规使用选择克隆5，因为其具有良好的信号背景比并可响应试验参考化合物。
作为TCF调节的转录和因此Wnt信号传导激活的报告基因分析荧光素酶读数。抑制Wnt通路的化合物预计会抑制通过TCF诱发荧光素酶转录；这会造成降低的荧光素酶蛋白生成和荧光素酶信号读数。
使用所述萤火虫荧光素酶报告基因细胞基检测测试化合物的Wnt通路抑制活性。使用含有T-细胞因子（TCF）依赖性的基因启动子萤火虫荧光素酶构建体的LS174T荧光素酶报告基因细胞系。
化合物以30 µM至1 nM的浓度在细胞上孵育24小时。使用Steady Glo荧光素酶检测系统(Promega)和TOPCOUNT微板读取器(Perkin Elmer)测定荧光素酶活性。
为了分析，所得数据对照未处理的媒介物对照物标准化并使用Excel软件 (Microsoft)的Excel Fit应用拟合以测定IC50值。
2. CLint （固有清除率）测定
仪器
使用Tecan Genesis工作站(RWS ASY 150/8)进行微粒体孵育。使用与ABSciex API3000质谱仪联用的Waters ACQUITY UPLC系统进行分析。使用Assay Explorer (Symyx)进行数据分析。
UPLC 条件
柱：　　　　Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50mm, 1.7 um (Waters)
流动相：　　A = 水中的0.1%甲酸
　　　　　　B = 乙腈
梯度：　　　时间　　　%A　　%B
　　　　　　初始　　　90　　　10
　　　　　　0.47　　　5　　　　95
　　　　　　0.65　　　5　　　　95
　　　　　　0.66　　　90　　 　10
流速：　　　0.750 mL/min
检测：　　　ESI, MRM
注射：　　　10 uL
柱温度：　　50℃。
化学品
0.1 M磷酸钾缓冲液pH 7.4，含有1 mM MgCl2
在磷酸盐缓冲液中的15 mM NADPH
在磷酸盐缓冲液中的5.0 mg蛋白质/mL肝微粒体
乙腈
水中的20% DMSO。
微粒体孵育
各实验由12个受试化合物和2个参考化合物构成。参考化合物作为混合物（cocktail）孵育。
受试化合物由10 mM DMSO储液分2个步骤进行稀释。首先将4微升储液添加到196微升20% DMSO/磷酸钾缓冲液pH 7.4中。在第二步骤中，将10微升一次稀释液添加到1890微升磷酸钾缓冲液和100微升内标溶液中至0.8 μM的最终浓度。
将100微升最终化合物稀释液等分到96深孔板中。将12.5微升肝微粒体添加到各孔中（0.5 mg/mL最终蛋白质浓度）并将样品在37℃和800 rpm搅动下预孵育5分钟。
在预孵育后，将250微升冷乙腈添加到0 min样品中以防止反应。此后，将12.5微升NADPH溶液添加到除无辅助因子的0 min和30 min对照物（其中NADPH被磷酸盐缓冲液取代）外的所有孔中以开始孵育。
在5、10、20和30分钟后通过将250微升冷乙腈添加到各孔中来停止孵育。
淬灭的样品然后在4℃下以4000g离心1小时。将100微升上清液转移到96孔板中以供分析。
数据分析
通过测量LC-MS/MS峰面积随时间经过的变化，测定各化合物的代谢稳定性。使用Assay Explorer软件自动计算衰减的斜率k。然后根据下列公式计算各化合物的固有清除率（CLint）：
CLint (μL/min/mg蛋白质) = k 1000/蛋白质浓度。
本发明还涉及可根据上述方法制备和测试的下列化合物：
。

Claims (16)

1.式(I)的化合物
或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物，其中
R1是H、LA、Hal、CN、S(LA)、CA，
R2是H、NH2、LA、NH(LA)、Hal、X-Cyc，
R3是LA、Hal、CN、CONH2、CONH(LA)
或
R2、R3与它们所连接的C原子一起形成具有1-3个选自O、S和N的杂原子的5或6元脂族杂环，其被1或2个氧代基团取代，所述杂环可进一步被LA单取代，且所述杂环可以与苯基或吡啶基形成稠环体系
R4是H、LA、CONH(LA)或X-Cyc，
R5是H、F，
或
R4、R5与它们所连接的原子一起形成具有1-3个选自O、S和N的杂原子的5或6元杂环，其任选独立地被氧代、LA、NH2、NH(LA)、N(LA)2、HO(LA)-单取代、二取代或三取代，或其任选被CA单取代，
R6是H、LA、OH或F，
Cyc是具有1-3个选自O、S和N的杂原子的5或6元单环的、脂族或芳族碳环或杂环，其可以被氧代、LA、NH2、NH(LA)、N(LA)2、HO(LA)-单取代或二取代或被CA单取代，
X是-CH­2-、-C2H4-、-NH-、-O-或键，
LA是具有1、2、3、4或5个碳原子的直链或支链烷基，其可以是饱和或部分不饱和的，其中1、2或3个H原子可以被Hal替代，和/或
　　1个CH2基团可以被-O-、-NH-或-SO2-替代，和/或
　　1个CH基团可以被N替代，
CA是具有3、4、5或6个碳原子的环烷基，或具有3、4、5或6个环碳原子和1或2个非环碳原子的环烷基烷基，在所述环烷基或环烷基烷基中，1个CH2基团可以被-O-替代，或1个CH基团可以被N替代，
Hal是F、Cl、Br或I。
2.根据权利要求1的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物，其中没有更详细指明的残基具有对式(I)指示的含义，但其中
在子式1中
R2、R3与它们所连接的哌啶环一起形成(2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮)-8-基、(2,8-二氮杂-螺[4.5]癸烷-1,3-二酮)-8-基、(1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮)-8-基、(1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮)-8-基、(1,4,9-三氮杂-螺[5.5]十一烷-5-酮)-9-基、(4-氧代-1,3,8-三氮杂螺[4.5]癸-8-基，
R6是H，
在子式2中
R2、R3与它们所连接的C原子一起形成1,3-二氢-吲哚-2-酮-3-基或氮杂-1,3-二氢-吲哚-2-酮-3-基，
R6是H，
在子式3中
R4是吗啉-4-基、哌嗪-1-基、1H-吡唑-3-基、吡啶-3-基、1H-吡唑-4-基，
它们各自可以未取代或被LA、OH、NH2、HO(LA)-或NH2(LA)-单取代，
R5是H，
在子式4中
R4、R5与它们所连接的苯基环一起形成1H-吲唑-5-基、1H-吲唑-6-基、2-氧代-2,3-二氢-苯并噁唑-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基、(3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮)-6-基、1H-吲哚-6-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基、(3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮)-6-基、2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基、2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-6-基、1,1-二氧代-2,3-二氢-1H-1l6-苯并[b]噻吩-5-基、1-二氧化-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基，
它们各自可以未取代或被LA、OH、NH2、HO(LA)-或NH2(LA)-取代，
在子式6中
R1是Hal或C(Hal)3，
在子式7中
R4是吗啉-4-基、4-甲基-哌嗪-1-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、6-氨基-吡啶-3-基、1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-4-基、1-甲基-1H-吡唑-4-基，
R5是H，
在子式8中
R4、R5与它们所连接的苯基环一起形成1-甲基-1H-吲唑-5-基、1H-吲唑-5-基、1-甲基-1H-吲唑-6-基、1-乙基-1H-吲唑-5-基、1-乙基-1H-吲唑-6-基、1-异丙基-1H-吲唑-6-基、2-氧代-2,3-二氢-苯并噁唑-5-基、(3H-苯并噁唑-2-酮)-5-基、1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基、1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基、(3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮)-6-基、1H-吲哚-6-基、2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基、(1-甲基-3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮)-6-基、3-氨基-1H-吲唑-6-基、1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基、1-乙基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基、2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-6-基、1,1-二氧代-2,3-二氢-1H-1l6-苯并[b]噻吩-5-基、2-乙基-1,1-二氧化-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基，
在子式9中
R1是F、Cl或CF3，
在子式10中
R2、R3与它们所连接的哌啶环一起形成(2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮)-8-基、(1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮)-8-基、(1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮)-8-基，
R6是H，
在子式11中
R1是F、Cl或CF3，
R2、R3与它们所连接的哌啶环一起形成(2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮)-8-基、(1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮)-8-基、(1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮)-8-基，
R6是H，
在子式12中
R2是H，
R3是CN、CONH2，
R6是H，
在子式13中
R2是H，
R3是CN，
R6是OH。
3.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物选自：
8-(2-氨基-3-氯-5-苯基-吡啶-4-基)-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-{2-氨基-3-氯-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-吡啶-4-基}-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮,
8-[2-氨基-5-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-3-氯-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-[2-氨基-5-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-3-氯-吡啶-4-基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮,
8-(2-氨基-3-氯-5-{4-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-苯基}-吡啶-4-基)-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮,
6-(6-氨基-5-氯-4-(1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡啶-3-基)吲哚啉-2-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-4-基]-1,3,8-三氮杂-螺[4.5]癸烷-2,4-二酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(2-氧代-2,3-二氢-苯并噁唑-5-基)-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-{2-氨基-3-氯-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-吡啶-4-基}-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
1'-(2-氨基-3-氯-5-(4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)吡啶-4-基)螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮,
8-[2-氨基-5-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-3-氯-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸烷-1,3-二酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(2-氧代-1,2,3,4-四氢-喹啉-6-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸烷-1,3-二酮,
6-[6-氨基-5-氯-4-(1-氧代-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-8-基)-吡啶-3-基]-1-甲基-3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-{2-氨基-3-氯-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸烷-1,3-二酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(4-吗啉-4-基-苯基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
6-[6-氨基-5-氯-4-(1-氧代-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-8-基)-吡啶-3-基]-3,4-二氢-1H-喹啉-2-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-{2-氨基-3-氯-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-苯基]-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-6-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1H-吲哚-6-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-(2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-2,2-二氧化-1,3-二氢苯并[c]异噻唑-5-基)吡啶-4-基)-2,8-二氮杂螺[4.5]癸-1-酮,
1-(2-氨基-3-氯-5-(4-吗啉苯基)吡啶-4-基)哌啶-4-甲腈,
8-{2-氨基-5-[4-(6-氨基-吡啶-3-基)-苯基]-3-氯-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1H-吲哚-6-基)-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
1-(2-氨基-3-氯-5-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)吡啶-4-基)哌啶-4-甲腈,
1'-(2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)吡啶-4-基)螺[吲哚啉-3,4'-哌啶]-2-酮,
5-[6-氨基-5-氯-4-(1-氧代-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-8-基)-吡啶-3-基]-3H-苯并噁唑-2-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-(2-氨基-3-氯-5-{4-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-苯基}-吡啶-4-基)-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1H-吲唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-[2-氨基-5-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-3-氯-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-{2-氨基-3-氯-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸烷-1,3-二酮,
8-[2-氨基-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-三氟甲基-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
9-{2-氨基-3-氯-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-吡啶-4-基}-1,4,9-三氮杂-螺[5.5]十一烷-5-酮,
8-{2-氨基-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-3-三氟甲基-吡啶-4-基}-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-[2-氨基-5-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-3-三氟甲基-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-{2-氨基-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-3-三氟甲基-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-5-(3-氨基-1H-吲唑-6-基)-3-三氟甲基-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
9-(2-氨基-3-氯-5-{4-[1-(2-羟基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-苯基}-吡啶-4-基)-1,4,9-三氮杂-螺[5.5]十一烷-5-酮,
9-[2-氨基-3-氯-5-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-1,4,9-三氮杂-螺[5.5]十一烷-5-酮,
2'-氨基-5'-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-3'-三氟甲基-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲酰胺,
2'-氨基-5'-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-3'-三氟甲基-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲酰胺,
8-[2-氨基-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-三氟甲基-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸烷-1,3-二酮,
8-{2-氨基-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-3-三氟甲基-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸烷-1,3-二酮,
8-[2-氨基-3-氟-5-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-{2-氨基-5-[4-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-3-三氟甲基-吡啶-4-基}-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
外消旋(3R,4R)-2'-氨基-3'-氯-3-羟基-5'-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲腈,
8-(2-氨基-3-氯-5-{4-[1-(2-甲磺酰基-乙基)-1H-吡唑-4-基]-苯基}-吡啶-4-基)-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氟-5-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-乙基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-5-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-6-基)-3-三氟甲基-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-5-(1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吲哚-5-基)-3-三氟甲基-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-5-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-3-三氟甲基-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-{2-氨基-3-氯-5-[4-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-吡啶-4-基}-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
外消旋(3R,4R)-2'-氨基-3'-氯-3-羟基-5'-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲腈,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-乙基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1,1-二氧代-2,3-二氢-1H-1l6-苯并[b]噻吩-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-{2-氨基-3-氟-5-[4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-吡啶-4-基}-1-氧杂-3,8-二氮杂-螺[4.5]癸-2-酮,
8-[2-氨基-3-氟-5-(1-甲基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
(3R,4R)-2'-氨基-3'-氯-3-羟基-5'-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲腈,
(3S,4S)-2'-氨基-3'-氯-3-羟基-5'-(1-甲基-2,2-二氧代-2,3-二氢-1H-2l6-苯并[c]异噻唑-5-基)-3,4,5,6-四氢-2H-[1,4']联吡啶-4-甲腈,
8-(2-氨基-3-氯-5-{4-[1-(2-羟基-2-甲基-丙基)-1H-吡唑-4-基]-苯基}-吡啶-4-基)-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-{2-氨基-3-氯-5-[4-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-{2-氨基-3-氯-5-[4-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-吡啶-4-基}-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-乙基-1H-吲唑-6-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-乙基-1H-吲唑-5-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
8-[2-氨基-3-氯-5-(1-异丙基-1H-吲唑-6-基)-吡啶-4-基]-2,8-二氮杂-螺[4.5]癸-1-酮,
或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物。
4.药物组合物，包含根据权利要求1至3中的一项或多项的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物作为活性成分，以及可药用载体。
5.根据权利要求1至3中的一项或多项的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物，其用于治疗过度增殖性、炎性或退行性疾病。
6.根据权利要求5使用的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物，其中所述过度增殖性疾病是癌症。
7.根据权利要求6使用的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物，其中所述癌症选自脑癌、肺癌、结肠癌、表皮样癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、肾癌、肾脏癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、食管癌、睾丸癌、妇科癌、甲状腺癌、黑素瘤、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、慢性骨髓性白血病、髓样细胞白血病、卡波西肉瘤。
8.根据权利要求5使用的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物，其中所述炎性疾病选自多发性硬化症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮或炎性肠病。
9.根据权利要求5使用的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物，其中所述退行性疾病选自骨关节炎或阿尔茨海默氏症。
10.权利要求1至3中的一项或多项的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物用于制备用于治疗过度增殖性、炎性或退行性疾病的药物的用途。
11.根据权利要求10的用途，其中所述疾病是癌症。
12.根据权利要求11的用途，其中所述癌症选自脑癌、肺癌、结肠癌、表皮样癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、肾癌、肾脏癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、食管癌、睾丸癌、妇科癌、甲状腺癌、黑素瘤、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、慢性骨髓性白血病、髓样细胞白血病、卡波西肉瘤。
13.治疗过度增殖性、炎性或退行性疾病的方法，包括给予对象权利要求1至3中任一项的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物。
14.权利要求13的方法，其中所述癌症选自脑癌、肺癌、结肠癌、表皮样癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、头颈癌、肾癌、肾脏癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、食管癌、睾丸癌、妇科癌、甲状腺癌、黑素瘤、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、慢性骨髓性白血病、髓样细胞白血病、卡波西肉瘤。
15.套盒（药盒），其由
a) 有效量的根据权利要求1至3中的一项或多项的化合物或其立体异构体或互变异构体或上述各自的可药用盐，包括它们的所有比率的混合物，和
b) 有效量的其它药物活性成分
的单独包装构成。
16.式(I)的化合物的制备方法，其中使式(V)的化合物
与式(IV)的化合物
反应产生式(III)的化合物
其然后进一步与式(II)的化合物
其中
LG1、LG2独立地为Hal，
X是H或胺保护基，
Y是硼酸或硼酸酯，
反应产生式(I)的化合物。
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