CN104673887A - 生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒及检测方法 - Google Patents

生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104673887A
CN104673887A CN201410669703.3A CN201410669703A CN104673887A CN 104673887 A CN104673887 A CN 104673887A CN 201410669703 A CN201410669703 A CN 201410669703A CN 104673887 A CN104673887 A CN 104673887A
Authority
CN
China
Prior art keywords
primer
pcr
detection
kit
chain reaction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410669703.3A
Other languages
English (en)
Inventor
胡文忠
冯可
邹宇
姜爱丽
何煜波
陈晨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dalian Minzu University
Original Assignee
Dalian Nationalities University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Dalian Nationalities University filed Critical Dalian Nationalities University
Priority to CN201410669703.3A priority Critical patent/CN104673887A/zh
Publication of CN104673887A publication Critical patent/CN104673887A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒，各组分组成及浓度为：⑴检测金黄色葡萄球菌的引物⑵检测沙门氏菌的引物⑶检测大肠杆菌的引物⑷镁盐⑸脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)⑹10×聚合酶链式反应(PCR)反应缓冲液⑺水生栖热菌(Taq)DNA聚合酶，灭菌无离子水补足体积至50.0μL。检测方法(1)取样品放入无菌均质袋中，取上清作为聚合酶链式反应(PCR)模板液；(2)将待检样品菌体制备的基因组DNA模板添加到检测试剂盒中；(3)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。本发明针对生鲜果蔬食品中主要致病菌，一次可检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌三种致病菌，检测时间由常规检测的3-5天，缩短为聚合酶链式反应(PCR)检测的30小时以内，省时省力，节约检测成本。

Description

生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒及检测方法
技术领域 本发明涉及一种食品中致病菌快速检测试剂盒及其检测方法。
背景技术 水果蔬菜中富含人体必需的维生素、有机酸、无机盐和植物纤维等营养成分，而即食生鲜果蔬食品因为食用方便、口味清新和味道鲜美，更是人们日常生活中和餐桌上常见的食物。但是，生鲜果蔬食品仅经简单清洗，未经高温杀菌处理，其表面和内部附着的微生物，尤其是金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌等水果蔬菜中常见的致病菌因而可能部分残留，对生鲜果蔬食品的食用安全性造成了极大的隐患。因而，对生鲜果蔬食品中致病菌的快速、准确的检测和鉴定技术就显得格外重要了。目前，我国对生鲜果蔬食品中致病菌的检测仍以常规的微生物学检测和鉴定方法为主。它的不足之处：费时、费力，且难以快速、准确的进行检测，检测成本高。
发明内容 本发明的目的是提供一种省时、省力，且能够快速、准确的进行检测，节约检测成本的生鲜果蔬食品中致病菌多重聚合酶链式反应检测试剂盒。
本发明所述的检测试剂盒，其中各组分组成及浓度为：⑴检测金黄色葡萄球菌的引物：上游引物5’-TGC GAA ACA TCC ACG ACA TA-3’，下游引物5’-CGT TTG TGC TGA TTT CCC TAC-3’，浓度为0.5～2.0μmol/L⑵检测沙门氏菌的引物：上游引物5’-GTG AAA TTA TCG CCA CGT TCG GGC AA-3’，下游引物5’-TCA TCG CAC CGT CAA AGG AAC C-3’，浓度为0.5～2.0μmol/L，⑶检测大肠杆菌的引物：上游引物5’-GGC GGA TAA GAC TTC GGC TA-3’，下游引物5’-CGT TTT GGC ACT ATT TGC CC-3’，浓度0.5～2.0μmol/L，⑷镁盐，浓度为1.0～2.0μmol/L，⑸脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)，浓度为0.15～0.25μmol/L，⑹10×聚合酶链式反应(PCR)反应缓冲液5.0μL，⑺水生栖热菌(Taq)DNA聚合酶1.0～3.0U，用灭菌无离子水补足体积至50.0μL。其中，镁盐为氯化镁或硫酸镁。
应用上述试剂盒对生鲜果蔬食品中致病菌进行检测的方法具体如下：
(1)无菌操作取样品放入无菌均质袋(内含100mL无菌生理盐水)中在均质仪上拍打混匀，取1.0mL样液无菌操作涂于LB肉汤固体平板，37℃恒温培养24h。在无菌条件下将单菌落分别挑入各灭菌离心管中，分别加50μL Lysis Buffer细胞裂解液，80℃水浴裂解20min，1000r/min离心10min，取上清作为聚合酶链式反应(PCR)模板液；
(2)将待检样品菌体制备的基因组DNA模板添加到检测试剂盒中，试剂盒内各组分组成及浓度为：检测金黄色葡萄球菌的引物0.5～2.0μmol/L，检测沙门氏菌的引物0.5～2.0μmol/L，检测大肠杆菌的引物0.5～2.0μmol/L，镁盐1.0～2.0μmol/L，脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)0.15～0.25μmol/L，10×聚合酶链式反应(PCR)反应缓冲液5.0μL，水生栖热菌(Taq)DNA聚合酶1.0～3.0U，用灭菌无离子水补足体积至50.0μL。各致病菌DNA模板各3μL，按现有技术，在聚合酶链式反应(PCR)扩增仪(Thermo Scientific，型号：Arktik)上孵育，聚合酶链式反应(PCR)循环参数为95℃预变性3min；95℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，循环32次；72℃终延伸10min，结束聚合酶链式反应(PCR)扩增；
(3)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，取扩增后的产物5μL点样于1％琼脂糖凝胶，其中含0.5μg/mL嗅化乙锭，以1000bp Marker为标准分子量参照，以5V/cm的电场强度于0.5×TBE电泳缓冲液中电泳30min，电泳结果用紫外凝胶成像系统拍照和分析，待检样品与阳性对照同时扩增出426bp的条带，则判定为金黄色葡萄球菌阳性；待检样品与阳性对照同时扩增出284bp的条带，则判定为沙门氏菌阳性；待检样品与阳性对照同时扩增出151bp的条带，则判定为大肠杆菌阳性。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：本发明针对生鲜果蔬食品中主要致病菌而设计，一次可检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌三种致病菌，检测时间由常规检测的3-5天，缩短为聚合酶链式反应(PCR)检测的30小时以内，省时省力，节约检测成本。
附图说明
图1为本发明试剂盒对实施例1的检测结果图。
具体实施方式
实施例1
(1)无菌操作取香菜样品10g放入无菌均质袋(内含100mL无菌生理盐水)中，在均质仪上拍打混匀，取1.0mL样液无菌操作涂于LB肉汤固体平板，37℃恒温培养24h。在无菌条件下将单菌落分别挑入各灭菌离心管中，分别加50μLLysis Buffer细胞裂解液，80℃水浴裂解20min，1000r/min离心10min，取上清作为聚合酶链式反应(PCR)模板液；
(2)将待检样品菌体制备的基因组DNA模板添加到检测试剂盒中，试剂盒内各组分组成及浓度为：检测金黄色葡萄球菌的引物1.0μmol/L，检测沙门氏菌的引物1.0μmol/L，检测大肠杆菌的引物1.0μmol/L，氯化镁1.5μmol/L，脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)0.2μmol/L，10×聚合酶链式反应(PCR)反应缓冲液5.0μL，水生栖热菌(Taq)DNA聚合酶2.0U，用灭菌无离子水补足体积至50.0μL。各致病菌DNA模板各3μL，在聚合酶链式反应(PCR)扩增仪上孵育，聚合酶链式反应(PCR)循环参数为95℃预变性3min；95℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环；72℃终延伸10min，结束聚合酶链式反应(PCR)扩增；
(3)取扩增后的产物5μL点样于1％琼脂糖凝胶，其中含0.5μg/mL嗅化乙锭，以1000bp Marker为标准分子量参照，以5V/cm的电场强度于0.5×TBE电泳缓冲液中电泳30min，电泳结果用紫外凝胶成像系统拍照和分析。
从图1中可以看出，四种供检测的香菜样品中均不同程度的检测出金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌的存在。
编号M为1000bp marker；
编号1-4为四种供检测的香菜样品；
编号5为金黄色葡萄球菌(426bp)；
编号6为沙门氏菌(284bp)；
编号7为大肠杆菌(151bp)；
编号8为阴性对照。
待检样品与阳性对照同时扩增出426bp的条带，则判定编号5的金黄色葡萄球菌阳性。如待检样品与阳性对照同时扩增出284bp的条带，则判定为编号6的沙门氏菌阳性；如待检样品与阳性对照同时扩增出151bp的条带，则判定为编号8的大肠杆菌阳性。
实施例2
(1)无菌操作取黄瓜样品10g放入无菌均质袋(内含100mL无菌生理盐水)中，在均质仪上拍打混匀，取1.0mL样液无菌操作涂于LB肉汤固体平板，37℃恒温培养24h。在无菌条件下将单菌落分别挑入各灭菌离心管中，分别加50μLLysis Buffer细胞裂解液，80℃水浴裂解20min，1000r/min离心10min，取上清作为聚合酶链式反应(PCR)模板液；
(2)将待检样品菌体制备的基因组DNA模板添加到检测试剂盒中，试剂盒内各组分组成及浓度为：检测金黄色葡萄球菌的引物2.0μmol/L，检测沙门氏菌的引物2.0μmol/L，检测大肠杆菌的引物2.0μmol/L，氯化镁2.0μmol/L，脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)0.25μmol/L，10×聚合酶链式反应(PCR)反应缓冲液5.0μL，水生栖热菌(Taq)DNA聚合酶3.0U，用灭菌无离子水补足体积至50.0μL。各致病菌DNA模板各3μL。在聚合酶链式反应(PCR)扩增仪上孵育，聚合酶链式反应(PCR)循环参数为95℃预变性3min；95℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环；72℃终延伸10min，结束聚合酶链式反应(PCR)扩增；
(3)取扩增后的产物5μL点样于1％琼脂糖凝胶，其中含0.5μg/mL嗅化乙锭，以1000bp Marker为标准分子量参照，以5V/cm的电场强度于0.5×TBE电泳缓冲液中电泳30min，电泳结果用紫外凝胶成像系统拍照和分析，待检样品与阳性对照同时扩增出426bp的条带，则判定为金黄色葡萄球菌阳性；如待检样品与阳性对照同时扩增出284bp的条带，则判定为沙门氏菌阳性；如待检样品与阳性对照同时扩增出151bp的条带，则判定为大肠杆菌阳性。
实施例3
(1)无菌操作取草莓样品10g放入无菌均质袋(内含100mL无菌生理盐水)中，在均质仪上拍打混匀，取1.0mL样液无菌操作涂于LB肉汤固体平板，37℃恒温培养24h。在无菌条件下将单菌落分别挑入各灭菌离心管中，分别加50μLLysis Buffer细胞裂解液，80℃水浴裂解20min，1000r/min离心10min，取上清作为聚合酶链式反应(PCR)模板液；
(2)将待检样品菌体制备的基因组DNA模板添加到检测试剂盒中，试剂盒内各组分组成及浓度为：检测金黄色葡萄球菌的引物2.0μmol/L，检测沙门氏菌的引物2.0μmol/L，检测大肠杆菌的引物2.0μmol/L，硫酸镁2.0μmol/L，脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)0.25μmol/L，10×聚合酶链式反应(PCR)反应缓冲液5.0μL，水生栖热菌(Taq)DNA聚合酶3.0U，用灭菌无离子水补足体积至50.0μL。各致病菌DNA模板各3μL。在聚合酶链式反应(PCR)扩增仪上孵育，聚合酶链式反应(PCR)循环参数为95℃预变性3min；95℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环；72℃终延伸10min，结束聚合酶链式反应(PCR)扩增；
(3)取扩增后的产物5μL点样于1％琼脂糖凝胶，其中含0.5μg/mL嗅化乙锭，以1000bp Marker为标准分子量参照，以5V/cm的电场强度于0.5×TBE电泳缓冲液中电泳30min，电泳结果用紫外凝胶成像系统拍照和分析，待检样品与阳性对照同时扩增出426bp的条带，则判定为金黄色葡萄球菌阳性；如待检样品与阳性对照同时扩增出284bp的条带，则判定为沙门氏菌阳性；如待检样品与阳性对照同时扩增出151bp的条带，则判定为大肠杆菌阳性。
实施例4
(1)无菌操作取西红柿样品10g放入无菌均质袋(内含100mL无菌生理盐水)中，在均质仪上拍打混匀，取1.0mL样液无菌操作涂于LB肉汤固体平板，37℃恒温培养24h。在无菌条件下将单菌落分别挑入各灭菌离心管中，分别加50μL Lysis Buffer细胞裂解液，80℃水浴裂解20min，1000r/min离心10min，取上清作为聚合酶链式反应(PCR)模板液；
(2)将待检样品菌体制备的基因组DNA模板添加到检测试剂盒中，试剂盒内各组分组成及浓度为：检测金黄色葡萄球菌的引物1.5μmol/L，检测沙门氏菌的引物1.5μmol/L，检测大肠杆菌的引物1.5μmol/L，硫酸镁1.5μmol/L，脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)0.2μmol/L，10×聚合酶链式反应(PCR)反应缓冲液5.0μL，水生栖热菌(Taq)DNA聚合酶2.0U，用灭菌无离子水补足体积至50.0μL。各致病菌DNA模板各3μL。在聚合酶链式反应(PCR)扩增仪上孵育，聚合酶链式反应(PCR)循环参数为95℃预变性3min；95℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，32个循环；72℃终延伸10min，结束聚合酶链式反应(PCR)扩增；
(3)取扩增后的产物5μL点样于1％琼脂糖凝胶，其中含0.5μg/mL嗅化乙锭，以1000bp Marker为标准分子量参照，以5V/cm的电场强度于0.5×TBE电泳缓冲液中电泳30min，电泳结果用紫外凝胶成像系统拍照和分析，待检样品与阳性对照同时扩增出426bp的条带，则判定为金黄色葡萄球菌阳性；如待检样品与阳性对照同时扩增出284bp的条带，则判定为沙门氏菌阳性；如待检样品与阳性对照同时扩增出151bp的条带，则判定为大肠杆菌阳性。
金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌常规检测方法与本专利申请的检测方法的对比
序列表

Claims (2)

1.生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒，其特征在于:各组分组成及浓度为：⑴检测金黄色葡萄球菌的引物：上游引物5’-TGC GAA ACA TCC ACG ACA TA-3’，下游引物5’-CGT TTG TGC TGA TTT CCC TAC-3’，浓度为0.5～2.0μmol/L⑵检测沙门氏菌的引物：上游引物5’-GTG AAA TTA TCG CCA CGT TCG GGC AA-3’，下游引物5’-TCA TCG CAC CGT CAA AGG AAC C-3’，浓度为0.5～2.0μmol/L，⑶检测大肠杆菌的引物：上游引物5’-GGC GGA TAA GAC TTC GGCTA-3’，下游引物5’-CGT TTT GGC ACT ATT TGC CC-3’，浓度0.5～2.0μmol/L，⑷镁盐，浓度为1.0～2.0μmol/L，⑸脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)，浓度为0.15～0.25μmol/L，⑹10×聚合酶链式反应(PCR)反应缓冲液5.0μL，⑺水生栖热菌(Taq)DNA聚合酶1.0～3.0U，用灭菌无离子水补足体积至50.0μL。
2.生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒的检测方法，其特征在于：
(1)无菌操作取样品放入无菌均质袋(内含100mL无菌生理盐水)中在均质仪上拍打混匀，取1.0mL样液无菌操作涂于LB肉汤固体平板，37℃恒温培养24h，在无菌条件下将单菌落分别挑入各灭菌离心管中，分别加50μLLysis Buffer细胞裂解液，80℃水浴裂解20min，1000r/min离心10min，取上清作为聚合酶链式反应(PCR)模板液；
(2)将待检样品菌体制备的基因组DNA模板添加到检测试剂盒中，试剂盒内各组分组成及浓度为：检测金黄色葡萄球菌的引物0.5～2.0μmol/L，检测沙门氏菌的引物0.5～2.0μmol/L，检测大肠杆菌的引物0.5～2.0μmol/L，镁盐1.0～2.0μmol/L，脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)0.15～0.25μmol/L，10×聚合酶链式反应(PCR)反应缓冲液5.0μL，水生栖热菌(Taq)DNA聚合酶1.0～3.0U，用灭菌无离子水补足体积至50.0μL，各致病菌DNA模板各3μL，按现有技术，在聚合酶链式反应(PCR)扩增仪(Thermo Scientific，型号：Arktik)上孵育，聚合酶链式反应(PCR)循环参数为95℃预变性3min；95℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，循环32次；72℃终延伸10min，结束聚合酶链式反应(PCR)扩增；
(3)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，取扩增后的产物5μL点样于1％琼脂糖凝胶，其中含0.5μg/mL嗅化乙锭，以1000bp Marker为标准分子量参照，以5V/cm的电场强度于0.5×TBE电泳缓冲液中电泳30min，电泳结果用紫外凝胶成像系统拍照和分析，待检样品与阳性对照同时扩增出426bp的条带，则判定为金黄色葡萄球菌阳性；待检样品与阳性对照同时扩增出284bp的条带，则判定为沙门氏菌阳性；待检样品与阳性对照同时扩增出151bp的条带，则判定为大肠杆菌阳性。
CN201410669703.3A 2014-11-21 2014-11-21 生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒及检测方法 Pending CN104673887A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410669703.3A CN104673887A (zh) 2014-11-21 2014-11-21 生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410669703.3A CN104673887A (zh) 2014-11-21 2014-11-21 生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒及检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104673887A true CN104673887A (zh) 2015-06-03

Family

ID=53309474

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410669703.3A Pending CN104673887A (zh) 2014-11-21 2014-11-21 生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104673887A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1707638A1 (en) * 2003-12-26 2006-10-04 Prima Meat Packers, Ltd. Method of multiplex microorganism detection
CN101570783A (zh) * 2009-03-20 2009-11-04 郑秋月 水产品中9种致病性微生物检测试剂盒及检测方法
CN101613745A (zh) * 2009-07-21 2009-12-30 广东省微生物研究所 金黄色葡萄球菌的多重pcr-mix快速检测试剂盒及检测方法
EP2284283A1 (en) * 2008-04-30 2011-02-16 Universidad del Pais Vasco Methods and reagents for the detection of salmonella sp.
CN103740803A (zh) * 2013-08-19 2014-04-23 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 一种食源性病原微生物核酸侧向流试纸条检测试剂盒及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1707638A1 (en) * 2003-12-26 2006-10-04 Prima Meat Packers, Ltd. Method of multiplex microorganism detection
EP2284283A1 (en) * 2008-04-30 2011-02-16 Universidad del Pais Vasco Methods and reagents for the detection of salmonella sp.
CN101570783A (zh) * 2009-03-20 2009-11-04 郑秋月 水产品中9种致病性微生物检测试剂盒及检测方法
CN101613745A (zh) * 2009-07-21 2009-12-30 广东省微生物研究所 金黄色葡萄球菌的多重pcr-mix快速检测试剂盒及检测方法
CN103740803A (zh) * 2013-08-19 2014-04-23 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 一种食源性病原微生物核酸侧向流试纸条检测试剂盒及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
代晓航等: "生菜中肠杆菌污染分析", 《中国卫生检验杂志》 *
王如景等: "双正交优化多重PCR检测食源性致病菌的研究", 《食品安全与检测》 *
郝玉芹等: "正交优化多重PCR反应体系检测3种食源性致病菌的研究", 《安徽农业科学》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. Rapid and accurate detection of viable Escherichia coli O157: H7 in milk using a combined IMS, sodium deoxycholate, PMA and real-time quantitative PCR process
Lee et al. Identification of microbial communities, with a focus on foodborne pathogens, during kimchi manufacturing process using culture-independent and-dependent analyses
CN105671197B (zh) 一种食源性致病菌单增李斯特菌的检测方法
Saeidi et al. VacA genotype status of Helicobacter pylori isolated from foods with animal origin
Singh et al. Multiplex real-time PCR assays for detection of eight Shiga toxin-producing Escherichia coli in food samples by melting curve analysis
CN105177170B (zh) 五种食源性致病菌的检测试剂盒及检测方法
Lupien-Meilleur et al. Viability of probiotic bacteria in a maple sap beverage during refrigerated storage
Kjeldgaard et al. Method enabling gene expression studies of pathogens in a complex food matrix
Nylén et al. The performance of 4 different supplements and 5 blood culture bottles types in detection of bacteria and Candida spp. in simulated sterile body fluid cultures
CN104673887A (zh) 生鲜果蔬食品中致病菌检测试剂盒及检测方法
CN203238265U (zh) 一种弯曲菌多重pcr检测试剂盒
CN103436623A (zh) 一种食品中沙门氏菌活菌的快速检测试剂盒及使用方法
CN106636437A (zh) 一种基于mpn与pcr的食品中沙门氏菌快速定量方法
CN103725771B (zh) 同时快速准确检测食品中活的产呕吐毒素和不产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌试剂盒及其检测方法
Cho et al. Labchip-based diagnosis system for on-site application: Sensitive and easy-to-implement detection of single recoverable Cronobacter in infant formula without post-enrichment treatment
CN105154582A (zh) 四种大肠埃希氏菌的检测试剂盒及检测方法
Vural et al. A study about microbiological quality and species identification of frozen turkey meat
De Lamo-Castellví et al. Survival and growth of Yersinia enterocolitica strains inoculated in skimmed milk treated with high hydrostatic pressure
Nandi et al. Detection of stx2 and elt genes in bovine milk by using a multiplex PCR system
CN108220460B (zh) 一种食源性化脓链球菌lamp引物组及试剂盒与应用
CN105779578A (zh) 一种利用重组酶介导等温核酸扩增技术检测沙门氏菌的方法
Ashraf et al. Detection of species-specific gene thermonuclease (nuc) in Staphylococcus aureus from chickens by real-time PCR assay.
de Carvalho Proença et al. Occurrence of Escherichia coli in salmon sashimis commercialized in restaurants from Londrina-PR
CN103667462A (zh) 一种利用数字pcr检测食品中菌落总数的方法
Birmpa et al. A loop-mediated isothermal amplification platform for the detection of foodborne pathogens

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150603

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication