CN104643094A - 一种富含益生菌的膳食补充剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种富含益生菌的膳食补充剂及其制备方法。所述制备方法包括以下步骤：(1)将植物乳杆菌(L.plantarum)接种于番茄汁培养基中培养，35～40℃培养6～12小时收集发酵液A；(2)将肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)接种于番茄汁蔗糖培养基中，20～35℃100～300rpm振荡培养12～48小时，收集发酵液B；(3)将所得发酵液A和发酵液B以体积比1:0～0:1混合均匀后，调节pH值为6.5～7.5，冷冻干燥即得。该制备方法工艺简便，所得富含益生菌的膳食补充剂具有其包含的菌株存活率高、该膳食补充剂保存稳定性极佳的优点。

Description

一种富含益生菌的膳食补充剂及其制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种富含益生菌的膳食补充剂及其制备方法。
背景技术
乳酸菌是人类肠道中的重要菌群，研究表明，乳酸菌可以使肠道菌群的构成发生有益变化，抑制腐败菌的繁殖，恢复人体肠道内菌群平衡，形成抗菌生物屏障，并消解腐败菌产生的毒素，清除肠道垃圾，维护人体健康。其次，乳酸菌的发酵代谢产物能减轻胃酸分泌，并且对肠壁神经有良好的刺激作用,能促进人体消化酶的分泌和肠道的蠕动,从而促进对蛋白质、单糖及钙、镁等营养物质的吸收利用,并预防便秘。另外，乳酸菌在改善乳糖不耐、降血脂、降血压、增强人体免疫力和抵抗力、抗衰老、抗肿瘤等方面都起着积极作用。
膳食补充剂是一种日常营养补充剂，其可通过维生素、矿物质、氨基酸等营养成分的补充，来提高机体健康水平和降低疾病发生风险，现有的膳食补充剂基本都是通过多种营养成分的组合制备而成的，复杂的配方大大增加了膳食补充剂在制备过程中被污染的风险，进而对消费者形成了潜在的威胁。此外，由于益生菌及其代谢产物对机体的益生作用已被广泛认同，与膳食补充剂配合使用势必相得益彰，但目前富含益生菌的膳食补充剂较少，并且益生菌的存活率和稳定性较差，因此，寻找来源天然、操作简便、存活率高、保存稳定性佳的含益生菌膳食补充剂及其制备方法将是膳食补充剂的重要研究方向之一。
发明内容
因此，本发明为了解决目前益生菌膳食补充剂缺乏天然来源，制备工艺较为复杂，其所包含的益生菌存活率不高，而且保存稳定性不佳的问题，提供了一种新的富含益生菌的膳食补充剂及其制备方法。
本发明人发现，由于现有的含有益生菌的膳食补充剂制备所涉及的配方相当复杂，正如背景技术内容所述，现有的膳食补充剂往往是通过多种营养成分的组合制备而成的，包含诸如海藻糖、乳糖、蔗糖、D-山梨醇、脱脂奶粉、糊精等复杂成分，由于配方成分复杂，对膳食补充剂原料的安全性提出了更高的要求，同时大大增加了在膳食补充剂的制备过程中产生污染的风险，从而对消费者构成了潜在的威胁，这种现状与当前消费者日益增强的食品安全意识构成了极大的矛盾和冲突，为了解决这一矛盾，发明人对膳食补充剂的制备方法，特别是菌种的培养方式，培养基的选择，发酵培养的温度、时间等一系列技术参数进行了认真的分析和筛选，最终得到了本发明所述的技术方案以及所得富含益生菌的膳食补充剂。制备该膳食补充剂的原料来源天然，其制备方法工艺简便，所得产品的保存稳定性极佳，能够获得其中包含的益生菌菌株存活率高的技术效果。
因此，为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一是：一种富含益生菌的膳食补充剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将植物乳杆菌(L.plantarum)接种于番茄汁培养基中培养，培养的温度为35～40℃，培养6～12小时收集发酵液A；
(2)将肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)接种于番茄汁蔗糖培养基中，所述番茄汁蔗糖培养基的pH值为6.5-7.5，蔗糖的质量百分比浓度为5-20％，其余为番茄汁，20～35℃，100～300rpm振荡培养12～48小时，收集发酵液B；
(3)将所得发酵液A和发酵液B以体积比1:0～0:1混合均匀后，调节pH值为6.5～7.5，冷冻干燥即得。
其中步骤(1)为：将植物乳杆菌(L.plantarum)接种于番茄汁培养基中培养，培养的温度为35～40℃，培养6～12小时收集发酵液A。其中所述植物乳杆菌较佳地为植物乳杆菌(L.plantarum)ST-Ⅲ，植物乳杆菌ATCC14917或植物乳杆菌WCFS1。上述几种植物乳杆菌均为现有技术，其制备方法为本领域常规制备方法，或者通过购买获得。其中所述番茄汁培养基为本领域常规的番茄汁培养基，所述的番茄汁培养基较佳地由包括由以下步骤组成的方法制备而得：清洗成熟番茄，去皮，榨汁，过滤后煮沸，4,000-12,000g离心10min，取上清，灭菌，冷却即得。其中所述的过滤较佳地为采用100目纱布过滤，煮沸的时间较佳地为1-10分钟，所述的灭菌温度较佳地为110-135℃，灭菌时间较佳地为10-30分钟。其中所述植物乳杆菌ST-Ⅲ的培养温度较佳地为37℃，时间较佳地为8小时。其中所述的培养温度较佳地为37℃，时间较佳地为8小时，所述植物乳杆菌的接种量较佳地为0.5％-5％，所述百分比为体积百分比。
其中所述步骤(2)为：将肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)接种于番茄汁蔗糖培养基中，所述番茄汁蔗糖培养基的pH值为6.5-7.5，蔗糖的质量百分比浓度为5-20％，其余为番茄汁，20～35℃，100～300rpm振荡培养12～48小时，收集发酵液B。其中所述肠膜明串珠菌较佳地为：肠膜明串珠菌BD1710，肠膜明串珠LM57或肠膜明串珠菌LM79。上述几种肠膜明串珠菌的菌株为现有技术，其制备方法为本领域常规制备方法，或者通过购买获得。其中所述番茄汁蔗糖培养基为本领域常规的番茄汁蔗糖培养基，该番茄汁蔗糖培养基较佳地由包括以下步骤的方法制备：清洗成熟番茄，去皮榨汁，将所得榨汁过滤后煮沸，离心取上清，加入蔗糖加热溶解后冷却，调节pH值，灭菌后冷却即得。其中所述过滤的方法较佳地为利用100目纱布过滤取汁，所述煮沸的时间较佳地为1-10分钟，所述离心的速度较佳地为4,000-12,000g，离心的时间较佳地为8-12分钟，蔗糖的加入量较佳地为5-20％，所述灭菌的温度较佳地为110-135℃，灭菌时间较佳地为10-30分钟，pH值较佳地为6.5-7.5。所述培养的温度较佳地为25-30℃，更佳地为28℃，所述震荡的速度较佳地为150-200rpm，更佳地为180rpm，所述培养的时间较佳地为24-45小时，更佳地为40小时。
其中所述步骤(3)为：将所得发酵液A和发酵液B以体积比1:0～0:1混合均匀后，调节pH值为6.5～7.5，冷冻干燥即得。其中所述发酵液A和发酵液B的体积比较佳地为1:1，所述调节pH值的方法为本领域常规方法，较佳地为利用食品级碱调节pH值，所述食品级碱为本领域常规，较佳地是：Na2CO3、NaHCO3和NaOH中的一种或多种。所述pH值较佳地为7.0。
本发明所述的冻干为本领域常规的冻干方法，所述冻干方法较佳地为真空冷冻干燥，其中所述真空冷冻干燥条件较佳地为：板层极限温度≤-60℃，冷阱极限温度-70℃，板层装料厚度0.5～2.0mm，真空度10～30Pa。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之二是：一种富含益生菌的膳食补充剂，其是由包括以下步骤的方法制备而得：
(1)将植物乳杆菌(L.plantarum)接种于番茄汁培养基中培养，培养的温度为35～40℃，培养6～12小时收集发酵液A；
(2)将肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)接种于番茄汁蔗糖培养基中，所述番茄汁蔗糖培养基的pH值为6.5-7.5，蔗糖的质量百分比浓度为5-20％，其余为番茄汁，20～35℃，100～300rpm振荡培养12～48小时，收集发酵液B；
(3)将所得发酵液A和发酵液B以体积比1:0～0:1混合均匀后，调节pH值为6.5～7.5，冷冻干燥即得。
本发明所述富含益生菌的膳食补充剂的制备方法中各步骤所述技术特征的优选范围与上文所述富含益生菌的膳食补充剂的制备方法中相应的内容完全一致。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
1、本发明所述富含益生菌的膳食补充剂在制备时采用的原料来源天然，因此所得产品具有更高的食品安全性；
2、本发明所述含益生菌膳食补充剂的制备方法工艺简便，其创新性的制备流程省略了传统工艺中必要的营养成分混合的过程，大大降低了该环节潜在的污染风险，仅需菌种发酵、发酵液混匀和混合发酵液的冷冻干燥三步即可完成。
3、采用本发明的制备方法获得的膳食补充剂中益生菌存活率高，保存稳定性佳，本发明所述制备方法可作为一种新型的制备方法应用于富含益生菌的膳食补充剂的工业化生产及相关领域中，应用前景十分广阔。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。本发明中所述的室温是指进行试验的操作间的温度，一般为15-25℃。
实施例1富含益生菌的膳食补充剂的制备与存活率、活菌数的测定
1、材料
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸5min，8000g离心10min取上清，121℃灭菌20min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
番茄汁蔗糖培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸5min，8000g离心10min取上清，加入15％(w/v)蔗糖加热溶解后冷却至室温，以食用级碱调节pH至7.0，121℃灭菌20min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁蔗糖培养基。
种子(发酵菌种)的制备：
(a)将植物乳杆菌L.plantarum ST-Ⅲ(CGMCC No.0847)(所述植物乳杆菌的来源请参见公开号为CN 102604833A的中国专利)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(Merck Co.德国)上，37℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mL MRS液体(MerckCo.德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃厌氧培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于50mL MRS液体，37℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
(b)将肠膜明串珠菌L.mesenteroides BD1710(CGMCC No.6432)(所述肠膜明串珠菌的来源请参见公开号为CN 103013891 A的中国专利)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于含2％(w/v)蔗糖的M17琼脂培养基(Merck Co.德国)上，28℃好氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入20mL含2％(w/v)蔗糖的M17液体培养基(Merck Co.德国)，28℃180rpm摇床培养24h取出，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
2、富含益生菌的膳食补充剂的制备
(1)将所得植物乳杆菌ST-Ⅲ的种子以接种量2％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，37℃培养8小时，获得发酵液A。
(2)将所得肠膜明串珠菌BD1710的种子按接种量2％(v/v)无菌接种于pH7.0、蔗糖浓度为15％(w/v)的番茄汁培养基中，28℃、180rpm振荡培养24小时，获得发酵液B。
(3)将发酵液A、B以体积比1:0，4:1，1:1，1:4和0:1混合均匀后，调节pH至7.0，经冷冻干燥后即得富含益生菌的膳食补充剂S1、S2、S3、S4、S5。
3、膳食补充剂中益生菌存活率、活菌数的测定
向上述方法制备所得膳食补充剂S1、S2、S3、S4、S5中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内植物乳杆菌、肠膜明串珠菌的活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。
存活率＝膳食补充剂还原体积后单位体积内的活菌数÷发酵液A、B混合后单位体积内的活菌数×100％。不同膳食补充剂中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数如表1所示。
表1不同膳食补充剂中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数
实施例2富含益生菌的膳食补充剂的制备与益生菌存活率、活菌数的测定
1、材料
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸1min，12,000g离心10min取上清，110℃灭菌30min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
番茄汁蔗糖培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸1min，12,000g离心10min，取上清，加入20％(w/v)蔗糖加热溶解后冷却至室温，以食用级碱调节pH至6.5，110℃灭菌30min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁蔗糖培养基。
种子(发酵菌种)的制备方法与实施例1相同。
2、富含益生菌的膳食补充剂的制备
(1)将植物乳杆菌ST-Ⅲ的种子以接种量5％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，40℃培养6小时，获得发酵液A。
(2)将肠膜明串珠菌BD1710的种子按接种量0.5％(v/v)无菌接种于pH6.5、蔗糖浓度为20％(w/v)的番茄汁培养基中，35℃、100rpm振荡培养48小时，获得发酵液B。
(3)将发酵液A、B以体积比1：1混合均匀后，调节pH至6.5，经冷冻干燥后即得富含益生菌的膳食补充剂S6。
3、膳食补充剂中益生菌存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的膳食补充剂S6中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内植物乳杆菌、肠膜明串珠菌的活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。
存活率＝膳食补充剂还原体积后单位体积内的活菌数÷发酵液A、B混合后单位体积内的活菌数×100％。膳食补充剂S6中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数如表2所示。
表2膳食补充剂S6中的植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数
实施例3富含益生菌的膳食补充剂的制备与益生菌存活率、活菌数的测定
1、材料
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸10min，4,000g离心10min取上清，135℃灭菌10min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
番茄汁蔗糖培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸10min，4,000g离心10min取上清，加入5％(w/v)蔗糖加热溶解后冷却至室温，以食用级碱调节pH至7.5，135℃灭菌10min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁蔗糖培养基。益生菌的种子(发酵菌种)的制备方法与实施例1相同。
2、富含益生菌的膳食补充剂的制备
(1)将植物乳杆菌ST-Ⅲ的种子以接种量0.5％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，35℃培养12小时，获得发酵液A。
(2)将肠膜明串珠菌BD1710的种子按接种量5％(v/v)无菌接种于pH7.5、蔗糖浓度为5％(w/v)的番茄汁培养基中，25℃、300rpm振荡培养12小时，获得发酵液B。
(3)将发酵液A、B以体积比1：1混合均匀后，调节pH至7.5，经冷冻干燥后即得富含益生菌的膳食补充剂S7。
3、膳食补充剂中益生菌存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的膳食补充剂S7中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌、肠膜明串珠菌的活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。存活率＝膳食补充剂还原体积后单位体积内的活菌数÷发酵液A、B混合后单位体积内的活菌数×100％。膳食补充剂S7中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数如表3所示。
表3膳食补充剂S7中的植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数
实施例4富含益生菌的膳食补充剂的制备与益生菌存活率、活菌数的测定
1、材料
番茄汁培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸5min，8000g离心10min取上清，121℃灭菌20min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁培养基。
番茄汁蔗糖培养基的制备：成熟番茄清洗，去皮，榨汁机压榨，100目纱布过滤取汁，煮沸5min，8000g离心10min取上清，加入15％(w/v)蔗糖加热溶解后冷却至室温，以食用级碱调节pH至7.0，121℃灭菌20min，冷却至室温，即得无菌的番茄汁蔗糖培养基。
种子(发酵菌种)的制备：
(a)将L.plantarum ATCC14917(购买自ATCC)、L.plantarum WCFS1(购买自TI Food and Nutrition，Wageningen，The Netherlands)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于MRS固体培养基(Merck Co.德国)上，37℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mL MRS液体(Merck Co.德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃厌氧培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于50mL MRS液体，37℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
(b)将L.mesenteroides LM57(购买自丹尼斯克公司)和L.mesenteroides LM79(购买自丹尼斯克公司)的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于含2％(w/v)蔗糖的M17琼脂培养基(Merck Co.德国)上，28℃好氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入20mL含2％(w/v)蔗糖的M17液体培养基(Merck Co.德国)，28℃180rpm摇床培养24h取出，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。
2、富含益生菌的膳食补充剂的制备
(1)将所得L.plantarum ATCC14917、L.plantarum WCFS1的种子分别以接种量2％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，37℃培养8小时，获得发酵液A1、A2。
(2)将所得L.mesenteroides LM57和L.mesenteroides LM79的种子按接种量2％(v/v)分别接种于pH7.0、蔗糖浓度为15％(w/v)的番茄汁培养基中，28℃、180rpm振荡培养24小时，获得发酵液B1、B2。
(3)将所得发酵液A1、B1以体积比1：1混合均匀，调节pH至7.0，经冷冻干燥后即得富含益生菌的膳食补充剂T1。将发酵液A2、B2以体积比1：1混合均匀，调节pH至7.0，经冷冻干燥后即得富含益生菌的膳食补充剂T2。
3、膳食补充剂中益生菌存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的膳食补充剂T1、T2中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内的植物乳杆菌、肠膜明串珠菌的活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。存活率＝膳食补充剂还原体积后单位体积内的活菌数÷发酵液A、B混合后单位体积内的活菌数×100％。膳食补充剂T1、T2中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数如表4所示。
表4膳食补充剂和冻干制剂中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数
由表4可知，本发明制备所得膳食补充剂中益生菌的存活率≥75％，其活菌数≥5×109cfu。
效果实施例1检测所得膳食补充剂中益生菌的稳定性
将实施例1-3制备的膳食补充剂S1、S2、S3、S4、S5、S6和S7，分装入无菌的铝箔袋，常温(25℃)保存6个月和12个月后，取出菌粉，采用MRS平板计数法测定活菌数，结果如表5所示。
表5膳食补充剂中益生菌在常温保存条件下的稳定性
由表5可知，所有测试的膳食补充剂在常温保存12个月后，其益生菌活菌总数稳定保持在108以上。
对比例1检测传统冻干制剂中益生菌的存活率和活菌数
其中涉及的无菌番茄汁培养基，含有蔗糖的番茄汁培养基以及微生物种子的制备方法与实施例1相同。
1、利用传统方法制备冻干制剂：
(1)制备传统冻干保护剂：将脱脂乳粉、海藻糖、蔗糖、硫酸锰用透明包装袋包装，进行辐射灭菌后，在无菌条件下用无菌水溶解制成如下浓度的冻干保护剂：脱脂乳粉10％、海藻糖3％、硫酸锰0.25％、蔗糖4％(制备方法请参见文献：田文,邵秀芝,陈文佳,et al.直投式泡菜发酵剂冻干保护剂的研究[J].中国调味品,2012,37(6):49-52.)。
(2)将L.plantarum ST-Ⅲ的种子以接种量2％(v/v)无菌接种于无菌的番茄汁培养基，37℃培养8小时，获得发酵液A，其中所述无菌的番茄汁培养基的制备方法如实施例1所述。
(3)将肠膜明串珠菌BD1710的种子按接种量2％(v/v)无菌接种于pH7.0、蔗糖浓度为15％(w/v)的番茄汁培养基中，28℃、180rpm振荡培养24小时，获得发酵液B，其中所述含有蔗糖的番茄汁培养基的制备方法如实施例1所述。
(4)将发酵液A、B以体积比1：1混合均匀后，离心取沉淀，将菌体沉淀重悬于相同体积的步骤(1)所得传统冻干保护剂，经冷冻干燥后即得传统方法制备的冻干制剂P2。
2、传统冻干制剂中益生菌存活率、活菌数的测定
取实施例1制备所得富含益生菌的膳食补充剂S3，将其命名为P1，作为对照。向上述方法制备所得的膳食补充剂P1和冻干制剂P2中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内植物乳杆菌、肠膜明串珠菌的活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。存活率＝膳食补充剂/冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷发酵液A、B混合后单位体积内的活菌数×100％。膳食补充剂和传统冻干制剂中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数如表6所示。
表6膳食补充剂和传统冻干制剂中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数
由表6可知，传统的冻干制剂中益生菌的存活率略高于本发明膳食补充剂，但活菌数显著低于本发明膳食补充剂。
对比例2检测常规发酵液制备的冻干制剂中益生菌的总存活率和总活菌数
其中涉及的MRS液体培养基以及微生物种子的制备方法与实施例1相同。
1、利用常规发酵液制备冻干制剂
(1)制备化学合成培养基：将下述配料根据所述浓度溶解于蒸馏水中，调pH至6.5，118℃灭菌20分钟，冷却至室温即得适用于明串珠菌生长的常规培养基：蔗糖2％、酵母提取物0.5％、牛肉浸膏1％、蛋白胨1％、磷酸氢二钾0.2％、乙酸钠0.5％、柠檬酸铵0.2％、MgSO4·7H2O 0.02％、MnSO4·4H2O0.02％(制备方法请参见文献：GOYAL A,KATIYAR S S.Regulation ofdextransucrase productivity of Leuconostoc mesenteroides NRRL B-512F by themaintenance media[J].Journal of General and Applied Microbiology,1996,42(1):81-5.)。
(2)将L.plantarum ST-Ⅲ的种子以接种量2％(v/v)无菌接种于无菌的MRS液体培养基，37℃培养8小时，获得发酵液A。
(3)将肠膜明串珠菌BD1710的种子以接种量2％(v/v)无菌接种于步骤(1)制备的化学合成培养基中，28℃、180rpm振荡培养24小时，获得发酵液B。
(4)将发酵液A、B以体积比1：1混合均匀后，离心取沉淀，将菌体沉淀重悬于相同体积的传统冻干保护剂，经冷冻干燥后即得冻干制剂P3。
2、常规发酵液制备的冻干制剂中益生菌存活率、活菌数的测定
以对比例1所述的冻干制剂P1和P2作为对照。向上述方法制备的冻干制剂P1、P2和P3中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内植物乳杆菌、肠膜明串珠菌的活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。存活率＝膳食补充剂/冻干制剂还原体积后单位体积内的活菌数÷发酵液A、B混合后单位体积内的活菌数×100％。膳食补充剂、传统冻干制剂及常规发酵液制备的冻干制剂中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数如表7所示。
表7膳食补充剂、传统冻干制剂及常规发酵液制备的冻干制剂中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数
从表7的结果中可以得出，利用常规发酵液制备的冻干制剂与本发明所得膳食补充剂相比，其中益生菌菌株的存活率和活菌数都显著降低。
对比例3检测膳食补充剂中益生菌的总存活率和总活菌数
1、其中涉及MRS液体培养基，含有蔗糖的番茄汁培养基以及微生物种子的制备方法与实施例1相同。其中涉及的无菌的番茄汁培养基，含有蔗糖的番茄汁培养基以及微生物种子的制备方法与实施例1相同。
2、制备富含益生菌的膳食补充剂
将实施例中植物乳杆菌的接种量，培养温度，培养时间以及肠膜明串珠菌的菌株接种量，培养温度，培养时间，震荡速度，番茄汁蔗糖培养基中蔗糖的含量，该培养基的pH值，以及所得发酵液的混合体积比例和所得混合发酵液的pH值等主要技术参数进行调整，获得了以下一组不同方法制备的富含益生菌的膳食补充剂。
3、膳食补充剂中益生菌存活率、活菌数的测定
向上述方法制备的一组膳食补充剂中加入无菌蒸馏水，使体积还原为冻干前的体积，采用MRS平板计数方法测定单位体积(通常为每毫升)内植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的活菌数。冻干粉活菌数(cfu/g)＝单位体积发酵液活菌数(cfu/mL)÷单位体积发酵液冻干后的质量(g/mL)。存活率＝膳食补充剂还原体积后单位体积内的活菌数÷发酵液A、B混合后单位体积内的活菌数×100％。不同膳食补充剂中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数如表8所示。
表8不同膳食补充剂中植物乳杆菌和肠膜明串珠菌的存活率、活菌数及益生菌总存活率和总活菌数
从表8的结果中可以得出，当所述富含益生菌的膳食补充剂制备方法中的主要参数，包括微生物的接种量，培养的温度，培养的时间，震荡的速度，番茄汁培养基中的蔗糖浓度以及将菌株发酵液的勾兑的体积比以及pH值调整到本发明之外的时候，所得膳食补充剂中微生物的存活率和活菌数都产生了显著降低。
应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种富含益生菌的膳食补充剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将植物乳杆菌(L.plantarum)接种于番茄汁培养基中培养，培养的温度为35～40℃，培养6～12小时收集发酵液A；
(2)将肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)接种于番茄汁蔗糖培养基中，所述番茄汁蔗糖培养基的pH值为6.5-7.5，蔗糖的质量百分比浓度为5-20％，其余为番茄汁，20～35℃，100～300rpm振荡培养12～48小时，收集发酵液B；
(3)将所得发酵液A和发酵液B以体积比1:0～0:1混合均匀后，调节pH值为6.5～7.5，冷冻干燥即得。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的植物乳杆菌是植物乳杆菌ST-Ⅲ，植物乳杆菌ATCC14917或植物乳杆菌WCFS1。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的肠膜明串珠菌是肠膜明串珠菌BD1710，肠膜明串珠菌LM57或肠膜明串珠菌LM79。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述植物乳杆菌的接种量为0.5％-5％，所述百分比为体积百分比。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的番茄汁培养基由包括以下步骤的方法制备而得：清洗成熟番茄，去皮，榨汁，采用100目纱布过滤，过滤后煮沸1-10分钟，4,000-12,000g离心10分钟，取上清，用110-135℃灭菌10-30分钟，冷却即得。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的培养温度为37℃，时间为8小时。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的肠膜明串珠菌的接种量为0.5％-5％，所述百分比为体积百分比。
8.一种富含益生菌的膳食补充剂，其特征在于，其是由包括以下步骤的方法制备而得：
(1)将植物乳杆菌(L.plantarum)接种于番茄汁培养基中培养，培养的温度为35～40℃，培养6～12小时收集发酵液A；
(2)将肠膜明串珠菌(L.mesenteroides)接种于番茄汁蔗糖培养基中，所述番茄汁蔗糖培养基的pH值为6.5-7.5，蔗糖的质量百分比浓度为5-20％，其余为番茄汁，20～35℃，100～300rpm振荡培养12～48小时，收集发酵液B；
(3)将所得发酵液A和发酵液B以体积比1:0～0:1混合均匀后，调节pH值为6.5～7.5，冷冻干燥即得。
9.如权利要求8所述的富含益生菌的膳食补充剂，其特征在于，步骤(1)所述植物乳杆菌的接种量为0.5％-5％，所述百分比为体积百分比。
10.如权利要求8所述的富含益生菌的膳食补充剂，其特征在于，步骤(2)所述的肠膜明串珠菌的接种量为0.5％-5％，所述百分比为体积百分比。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105039454A (zh) * 2015-08-27 2015-11-11 光明乳业股份有限公司 一种富含果聚糖的膳食补充剂及其制备方法
CN105595326A (zh) * 2015-12-21 2016-05-25 光明乳业股份有限公司 一种富含水不溶性葡聚糖的膳食补充剂及其制备方法
CN108013134A (zh) * 2017-12-26 2018-05-11 光明乳业股份有限公司 一种富含植物乳杆菌st-iii的发酵乳及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998042194A1 (en) * 1997-03-24 1998-10-01 Viva America Marketing, Inc. Stabilized solid bacteria compositions
CN1819771A (zh) * 2003-05-22 2006-08-16 生物合成公司 包含至少两种能定居在胃肠道中以及具有肠存活特性,肠结合特性,感染保护特性和纤维发酵特性的乳酸菌株的益生菌组合物
CN102732470A (zh) * 2012-07-20 2012-10-17 光明乳业股份有限公司 一种纯天然、低成本的植物乳杆菌st-ⅲ培养方法及其产品和应用
CN103468611A (zh) * 2013-09-03 2013-12-25 光明乳业股份有限公司 发酵培养基及制备方法和应用、乳酸菌葡聚糖的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998042194A1 (en) * 1997-03-24 1998-10-01 Viva America Marketing, Inc. Stabilized solid bacteria compositions
CN1819771A (zh) * 2003-05-22 2006-08-16 生物合成公司 包含至少两种能定居在胃肠道中以及具有肠存活特性,肠结合特性,感染保护特性和纤维发酵特性的乳酸菌株的益生菌组合物
CN102732470A (zh) * 2012-07-20 2012-10-17 光明乳业股份有限公司 一种纯天然、低成本的植物乳杆菌st-ⅲ培养方法及其产品和应用
CN103468611A (zh) * 2013-09-03 2013-12-25 光明乳业股份有限公司 发酵培养基及制备方法和应用、乳酸菌葡聚糖的制备方法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105039454A (zh) * 2015-08-27 2015-11-11 光明乳业股份有限公司 一种富含果聚糖的膳食补充剂及其制备方法
CN105595326A (zh) * 2015-12-21 2016-05-25 光明乳业股份有限公司 一种富含水不溶性葡聚糖的膳食补充剂及其制备方法
CN105595326B (zh) * 2015-12-21 2018-11-20 光明乳业股份有限公司 一种富含水不溶性葡聚糖的膳食补充剂及其制备方法
CN108013134A (zh) * 2017-12-26 2018-05-11 光明乳业股份有限公司 一种富含植物乳杆菌st-iii的发酵乳及其制备方法
CN108013134B (zh) * 2017-12-26 2020-08-28 光明乳业股份有限公司 一种富含植物乳杆菌st-iii的发酵乳及其制备方法

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