CN104719669A - 一种栉孔扇贝幼体饵料的制作和投喂方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种栉孔扇贝幼体饵料的制作和投喂方法，属水产养殖领域。在栉孔扇贝育苗过程中，常发生因饵料不足导致苗种体质弱、成活率低。本发明技术核心是利用磁化水和蓝光培养4种海洋微藻并制成藻膏投喂栉孔扇贝幼苗，营养全面，扇贝幼虫生长快，体质健壮，成活率高；用磁化水培养微藻，藻体繁殖旺盛，颜色纯正，采用贮水罐培养微藻，洗刷方便，成本低，不易碰碎，可重复使用，不易污染；采用蓝光培养，微藻中EPA、DHA含量高；将藻液制成藻膏投喂，投喂量易控制，不污染水体，饵料可常年生产，占空间小，运输和储存方便。

Description

一种栉孔扇贝幼体饵料的制作和投喂方法

技术领域 本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种栉孔扇贝幼体饵料的制作和投喂方法。

背景技术

栉孔扇贝，学名Chlamys Farreri，俗名干贝蛤、海扇，属软体动物门、瓣鳃纲、珍珠贝目、扇贝科、扇贝属。一般壳长74mm，壳高77mm，壳宽27.5mm，两壳略对称，右壳较平，壳上有多条粗细不等放射肋，两壳前后耳大小不等，前大后小，壳表呈浅灰白色。栉孔扇贝生活在低潮线下、水流较急、盐度较高、透明度较大、水深10-30m岩礁或有贝壳沙砾硬质海底，以足丝附着侧卧于附着基上，右壳在下。可开闭双壳排水，以反作用力作短距离游泳。闭壳运动发出清脆声响，能脱落足丝到水中游动。正常生活时，张开两壳，滤食海水中单细胞藻类和有机碎屑以及其它小型微生物。若环境不适，可切断足丝，急剧伸缩闭壳肌，借贝壳张闭排水和海流力量作短距离移动。对低温抵抗力较强，0℃以下也能存活。最适水温15-20℃，高于25℃生长受抑制，4℃以下几乎不生长。高盐种类，最适盐度23-34‰，耗氧率高，抗干露能力较差。多年生，1-2龄贝生长速度较快，在人工筏式养殖的条件下，当年常温培育的苗种，入冬前壳高可达2cm，第二年底壳高可达7cm，广布于广东、广西、福建东南海域。栉孔扇贝肉质细嫩，味道鲜美，营养丰富，生长快，养殖周期短，属名贵海产品，深受人们欢迎。除鲜吃外，还可将闭壳肌取出冷冻保存，称冻扇贝柱或冻鲜贝，是宾馆、饭店高档菜肴，用扇贝闭壳肌制成的干品“干贝”，是驰名中外的海珍品，居海产八珍之首。

在栉孔扇贝育苗过程中，为幼苗提供质量优良、数量充足的优质饵料是保证幼体健康成长、成活率高、继而保证成体养殖高产、稳产的重要环节，过去常发生因幼体饵料不足导致苗种体质瘦弱、成活率低、甚至大量死亡情况，尽管过去很多学者和研究员就亲贝运输、催熟、种苗培育、生长发育、海区适应等进行了大量研究和试验并取得了很大进展，但仍在一定程度和范围内存在幼苗饵料供应不足、质量不高、苗种体质差、扇贝产量低、生产不稳等问题。关于栉孔扇贝的养殖方法，过去刘志鸿等公开了一种提高栉孔扇贝免疫力的褐藻多糖复合剂制备和投喂方法(申请号CN200410024577)，是将褐藻胶经酶解后形成低分子量的褐藻多糖，与壳聚糖相互中和制备成非水溶性的褐藻多糖复合剂；后将褐藻多糖复合剂用海水洗入，定量定时与饵料同时投喂，使褐藻多糖复合剂随扇贝的滤食而被摄入。褐藻多糖复合剂能够显著提高三倍体与二倍体栉孔扇贝血细胞吞噬能力以及肝脏酸性磷酸酶、碱性磷酸酶活性，增强其免疫功能和抗病力。该发明适用于三倍体与二倍体栉孔扇贝苗种培育及亲贝培育，有助于提高栉孔扇贝抗病力和成活率，经生产应用，三倍体苗种成活率可提高10-20％。但该技术制作工艺复杂，成本较高，难以推广。另外，杜佳垠发明了一种海湾扇贝苗种培育方法(申请号CN88104378)，该发明主要解决了海湾扇贝苗种提早育成问题，其主要技术特征在于利用池塘(包括对虾养殖池)培育海湾扇贝稚贝。培育器材为网袋，放苗规格为400-1000微米，培育水温为15-30℃。与现行方法相比，该发明利用天然饵料提早15-30天育成海湾扇贝养成所用苗种，并避免海况不利影响，但该技术占地面积大，操作麻烦，易污染，养殖周期长。

为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种栉孔扇贝幼体饵料的制作和投喂方法，技术核心是利用磁化水和蓝光混合培养4种海洋微藻并制成藻膏投喂扇贝幼苗。与传统技术相比，本发明的技术创新性表现在：1)采用混合微藻投喂栉孔扇贝幼虫，营养全面，避免了单一饵料的营养不足和营养缺乏，扇贝幼虫生长快，健壮活泼，成活率高；2)打破了传统微藻单种纯培养做法，本技术采用4种微藻混合培养，充分利用空间和营养盐及光照，4种微藻相互促进，生长快，产量高；3)用磁化水培养微藻，藻体繁殖旺盛，颜色纯正，用磁化水培养扇贝幼虫，体质健壮，成活率提高70％；4)微藻培养过程中，采用优化营养盐配方，特别是采用缓释肥丁烯叉二脲、草酰铵、聚磷酸铵、偏磷酸钾和复合肥磷酸二铵、氨化过磷酸钙，肥效持久、稳定，营养全面，微藻生长快，产量高；5)采用贮水罐培养微藻，洗刷方便，产量高，透光性好，成本低，不易碰碎或划破，可重复使用，不易污染；特别是在罐外覆以蓝色薄膜，采用蓝光培养，微藻中高不饱和脂肪酸EPA、DHA含量明显增高；2个贮水罐串联养殖微藻，通入的气体得到2次利用，节约了能量和资源；6)根据微藻生长规律，培养的早、中、晚期提供不同光照时间、强度和温度，在早期光照时间较短，强度较小，避免强光对藻细胞造成光伤害，晚期提供较强光照及较高温度，有利于细胞中EPA、DHA等高不饱和脂肪酸大量积累，且在培养中后期补充营养盐，促进了微藻持续、快速生长；7)与传统的做法-用藻液直接投喂贝苗不同，本发明将藻液制成藻膏投喂，投喂量易控制，不污染水体，微藻可常年生产，冷冻保存不变质，饵料供应有保证，不受季节限制，且占用空间小，储存和运输方便，还可进行工厂化、规模化、市场化生产和交易；8)采用玻璃鱼缸培养栉孔扇贝幼虫，鱼缸可直接从市场购买，操作简单，照明、洗刷、充气和换水方便；9)传统上收集藻细胞，多采用离心法，耗电量大，离心机昂贵，成本太高，本技术采用复合沉淀剂，花钱少，沉淀完全、彻底、迅速，操作简单方便。

表1四种微藻的生物学特征

发明内容

为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种栉孔扇贝幼体饵料的制作和投喂方法，具体方法如下：

步骤1微藻培养液的配制

培养液成分配方(质量比)：丁烯叉二脲0.4份，草酰铵0.3份，聚磷酸铵0.01份，偏磷酸钾0.002份，磷酸二铵0.004份，氨化过磷酸钙0.005份，NH₄NO₃ 0.8份，KH₂PO₄ 0.004份，Na₂SiO₃·9H₂O 0.02份，NaHCO₃0.8份，NH₄VO₃0.02份，ZnSO₄·7H₂O 0.08份，Cr₂(SO₄)₄·24H₂O0.02份，f/2微量元素溶液1.2份，维生素S-3溶液0.8份，土壤浸出液0.4份，海泥抽取液0.6份，吲哚乙酸0.0001份，亚精胺0.002份，中草药浸出液0.5份，煮沸冷却磁化后的海水1000份；用15％的乙酸溶液(体积比)和10％的NaOH溶液(重量比)调节pH值至7.8-8.2，装入三角烧瓶，放在摇床上摇匀混合15分钟；其中f/2微量元素溶液配方(按配制1000毫升溶液计)：ZnSO₄·4H₂O 23毫克，MnCl₂·4H₂O 178毫克，CuSO₄·5H₂O 10毫克，FeC₆H₅O₇·5H₂O3.9克，Na₂MoO₄·2H₂O 7.3毫克，CoCl₂·6H₂O 12毫克，Na₂EDTA 4.35克，蒸馏水1000毫升；维生素S-3溶液配法：硫胺素盐酸盐50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸钙10毫克，对氨基苯甲酸1.0克，维生素H 0.1克，肌醇0.5克，叶酸0.2微克，胸间氮苯0.3克，蒸馏水1000毫升；

步骤2微藻培养

采用二级培养法培养。第一级培养：培养容器为20000毫升的细口玻璃瓶，工作体积12000毫升。洗刷干净后用煮沸冷却的消毒海水润洗3遍，瓶口用75％酒精拭擦消毒，加入步骤1所述培养液10000毫升，取无污染、纯种、处于指数生长期的娇柔塔胞藻，湛江叉鞭金藻，膜状舟形藻，异胶藻分别接种，接种密度娇柔塔胞藻6万细胞/毫升，湛江叉鞭金藻3万细胞/毫升，膜状舟形藻4万细胞/毫升，异胶藻8万细胞/毫升。用干净报纸和橡皮筋封瓶口，放进微藻培养室不充气培养，空调控温，日光灯管提供光源，每天摇瓶6次，每次5分钟，培养的前3天，光照强度设为3000lux，温度控制为18℃，光照周期为L∶D＝12h∶12h，即12小时光照，12小时黑暗；第4-6天，光强设为6000lux，温度调节为21℃，光暗周期调至L∶D＝16h∶8h为；到第7天，补充步骤1所述培养液1000毫升和蒸馏水500毫升，以补充消耗掉的营养盐和挥发的水分并稀释藻液；第7-9天，调节温度至25℃，光照强度12000lux，光暗周期L∶D＝20h∶4h，即每天20小时光照，4小时黑暗。到第9天，藻细胞密度合计可达2400万/每毫升，即可转入第二级培养。第二级培养：取两个1000升的白色卧式贮水桶(市场有售)，洗刷干净，加入200ppm的高锰酸钾溶液浸泡消毒3小时，用煮沸冷却海水冲洗3遍，每个桶加入步骤1所述培养液600升，第一级培养得到的藻液作为种子液按1∶8的体积比例接种(即8份培养液加入1份种子液)。桶的盖子上分别打上2个孔，孔径10毫米，其中一个孔插入充气管，另一孔插入排气管，管的内经8毫米，第二个桶的充气管与第一个桶的排气管相连，这样充入的气体可以得到二次利用。第一个桶的充气管顶端连接一空气压缩机，充入混合气体，气体成分和体积比例为V_空气∶V_纯氧气∶V_{纯二氧化碳}∶V_纯氨气＝98∶0.8∶0.9∶0.3，充气量不宜太大，能让藻细胞悬浮不沉淀即可。将此二桶放入微藻培养室进行培养，室内空调控温，日光灯管提供光源，桶的外表面覆盖一层很薄的蓝色塑料薄膜，这样射入藻液的主要是蓝色光，有利于细胞内高不饱和脂肪酸EPA、DHA积累。每天用15％的乙酸溶液(体积比)和10％的NaOH溶液(重量比)调节pH值至7.8-8.2。培养的前3天，光照强度设为6000lux(由于塑料桶壁的和薄膜的阻挡和吸收作用，实际到达藻液的光强约为3000lux.)，温度控制为18℃，光照周期为L∶D＝12h∶12h，即12小时光照，12小时黑暗；第4-6天，光强设为12000lux，温度调节为21℃，光暗周期调至L∶D＝16h∶8h为；到第7天，每个桶补充步骤1所述培养液25升和10升蒸馏水，以补充消耗掉的营养盐和挥发的水分并稀释藻液；第7-9天，调节温度至26℃，光照强度18000lux，光暗周期L∶D＝21h∶3h，即每天21小时光照，3小时黑暗。到第9天，藻细胞密度合计可达2100万/毫升，停止培养，即可采收。

步骤3微藻采收

采收方法：将明矾、甲壳素、聚丙烯酰胺、硫酸亚铁按1∶1.5∶0.8∶0.4的质量比混合，充分搅拌、混合均匀制成复合沉淀剂，按1升藻液加入200毫克复合沉淀剂的量加入沉淀剂，充分搅拌、混合15分钟，静置、沉淀24小时，绝大多数藻细胞沉淀到底部，弃上清液，得底部牙膏状藻膏，装入食品用塑料薄膜袋，置于-15℃冰箱冷冻保存，备用，即得到栉孔扇贝幼体饵料。

一种栉孔扇贝幼体饵料的投喂方法，具体步骤如下：

栉孔扇贝幼虫的培养和投喂：当受精卵孵化至D形幼虫时，将幼虫转移至100L的玻璃鱼缸(可自动充气和照明，市场有售)中进行培养，鱼缸为长方体或立方体，实际装水60L，采用煮沸消毒冷却后的磁化海水培养，幼虫密度为4-8个/ml，不间断充气，充气量不宜太大，水体保持较高溶氧即可，充气管末端连一散气石，避免形成大气泡伤害扇贝幼虫；投喂权利要求1所述的栉孔扇贝幼体饵料，第一天投喂量为2克/m³，分6次投喂，栉孔扇贝幼体饵料投喂量每天增加10％；具体投喂方法是：取栉孔扇贝幼体饵料2克，放在研钵中研碎，转入150毫升的三角烧瓶中，加入蒸馏水80毫升，充分摇匀，后均匀泼洒到培养容器中，然后均匀搅拌10分钟；换水1次/2天，换水量为总量的1/5-1/3，换水时用网目大小为60微米的聚乙烯筛绢阻挡，以免幼虫随水流走；培养期间水温20-23℃，相对密度1.019，光照强度1000-1200lux；当眼点幼虫出现率为80％以上、大眼点率为40％以上开始投附着基棕绳帘，投放前棕绳帘要经过严格洗刷处理，投放时再用200ppm孔雀石绿浸泡12小时，采用先倒池后投附着基，幼虫培育期间连续微量充气；每4-5天施链霉素4-6毫克/升，投附着基后连续施2-3天漂白粉消毒，每天一次，每次5-8毫克/升；稚贝出池：当稚贝平均壳高达600微米时，开始出池下海保苗。

有益结果

为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种栉孔扇贝幼体饵料的制作和投喂方法，技术核心是利用磁化水和蓝光混合培养4种海洋微藻并制成藻膏投喂扇贝幼苗。与传统技术相比，本发明的技术创新性表现在：1)采用混合微藻投喂栉孔扇贝幼虫，营养全面，避免了单一饵料的营养不足和营养缺乏，扇贝幼虫生长快，健壮活泼，成活率高；2)打破了传统微藻单种纯培养做法，本技术采用4种微藻混合培养，充分利用空间和营养盐及光照，4种微藻相互促进，生长快，产量高；3)用磁化水培养微藻，藻体繁殖旺盛，颜色纯正，用磁化水培养扇贝幼虫，体质健壮，成活率提高70％；4)微藻培养过程中，采用优化营养盐配方，特别是采用缓释肥丁烯叉二脲、草酰铵、聚磷酸铵、偏磷酸钾和复合肥磷酸二铵、氨化过磷酸钙，肥效持久、稳定，营养全面，微藻生长快，产量高；5)采用贮水罐培养微藻，洗刷方便，产量高，透光性好，成本低，不易碰碎或划破，可重复使用，不易污染；特别是在罐外覆以蓝色薄膜，采用蓝光培养，微藻中高不饱和脂肪酸EPA、DHA含量明显增高；2个贮水罐串联养殖微藻，通入的气体得到2次利用，节约了能量和资源；6)根据微藻生长规律，培养的早、中、晚期提供不同光照时间、强度和温度，在早期光照时间较短，强度较小，避免强光对藻细胞造成光伤害，晚期提供较强光照及较高温度，有利于细胞中EPA、DHA等高不饱和脂肪酸大量积累，且在培养中后期补充营养盐，促进了微藻持续、快速生长；7)与传统的做法-用藻液直接投喂贝苗不同，本发明将藻液制成藻膏投喂，投喂量易控制，不污染水体，微藻可常年生产，冷冻保存不变质，饵料供应有保证，不受季节限制，且占用空间小，储存和运输方便，还可进行工厂化、规模化、市场化生产和交易；8)采用玻璃鱼缸培养栉孔扇贝幼虫，鱼缸可直接从市场购买，操作简单，照明、洗刷、充气和换水方便；9)传统上收集藻细胞，多采用离心法，耗电量大，离心机昂贵，成本太高，本技术采用复合沉淀剂，花钱少，沉淀完全、彻底、迅速，操作简单方便。

附图说明

图1为娇柔塔胞藻形态；

图2为湛江叉鞭金藻形态；

图3为膜状舟形藻形态；

图4为异胶藻形态；

图5混合微藻的第二级培养方法；其中附图标记为：1充气管，2排气管；箭头所指为气体走向；

具体实施方式

一种栉孔扇贝幼体饵料的制作方法，具体步骤如下：

步骤1微藻培养液的配制

培养液成分配方(重量比)：丁烯叉二脲0.4份，草酰铵0.3份，聚磷酸铵0.01份，偏磷酸钾0.002份，磷酸二铵0.004份，氨化过磷酸钙0.005份，NH₄NO₃ 0.8份，KH₂PO₄0.004份，Na₂SiO₃·9H₂O 0.02份，NaHCO₃0.8份，NH₄VO₃0.02份，ZnSO₄·7H₂O 0.08份，Cr₂(SO₄)₄·24H₂O0.02份，f/2微量元素溶液1.2份，维生素S-3溶液0.8份，土壤浸出液0.4份，海泥抽取液0.6份，吲哚乙酸0.0001份，亚精胺0.002份，中草药浸出液0.5份，煮沸冷却磁化后的海水1000份；用15％的乙酸溶液(体积比)和10％的NaOH溶液(重量比)调节pH值至7.8-8.2，装入三角烧瓶，放在摇床上摇匀混合15分钟；其中f/2微量元素溶液配方(按配制1000毫升溶液计)：ZnSO₄·4H₂O 23毫克，MnCl₂·4H₂O 178毫克，CuSO₄·5H₂O 10毫克，FeC₆H₅O₇·5H₂O3.9克，Na₂MoO₄·2H₂O 7.3毫克，CoCl₂·6H₂O 12毫克，Na₂EDTA 4.35克，蒸馏水1000毫升；维生素S-3溶液配法：硫胺素盐酸盐50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸钙10毫克，对氨基苯甲酸1.0克，维生素H 0.1克，肌醇0.5克，叶酸0.2微克，胸间氮苯0.3克，蒸馏水1000毫升；

步骤2微藻培养

采用二级培养法培养，第一级培养：培养容器为20000毫升的细口玻璃瓶，工作体积12000毫升；洗刷干净后用煮沸冷却的消毒海水润洗3遍，瓶口用75％酒精拭擦消毒，加入步骤1所述培养液10000毫升，取无污染、纯种、处于指数生长期的娇柔塔胞藻，湛江叉鞭金藻，膜状舟形藻，异胶藻分别接种，接种密度娇柔塔胞藻6万细胞/毫升，湛江叉鞭金藻3万细胞/毫升，膜状舟形藻4万细胞/毫升，异胶藻8万细胞/毫升；用干净报纸和橡皮筋封瓶口，放进微藻培养室不充气培养，空调控温，日光灯管提供光源，每天摇瓶6次，每次5分钟，培养的前3天，光照强度设为3000lux，温度控制为18℃，光照周期为L∶D＝12h∶12h，即12小时光照，12小时黑暗；第4-6天，光强设为6000lux，温度调节为21℃，光暗周期调至L∶D＝16h∶8h为；到第7天，补充步骤1所述培养液1000毫升和蒸馏水500毫升，以补充消耗掉的营养盐和挥发的水分并稀释藻液；第7-9天，调节温度至25℃，光照强度12000lux，光暗周期L∶D＝20h∶4h，即每天20小时光照，4小时黑暗。到第9天，藻细胞密度合计可达2400万/每毫升，即可转入第二级培养；第二级培养：取两个1000升的白色卧式贮水桶(市场有售)，洗刷干净，加入200ppm的高锰酸钾溶液浸泡消毒3小时，用煮沸冷却海水冲洗3遍，每个桶加入步骤1所述培养液600升，第一级培养得到的藻液作为种子液按1∶8的体积比例接种(即8份培养液加入1份种子液)；桶的盖子上分别打上2个孔，孔径10毫米，其中一个孔插入充气管，另一孔插入排气管，管的内经8毫米，第二个桶的充气管与第一个桶的排气管相连，这样充入的气体可以得到二次利用；第一个桶的充气管顶端连接一空气压缩机，充入混合气体，气体成分和体积比例为V_空气∶V_纯氧气∶V_{纯二氧化碳}∶V_纯氨气＝98∶0.8∶0.9∶0.3，充气量不宜太大，能让藻细胞悬浮不沉淀即可；将此二桶放入微藻培养室进行培养，室内空调控温，日光灯管提供光源，桶的外表面覆盖一层很薄的蓝色塑料薄膜，这样射入藻液的主要是蓝色光，有利于细胞内高不饱和脂肪酸EPA、DHA积累；每天用15％的乙酸溶液(体积比)和10％的NaOH溶液(重量比)调节pH值至7.8-8.2；培养的前3天，光照强度设为6000lux(由于塑料桶壁的和薄膜的阻挡和吸收作用，实际到达藻液的光强约为3000lux.)，温度控制为18℃，光照周期为L∶D＝12h∶12h，即12小时光照，12小时黑暗；第4-6天，光强设为12000lux，温度调节为21℃，光暗周期调至L∶D＝16h∶8h为；到第7天，每个桶补充步骤1所述培养液25升和10升蒸馏水，以补充消耗掉的营养盐和挥发的水分并稀释藻液；第7-9天，调节温度至26℃，光照强度18000lux，光暗周期L∶D＝21h∶3h，即每天21小时光照，3小时黑暗；到第9天，藻细胞密度合计可达2100万/毫升，停止培养，即可采收；

步骤3微藻采收采收方法：将明矾、甲壳素、聚丙烯酰胺、硫酸亚铁按1∶1.5∶0.8∶0.4的质量比混合，充分搅拌、混合均匀制成复合沉淀剂，按1升藻液加入200毫克复合沉淀剂的量加入沉淀剂，充分搅拌、混合15分钟，静置、沉淀24小时，绝大多数藻细胞沉淀到底部，弃上清液，得底部牙膏状藻膏，装入食品用塑料薄膜袋，置于-15℃冰箱冷冻保存，备用，即得到栉孔扇贝幼体饵料。

一种栉孔扇贝幼体饵料的投喂方法，具体步骤如下：

栉孔扇贝幼虫的培养和投喂：当受精卵孵化至D形幼虫时，将幼虫转移至100L的玻璃鱼缸(可自动充气和照明，市场有售)中进行培养，鱼缸为长方体或立方体，实际装水60L，采用煮沸消毒冷却后的磁化海水培养，幼虫密度为4-8个/ml，不间断充气，充气量不宜太大，水体保持较高溶氧即可，充气管末端连一散气石，避免形成大气泡伤害扇贝幼虫；投喂上述的栉孔扇贝幼体饵料，第一天投喂量为2克/m³，分6次投喂，栉孔扇贝幼体饵料投喂量每天增加10％；具体投喂方法是：取栉孔扇贝幼体饵料2克，放在研钵中研碎，转入150毫升的三角烧瓶中，加入蒸馏水80毫升，充分摇匀，后均匀泼洒到培养容器中，然后均匀搅拌10分钟；换水1次/2天，换水量为总量的1/5-1/3，换水时用网目大小为60微米的聚乙烯筛绢阻挡，以免幼虫随水流走；培养期间水温20-23℃，相对密度1.019，光照强度1000-1200lux；当眼点幼虫出现率为80％以上、大眼点率为40％以上开始投附着基棕绳帘，投放前棕绳帘要经过严格洗刷处理，投放时再用200ppm孔雀石绿浸泡12小时，采用先倒池后投附着基，幼虫培育期间连续微量充气；每4-5天施链霉素4-6毫克/升，投附着基后连续施2-3天漂白粉消毒，每天一次，每次5-8毫克/升；稚贝出池：当稚贝平均壳高达600微米时，开始出池下海保苗。

步骤1中各种营养盐要按配方中提供的顺序加入，以免发生化学反应；

步骤1中各种无机营养盐和维生素可预先配成母液且置于4℃冰箱冷藏保存备用，放置时间不要超过30天；

步骤1中所述土壤浸出液制备方法：取树林中上层土壤1000份，加蒸馏水1000份，再加NaOH 2.5份，加热，煮沸45分钟，冷却、沉淀12小时，取上清液，滤纸过滤，滤液即为土壤浸出液；

步骤1中所述海泥抽取液制备方法：取比较肥沃又不於黑的海泥，以1份泥加2份淡水，充分搅拌均匀，静置1-2分钟，取上层泥浆于铝锅中，按每1000毫升泥浆加1克NaOH的量加入NaOH，煮沸25分钟。煮时需不断搅拌均匀，煮后静置24小时取上清液备用；

步骤1中所述NH₄NO₃，KH₂PO₄，Na₂SiO₃·9H₂O，NaHCO₃，NH₄VO₃，ZnSO₄·7H₂O等化学药品纯度均需化学纯级别；

步骤1中所述中草药组成和质量份数为：生地黄8份，防风5份，白芷7份，川芎14份，苍术6份，黄柏18份，玉竹16份，蒲公英10份，当归3份，橘皮6份，黄连5份，元参18份，金银花9份，丹参2份，连翘15份，车前草7份，蒸馏水48份；先浸泡45分钟，用砂锅煎煮，大火(武火)加热，烧开后小火(文火)煮沸15分钟后停止加热，冷却、静置8小时，取上清液用120目筛绢过滤，即得复合中草药药液，4℃冰箱保存，备用；

步骤1中培养微藻所用磁化水制作方法：海水煮沸后，冷却，流经磁化水器后，即为磁化水。磁化水器磁感应强度为0.3T，流量为2t/h，流速为0.3m/s。步骤4中培养扇贝幼虫所用磁化水也是用同样的方法制得；

步骤4中培养扇贝幼虫所用的鱼缸买来时里面可能带有一些装饰用的水草、石头、贝壳、假山等，予以清除，以防止扇贝幼虫附着且方便操作、避免污染。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (2)

1.一种栉孔扇贝幼体饵料的制作方法，其特征在于具体步骤如下：

步骤1微藻培养液的配制

培养液成分配方(重量比)：丁烯叉二脲0.4份，草酰铵0.3份，聚磷酸铵0.01份，偏磷酸钾0.002份，磷酸二铵0.004份，氨化过磷酸钙0.005份，NH₄NO₃ 0.8份，KH₂PO₄ 0.004份，Na₂SiO₃·9H₂O 0.02份，NaHCO₃ 0.8份，NH₄VO₃ 0.02份，ZnSO₄·7H₂O 0.08份，Cr₂(SO₄)₄·24H₂O0.02份，f/2微量元素溶液1.2份，维生素S-3溶液0.8份，土壤浸出液0.4份，海泥抽取液0.6份，吲哚乙酸0.0001份，亚精胺0.002份，中草药浸出液0.5份，煮沸冷却磁化后的海水1000份；用15％的乙酸溶液(体积比)和10％的NaOH溶液(重量比)调节pH值至7.8-8.2，装入三角烧瓶，放在摇床上摇匀混合15分钟；其中f/2微量元素溶液配方(按配制1000毫升溶液计)：ZnSO₄·4H₂O 23毫克，MnCl₂·4H₂O 178毫克，CuSO₄·5H₂O 10毫克，FeC₆H₅O₇·5H₂O3.9克，Na₂MoO₄·2H₂O 7.3毫克，CoCl₂·6H₂O 12毫克，Na₂EDTA 4.35克，蒸馏水1000毫升；维生素S-3溶液配法：硫胺素盐酸盐50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸钙10毫克，对氨基苯甲酸1.0克，维生素H 0.1克，肌醇0.5克，叶酸0.2微克，胸间氮苯0.3克，蒸馏水1000毫升；

步骤2微藻培养

采用二级培养法培养，第一级培养：培养容器为20000毫升的细口玻璃瓶，工作体积12000毫升；洗刷干净后用煮沸冷却的消毒海水润洗3遍，瓶口用75％酒精拭擦消毒，加入步骤1所述培养液10000毫升，取无污染、纯种、处于指数生长期的娇柔塔胞藻，湛江叉鞭金藻，膜状舟形藻，异胶藻分别接种，接种密度娇柔塔胞藻6万细胞/毫升，湛江叉鞭金藻3万细胞/毫升，膜状舟形藻4万细胞/毫升，异胶藻8万细胞/毫升；用干净报纸和橡皮筋封瓶口，放进微藻培养室不充气培养，空调控温，日光灯管提供光源，每天摇瓶6次，每次5分钟，培养的前3天，光照强度设为3000lux，温度控制为18℃，光照周期为L∶D＝12h∶12h，即12小时光照，12小时黑暗；第4-6天，光强设为6000lux，温度调节为21℃，光暗周期调至L∶D＝16h∶8h为；到第7天，补充步骤1所述培养液1000毫升和蒸馏水500毫升，以补充消耗掉的营养盐和挥发的水分并稀释藻液；第7-9天，调节温度至25℃，光照强度12000lux，光暗周期L∶D＝20h∶4h，即每天20小时光照，4小时黑暗。到第9天，藻细胞密度合计可达2400万/每毫升，即可转入第二级培养；第二级培养：取两个1000升的白色卧式贮水桶(市场有售)，洗刷干净，加入200ppm的高锰酸钾溶液浸泡消毒3小时，用煮沸冷却海水冲洗3遍，每个桶加入步骤1所述培养液600升，第一级培养得到的藻液作为种子液按1∶8的体积比例接种(即8份培养液加入1份种子液)；桶的盖子上分别打上2个孔，孔径10毫米，其中一个孔插入充气管，另一孔插入排气管，管的内经8毫米，第二个桶的充气管与第一个桶的排气管相连，这样充入的气体可以得到二次利用；第一个桶的充气管顶端连接一空气压缩机，充入混合气体，气体成分和体积比例为V_空气∶V_纯氧气∶V_{纯二氧化碳}∶V_纯氨气＝98∶0.8∶0.9∶0.3，充气量不宜太大，能让藻细胞悬浮不沉淀即可；将此二桶放入微藻培养室进行培养，室内空调控温，日光灯管提供光源，桶的外表面覆盖一层很薄的蓝色塑料薄膜，这样射入藻液的主要是蓝色光，有利于细胞内高不饱和脂肪酸EPA、DHA积累；每天用15％的乙酸溶液(体积比)和10％的NaOH溶液(重量比)调节pH值至7.8-8.2；培养的前3天，光照强度设为6000lux(由于塑料桶壁的和薄膜的阻挡和吸收作用，实际到达藻液的光强约为3000lux.)，温度控制为18℃，光照周期为L∶D＝12h∶12h，即12小时光照，12小时黑暗；第4-6天，光强设为12000lux，温度调节为21℃，光暗周期调至L∶D＝16h∶8h为；到第7天，每个桶补充步骤1所述培养液25升和10升蒸馏水，以补充消耗掉的营养盐和挥发的水分并稀释藻液；第7-9天，调节温度至26℃，光照强度18000lux，光暗周期L∶D＝21h∶3h，即每天21小时光照，3小时黑暗；到第9天，藻细胞密度合计可达2100万/毫升，停止培养，即可采收；

步骤3微藻采收采收方法：将明矾、甲壳素、聚丙烯酰胺、硫酸亚铁按1∶1.5∶0.8∶0.4的质量比混合，充分搅拌、混合均匀制成复合沉淀剂，按1升藻液加入200毫克复合沉淀剂的量加入沉淀剂，充分搅拌、混合15分钟，静置、沉淀24小时，绝大多数藻细胞沉淀到底部，弃上清液，得底部牙膏状藻膏，装入食品用塑料薄膜袋，置于-15℃冰箱冷冻保存，备用，即得到栉孔扇贝幼体饵料。

2.一种栉孔扇贝幼体饵料的投喂方法，其特征在于具体步骤如下：

栉孔扇贝幼虫的培养和投喂：当受精卵孵化至D形幼虫时，将幼虫转移至100L的玻璃鱼缸(可自动充气和照明，市场有售)中进行培养，鱼缸为长方体或立方体，实际装水60L，采用煮沸消毒冷却后的磁化海水培养，幼虫密度为4-8个/ml，不间断充气，充气量不宜太大，水体保持较高溶氧即可，充气管末端连一散气石，避免形成大气泡伤害扇贝幼虫；投喂权利要求1所述的栉孔扇贝幼体饵料，第一天投喂量为2克/m³，分6次投喂，栉孔扇贝幼体饵料投喂量每天增加10％；具体投喂方法是：取栉孔扇贝幼体饵料2克，放在研钵中研碎，转入150毫升的三角烧瓶中，加入蒸馏水80毫升，充分摇匀，后均匀泼洒到培养容器中，然后均匀搅拌10分钟；换水1次/2天，换水量为总量的1/5-1/3，换水时用网目大小为60微米的聚乙烯筛绢阻挡，以免幼虫随水流走；培养期间水温20-23℃，相对密度1.019，光照强度1000-1200lux；当眼点幼虫出现率为80％以上、大眼点率为40％以上开始投附着基棕绳帘，投放前棕绳帘要经过严格洗刷处理，投放时再用200ppm孔雀石绿浸泡12小时，采用先倒池后投附着基，幼虫培育期间连续微量充气；每4-5天施链霉素4-6毫克/升，投附着基后连续施2-3天漂白粉消毒，每天一次，每次5-8毫克/升；稚贝出池：当稚贝平均壳高达600微米时，开始出池下海保苗。