CN104725208A - 一种2,4-二乙酰基间苯三酚的分离纯化方法 - Google Patents
一种2,4-二乙酰基间苯三酚的分离纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104725208A CN104725208A CN201310698092.0A CN201310698092A CN104725208A CN 104725208 A CN104725208 A CN 104725208A CN 201310698092 A CN201310698092 A CN 201310698092A CN 104725208 A CN104725208 A CN 104725208A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- column
- macroporous resin
- method described
- dapg
- temperature
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
- C07C45/78—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
- C07C45/78—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C45/79—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
Abstract
本发明提供了一种从发酵液中使用大孔吸附树脂分离纯化2，4-二乙酰基间苯三酚(也称2，4-DAPG)的方法。本发明还提供了从发酵液中分离提取代谢产物2，4-DAPG的工艺流程。本发明整个操作流程中，能够较快的得到浓缩产物，而且大孔吸附树脂的可再生的特性使得树脂能够反复使用，节约成本。
Description
技术领域
本申请涉及生物技术领域，尤其是生物活性物质分离纯化领域。具体而言，本申请涉及发酵液中2,4-二乙酰基间苯三酚的分离纯化方法。
背景技术
2,4-DAPG作为一种广谱生物活性产物，对小麦全蚀病、番茄黑根病、小麦根腐病和甜菜猝倒病等植物病害有防治效果，是一种已被证实的对于农作物生长和生产有着重要作用的生物活性产物。
目前对于2,4-DAPG的研究主要集中在实验室，还没有工业化生产的相关研究。主要研究集中证2,4-DAPG能够防治多种植物病害，通过分子生物学手段对2,4-DAPG的代谢途径进行了相关研究；而针对发酵液中的2,4-DAPG的分离研究主要是用HPLC的定性分离鉴定，缺乏2,4-DAPG工业化生产的分离、制备的技术和工艺，无法实现发酵产物规模化的分离纯化制备。通过分子生物学的改造手段，虽然可以提高发酵产生2,4-DAPG的产量，但是如果没有良好的制备工艺，仍然无法将此生物活性产物投入到规模化生产以及实际应用中去。
因此，本领域中迫切需要开发从发酵产物中分离并且进行进一步纯化2,4-DAPG的方法，再将其投入实际应用，使生物活性产物2,4-DAPG在防治植物病害中发挥关键作用。
发明内容
本发明提供了一种从发酵液中分离纯化2,4-二乙酰基间苯三酚(也称2,4-DAPG)的方法。该方法具有工艺简单、品质稳定、产品收率高等优点。本发明的技术方案如下：
(1)发酵液预处理：将含有2,4-二乙酰基间苯三酚的发酵液，离心取上清液，备用；
(2)上清液处理：将步骤(1)中处理后的上清液微孔滤膜过滤，再用超滤膜超滤，获得滤液，用稀HCl调节滤液pH至2-4；
(3)大孔树脂吸附：将步骤(2)的滤液上大孔树脂柱至饱和，控制柱温和上样 流速；
(4)将步骤(3)中上样好的大孔树脂柱，用两倍柱床体积的纯水进行洗脱，控制柱温和流速；
(5)大孔树脂解吸附：将步骤(4)中纯水洗脱过的树脂柱，用50％-70％乙醇水溶液3倍柱床体积进行洗脱，控制柱温和洗脱流速，收集洗脱液；
(6)将步骤(5)中收集到的洗脱液，减压干燥，回收溶剂，获得粗结晶；
(7)将步骤(6)中获得的粗结晶，用90％乙醇水溶液重结晶，获得高纯度的2,4-DAPG；
优选步骤(1)中离心采用连续流离心，4000-5000rmp转速；
优选步骤(2)中所述的微孔滤膜孔径为0.22-0.6um，材质为聚四氟乙烯、聚醚砜或混合纤维素酯；所述的超滤膜的截留分子量为2000-5000，材质为聚醚砜、聚酰胺或聚碳酸酯；
优选步骤(3)、(4)、(5)中的柱温为25-35℃，流速为3-5BV/h；
优选步骤(3)、(4)、(5)中的大孔树脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、D101、DK110、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818中的一种或几种混合树脂，优先选用HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818；
优选步骤(6)中减压干燥的温度在50-70℃；
优选步骤(6)中重结晶的温度在50-70℃。
附图说明
没有。
具体实施方式
以下结合实例来进一步解释本发明，但实施案例并不对本发明做任何形式的限定。
实施例1
(1)发酵液预处理：将含有2,4-二乙酰基间苯三酚的发酵液，碟片式离心机连续流离心，离心转速为4000rmp，取上清液，备用；
(2)上清液处理：将步骤(1)中处理后的上清液先经过0.22um聚醚砜材质的微孔滤膜过滤，再用截留分子量为2000的聚醚砜材质的超滤膜超滤，获得滤液，用5M HCl调节pH至2-4，；
(3)大孔树脂吸附：将步骤(2)的滤液上大孔树脂柱至饱和，树脂装柱高度为 150cm、直径20cm、柱温28℃，上样流速为5BV/h；
(4)将步骤(3)中上样好的大孔树脂柱，用两倍柱床体积的纯水进行洗脱，柱温28℃，流速为5BV/h；
(5)大孔树脂解吸附：将步骤(4)中纯水洗脱过的树脂柱，用65％乙醇水溶液3倍柱床体积进行洗脱，柱温28℃，上样流速为5BV/h，收集洗脱液；
(6)将步骤(5)中收集到的洗脱液，55℃真空干燥，获得2,4-DAPG的粗结晶；
(7)将步骤(6)中获得的粗结晶，用90％乙醇水溶液重结晶，获得高纯度的2,4-DAPG。
实施例2
(1)发酵液预处理：将含有2,4-二乙酰基间苯三酚的发酵液，碟片式离心机5000rmp连续流离心，取上清液，备用；
(2)上清液处理：将步骤(1)中处理后的上清液先经过0.45um聚醚砜材质的微孔滤膜过滤，再用截留分子量为5000的聚醚砜材质的超滤膜超滤，获得滤液，用5M HCl调节pH至2；
(3)大孔树脂吸附：将步骤(2)的滤液上大孔树脂柱至饱和，树脂装柱高度为200cm、直径20cm、柱温25℃，上样流速为4BV/h；
(4)将步骤(3)中上样好的大孔树脂柱，用两倍柱床体积的纯水进行洗脱，柱温25℃，流速为4BV/h；
(5)大孔树脂解吸附：将步骤(4)中纯水洗脱过的树脂柱，用60％乙醇水溶液3倍柱床体积进行洗脱，柱温25℃，上样流速为4BV/h，收集洗脱液；
(6)将步骤(5)中收集到的洗脱液，60℃真空干燥，获得2，4-DAPG粗结晶；
(7)将步骤(6)中获得的粗结晶，用90％乙醇水溶液重结晶，获得高纯度的2，4-DAPG。
Claims (7)
1.一种从发酵液中分离纯化2,4-二乙酰基间苯三酚(也称2,4-DAPG)的方法，其特征在于它，该方法包括以下步骤，
(1)发酵液预处理：将含有2,4-二乙酰基间苯三酚的发酵液，离心取上清液，备用；
(2)上清液处理：将步骤(1)中处理后的上清液微孔滤膜过滤，再用超滤膜超滤，获得滤液，用稀HCl调节滤液pH至2-4；
(3)大孔树脂吸附：将步骤(2)的滤液上大孔树脂柱至饱和，控制柱温和上样流速；
(4)将步骤(3)中上样好的大孔树脂柱，用两倍柱床体积的纯水进行洗脱，控制柱温和流速；
(5)大孔树脂解吸附：将步骤(4)中纯水洗脱过的树脂柱，用50％-70％乙醇水溶液3倍柱床体积进行洗脱，控制柱温和洗脱流速，收集洗脱液；
(6)将步骤(5)中收集到的洗脱液，减压干燥，回收溶剂，获得粗结晶；
(7)将步骤(6)中获得的粗结晶，用90％乙醇水溶液重结晶，获得高纯度的2,4-DAPG。
2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(1)中离心采用连续流离心，4000-5000rmp转速。
3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(2)中所述的微孔滤膜孔径为0.22-0.6um，材质为聚四氟乙烯、聚醚砜或混合纤维素酯；所述的超滤膜的截留分子量为2000-5000，材质为聚醚砜、聚酰胺或聚碳酸酯。
4.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：树脂柱的高径比为7-16，在步骤(3)、(4)、(5)中的柱温为25-35℃，流速为3-6BV/h。
5.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：大孔树脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、D101、DK110、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818中的一种或几种混合树脂，优先选用HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818。
6.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(6)中减压干燥的温度在50-70℃。
7.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：在步骤(7)中重结晶的温度在50-70℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310698092.0A CN104725208A (zh) | 2013-12-18 | 2013-12-18 | 一种2,4-二乙酰基间苯三酚的分离纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310698092.0A CN104725208A (zh) | 2013-12-18 | 2013-12-18 | 一种2,4-二乙酰基间苯三酚的分离纯化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104725208A true CN104725208A (zh) | 2015-06-24 |
Family
ID=53449693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310698092.0A Pending CN104725208A (zh) | 2013-12-18 | 2013-12-18 | 一种2,4-二乙酰基间苯三酚的分离纯化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104725208A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105543288A (zh) * | 2015-11-18 | 2016-05-04 | 寿光富康制药有限公司 | 一种大孔树脂法提高间苯三酚生产菌的产量的方法 |
| CN109456927A (zh) * | 2018-11-14 | 2019-03-12 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种高产2,4-二乙酰基间苯三酚的重组菌及其构建方法与应用 |
-
2013
- 2013-12-18 CN CN201310698092.0A patent/CN104725208A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105543288A (zh) * | 2015-11-18 | 2016-05-04 | 寿光富康制药有限公司 | 一种大孔树脂法提高间苯三酚生产菌的产量的方法 |
| CN109456927A (zh) * | 2018-11-14 | 2019-03-12 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种高产2,4-二乙酰基间苯三酚的重组菌及其构建方法与应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10214552B2 (en) | Method for purifying beta-nicotinamide mononucleotide | |
| CN102976923B (zh) | 从乳酸发酵液中提取乳酸的工艺 | |
| CN102363594B (zh) | 一种从发酵液中分离纯化丁二酸的工艺 | |
| CN105859809B (zh) | 一种从发酵液中提取β-胸苷的方法 | |
| CN1928121A (zh) | 一种从糖化后的葡萄糖浆中提取高纯度葡萄糖的方法 | |
| CN104529755B (zh) | 一种从转化液中分离α-酮戊二酸的方法 | |
| CN111087432B (zh) | 一种n-乙酰神经氨酸的分离提取方法 | |
| CN106755143A (zh) | 一种从乳酸发酵液中连续提取高纯度乳酸的方法 | |
| CN102329340A (zh) | 一种d-甘露糖制备方法 | |
| CN105566136A (zh) | 一种从发酵液中分离提取4-羟基异亮氨酸的方法 | |
| CN104974032A (zh) | 一种从d-乳酸钠发酵液中分离提取d-乳酸的方法 | |
| CN107602404B (zh) | 一种从糖蜜酒精废液提取高纯度甜菜碱的方法 | |
| CN103709235A (zh) | 一种减少溶媒使用的提取高纯度恩拉霉素的方法 | |
| CN104725208A (zh) | 一种2,4-二乙酰基间苯三酚的分离纯化方法 | |
| CN102827884B (zh) | 一种提取玉米浸泡过程中生产的l-乳酸的方法 | |
| CN101665448A (zh) | 一种利用膜分离技术从发酵液中分离提取冠菌素的方法 | |
| Hatti-Kaul | Downstream processing in industrial biotechnology | |
| CN107629096A (zh) | 采用超滤与离子交换技术精制发酵液中β‑胸苷的方法 | |
| CN109053707B (zh) | 一种莫匹罗星的提纯方法 | |
| CN103113423A (zh) | 一种采用离子交换与膜分离技术从发酵液中提取d-核糖的方法 | |
| CN103539688B (zh) | 一种从谷氨酸棒杆菌发酵液中分离提取l-丝氨酸的方法 | |
| WO2014045299A4 (en) | Continuous biotransformation of substituted aromatic carboxylic acids to their selective aldehydes and alcohols | |
| CN103145771B (zh) | 一种采用超滤与离子交换技术从发酵液中提取d-核糖的方法 | |
| CN105111254A (zh) | 一种林可霉素的提取方法 | |
| CN110396058A (zh) | 一种新型骨化二醇（25-羟基维生素d3）分离纯化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20150624 |