CN104730160A - 一种乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法，属于药物分析检测技术领域，该方法采用直链淀粉类涂覆型手性色谱柱，以正相混合溶剂为流动相对乙酰酪氨酸及其光学异构体进行分离检测。能有效地分离N-乙酰-L-酪氨酸和N-乙酰-D-酪氨酸，从而准确地测出样品中N-乙酰-L-酪氨酸及其异构体的含量。本发明方法简便、可靠、迅速，灵敏度高，分离度、重现性好，结果准确可靠，可用于N-乙酰-L-酪氨酸的质量控制。
Description
技术领域
本发明属于药物分析检测技术领域，具体涉及一种乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法。
背景技术
N-乙酰-L-酪氨酸为重要的精细有机化工中间体，其化学结构式为：
N-乙酰-L-酪氨酸广泛应用于医药，农药，化学工业等领域，目前通常只对N-乙酰-L-酪氨酸的常规理化指标进行检测，但在生产过程中会产生副生物——N-乙酰-D-酪氨酸这一旋光异构体，从而影响产品质量。建立一种能准确测定乙酰酪氨酸及其旋光异构体含量的方法，将对其生产有重要指导意义。
HPLC在拆分氨基酸外消旋体时通常有三种方法：一是利用手性试剂与被拆分物进行衍生化反应生成非对映异构体，从而可被传统的非手性色谱柱所拆分；二是在流动相中加入手性添加剂，利用非手性固定相色谱柱进行拆分；三是利用手性固定相色谱柱进行拆分。其中衍生化反应操作复杂，衍生试剂和反应介质有可能干扰色谱分离和检测；手性流动相添加剂拆分机理较复杂，方法的建立较困难，更换流动相时系统较长时间才能平衡。而手性固定相色谱法虽然成本较高，但因其简单，快速和准确的优点，已成为分析和分离对映体的最常用的方法。
在多糖类衍生物手性固定相中，纤维素涂覆型手性色谱柱和直链淀粉类涂覆型手性色谱柱由于拆分范围广而得到广泛应用。两者的光学拆分能力不同，一些在纤维素上不能拆分的样品，在直链淀粉上却能够很好地拆分，反之亦然。
直链淀粉与5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯反应便可得到直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)，把得到的衍生物涂敷在γ-氨丙基键合硅胶上，便得到直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分析分离N-乙酰-L-酪氨酸及其对映异构体N-乙酰-D-酪氨酸的高效液相色谱方法，从而实现N-乙酰-L-酪氨酸与其对映异构体的分离测定。
发明人发现，采用直链淀粉类涂覆型手性色谱柱，以正相混合溶剂为流动相对乙酰酪氨酸的光学异构体进行分离检测，可以将N-乙酰-L-酪氨酸及其光学异构体进行有效分离，从而对N-乙酰-L-酪氨酸及其光学异构体进行定性、定量分析。本发明的方法能简单、快速、准确地分析分离N-乙酰-L-酪氨酸及其光学异构体杂质。
所述直链淀粉类涂覆型手性柱是以硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)为填料；所述正相混合溶剂为正己烷-无水乙醇，所述正己烷-无水乙醇的体积比为70～90∶10～30。
优选地，所述正己烷-无水乙醇的体积比为85∶15。
优选地，所述高效液相色谱检测有如下任选的色谱条件：
流动相流速为0.8～1.2ml/min，和/或
色谱柱温度为25～40℃，和/或
检测器采用紫外检测器，检测波长为210nm。
进一步优选地，所述流动相流速为1.0ml/min；色谱柱温度为40℃；检测器采用紫外检测器，检测波长为210nm。
优选地，所述检测方法包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和测定三个步骤，
所述供试品溶液的制备包括：取乙酰酪氨酸或含乙酰酪氨酸的相关待测样品，用稀释液配制成浓度为0.25～1mg/ml的溶液，作为供试品溶液；
所述对照品溶液的制备包括：精密量取乙酰酪氨酸及其光学异构体对照品，分别用稀释液稀释，作为对照品溶液；
所述测定步骤包括：取对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10～20％；再取供试品溶液20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
进一步优选地，所述稀释液为无水乙醇。
本发明采用硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱，采用HPLC法使N-乙酰-L-酪氨酸和N-乙酰-D-酪氨酸得到有效的分离，从而准确测出样品中N-乙酰-L-酪氨酸及其异构体的含量。本发明方法简便、可靠、迅速，灵敏度高，分离度、重现性好，结果准确可靠，可用于N-乙酰-L-酪氨酸的质量控制。
附图说明
图1是流动相为体积比为75:25的正己烷-无水乙醇的分离效果色谱图。
图2是流动相为体积比为80:20的正己烷-无水乙醇的分离效果色谱图。
图3是流动相为体积比为85:15的正己烷-无水乙醇的分离效果色谱图。
图4是待测样品含量测定的色谱图，其样品主峰N-乙酰-L-酪氨酸的出峰时间为6.34min，N-乙酰-D-酪氨酸的出峰时间为5.24min。
具体实施方式
实施例1不同手性柱的分离效果试验
1.仪器与条件：
高效液相色谱仪：日立
色谱柱：硅胶表面涂敷有纤维素-三(3,5-二甲苯基氨酸甲酸酯)(OD-H，Daicel 4.6mm*250mm，5μm)；硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)(OJ-H，Daicel 4.6mm*250mm，5μm)；硅胶表面涂敷有直链淀粉-三[(S)-α-苯乙基氨基甲酸酯](AS-H，Daicel 4.6mm*250mm，5μm)；硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)(AD-H，Daicel 4.6mm*250mm，5μm)；硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)(AY，广州研创，4.6mm*250mm，5μm)。
流动相：正己烷-乙醇(80∶20)
流速：1ml/min
柱温：40℃
进校体积：20μl
检测波长：210nm
2.实验方法和结果：
称取N-乙酰-L-酪氨酸及其对映异构体N-乙酰-D-酪氨酸标准品各2.5mg，置于10mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合标准溶液；称取N-乙酰-L-酪氨酸和N-乙酰-D-酪氨酸各5mg，分别置于10mL容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
取各定性对照溶液和混合标准溶液，以正己烷∶乙醇＝80∶20为流动相，分别用五种手性色谱柱，按上述色谱条件进行HPLC分析，记录色谱图，结果见表1。
表1不同手性柱的分离效果试验结果
从以上结果可以看出，采用硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)为填料的手性柱，N-乙酰-L-酪氨酸及其对映异构体N-乙酰-D-酪氨酸完全分离，分离度达到1.51，其它填料的手性柱分离效果较差，不能满足检测的需要。
实施例2不同流动相的分离效果试验
1.仪器与条件：
高效液相色谱仪：日立
色谱柱：硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)(AY，广州研创，4.6mm*250mm，5μm)。
流动相：正己烷-乙醇(75∶25；80∶20；85∶15)
流速：1ml/min
柱温：40℃
进校体积：20μl
检测波长：210nm
2.实验方法和结果：
取各定性对照溶液和混合标准溶液，分别以正己烷∶乙醇＝75∶25、正己烷∶乙醇＝80∶20、正己烷∶乙醇＝85∶15为流动相，用AY手性色谱柱，按上述色谱条件进行HPLC分析，记录色谱图，结果见附图1-3，图中1号峰为N-乙酰-D-酪氨酸，分别在5.40min、5.43min、5.09min左右出峰；2号峰为N-乙酰-L-酪氨酸，分别在6.19min、6.43min、6.26min左右出峰，D型和L型的分离度分别为1.24、1.51、1.77，详细结果见表2。可以看出乙酰酪氨酸及其对映异构体完全分离，正己烷∶乙醇＝85∶15为流动相时分离度最高。
表2不同比例流动相的试验结果
实施例3样品中乙酰酪氨酸及其光学异构体的含量测定
1.仪器与条件：
高效液相色谱仪：日立
色谱柱：硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)(AY，广州研创，4.6mm*250mm，5μm)
流动相：正己烷-乙醇(85∶15)
流速：1ml/min
柱温：40℃
进校体积：20μl
检测波长：210nm
2.检测方法和结果：
1)供试品溶液的制备：取待测样品5mg，用无水乙醇10ml溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：取N-乙酰-L-酪氨酸及其对映异构体N-乙酰-D-酪氨酸各2.5mg，置于10mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液；
3)样品测定：取对照品溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10～20％；再精密量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行HPLC分析，记录色谱图。
待测样品检测图谱如图4所示，按照外标法计算得N-乙酰-L-酪氨酸含量为80.43％，N-乙酰-D-酪氨酸含量为3.73％。
Claims (6)
1.一种乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于：采用直链淀粉类涂覆型手性色谱柱，以正相混合溶剂为流动相对乙酰酪氨酸及其光学异构体进行分离检测；
所述直链淀粉类涂覆型手性柱是以硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)为填料；所述正相混合溶剂为正己烷-无水乙醇，所述正己烷-无水乙醇的体积比为70～90∶10～30。
2.如权利要求1所述的乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述正己烷-无水乙醇的体积比为85∶15。
3.如权利要求1所述的乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱检测采用如下任选的色谱条件：
流动相流速为0.8～1.2ml/min，和/或
色谱柱温度为25～40℃，和/或
检测器采用紫外检测器，检测波长为210nm。
4.如权利要求3所述的乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述流动相流速为1.0ml/min；色谱柱温度为40℃；检测器采用紫外检测器，检测波长为210nm。
5.如权利要求1至4任一项所述的乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述检测方法包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和测定三个步骤，
所述供试品溶液的制备包括：取乙酰酪氨酸或含乙酰酪氨酸的相关待测样品，用稀释液配制成浓度为0.25～1mg/ml的溶液，作为供试品溶液；
所述对照品溶液的制备包括：精密量取乙酰酪氨酸及其光学异构体对照品，分别用稀释液稀释，作为对照品溶液；
所述测定步骤包括：取对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10～20％；再取供试品溶液20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
6.如权利要求5所述的乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述稀释液为无水乙醇。
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| CN115144498A (zh) * | 2022-06-30 | 2022-10-04 | 浙江金华康恩贝生物制药有限公司 | 一种检测乙酰半胱氨酸及乙酰半胱氨酸颗粒中对映异构体含量的方法 |
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Non-Patent Citations (3)
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|---|
| IVANKA JERIC，ET AL: "Synthesis and reactivity of the monosaccharide esters of amino acids as models of teichoic acid fragment", 《GLYCOCONJUGATE JOURNAL》 * |
| 广州研创生物技术发展有限公司: "N-乙酰-DL-酪氨酸", 《HTTP://WWW.CHIRAL-SE.COM/CHIRAL_SHOW60.905.HTML》 * |
| 陈永波等: "高效液相色谱法快速直接测定酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸", 《氨基酸和生物资源》 * |
Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN115144498A (zh) * | 2022-06-30 | 2022-10-04 | 浙江金华康恩贝生物制药有限公司 | 一种检测乙酰半胱氨酸及乙酰半胱氨酸颗粒中对映异构体含量的方法 |
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