CN104686005B - 一种提高紫甘蓝花青素含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及农作物培育，具体提供一种提高紫甘蓝花青素含量的方法，将紫甘蓝种子用清水漂洗干净，然后在20‑30℃下浸泡于褪黑素溶液中12‑24h，冲洗干净后进行播种。本发明提供了一种新的促进紫甘蓝花青素积累的方法，利用10μmol/L～1000μmol/L的褪黑素溶液浸泡紫甘蓝种子，可显著提高紫甘蓝幼苗的花青素含量。

Description

一种提高紫甘蓝花青素含量的方法
技术领域
本发明涉及农作物培育，具体地说，涉及一种提高紫甘蓝花青素含量的方法。
背景技术
花青素是一种水溶性植物色素，属于类黄酮类化合物，是植物的二级次生代谢产物。花青素具有较高的营养价值，经常食用含有花青素的蔬菜水果对身体很有益处，可以保护身体免受自由基的损伤，能够增强免疫力，抵抗衰老。植物积累花青素能够帮助植物抵抗逆境，花青素是一种高效的抗氧化剂，能够保护植物不受自由基伤害。目前对于提高植物花青素积累的方法有一些报道，如利用L-谷氨酸处理着色期的苹果，能够提高苹果果皮的花青素合成及积累(汪良驹等，L-谷氨酸促进富士苹果花青素积累的效应[J]，果树学报,2006，23：157-160)；以及利用转基因的方法促进花青素合成结构基因的表达，从而提高作物的花青素含量(梁毅等，洋葱花青素合成相关基因(AcPAL1)的克隆和表达分析[J]，生物技术学报,2014，22；47-54)。然而转基因技术由于其操作及产品安全鉴定的复杂性，并不适合在紫甘蓝栽培上进行推广。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种快速有效、易于推广应用的提高紫甘蓝花青素含量的方法。
为了实现本发明目的，本发明首先提供一种能够有效提高紫甘蓝花青素含量的方法，所述方法为：将紫甘蓝种子用清水漂洗干净，然后在20-30℃下浸泡于褪黑素溶液中12-24h，冲洗干净后进行播种。
进一步地，所述褪黑素溶液的浓度为10μmol/L～1000μmol/L。
作为优选，所述褪黑素溶液的浓度为100μmol/L。
作为优选，将紫甘蓝种子在25℃下浸泡于褪黑素溶液中。
本发明还提供了褪黑素在提高紫甘蓝花青素含量中的应用。
具体为，利用浓度为10μmol/L～1000μmol/L的褪黑素溶液浸泡紫甘蓝种子，将种子冲洗干净后进行播种。
作为优选，所述褪黑素溶液的浓度为100μmol/L。
甘蓝长成幼苗后，取样进行花青素含量测定，相对于未被褪黑素提前浸泡过的幼苗，褪黑素处理提高了紫甘蓝幼苗的花青素含量。
本发明的有益效果在于：
本发明提供了一种新的促进紫甘蓝花青素积累的方法，利用10μmol/L～1000μmol/L的褪黑素溶液浸泡紫甘蓝种子，可显著提高紫甘蓝幼苗的花青素含量。
附图说明
图1为本发明实施例1中褪黑素处理对出苗后的紫甘蓝幼苗胚根及子叶颜色的影响。
图2为本发明实施例1中出苗后的紫甘蓝幼苗的花青素含量。
图3为本发明实施例1中褪黑素对紫甘蓝幼苗成株的影响；
其中：左边植株为未被褪黑素处理过的紫甘蓝幼苗；右边植株为经过100μmol/L褪黑素前处理的甘蓝幼苗。
图4为本发明实施例1中褪黑素对紫甘蓝幼苗生长发育各阶段花青素含量的影响；
其中：CK植株为未被褪黑素处理过的紫甘蓝幼苗；M100植株为经过100μmol/L褪黑素前处理的甘蓝幼苗。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
播种前将紫甘蓝种子用清水漂洗干净，然后于室温条件下(25℃)在褪黑素溶液中浸泡24h；
褪黑素溶液配制方法：称取0.232g褪黑素粉末(购自sigma公司，纯度为98％)，在10mL无水乙醇中彻底溶解，加水至1L，此时褪黑素溶液浓度为1000μmol/L。根据需要的褪黑素溶液浓度进行稀释，有效的褪黑素溶液浓度为10μmol/L～1000μmol/L。
本实施例设置4个浓度处理，分别为10μmol/L、100μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L。
将浸泡好的种子用清水冲洗干净，播种。每个处理设置3个重复。以清水浸泡的甘蓝种子未对照。幼苗出土后，观察幼苗的颜色，取样测定紫甘蓝幼苗的花青素含量。
花青素测定采用pH差示法：
①称取样品0.1g，置于研钵中，加液氮研磨至粉末状，置于2mL的离心管中备用。
②每种样品准备六份，分为两个小组，每个小组3次重复，分别加入2mL pH＝1.0的缓冲液(50mM KCl+150mM HCl)和2mL pH＝4.5的缓冲液(400mM醋酸钠+240mM HCl)
③将混合物于4℃条件下，12,000g离心15min，吸取上清液并稀释两倍后，测定其在510nm处的OD值；
④按照下列公式计算样品中的总花青素含量：
花青素含量(mg/g)＝(A510pH1.0-A510pH4.5)×484.8/24,825×稀释倍数
其中常数484.8为花青素-3-葡萄糖苷氯化物的分子量，24,825为其在510nm处的摩尔吸光系数(ε)每个样品总花青素含量取3次重复测量结果的平均值。
结果表明，褪黑素处理过的甘蓝幼苗花青素含量得到了显著提高。如图1所示，经过褪黑素溶液浸种的紫甘蓝幼苗明显比未被褪黑素处理过的幼苗颜色深，且测定幼苗中的花青素浓度也反映了相同的实验规律，结果如图2所示。其中促进效果最明显的为100μmol/L的褪黑素溶液浓度，将CK组的幼苗和M100处理的幼苗继续进行栽培，分别在幼苗期、莲座期和结球期取样进行花青素含量的测定，发现在紫甘蓝的生长发育过程中，100μmol/L处理过的紫甘蓝花青素含量抑制高于未被褪黑素处理过的植株如图3和图4所示。以上结果均说明褪黑素对种子的处理能够提高紫甘蓝的花青素合成。而花青素是目前公认的营养保健物质，它是一种强氧化剂，能够抵抗自由基伤害，延缓衰老。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (5)

1.一种提高紫甘蓝花青素含量的方法，其特征在于，所述方法为将紫甘蓝种子用清水漂洗干净，然后在20-30℃下浸泡于褪黑素溶液中12-24h，冲洗干净后进行播种；所述褪黑素溶液的浓度为10μmol/L～1000μmol/L。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述褪黑素溶液的浓度为100μmol/L。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，将紫甘蓝种子在25℃下浸泡于褪黑素溶液中。
4.褪黑素在提高紫甘蓝花青素含量中的应用，其特征在于，利用浓度为10μmol/L～1000μmol/L的褪黑素溶液浸泡紫甘蓝种子，将种子冲洗干净后进行播种。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述褪黑素溶液的浓度为100μmol/L。
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