CN104693247A - 制备白芨胶的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种制备白芨胶的方法，包括：(1)将白芨药材与水混合，进行水提取，以便获得白芨水提液；以及(2)将所述白芨水提液与乙醇混合，以便获得含有白芨胶的沉淀。该方法可以有效从白芨药材中提取白芨胶，并且白芨胶得率较高。

Description

制备白芨胶的方法

技术领域

本发明属于生物药学技术领域，具体而言，本发明涉及一种制备白芨胶的方法。

背景技术

白芨为兰科植物白芨Bletila striata(Thunb.)R eichb.f.的干燥块茎，具有收敛止血，清热利湿，消肿生肌等功效。临床上常用于咳血吐血、外伤疮疡、宫颈糜烂及消化道溃疡等症。化学研究表明，白芨胶是白芨止血的活性成分，白芨胶由4分子甘露糖和1分子葡萄糖组成，在水中溶解时受分子间氢键作用的影响，易形成亲水性凝胶，达到药辅合一的目的。因此将白芨药材单独提取白芨胶，以白芨胶得率及白芨多糖含量作为主要考察目标，对白芨胶的制备工艺进行研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种制备白芨胶的方法，该方法可以有效从白芨药材中提取白芨胶，并且白芨胶得率较高。

在本发明的一个方面，本发明提出了一种制备白芨胶的方法，包括：

(1)将白芨药材与水混合，进行水提取，以便获得白芨水提液；以及

(2)将所述白芨水提液与乙醇混合，以便获得含有白芨胶的沉淀。

根据本发明实施例的制备白芨胶的方法可以有效从白芨药材中提取白芨胶，并且白芨胶得率较高。

另外，根据本发明上述实施例的制备白芨胶的方法还可以具有如下附加的技术特征：

在本发明的一些实施例中，在步骤(1)中，所述白芨药材与所述水的重量比为1:10～20。由此，可以显著提高白芨胶得率。

在本发明的一些实施例中，在步骤(1)中，所述白芨药材与所述水的重量比为1:15。由此，可以进一步提高白芨胶得率。

在本发明的一些实施例中，在步骤(1)中，进行多次水提取，每次2小时。由此，可以进一步提高白芨胶得率。

在本发明的一些实施例中，在步骤(1)中，进行三次水提取，每次2小时。由此，可以进一步提高白芨胶得率。

在本发明的一些实施例中，在步骤(2)中，将所述白芨水提液与所述乙醇混合后，乙醇的终浓度为55～80体积％。由此，可以进一步提高白芨胶得率。

在本发明的一些实施例中，在将所述白芨水提液与所述乙醇混合之前，预先将所述白芨水提液浓缩。由此，可以进一步提高白芨胶得率。

在本发明的一些实施例中，按照3～7:1的比例进行浓缩。由此，可以进一步提高白芨胶得率。

在本发明的一些实施例中，按照5:1的比例进行浓缩。由此，可以进一步提高白芨胶得率。

在本发明的一些实施例中，在步骤(2)中，将所述白芨水提液与所述乙醇混合后，乙醇的终浓度为70体积％，静置过夜后进行抽滤，在80摄氏度下将滤渣进行减压干燥至恒重。由此，可以进一步提高白芨胶得率。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，下面描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

在本发明的一个方面，本发明提出了制备白芨胶的方法。根据本发明的实施例，白芨胶是通过下列步骤获得的：(1)将白芨药材与水混合，进行水提取，以便获得白芨水提液；以及(2)将得到的白芨水提液与乙醇混合，从而可以获得含有白芨胶的沉淀。由此，可以显著提高白芨胶的得率。发明人发现，该方法通过采用水提取的方法对白芨药材进行处理，使得提取过程安全、无溶剂残留，并且与有机溶剂相比较，水资源价廉易得，同时该方法简单，不需要特殊设备，适合工厂、小作坊、实验室生产，另外采用该方法可以显著提高白芨胶的提取效率。

根据本发明的实施例，在步骤(1)中，白芨药材与水的混合比例并不受特别限制，根据本发明的具体实施例，白芨药材与水的重量比可以为1:10～20。发明人发现，白芨含有较多的胶质多糖，若溶剂过少，使得先溶出的多糖浓度高，从而阻止白芨多糖的进一步溶出，导致提取不完全，而溶剂过高，则提取效率太低，同时增加了后续浓缩时间。例如，白芨药材与水的重量比可以为1:15，由此，可以进一步提高白芨胶的得率。

根据本发明的实施例，在步骤(1)中，水提取的条件并不受特别限制，根据本发明的具体实施例，可以进行多次水提取，每次2小时，根据本发明的具体示例，可以进行三次水提取，每次2小时。发明人发现，通过增加水提取次数和水提取时间，虽然可以提高白芨胶得率和白芨多糖含量，但其增幅较小，而随着水提取次数和水提取时间的延长，水提取成本显著增加，因此，综合考虑，进行三次水提取，每次2小时不仅可以得到较高的白芨胶得率和白芨多糖含量，并且可以节约能源。

根据本发明的实施例，在步骤(2)中，将白芨水提液与乙醇混合后，乙醇的终浓度并不受特别限制，根据本发明的具体实施例，乙醇的终浓度可以为55～80体积％。发明人发现，若乙醇浓度过低，白芨多糖沉淀不完全，造成损失；而乙醇浓度达到80体积％时，多糖已经沉淀完全。

根据本发明的实施例，在步骤(2)中，在将白芨水提液与乙醇混合之前，预先将白芨水提液进行浓缩。根据本发明的具体实施例，可以按照3～7:1的比例进行浓缩。发明人发现，若按照浓缩比低于3:1进行浓缩，使得后续乙醇的用量较大，后续工作量也较大，而浓缩比高于7:1，所得浓缩液粘度较大，并伴随着有块状不溶，不能正常进行后续醇沉。根据本发明的具体示例，可以按照5:1的比例进行浓缩。由此，可以进一步提高白芨胶的提取效率。

根据本发明的实施例，在步骤(2)中，将白芨水提液与乙醇混合后，乙醇的终浓度可以为70体积％，静置过夜后进行抽滤，在80摄氏度下将滤渣进行减压干燥至恒重。由此，可以进一步提高白芨胶得率和白芨多糖含量。

下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。

实验例

1、正交试验优选白芨药材的水提工艺

采用正交试验设计对白芨胶得率、白芨多糖含量的影响因素，将加水量、水提取时间、水提取次数作为考察因素，选用L9(34)正交表进行实验，表头设计见表1所示，并结合生产成本、能源等方面进行综合考虑。

表1 正交设计表

1.1试验方法

分别称取20g白芨药材，按照表1进行水提取提取，滤液经4层纱布过滤，浓缩至药材的5倍量，静置至室温，加乙醇沉淀使含醇量达75体积％，静置过夜，抽滤得到沉淀，加乙醇洗涤3次，抽滤至干，减压干燥(80℃)至恒重，即得白芨胶成品，备用。

1.2评价指标

1.2.1白芨多糖含量的计算：采用硫酸苯酚法测定白芨多糖的含量。

1.2.2白芨胶得率的计算：白芨胶得率＝白芨胶重量/白芨药材重量×100％

1.3白芨多糖含量的测定

1.3.1对照品溶液的制备

精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的无水葡萄糖对照品55.10mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得对照品储备液；

精密吸取储备液2.5ml、3.5ml、4.5ml、5ml、5.5ml至100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀即得系列对照品溶液。

1.3.2供试品溶液的制备

精密称取白芨胶4mg，加少量水加热，搅拌使溶解，转移至100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

1.3.3测定波长的选择

精密吸取2ml水作为空白溶液，对照品溶液、供试品溶液各2ml于干燥具塞试管中，各精密加入新配置的4wt％苯酚溶液1ml，摇匀，迅速精密加入硫酸7ml，摇匀，然后于40℃水浴中保温30min，取出，置冰水浴中5min，取出，照2010版中国药典分光光度法，于400～500nm进行扫描，结果显示在490nm处有最大吸收，且空白试剂无干扰。

1.3.4线性关系的考察

精密吸取上述系列对照品溶液各2ml，分别至具塞试管中，按1.3.3项下操作，以水为空白，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程为：Y＝11.54C+0.013(r＝0.9947)，表明对照品溶液在27.55～60.61mg·L^-1线性关系良好。

1.3.5精密度实验

精密吸取对照品溶液2ml，按1.3.3项下操作，在490nm波长处连续测定5次吸光度，吸光度值分别为0.453、0.448、0.454、0.439、0.440(RSD＝0.26％)。

1.3.6稳定性试验

精密吸取供试品溶液2ml，按1.3.3项下操作，在490nm波长处每隔30min测定1次吸光度，结果2.5h内吸光度的RSD＝1.07％，结果表明供试品溶液在2.5h内稳定。

1.3.7重复性试验

精密称取9号样品4.2mg，平行处理6份，按1.3.3项下操作，在490nm波长处测定吸光度，计算多糖的含量，多糖的含量平均值为15.06％，RSD＝0.66％，结果表明方法的重复性良好。

1.3.8加样回收率试验

精密称取9号样品1.63mg，精密加入对照品溶液50ml(浓度为0.03306mg/ml)，平行处理6份，按1.3.3下操作，在490nm波长处测定吸光度，计算多糖的含量，结果见表2。

表2 加样回收率试验结果

1.3.9样品含量测定

精密吸取各供试品溶液2ml，至具塞试管中，按1.3.3项下操作，在490nm波长处测定吸收度，每供试品平行测定3次，按外标法计算多糖含量，结果见表3，方差分析见表4。

1.4白芨胶得率的测定

精密称定各所得白芨胶重量，按白芨胶得率公式进行计算，结果见表3，方差分析见表4。

表3 L9(34)正交试验设计及测定结果

注：a为白芨胶得率；b为白芨多糖含量

表4 方差分析

由表3分析可知，各因素对白芨胶得率影响的大小分别为：C＞A＞B，对白芨多糖含量影响的大小分别为：C＞B＞A；表4方差分析结果表明，水提取次数对白芨胶得率及白芨多糖含量影响有显著性意义，水提取时间对白芨多糖含量影响有显著性意义；通过分析判断以及节约能源的角度考虑，确定白芨的最佳提取工艺为A2B3C3，即白芨药材加入15倍量水提取3次，每次2小时。

1.5验证试验

分别称取白芨药材20g，按照正交实验所得的最佳工艺(即白芨药材加入15倍量水提取3次，每次2小时)进行验证，结果白芨胶得率为19.61％，白芨多糖含量为15.97％，通过比较证明该工艺确定为白芨水提最佳工艺。

2、醇沉的工艺条件选择

2.1水提液浓缩程度的考察

取白芨药材20g，按照正交实验所得的最佳工艺进行提取，将所得提取液按表5浓缩成不同程度的浓缩液，冷却，加入乙醇，使之醇沉液中含醇量达75％，室温静置过夜，抽滤，80℃减压干燥至恒重，称定重量，观察白芨胶颜色，并计算白芨胶得率以及白芨多糖含量，结果见表5所示。

表5 白芨水提液浓缩程度对白芨胶颜色、得率及白芨多糖含量的影响

由表5可知，浓缩程度为5:1时的浓缩液外观，白芨胶得率和白芨多糖含量和7:1时相近，考虑到醇沉时7:1浓缩液特别粘稠且有块状不溶物，故选择浓缩程度为5:1。

2.2醇沉浓度的考察

选择浓度为5:1的浓缩液，加入不同量的乙醇，使之醇沉液中含醇量不同，室温静置过夜，抽滤，80℃减压干燥至恒重，称定重量，观察白芨胶外观，并计算白芨胶得率以及白芨多糖含量，结果见下表6所示。

表6 白芨水提浓缩液醇沉浓度对白芨胶外观、得率及白芨多糖含量的影响

由表6可知，当含醇量为70体积％时，所得白芨胶外观、白芨胶得率及多糖含量和含醇量75体积％、80体积％相近，考虑到节约乙醇成本，因此选择醇沉浓度为70体积％。

2.3验证试验

选择三份浓度为1:5的白芨浓缩液，加入乙醇，使之醇沉液中含醇量为70体积％，室温静置过夜，抽滤，80℃减压干燥至恒重，称定重量，观察白芨胶外观均为浅褐色的疏松小块，白芨胶得率为19.60％，白芨多糖含量为15.91％，结果证明该工艺为醇沉最佳工艺。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种制备白芨胶的方法，其特征在于，包括：

(1)将白芨药材与水混合，进行水提取，以便获得白芨水提液；以及

(2)将所述白芨水提液与乙醇混合，以便获得含有白芨胶的沉淀。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述白芨药材与所述水的重量比为1:10～20。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述白芨药材与所述水的重量比为1:15。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，进行多次水提取，每次2小时。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，进行三次水提取，每次2小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，将所述白芨水提液与所述乙醇混合后，乙醇的终浓度为55～80体积％。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在将所述白芨水提液与所述乙醇混合之前，预先将所述白芨水提液浓缩。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，按照3～7:1的比例进行浓缩。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，按照5:1的比例进行浓缩。

10.根据权利要去1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，将所述白芨水提液与所述乙醇混合后，乙醇的终浓度为70体积％，静置过夜后进行抽滤，在80摄氏度下将滤渣进行减压干燥至恒重。