CN104693287A - 成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用 - Google Patents

成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN104693287A
CN104693287A CN201510149302.XA CN201510149302A CN104693287A CN 104693287 A CN104693287 A CN 104693287A CN 201510149302 A CN201510149302 A CN 201510149302A CN 104693287 A CN104693287 A CN 104693287A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fibroblast growth
growth factor
polypeptide
suppresses
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510149302.XA
Other languages
English (en)
Inventor
罗瑞雪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Puluoda Biological Science and Technology Co Ltd
Original Assignee
Suzhou Puluoda Biological Science and Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Puluoda Biological Science and Technology Co Ltd filed Critical Suzhou Puluoda Biological Science and Technology Co Ltd
Priority to CN201510149302.XA priority Critical patent/CN104693287A/zh
Publication of CN104693287A publication Critical patent/CN104693287A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/475—Assays involving growth factors
    • G01N2333/50—Fibroblast growth factors [FGF]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用；涉及药物领域，具体涉及具有抑制成纤维细胞生长因子，治疗恶性肿瘤的多肽。其序列为PSHNPEEQLSWGDSGEDSEPLP是全新的序列，它们可以在体外抑制结肠癌细胞和肝癌细胞的增殖，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。

Description

成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用
技术领域
本发明涉及成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用，具体涉及具有抑制成纤维细胞生长因子，治疗恶性肿瘤的多肽。
背景技术
血管生成是恶性实体肿瘤突破上皮基底膜后进一步生长所必须的。肿瘤中新形成的血管具有其自身独特的结构特点，表现为管壁不完整，无平滑肌成分，仅由有孔的内皮细胞和片状的基膜构成。多数学者认为，新生血管的结构特点使恶性肿瘤组织发生远处转移成为可能。因此，恶性实体肿瘤中新生血管的定量被认为是一种重要的独立的预后标志。
成纤维细胞生长因子，对肿瘤细胞有明显的趋向活性，刺激成纤维细胞，血管内皮细胞等向病灶部位移动。当细胞迁移至病灶部位时，开始进入增殖和修复期，其中最关键的步骤之一是肉芽组织的形成，肉芽组织的本质是大量的毛细血管和丰富的成纤维细胞，是成纤维细胞、血管内皮细胞及血管平滑肌细胞的高效促生长剂，能够强烈促进新生毛细血管的形成，显著增加肉芽组织毛细血管数量和血液流量，为肿瘤组织提供所需要的氧及丰富的营养物质，促进肿瘤的生长。抑制成纤维细胞生长因子，可以有效抑制肿瘤组织中血管的新生，断绝肿瘤组织生长需要的氧及营养物质，将肿瘤细胞“饿死”。从而，达到治疗肿瘤的效果。
目前，没有成熟开发的成纤维细胞生长因子抑制多肽问世，用于治疗恶性肿瘤。
本专利中的成纤维细胞生长因子抑制多肽已证明在结肠癌病中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。
发明内容
发明目的
本发明提供全新的序列，该序列为成纤维细胞生长因子拮抗剂，对恶性肿瘤具有很好的疗效。
技术方案
成纤维细胞生长因子抑制多肽，其特征在于其序列为PSHNPEEQLSWGDSGEDSEPLP。
所述的成纤维细胞生长因子抑制多肽在制备治疗肿瘤药物中的应用。
所述的成纤维细胞生长因子抑制多肽在制备治疗肝癌药物中的应用。
一种检测肿瘤的试剂盒，其含有权利要求1所述的成纤维细胞生长因子抑制多肽。
所述的试剂盒，其特征在于还有
(1)包被液：pH9.6的0.05mol/L碳酸盐缓冲液；
(2)PBS缓冲液：pH7.4的0.02mol/L磷酸盐缓冲液；
(3)抗体稀释液：pH7.4的0.02mol/LPBS和0.2％BSA；
(4)封闭液：pH9.6的0.05mol/L碳酸盐缓冲液和2.0％BSA
(5)洗涤液：0.02mol/LPBS(pH7.4)和0.05％Tween-20；
(6)底物液：可溶性单组份TMB底物溶液；
(7)终止液：2mol/L硫酸溶液；
(8)成纤维细胞生长因子抗体；
(9)山羊抗小鼠IgG。
有益效果
利用固相合成法化学合成成纤维细胞生长因子抑制多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外抑制成纤维细胞生长因子，治疗恶性肿瘤，如结肠癌。我们发现的成纤维细胞生长因子抑制多肽可以同时抑制结肠癌细胞增殖活力，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。
具体实施方式
成纤维细胞生长因子抑制多肽由上海生工合成。
实施例1
成纤维细胞生长因子抑制多肽对体外培养人结肠癌细胞的生长和存活IC50。
采用MTT比色法。将对数生长的人结肠癌细胞，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物成纤维细胞生长因子抑制多肽(上海生工合成)和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，分别在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、，48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式人结肠癌细胞生长抑制率＝(1-实验组吸光值/对照组吸光值)×100％。计算出实验药物的IC50为14.45μM，阳性对照药的IC50为4.2μM。
实施例2
成纤维细胞生长因子抑制多肽对体外培养人肝癌细胞的生长和存活IC50。
采用MTT比色法。将对数生长的人肝癌HepG2细胞，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物成纤维细胞生长因子抑制多肽和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，分别在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、，48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式人HepG2细胞生长抑制率＝(1-实验组吸光值/对照组吸光值)×100％。计算出实验药物的IC50为24.75μM，阳性对照药的IC50为4.9μM。
实施例3
用肿瘤模型检测成纤维细胞生长因子抑制多肽的体内活力。
建立结肠癌肿瘤模型，阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂，实验组多肽(上海生工合成)设3个剂量：1、2、4mg/Kg。21天后，观察小鼠存活数量，计算存活率。结果显示，成纤维细胞生长因子抑制多肽可有效地保护小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，0.75、1.5、3mg/Kg生存率达到92.12％，82.23％，72.4％，对应的紫杉醇42.2％。
实施例4含有成纤维细胞生长因子抑制多肽的ELISA试剂盒检测：
酶连免疫吸附实验(ELISA)试剂盒包括如下试剂：
(1)包被液：0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)。称取0.75g碳酸钠，1.46g碳酸氢钠，加去离子水定容至500ml；
(2)PBS缓冲液：0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)。称取0.2g磷酸二氢钾，2.90g磷酸氢二钠，8g氯化钠，加去离子水定容到1000ml；
(3)抗体稀释液：0.02mol/LPBS(pH7.4)和0.2％BSA。称取0.2gBSA加入配好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液溶解定量至100ml；
(4)封闭液：0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)和2.0％BSA。2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸盐缓冲液溶解定量至100ml；
(5)洗涤液：0.02mol/LPBS(pH7.4)和0.05％Tween-20。将50ulTween-20溶入100ml0.02mol/L磷酸盐缓冲液中，震荡混匀；
(6)底物液：可溶性单组份TMB底物溶液；
(7)终止液：2mol/L硫酸溶液。10ml98％浓硫酸加入60ml双蒸水中，定容至100ml，室温保存；
(8)成纤维细胞生长因子抑制多肽
(9)成纤维细胞生长因子抗体购自上海一研生物科技有限公司
(10)二抗(山羊抗小鼠IgG)购自艾美捷科技有限公司
使用方法：1、血清样本制备：取3只荷瘤裸鼠，进行眼眶取血，每只200μL，迅速离心12000rpm 3min，取上清，按体积比1：2加PBS，80℃水浴30min，12000rpm 3min取上清，-20℃冻存备用。2、成纤维细胞生长因子抗体为包被抗体，将成纤维细胞生长因子抗体溶于包被稀释液中，浓度为100μg/mL。96孔酶标板每孔加入100μL，4℃包被过夜。弃去包被液，加入封闭液200μL，37℃封闭1h。弃去封闭液，分别加入样品稀释液稀释的血清样本100μL(稀释比1：50)和成纤维细胞生长因子抑制多肽100μL(10μg/ml)及上述血清样本50μL和成纤维细胞生长因子抑制多肽50μL的混合物，分成3组，37℃孵育1h。弃去血清，PBST和自来水间隔洗涤三次。洗涤后，每孔加入样品稀释液稀释酶标二抗100μL(稀释比1：10000)，37℃孵育1h。弃去二抗，洗涤。洗涤后，每孔加入100μL底物液(50μL底物A，50μL底物B)，37℃反应30min后，加入50μL 2M H2SO4终止反应，用酶标仪在450nm波长测定每孔的光密度值OD450nm。
结果：成纤维细胞生长因子抑制多肽可以和成纤维细胞生长因子抗体结合，并可以竞争血清中成纤维细胞生长因子，故说明成纤维细胞生长因子抑制多肽用竞争法检测成纤维细胞生长因子，实现肿瘤预测；
                         SEQUENCE LISTING
 
<110>  苏州普罗达生物科技有限公司
 
<120>  成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用
 
<130> 
 
<160>  1    
 
<170>  PatentIn version 3.3
 
<210>  1
<211>  22
<212>  PRT
<213>  人工序列
 
<400>  1
 
Pro Ser His Asn Pro Glu Glu Gln Leu Ser Trp Gly Asp Ser Gly Glu
1               5                   10                  15     
 
 
Asp Ser Glu Pro Leu Pro
            20         
 
 

Claims (5)

1.成纤维细胞生长因子抑制多肽，其特征在于其序列为PSHNPEEQLSWGDSGEDSEPLP。
2.如权利要求1所述的成纤维细胞生长因子抑制多肽在制备治疗肿瘤药物中的应用。
3.如权利要求1所述的成纤维细胞生长因子抑制多肽在制备治疗肝癌药物中的应用。
4.一种检测肿瘤的试剂盒，其含有权利要求1所述的成纤维细胞生长因子抑制多肽。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于还有
(1)包被液：pH9.6的0.05mol／L碳酸盐缓冲液；
(2)PBS缓冲液：pH7.4的0.02mol／L磷酸盐缓冲液；
(3)抗体稀释液：pH7.4的0.02mol／LPBS和0.2％BSA；
(4)封闭液：pH9.6的0.05mol／L碳酸盐缓冲液和2.0％BSA
(5)洗涤液：0.02mol／LPBS(pH7.4)和0.05％Tween-20；
(6)底物液：可溶性单组份TMB底物溶液；
(7)终止液：2mol／L 硫酸溶液；
（8）成纤维细胞生长因子抗体；
（9）山羊抗小鼠IgG。
CN201510149302.XA 2015-03-31 2015-03-31 成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用 Pending CN104693287A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510149302.XA CN104693287A (zh) 2015-03-31 2015-03-31 成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510149302.XA CN104693287A (zh) 2015-03-31 2015-03-31 成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104693287A true CN104693287A (zh) 2015-06-10

Family

ID=53340874

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510149302.XA Pending CN104693287A (zh) 2015-03-31 2015-03-31 成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104693287A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002066498A2 (en) * 2001-02-21 2002-08-29 Provincia Italiana Della Congregazione Dei Figli Dell'immacolata Concezione - Istituto Dermopatico Dell'immacolata Peptide inhibiting platelet derived growth factor (pdgf-bb) and fibroblast growth factor (bfgf) activity
CN1414020A (zh) * 2002-07-12 2003-04-30 人体基因组科学有限公司 成纤维细胞生长因子11的抗体、拮抗剂及激动剂
CN1546522A (zh) * 2003-12-03 2004-11-17 暨南大学 一种碱性成纤维细胞生长因子抗原表位模拟肽及其筛选
CN101974076A (zh) * 2010-11-01 2011-02-16 李校堃 抑制由碱性成纤维细胞生长因子诱导的细胞增殖及血管增生的环肽
CN102399264A (zh) * 2011-08-12 2012-04-04 温州医学院 碱性成纤维细胞生长因子结合短肽衍生物及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002066498A2 (en) * 2001-02-21 2002-08-29 Provincia Italiana Della Congregazione Dei Figli Dell'immacolata Concezione - Istituto Dermopatico Dell'immacolata Peptide inhibiting platelet derived growth factor (pdgf-bb) and fibroblast growth factor (bfgf) activity
CN1414020A (zh) * 2002-07-12 2003-04-30 人体基因组科学有限公司 成纤维细胞生长因子11的抗体、拮抗剂及激动剂
CN1546522A (zh) * 2003-12-03 2004-11-17 暨南大学 一种碱性成纤维细胞生长因子抗原表位模拟肽及其筛选
CN101974076A (zh) * 2010-11-01 2011-02-16 李校堃 抑制由碱性成纤维细胞生长因子诱导的细胞增殖及血管增生的环肽
CN102399264A (zh) * 2011-08-12 2012-04-04 温州医学院 碱性成纤维细胞生长因子结合短肽衍生物及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104926815B (zh) 某些化学实体、组合物和方法
Guo et al. Theranostical nanosystem‐mediated identification of an oncogene and highly effective therapy in hepatocellular carcinoma
Shi et al. Oxidative stress-driven DR5 upregulation restores TRAIL/Apo2L sensitivity induced by iron oxide nanoparticles in colorectal cancer
CN104650194B (zh) 一种肽类树状大分子药物及其制备方法和应用
CN109568319A (zh) 非选择性激酶抑制剂
CN103558170A (zh) 叶酸-多孔铂-氧化石墨烯复合纳米材料及其检测肿瘤细胞
Wang et al. Tumor vessel targeted self-assemble nanoparticles for amplification and prediction of the embolization effect in hepatocellular carcinoma
CN108404138A (zh) 一种靶向cd24单克隆抗体与二乙胺偶氮鎓二醇盐的偶联物及其应用
Zhou et al. Glutamine-β-cyclodextrin for targeted doxorubicin delivery to triple-negative breast cancer tumors via the transporter ASCT2
CN104672313A (zh) Jaggedl激动剂多肽及其应用
Zhang et al. In situ autophagy disruption generator for cancer theranostics
CN103864921A (zh) 双重靶向治疗癌症的叶酸-阿霉素免疫制剂及其制备方法
CN104725486A (zh) 成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用
Liu et al. A novel synthetic small molecule YF-452 inhibits tumor growth through antiangiogenesis by suppressing VEGF receptor 2 signaling
Mu et al. Exosomal CD44 cooperates with integrin α6β4 to support organotropic metastasis via regulating tumor cell motility and target host cell activation
CN104693287A (zh) 成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用
CN106029683A (zh) 一种抑制肿瘤转移和治疗白血病的多肽和多肽复合物、其制备方法及其应用
CN104693288A (zh) 一种成纤维细胞生长因子抑制多肽及其应用
CN108030777B (zh) 氯胍在制备抗肿瘤药物中的应用
CN107238710A (zh) 一种基于直接竞争荧光免疫法定量检测叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的方法
CN104710513A (zh) 黑色素瘤细胞粘附分子拮抗剂多肽及其应用
CN104710514A (zh) 血管内皮钙联蛋白拮抗剂多肽及其应用
Wei et al. Hepatocyte-targeted delivery using oleanolic acid-loaded liposomes for enhanced hepatocellular carcinoma therapy
CN103450343B (zh) 四氢异喹啉-3-羧酸修饰的targd七肽、其合成、抗血栓活性和应用
CN104761622A (zh) 关于Jaggedl激动剂多肽及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150610

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication