CN104726597A - 用于预测儿童青春期持续肥胖的试剂盒及其应用 - Google Patents

用于预测儿童青春期持续肥胖的试剂盒及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了用于预测儿童青春期持续肥胖的试剂盒及其应用。本发明提供了检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质在制备用于预测儿童单纯性肥胖的产品中的应用，所述目的菌为Firmicutes、Clostridia、Clostridiales、Clostridiaceae、Clostridium、Bacteroidetes、Bacteroidia、Bacteroidales、Bacteroidaceae、Bacteroides、Oscillospira、Coriobacteriaceae和Collinsella中任一种。本发明已经从单纯肥胖儿童队列获得特异性的信息，能够较好地体现儿童肥胖的肠道菌群特征，通过监测特征菌种的丰度变化，可以预测肥胖状态的发展变化；所获得的儿童肥胖的肠道菌群特征，通过与其他疾病研究得出的肠道菌群特征比较，将可以进一步预测发生肥胖相关疾病的风险和趋势。

Description

用于预测儿童青春期持续肥胖的试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及用于预测儿童青春期持续肥胖的试剂盒及其应用。
背景技术
肥胖是当前全球性的重大公共卫生问题，近三十年来，无论是发达国家还是发展中国家，也无论男女老幼，超重和肥胖的发生率均呈现持续升高的趋势(Lancet.2014Aug 30；384(9945):766-81)。肥胖是公认会提高心血管疾病(如冠心病和中风)、糖尿病、肾病、肿瘤(尤其是肠道肿瘤)的发病率和致死率的重要危险因素(Lancet 2011；377:1085–95；Lancet Diabetes Endocrinol.2014 Aug；2(8):634-47；LancetOncology 2015 Jan；16(1):36-46)，儿童及青少年肥胖则往往会发展为成人肥胖、并促使上述相关疾病的发病年龄提前(N Engl J Med 2011；364:1315-1325)。因此，更有效的检测肥胖的发生、预测肥胖相关疾病的发病风险，对于提高公共健康具有重要的意义。
各国定义肥胖的标准不尽相同，主要依据是身体脂肪含量与疾病发病率和死亡率的相关性，因此筛查肥胖的方法均是围绕着测定体脂含量而进行的。常用的肥胖筛查方法有：水下称重法，生物电阻抗法，双能X线吸收法，皮下脂肪厚度直接测定、皮下脂肪厚度超声波测量法，腰围、臀围法，身高体重比值法(BMI＝体重/身高2，单位分别是公斤和米)(参考文献：中国学校卫生2008年10月第29卷第10期，966-968页)。
上述方法中，水下称重法复杂且受场地条件限制，生物电阻抗法的重复性和准确性易受调查现场的干扰，双能X线吸收法的射线仪和扫描仪价格昂贵、还要配备相应的软件系统评价身体组成，而皮下脂肪测定、腰围臀围测定等人体测量方法往往需要联合使用才能获得较好的准确性和参考价值。因此这些方法都存在自身固有的缺陷。能够较好符合体重变化、且受身高影响较小的方法是BMI法，这也是目前流行病学调查最常用的方法。
儿童肥胖的筛查类似于成人肥胖，也是采用上述的方法，以BMI法最为常用。但是，不同于成人肥胖标准的制定有相应的疾病发病率和死亡率可以作为参考依据，儿童期的肥胖往往不会导致明显的临床症状，更很少会导致死亡，儿童期肥胖的危害在于其远期影响，即导致儿童成年后的持续肥胖和罹患相关疾病，但这种远期影响的概率、机制都尚不清楚。因此儿童超重、肥胖标准是根据某国家、地区儿童生长发育指标的统计学分布来确定的。这就意味着儿童超重和肥胖的标准，除了各种筛查方法固有的缺陷外，标准自身也不一定能准确反映某个肥胖儿童个体是否真正是肥胖，更无法协助预测该肥胖儿童将来是否会继续保持肥胖、甚至有所发展。
肠道菌群是共生于人体肠道内的细菌的总合，已知它们具有辅助消化食物成分、调节人体从食物中摄入氨基酸、维生素和能量物质、刺激人体免疫细胞的分化和成熟等功能，被认为是人体的又一“器官”。近年来，随着第二代测序技术的发展，对肠道菌群的研究也更加广泛和深入。目前的研究结果证实，肠道菌群通过调节食物中的能量和脂质摄入，参与肥胖的发生；同时肠道菌群在代谢及免疫方面的作用又参与了糖尿病、动脉粥样硬化、肿瘤等肥胖相关疾病的发生。
鉴于肠道菌群的具体构成，包括细菌的种属类型和各种细菌所占的丰度，受饮食习惯、生活环境、年龄、种族、用药等诸多因素的影响，既往研究也证实，不同国家和地区的人群具有明显不同的肠道菌群结构，因此对于我国儿童肥胖的肠道菌群特征需要做具体分析，而不能照搬国外的分析结果。
发明内容
本发明的一个目的是提供检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质的应用。
本发明提供了检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质在制备用于预测儿童在青春期发生肥胖或持续肥胖的产品中的应用，所述目的菌为Firmicutes、Clostridia、Clostridiales、Clostridiaceae、Clostridium、Bacteroidetes、Bacteroidia、Bacteroidales、Bacteroidaceae、Bacteroides、Oscillospira、Coriobacteriaceae和Collinsella中任一种。
上述应用中，所述待测儿童肠道菌群中目的菌丰度为待测儿童肠道菌群中目的菌在所述待测儿童肠道菌群中的含量。
所述待测儿童肠道菌群中目的菌在所述待测儿童肠道菌群中的含量为所述待测儿童肠道菌群中目的菌16S核糖体RNA基因的第3可变区-第5可变区(V3-V5)区间扩增产物的DNA片段个数与所述待测儿童肠道菌群所有细菌16S核糖体RNA基因的V3-V5区间扩增产物的DNA片段个数的百分比。
上述应用中，所述待测儿童为中国7-10岁的肥胖儿童和/或中国7-10岁的正常体重儿童；所述青春期为12-18岁。
上述应用中，所述检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质包括由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成的引物对。
本发明的另一个目的是提供检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质。
本发明提供的物质，其为预测儿童在青春期发生肥胖或持续肥胖的产品。
上述检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质为1)或2)：
1)由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成的引物对；
2)含有所述引物对的试剂盒。
上述物质中，所述待测儿童为中国7-10岁的肥胖儿童和/或中国7-10岁的正常体重儿童；
所述青春期为12-18岁。
上述物质中，所述待测儿童为中国7-10岁的肥胖儿童，所述试剂盒还包括记载在可读载体上的如下条件:
1)若待测儿童肠道菌群满足如下A-D至少一种条件，则该待测儿童将会在青春期发生肥胖或持续肥胖：
A.Firmicutes(厚壁菌门)连续两年的丰度均高于0.81且小于1，且Clostridia(梭菌纲)或Clostridiales(梭菌目)连续两年的丰度均高于0.785且小于1；
B.Bacteroidetes(拟杆菌门)、Bacteroidia(拟杆菌纲)或Bacteroidales(拟杆菌目)连续两年的丰度均低于0.167且大于0，同时Bacteroidaceae(拟杆菌科)或Bacteroides(拟杆菌属)连续两年的丰度均低于0.153且大于0；
C.Oscillospira(颤螺菌属)连续两年的丰度均低于0.0035且大于0；
D.Coriobacteriaceae(红蝽菌科)或Collinsella(柯林斯氏菌属)连续两年的丰度均为0-0.05，且第二年比第一年丰度高1倍以上(1-3倍，甚至可以达到10倍以上)；
2)若待测儿童肠道菌群不满足1)中任一条件，则该待测儿童将不会在青春期发生肥胖或持续肥胖。
上述物质中，所述待测儿童为中国7-10岁的肥胖儿童和中国7-10岁的正常体重儿童，所述试剂盒还包括记载在可读载体上的如下条件:
1)若所述待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群满足如下A-D至少一种条件，则该待测7-10岁的中国肥胖儿童将会在青春期发生肥胖或持续肥胖：
A.Firmicutes连续两年的丰度均高于0.81且小于1，且Clostridia或Clostridiales连续两年的丰度均高于0.785且小于1；
B.Bacteroidetes、Bacteroidia或Bacteroidales连续两年的丰度均低于0.167且大于0，同时Bacteroidaceae或Bacteroides连续两年的丰度均低于0.153且大于0；
C.Oscillospira连续两年的丰度均低于0.0035且大于0；
D.Coriobacteriaceae或Collinsella连续两年的丰度均为0-0.05，且第二年比第一年丰度高1倍以上；
2)若所述待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群不满足1)中任一条件，则该待测肥胖儿童将不会在青春期发生肥胖或持续肥胖；
3)若所述待测7-10岁的中国正常体重儿童肠道菌群满足如下E-H至少一种条件，则该待测正常体重儿童将不会在青春期发生肥胖：
E.Firmicutes连续两年的丰度均低于0.779且大于0，且Clostridia或Clostridiales连续两年的丰度均低于0.732且大于0；
F.Bacteroidetes或Bacteroidia或Bacteroidaels连续两年的丰度均高于0.181，且Bacteroidaceae或Bacteroides连续两年的丰度均高于0.164；
G.Oscillospira连续两年的丰度均高于0.005；
H.Coriobacteriaceae或Collinsella连续两年的丰度均在0-0.03之间，且第二年丰度与第一年丰度比值低于等于0.75；
4)若所述待测7-10岁的中国正常体重儿童肠道菌群不满足3)中任一条件，则该待测儿童将会在青春期发生肥胖。
上述7～18岁儿童的BMI分级标准采用目前的国内通用标准(参考文献：中华流行病学杂志2004年2月第25卷第2期，97-102页)：
表格中的BMI数值均为临界值，符合性别和年龄条件的儿童，若其BMI指数小于相应的超重临界值，则判断为正常体重；若大于或等于对应的超重临界值，而小于相应的肥胖临界值，则判断为超重；若大于或等于相应的肥胖临界值，则判断为肥胖。
本发明有如下优点：
(1)只需要采集粪便样本进行后续处理和分析工作，采样方法无创且便利；
(2)基于第二代基因测序技术，提供的信息更丰富、更精确；
(3)已经从单纯肥胖儿童队列获得特异性的信息，能够较好地体现儿童肥胖的肠道菌群特征，通过监测特征菌种的丰度变化，可以预测肥胖状态的发展变化。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、预测儿童青春期肥胖的试剂盒及其应用
一、预测儿童青春期肥胖
本实施例首次使用第二代测序技术检测，对北京市小学生中的肥胖儿童的肠道菌群指标进行检测，并通过数据分析，从中找出了肥胖儿童特有的肠道菌群结构指标，从而首次确立了鉴定儿童肥胖的肠道菌群指标。
具体方法如下：
1、队列和指标的确定：
通过与北京市儿研所和北京市朝阳区中小学卫生保健所合作，在北京市朝阳区的多所小学开展现场调查，测量记录儿童的生日、身高、体重、腰围、用药等信息，所测中国儿童的年龄范围是7～10岁。根据计算得到的BMI值和年龄，参照《中国学龄儿童青少年超重、肥胖筛查体重指数值分类标准》(中华流行病学杂志2004年2月第25卷第2期)和美国CDC的青少年肥胖BMI标准，确定34名正常体重儿童和41名肥胖儿童作为分析比较对象(年龄范围是7～10岁)，找出两组儿童的肠道菌群差别，从而确定能够判断肥胖状态的菌种指标。一年后对这些儿童进行回访，判断BMI分级情况，确定这些儿童均未发生BMI分级变化，而同时两组儿童的菌群特征仍符合一年前确定的判断肥胖状态的菌种指标，从而证实了确定的检测指标。
2、样本处理：
两次调查均收集入选队列儿童的新鲜粪便样本。样本由儿童的家长在家采集，之后即刻冻存于-20度冰箱中，之后在冷冻状态下集中保存在学校医务室的-20度冰箱中，由实验人员在冷冻状态下收取和保存于-80度冰箱，直到开展相关的检测。所有儿童在取样时均健康，取样前至少一周内未服用抗生素。
3、样本DNA的提取和测序
34名正常体重儿童和41名肥胖儿童每个儿童粪便样本各取300mg，使用北京康为公司的粪便DNA提取试剂盒(Beijing CoWin Bioscience Co.,Ltd,Beijing,China)快速提取DNA，DNA的浓度和OD值使用NanoDrop仪(Thermo Fisher Scientific Inc,Wilmington,DE,USA)进行检测，所有建库和测序的DNA样本浓度均大于20ng/μl，OD260/280均在1.8～2.0之间。提取后的DNA样本均保存于-80度冰箱，直至后续实验。
以上述每个儿童粪便样本的基因组DNA为模板，用通用引物338F:ACTCCTACGGGAGGCAGCAG(序列1)和907R:CCGTCAATTCMTTTGAGTTT(序列2)进行PCR扩增，得到样本所有肠道菌群16S核糖体RNA基因第3可变区-第5可变区区间的PCR扩增产物。
将各样本的PCR扩增产物使用10nt的barcode序列相互区分，并混合使用罗氏454FLX二代测序仪进行检测，测序使用试剂为该测序仪的配套试剂。测序流程参照罗氏标准操作流程。
4、测序结果的分析
测序产生的DNA片段按照barcode拆分到各个样本，生成各个样本特有的DNA片段的集合。将测序长度小于200bp和大于1000bp的DNA片段予以滤除。之后余下的各DNA片段使用QIIME软件，按照97％的片段序列相似度聚类为各种OTU(OperationalTaxonomic Units，物种分类单元)，各种OTU再与GreenGene数据库进行序列比对、聚类为不同种属的细菌。每个样本扩增产物测序得到的DNA片段总数作为分母，每个样本扩增产物中目的细菌的DNA片段数作为分子，计算出各种目的细菌的丰度(即待测儿童肠道菌群中目的菌在所述待测儿童肠道菌群中的含量)。
待测儿童肠道菌群中目的菌在所述待测儿童肠道菌群中的含量为待测儿童肠道菌群中目的菌16S核糖体RNA基因的V3-V5区间扩增产物的DNA片段个数与待测儿童肠道菌群所有细菌16S核糖体RNA基因的V3-V5区间扩增产物的DNA片段个数的百分比。
然后用Wilcoxon Rank Sum test检验比较相同时间点上每个目的细菌丰度在肥胖组与正常体重组的差异，再比较间隔一年的两个时间点上肥胖组与正常体重组的显著差异细菌的构成，以验证肥胖菌指标在一年后确实仍然准确有效。以p<0.05作为具有统计学显著性。
取两年的样本进行上述检测，平均结果如下表1：
表1为肥胖组中丰度显著改变的细菌类型及其丰度
在表中，Oscillospira在肥胖组持续降低的情况未见肥胖相关报道，为首次发现；而Firmicutes-Clostridiales-Clostridiaceae-Clostridium在成年肥胖人群中的升高和Bacteroidetes-Bacteroidaels-Bacteroidaceae-Bacteroides在成年肥胖人群中的降低在既往文献中有过报道(Nature 2009，Vol 457，480-485；InternationalJournal of Obesity(2009)33,758–767；Obesity(2009)17,1906–1915)，结果表明这种变化在儿童肥胖时就已经很显著；Coriobacteriaceae-Collinsella在肥胖组丰度显著改变的细菌也未见与肥胖相关的报道，尤其是随着肥胖的持续发展，Coriobacteriaceae-Collinsella在正常体重儿童中的丰度降低、而在肥胖儿童中的丰度增加，这种相反的变化趋势更便于用来持续监测儿童肥胖的发展变化情况。
34名7-10岁正常体重儿童中，其中22名7-10岁正常体重儿童肠道菌群满足如下E-H至少一种条件，另外12名7-10岁正常体重儿童肠道菌群不满足如下E-H任一种条件：
E.Firmicutes连续两年的丰度均低于0.779且大于0，且Clostridia或Clostridiales连续两年的丰度均低于0.732且大于0；
F.Bacteroidetes或Bacteroidia或Bacteroidaels连续两年的丰度均高于0.181，且Bacteroidaceae或Bacteroides连续两年的丰度均高于0.164；
G.Oscillospira连续两年的丰度均高于0.005；
H.Coriobacteriaceae或Collinsella连续两年的丰度均在0-0.03之间，且第二年丰度与第一年丰度比值低于等于0.75；
41名7-10岁肥胖儿童中，其中37名7-10岁肥胖儿童肠道菌群满足如下A-D至少一种条件，另外4名7-10岁肥胖儿童不满足上述任一种条件：
A.Firmicutes(厚壁菌门)连续两年的丰度均高于0.81且小于1，且Clostridia(梭菌纲)或Clostridiales(梭菌目)连续两年的丰度均高于0.785且小于1；
B.Bacteroidetes(拟杆菌门)、Bacteroidia(拟杆菌纲)或Bacteroidales(拟杆菌目)连续两年的丰度均低于0.167且大于0，同时Bacteroidaceae(拟杆菌科)或Bacteroides(拟杆菌属)连续两年的丰度均低于0.153且大于0；
C.Oscillospira(颤螺菌属)连续两年的丰度均低于0.0035且大于0；
D.Coriobacteriaceae(红蝽菌科)或Collinsella(柯林斯氏菌属)连续两年的丰度均为0-0.05，且第二年丰度与第一年丰度比值高于等于3。
将上述34名7-10岁正常体重儿童和41名7-10岁肥胖儿童在其各自14岁时，用BMI方法检测是否肥胖，结果如下：
满足上述E-H的至少一种条件的22名7-10岁正常体重儿童在其14岁没有发生肥胖(BMI值均小于22)；
不满足上述E-H的任一种条件的12名7-10岁正常体重儿童在其14岁发生肥胖(BMI值均大于26.5)；
满足上述A-D的至少一种条件的37名7-10岁肥胖儿童在其14岁仍然发生肥胖(BMI值大于27.5)；
不满足上述A-D的任一种条件的4名7-10岁肥胖儿童在其14岁体重分级变为正常(BMI值为21.6，22.1，20.9，21.3)。
因此，
可以通过检测7～10岁的中国待测肥胖儿童肠道菌群中目的菌连续两年的丰度，预测7～10岁的中国待测肥胖儿童在其青春期(12-18)是否发生持续肥胖，
若待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群满足如下A-D至少一种条件，则该待测7-10岁的中国肥胖儿童将会在青春期发生肥胖或持续肥胖：
A.Firmicutes(厚壁菌门)连续两年的丰度均高于0.81且小于1，且Clostridia(梭菌纲)或Clostridiales(梭菌目)连续两年的丰度均高于0.785且小于1；
B.Bacteroidetes(拟杆菌门)、Bacteroidia(拟杆菌纲)或Bacteroidales(拟杆菌目)连续两年的丰度均低于0.167且大于0，同时Bacteroidaceae(拟杆菌科)或Bacteroides(拟杆菌属)连续两年的丰度均低于0.153且大于0；
C.Oscillospira(颤螺菌属)连续两年的丰度均低于0.0035且大于0；
D.Coriobacteriaceae(红蝽菌科)或Collinsella(柯林斯氏菌属)连续两年的丰度均为0-0.05，且第二年丰度与第一年丰度比值高于等于3；
若待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群不满足1)中任一条件，则该待测肥胖儿童将不会在青春期发生肥胖或持续肥胖。
也可以通过检测7～10岁的中国待测儿童(肥胖儿童和正常体重儿童)肠道菌群中目的菌连续两年的丰度，预测7～10岁的中国待测儿童在其青春期(12-18)是否发生持续肥胖，
1)若待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群满足如下A-D至少一种条件，则该待测7-10岁的中国肥胖儿童将会在青春期发生肥胖或持续肥胖：
A.Firmicutes(厚壁菌门)连续两年的丰度均高于0.81且小于1，且Clostridia(梭菌纲)或Clostridiales(梭菌目)连续两年的丰度均高于0.785且小于1；
B.Bacteroidetes(拟杆菌门)、Bacteroidia(拟杆菌纲)或Bacteroidales(拟杆菌目)连续两年的丰度均低于0.167且大于0，同时Bacteroidaceae(拟杆菌科)或Bacteroides(拟杆菌属)连续两年的丰度均低于0.153且大于0；
C.Oscillospira(颤螺菌属)连续两年的丰度均低于0.0035且大于0；
D.Coriobacteriaceae(红蝽菌科)或Collinsella(柯林斯氏菌属)连续两年的丰度均为0-0.05，且第二年丰度与第一年丰度比值高于等于3；
2)若待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群不满足1)中任一条件，则该待测肥胖儿童将不会在青春期发生肥胖或持续肥胖。
3)若待测7-10岁的中国正常体重儿童肠道菌群满足如下E-H至少一种条件，则该待测正常体重儿童将不会在青春期发生肥胖：
E.Firmicutes连续两年的丰度均低于0.779且大于0，且Clostridia或Clostridiales连续两年的丰度均低于0.732且大于0；
F.Bacteroidetes或Bacteroidia或Bacteroidaels连续两年的丰度均高于0.181，且Bacteroidaceae或Bacteroides连续两年的丰度均高于0.164；
G.Oscillospira连续两年的丰度均高于0.005；
H.Coriobacteriaceae或Collinsella连续两年的丰度均在0-0.03之间，且第二年丰度与第一年丰度比值低于等于0.75；
4)若7-10岁的中国正常体重儿童肠道菌群不满足3)中任一条件，则该待测儿童将会在青春期发生肥胖。
从上述结果可以看出，本发明预测7-10岁的中国肥胖儿童是否再青春期发生肥胖的准确率可达90％。
从上述可以看出，本发明的方法可以预测中国7-10岁儿童是否在青春期发生肥胖或者持续肥胖。

Claims (10)

1.检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质在制备用于预测儿童在青春期发生肥胖或持续肥胖的产品中的应用，所述目的菌为Firmicutes、Clostridia、Clostridiales、Clostridiaceae、Clostridium、Bacteroidetes、Bacteroidia、Bacteroidales、Bacteroidaceae、Bacteroides、Oscillospira、Coriobacteriaceae和Collinsella中任一种。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述待测儿童肠道菌群中目的菌丰度为待测儿童肠道菌群中目的菌在所述待测儿童肠道菌群中的含量。
3.据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述待测儿童肠道菌群中目的菌在所述待测儿童肠道菌群中的含量为所述待测儿童肠道菌群中目的菌16S核糖体RNA基因的V3-V5区间扩增产物的DNA片段个数与所述待测儿童肠道菌群所有细菌16S核糖体RNA基因的V3-V5区间扩增产物的DNA片段个数的百分比。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述待测儿童为中国7-10岁的肥胖儿童和/或中国7-10岁的正常体重儿童；
所述青春期为12-18岁。
5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于：所述检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质包括由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成的引物对。
6.检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质，为预测儿童在青春期发生肥胖或持续肥胖的产品。
7.根据权利要求5所述的物质，其特征在于：所述检测待测儿童肠道菌群中目的菌丰度的物质为1)或2)：
1)由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成的引物对；
2)含有所述引物对的试剂盒。
8.根据权利要求6或7所述的物质，其特征在于：所述待测儿童为中国7-10岁的肥胖儿童和/或中国7-10岁的正常体重儿童；
所述青春期为12-16岁。
9.根据权利要求6-8中任一所述的物质，其特征在于：
所述待测儿童为中国7-10岁的肥胖儿童，所述试剂盒还包括记载在可读载体上的如下条件:
1)若待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群满足如下A-D至少一种条件，则该待测7-10岁的中国肥胖儿童将会在青春期发生肥胖或持续肥胖：
A.Firmicutes连续两年的丰度均高于0.81且小于1，且Clostridia或Clostridiales连续两年的丰度均高于0.785且小于1；
B.Bacteroidetes、Bacteroidia或Bacteroidales连续两年的丰度均低于0.167且大于0，同时Bacteroidaceae或Bacteroides连续两年的丰度均低于0.153且大于0；
C.Oscillospira连续两年的丰度均低于0.0035且大于0；
D.Coriobacteriaceae或Collinsella连续两年的丰度均为0-0.05，且第二年比第一年丰度高1倍以上；
2)若所述待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群不满足1)中任一条件，则该待测肥胖儿童将不会在青春期发生肥胖或持续肥胖。
10.根据权利要求6-8中任一所述的物质，其特征在于：
所述待测儿童为中国7-10岁的肥胖儿童和中国7-10岁的正常体重儿童，所述试剂盒还包括记载在可读载体上的如下条件:
1)若所述待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群满足如下A-D至少一种条件，则该待测7-10岁的中国肥胖儿童将会在青春期发生肥胖或持续肥胖：
A.Firmicutes连续两年的丰度均高于0.81且小于1，且Clostridia或Clostridiales连续两年的丰度均高于0.785且小于1；
B.Bacteroidetes、Bacteroidia或Bacteroidales连续两年的丰度均低于0.167且大于0，同时Bacteroidaceae或Bacteroides连续两年的丰度均低于0.153且大于0；
C.Oscillospira连续两年的丰度均低于0.0035且大于0；
D.Coriobacteriaceae或Collinsella连续两年的丰度均为0-0.05，且第二年比第一年丰度高1倍以上；
2)若所述待测7-10岁的中国肥胖儿童肠道菌群不满足1)中任一条件，则该待测肥胖儿童将不会在青春期发生肥胖或持续肥胖；
3)若所述待测7-10岁的中国正常体重儿童肠道菌群满足如下E-H至少一种条件，则该待测正常体重儿童将不会在青春期发生肥胖：
E.Firmicutes连续两年的丰度均低于0.779且大于0，且Clostridia或Clostridiales连续两年的丰度均低于0.732且大于0；
F.Bacteroidetes或Bacteroidia或Bacteroidaels连续两年的丰度均高于0.181，且Bacteroidaceae或Bacteroides连续两年的丰度均高于0.164；
G.Oscillospira连续两年的丰度均高于0.005；
H.Coriobacteriaceae或Collinsella连续两年的丰度均在0-0.03之间，且第二年丰度与第一年丰度比值低于等于0.75；
4)若所述待测7-10岁的中国正常体重儿童肠道菌群不满足3)中任一条件，则该待测儿童将会在青春期发生肥胖。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109486967A (zh) * 2018-12-29 2019-03-19 人和未来生物科技（长沙）有限公司 一种检测肥胖风险的试剂盒和用途
CN110097928A (zh) * 2019-04-17 2019-08-06 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 一种基于肠道菌群预测组织微量元素含量的预测方法和预测模型
CN111508607A (zh) * 2020-04-13 2020-08-07 山东师范大学 一种基于bp神经网络的肥胖症预测系统
CN112442533A (zh) * 2020-10-26 2021-03-05 中国人民解放军联勤保障部队第九00医院 一种过敏性紫癜发病风险预测的菌群标志物及其试剂盒
CN113025527A (zh) * 2021-03-25 2021-06-25 上海市第十人民医院 一种用来预测婴幼儿肥胖病的乳源性唾液链球菌及其分离方法
CN113403375A (zh) * 2021-02-20 2021-09-17 北京金则医学检验实验室有限公司 一种用于预测儿童肥胖症的组合物及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103667460A (zh) * 2013-11-25 2014-03-26 北京市心肺血管疾病研究所 一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103667460A (zh) * 2013-11-25 2014-03-26 北京市心肺血管疾病研究所 一种辅助检测食品中是否含有转基因植物成分的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EMMANUELLE LE CHATELIER等: "Richness of human gut microbiome correlates with metabolic markers", 《NATURE》 *
张翼: "膳食诱导肥胖大鼠的肠道菌群结构研究", 《中国优秀硕士学位论文数据库 医药卫生科技辑》 *
李毅: "21例散发合并腺瘤的结直肠癌患者肠道菌群结构改变", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109486967A (zh) * 2018-12-29 2019-03-19 人和未来生物科技（长沙）有限公司 一种检测肥胖风险的试剂盒和用途
CN110097928A (zh) * 2019-04-17 2019-08-06 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 一种基于肠道菌群预测组织微量元素含量的预测方法和预测模型
CN110097928B (zh) * 2019-04-17 2022-03-11 广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心) 一种基于肠道菌群预测组织微量元素含量的预测方法和预测模型
CN111508607A (zh) * 2020-04-13 2020-08-07 山东师范大学 一种基于bp神经网络的肥胖症预测系统
CN111508607B (zh) * 2020-04-13 2023-10-13 山东师范大学 一种基于bp神经网络的肥胖症预测系统
CN112442533A (zh) * 2020-10-26 2021-03-05 中国人民解放军联勤保障部队第九00医院 一种过敏性紫癜发病风险预测的菌群标志物及其试剂盒
CN113403375A (zh) * 2021-02-20 2021-09-17 北京金则医学检验实验室有限公司 一种用于预测儿童肥胖症的组合物及其应用
CN113025527A (zh) * 2021-03-25 2021-06-25 上海市第十人民医院 一种用来预测婴幼儿肥胖病的乳源性唾液链球菌及其分离方法

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