CN104640567A - 治疗或预防牙周炎和与牙周炎相关的疾病的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开描述了预防或治疗牙周炎或与牙周炎相关的疾病的方法。本公开还描述了可用于预防或治疗牙周炎或与牙周炎相关的疾病的化合物的筛选方法。

Description

治疗或预防牙周炎和与牙周炎相关的疾病的方法
与相关申请的交叉引用
本申请要求2012年6月20日提交的美国申请号61/662,022和2013年3月13日提交的美国申请号13/801,096的优先权。
联邦资助的研究或开发
本发明在美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)国家牙科和颅面研究所(National Institute of Dental and CraniofacialResearch)(NIDCR)授予的资助号DE021685的政府支持下做出。政府在本发明中具有一定权利。
技术领域
本公开总的来说涉及牙周疾病和治疗或预防牙周炎的方法。
发明背景
牙周炎是一种普遍的慢性炎性疾病，其引起围绕并支撑牙齿的组织(牙周膜)的破坏。这种口腔疾病由形成在龈下牙齿表面上并主要包含革兰氏阴性厌氧物种群落的细菌生物膜引发。宿主对龈牙生态位处的慢性微生物激惹的炎性应答，与牙周膜上遭受的损伤有关。
尽管在传统上被视为血清中的抗微生物酶系统，但补体现在被认为是影响先天和适应性免疫两者的宿主防御的中心组分。不足为奇，由于它在对抗病原体中的重要性，补体构成了引起持久感染的微生物免疫逃避的关键靶点。
发明概述
本公开描述了预防或治疗牙周炎或与牙周炎相关的疾病的方法。本公开还描述了可用于预防或治疗牙周炎或与牙周炎相关的疾病的化合物的筛选方法。
一方面，提供了一种在个体中治疗或预防牙周炎或与牙周炎相关的疾病的方法。这样的方法一般包括向所述个体给药抑制或阻断C3的表达、活性或活化的化合物。代表性化合物包括但不限于坎普他汀(compstatin)、坎普他汀类似物、补体受体1相关基因/蛋白y(Crry)和补体活化阻断剂-2。另一种代表性化合物是针对C3的抗体或例如C3的肽模拟物拮抗剂。代表性的与牙周炎相关的疾病包括但不限于动脉粥样硬化、糖尿病、骨质疏松症和早产。
另一方面，提供了一种在个体中减少牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)的量和/或减轻由牙龈卟啉单胞菌引起的炎症的方法。这样的方法一般包括向所述个体给药抑制或阻断C3的表达、活性或活化的化合物。代表性化合物包括但不限于坎普他汀、坎普他汀类似物、补体受体1相关基因/蛋白y(Crry)和补体活化阻断剂-2。
另一方面，提供了一种治疗或预防牙周炎或与牙周炎相关的疾病的化合物的筛选方法。这样的方法通常包括将细胞在牙龈卟啉单胞菌存在的条件下与试验化合物相接触；并且评估所述细胞的C3的表达、活性或活化。一般来说，在试验化合物存在的条件下C3的表达、活性或活化的降低是能用于治疗或预防牙周炎或与牙周炎相关的疾病的试验化合物的征兆。在某些实施方式中，所述细胞是哺乳动物细胞。在某些实施方式中，所述细胞是包含编码C3的外源核酸的重组细胞。
除非另有定义，否则在本文中使用的所有技术和科学术语具有与所讨论的方法和组合物所属领域的普通技术人员通常理解的相同的意义。在下面描述了适合的方法和材料，尽管与本文中描述的方法和材料类似或等同的方法和材料可用于所讨论方法和组合物的实践或试验。此外，材料、方法和实例仅仅是说明性而不打算是限制性的。本文中提高的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献以其全部内容通过参考并入本文。
附图说明
图1的图示出了C3缺陷针对炎性牙周骨丧失提供保护。数据是平均值±SD(n＝5只小鼠)。*，与假感染的WT相比P<0.05，**，P<0.01。·，骨丧失或细胞因子诱导的显著(p<0.01)抑制。缩写：W-S：WT和假感染的；W-P：WT和Pg感染的；C3-S：C3-/-和假感染的；C3-P：C3-/-和Pg感染的。
图2的图示出了牙龈卟啉单胞菌在正常或补体缺陷小鼠的牙周膜中的定植和影响。数据是平均值±SD(n＝每组5只小鼠)。*在标出的组之间P<0.01。
图3的图示出了在去肉下颌骨中测量的骨丧失(图A)，以及所标出的细胞因子的mRNA表达(针对GAPDH mRNA进行归一化)，所述表达被表示成结扎位点中的转录水平相对于对侧未结扎位点的转录水平(指派为1的平均值)的变化倍数(图B)。数据是平均值±SD(n＝5只小鼠)。负值指示相对于未结扎的对侧牙齿的骨丧失。*，与WT对照相比P<0.01。·，细胞因子诱导的显著(P<0.01)抑制。
图4的图示出了Cp40降低NHP牙周炎的炎性临床参数。在两只动物中，始于结扎诱导的牙周炎开始后3天，将Cp40(500μg)每周三次局部注射到从第一前臼齿到第二臼齿的上颌牙间乳头中。在同样的两只动物中，将Cp40的无活性类似物(对照)注射到口腔的对侧中(口腔自身对照设计)。示出了Cp40对标出的炎性临床参数和使用标准化的X-射线成像(在第6周获取)和Nikon成像系统软件确定的骨骼高度的影响。具体来说，在6个点处(第一前臼齿，远端；第二前臼齿，中间和远端；第一臼齿，中间和远端；第二臼齿，中间)测量了牙骨质-釉质接合部(CEJ)与牙槽嵴顶(ABC)之间的距离，并且图E中的数据反映了6个点的总和。对照与Cp40治疗相比较高的CEJ-ABC距离值，表明在不存在药物治疗的情况下骨丧失增加。在所有动物中，龈缘位于牙骨质-釉质接合部处，因此PPD读数等于临床附着丧失(CAL)。
图5的图示出了Cp40抑制了NHP牙周炎中促炎性细胞因子产生和破骨细胞生成。在进行临床检查的相同时间点(根据图4)，使用龈沟液取样纸条从相同的猴(处理详述在图4的图例说明中)收集GCF，以测定标出的细胞因子。使用Milliplex Map试剂盒，在Bio-Plex系统上测量洗脱的GCF样品中的总细胞因子含量。在图G中，对于在每只动物的第二前臼齿与第一臼齿之间获取的每个骨骼活检样本来说，在9个连续区段中计数TRAP阳性多核细胞(破骨细胞)。
图6的图示出了在用Cp40治疗NHP牙周炎后炎性临床参数的显著抑制。始于结扎诱导的牙周炎开始后3天，将Cp40(500μg)或对照每周三次在口腔的相反侧中(口腔自身对照设计)局部注射到从第一前臼齿到第二臼齿的下颌牙间乳头中。在标出的时间点，确定Cp40对标出的炎性临床参数的影响。在所有动物中，龈缘位于牙骨质-釉质接合部处，因此PPD读数等于临床附着丧失(CAL)。数据是平均值±SD(n＝4只猴)。*，与对照相比P<0.05；**，P<0.01。
图7的图示出了用Cp40治疗NHP牙周炎后促炎性细胞因子的GCF水平的降低。在进行临床检查的相同时间点(根据图6)，使用龈沟液取样纸条从相同的猴(处理详述在图6的图例说明中)收集GCF，以测定标出的细胞因子。使用Milliplex Map试剂盒，在Bio-Plex系统上测量洗脱的GCF样品中的总细胞因子含量。数据是平均值±SD(n＝4只猴)。*，与对照相比P<0.05；**，P<0.01。
图8的图示出了在用Cp40治疗NHP牙周炎后牙周骨丧失的抑制。按照图6的图例说明中所述对4只猴进行处理，并使用标准化的X-射线成像(在基线和第6周时获取)和Nikon成像系统软件测量它们的下颌骨高度(CEJ-ABC距离)。测量在6个点处进行(第一前臼齿，远端；第二前臼齿，中间和远端；第一臼齿，中间和远端；第二臼齿，中间)，并且图A和图B中的数据分别反映了在基线(图A)和第6周(图B)时6个点的总和。对于每个对照或Cp40治疗来说，骨丧失被计算为基线时的骨骼高度减去第6周时的骨骼高度(图C)。Cp40与对照之间的差异是显著的(P<0.05；配对t检验)。
各个图中相似的参考符号指示相似的要素。
详细描述
牙周炎是影响牙周膜、即围绕并支撑牙齿的组织的一组炎性疾病。牙周炎涉及牙齿周围的牙槽骨的渐进性丧失，并且如果不进行治疗，可以引起牙齿松动和随后的丧失。牙周炎由粘附于牙齿表面并在其上生长的微生物以及针对这些微生物的过度侵入性的免疫应答引起。牙周炎表现为疼痛、发红、牙龈肿胀和大量的牙菌斑。症状可以包括在刷牙、使用牙线或咬嚼硬质食物(例如苹果)时牙龈发红或出血，反复的牙龈肿胀，口臭和口腔中持久的金属味，引起牙齿表观变长的牙龈萎缩，牙齿与牙龈之间的深袋(袋是附着已被胶原酶逐渐破坏的位点)，以及牙齿松动。
在1999年，开发了用于牙周疾病和病症的分类系统，其列出了7种主要的牙周疾病类型，其中后6种被称为“破坏性牙周疾病”，因为它们本质上是不可逆的。此外，这些类型附有表述牙周疾病的范围和严重性两者的术语，以进一步表示具体诊断。疾病的范围是指受到疾病影响的齿系的比例，用位点的百分数表示。位点被定义为在每颗牙齿周围获取探查测量值的位置，并且通常记录每颗牙齿周围的6个探查位点以确定牙周疾病的范围。通常，如果口腔中最多30％的位点受到影响，则表象被分类为局部；如果口腔中超过30％的位点受到影响，则使用术语“广泛”。疾病的严重性是指已损失的牙周韧带纤维的量，被称为临床附着丧失，并且被美国牙周病学会(American Academy ofPeriodontology)定义为轻度(1–2mm的附着丧失)、中度(3–4mm的附着丧失)或重度(≥5mm的附着丧失)。
还已显示，牙周炎对口腔之外有影响。例如，已将牙周炎与C反应性蛋白和白介素6(IL-6)的水平增加所指示的炎性增加相关联。此外，已显示牙周炎增加许多其他疾病的风险，包括但不限于中风、心肌梗塞、动脉粥样硬化、糖尿病、骨质疏松症和早产。
牙周炎中涉及的主要病原体是牙龈卟啉单胞菌这种革兰氏阴性厌氧细菌。牙龈卟啉单胞菌抑制补体级联反应，所述级联反应通常汇集到第三补体成分(C3)并导致效应分子的产生，所述效应分子通过过敏毒素C3a和C5a介导炎性细胞的召集和活化，通过调理素例如C3b介导微生物调理作用和细胞吞噬作用，并通过C5b-9膜攻击复合物介导靶微生物的直接裂解。
目前，在牙周炎中没有令人满意的辅助疗法；抗微生物剂和抗生素就此而言在很大程度上不成功。目前，最有希望的方法可能是使用促进炎症消退的药剂(例如脂氧素和消退素(resolvin))，尽管这些药剂中的至少一些显得具有稳定性问题(例如容易变得被氧化和失去生物活性)。
治疗或预防牙周炎或与牙周炎相关的疾病的方法
本文中所描述的牙龈卟啉单胞菌用来克服和挫败宿主免疫应答的机制，可以在治疗或预防牙周炎或与牙周炎相关的疾病的方法中用来对抗病原体。例如，阻断C3有效地剥夺了牙龈卟啉单胞菌的关键存活策略。因此，抑制或阻断C3的表达、活性或活化的方法，可用于减少个体中牙龈卟啉单胞菌的量，从而保护个体免于牙周炎和相关的系统性疾病例如动脉粥样硬化。此外，抑制在C3存在的条件下出现的免疫抑制性信号传导的方法，也可用于减少个体中牙龈卟啉单胞菌的量，从而保护个体免于牙周炎和相关的系统性疾病。
这样的方法(例如抑制或阻断C3的表达、活性或活化的方法)通常包括向个体给药抑制或阻断C3的表达、活性或活化的化合物。例如，存在许多已知抑制或阻断C3的表达、活性或活化的化合物(例如C3拮抗剂)。例如，坎普他汀或坎普他汀类似物、补体受体1相关基因/蛋白y(Crry)和补体活化阻断剂-2是本领域中已知的C3的抑制剂。参见例如Sahu等，2000，“靶向C3、C4和C5的补体抑制剂”(ComplementInhibitors Targeting C3,C4,and C5)，在《现代免疫学：补体系统中的治疗性干预》(Contemporary Immunology:Therapeutic Interventions in theComplement System，pp.75-112，Lambris和Holers主编，Humana PressInc.,Totowa,NJ)中；以及Qu等，2012，“临床补体抑制剂坎普他汀的具有亚纳摩尔亲和性和改进的药物动力学性质的新的类似物”(Newanalogs of the clinical complement inhibitor坎普他汀with subnanomolaraffinity and enhanced pharmacokinetic properties)，Immunobiology,218:496-505。
针对C3的抗体也可用于抑制或阻断C3的表达、活性或活化。针对C3的抗体是已知的，并且可以从例如Creative BioMart(Shirley,NY)、ABCAM(Cambridge,MA)和Acris Antibodies(San Diego,CA)商购。此外，RNA干扰(“RNAi”)可用于特异性靶向编码C3的核酸。RNAi是一种用于诱导特异性翻译后基因沉默的方法。RNAi涉及将具有部分或完全双链特点的RNA导入到细胞内或细胞外环境中。靶基因的用于制造RNAi的部分可以涵盖外显子，但是也可以包括非翻译区(UTR)以及内含子。参见例如Kim等，2008,Biotechniques,44:613-6以及Lares等，2010,Trends Biotechnol.,28:570-9；和Pfeifer等，2010,Pharmacol.Ther.,126:217-27。也参见Ricklin&Lambris,2007,Nature Biotechnol.,25:1265-75。
在某些实施方式中，可以将一种或多种补体抑制剂给药于个体，并通过本文中所描述的补体在牙周炎形成中以及特别是牙龈卟啉单胞菌的建立中的作用，用于预防或治疗牙周炎(或与牙周炎相关的疾病)。代表性的补体抑制剂包括但不限于sCR1、C1抑制剂(C1inh)、膜辅因子蛋白(MCP)、衰变加速因子(DAF)、MCP-DAF融合蛋白(CAB-2)、C4bp、因子H、因子I、羧肽酶N、玻连蛋白(S蛋白)、丛生蛋白、CD59、坎普他汀及其功能类似物、Clq抑制剂或抗Clq抗体、Cl抑制剂或抗Cl抗体、Clr抑制剂或抗Clr抗体、Cls抑制剂或抗Cls抗体、MSP抑制剂或抗MASP抗体、MBL抑制剂或抗MBL抗体、C2抑制剂或抗C2抗体、C4抑制剂或抗C4抗体、C4a抑制剂或抗C4a抗体、C5抑制剂或抗C5抗体、C5a抑制剂或抗C5a抗体、C5aR抑制剂或抗C5aR抗体、C5b抑制剂或抗C5b抗体、C3a抑制剂或抗C3a抗体、C3aR抑制剂或抗C3aR抗体、C6抑制剂或抗C6抗体、C7抑制剂或抗C7抗体、C8抑制剂或抗C8抗体、C9抑制剂或抗C9抗体、备解素抑制剂或抗备解素抗体、因子B抑制剂或抗因子B抗体或因子D抑制剂或抗因子D抗体。
抑制或阻断C3的表达、活性或活化的化合物可以通过多种途径中的任一种给药于个体，所使用的途径通常取决于具体化合物及其特点。可以将化合物合并到适合于给药到个体的药物组合物中。这样的组合物通常至少包括化合物和可药用载体。当在本文中使用时，“可药用载体”打算包括与药物给药相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。对药物活性物质使用这样的介质和试剂，在本领域中是公知的。任何常规介质和药剂，除非与活性化合物不相容，否则还设想了其在组合物中的使用。其他或第二活性化合物也可以并入到本文描述的组合物中。
将本文中描述的药物组合物配制成与其所打算的给药途径相容。给药途径的实例包括肠胃外例如静脉内、皮内、皮下、经口(例如吞咽或吸入)、透皮(表面)、透粘膜和直肠给药。此外，局部给药到牙周袋中(例如通过直接注射或通过例如Perio Chip)，也是可以在本文描述的方法中使用的给药途径。用于肠胃外、真皮内或皮下应用的溶液或悬液可以包括下列组分：无菌稀释剂例如注射用水、盐水溶液(例如磷酸盐缓冲盐水(PBS))、不挥发油、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、甘油或其他合成溶剂；抗细菌和/或抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等；抗氧化剂例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸；缓冲剂例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节渗涨度的试剂例如氯化钠或右旋糖。可以例如通过使用包衣例如卵磷脂，通过在分散的情况下维持所需的粒径和/或通过使用表面活性剂，来维持适合的流体性。在许多情况下，在组合物中包含等渗剂例如糖类、多元醇例如甘露糖醇或山梨糖醇和氯化钠，将是优选的。可注射组合物的延长给药，可以通过包含延迟吸收的药剂来产生。这样的药剂包括例如单硬脂酸铝和明胶。肠胃外制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂小瓶中。
经口组合物一般包含惰性稀释剂或可食用载体。经口组合物可以是液体，或者可以封装在明胶胶囊中或压制成片剂。可以包含药物相容的粘合剂和/或辅助材料作为经口组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有任何下述成分或具有类似性质的化合物：粘合剂例如微晶体纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂例如淀粉或乳糖；崩解剂例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂例如胶体二氧化硅；甜味剂例如蔗糖或糖精；和/或调味剂例如胡椒薄荷、水杨酸甲酯或橙味香料。透粘膜给药可以通过使用鼻喷剂或栓剂来实现。对于透皮给药来说，通常将活性化合物配制成本领域中公知的软膏、药膏、凝胶或霜剂。
将经口或肠胃外组合物配制成剂量单位形式，对于给药的容易性和剂量的均匀性来说是特别有利的。本文中使用的剂量单位形式是指适合作为单一剂量用于个体接受的物理上分立的单位；每个单位含有经计算能够与所需的药物载体相结合产生所需治疗效果的预定量的活性化合物。剂量单位本身依赖于待递送的化合物的量。可以将抑制或阻断C3的表达、活性或活化所必需的化合物量配制在多个剂量单位中。使用抑制或阻断C3的表达、活性或活化的化合物治疗个体，可能需要一次药剂，或者可能需要重复的或多剂药剂。
可用于治疗或预防牙周炎或与牙周炎相关的疾病的化合物的筛选
本文中描述的关于补体组分C3和牙龈卟啉单胞菌的结果，也可用于筛选治疗性化合物(即抑制C3的表达、活性或活化的化合物)。例如，可以产生包含与编码C3多肽的核酸可操作连接的启动子的核酸分子。驱动DNA序列的表达的启动子在本领域中是公知的。适用于表达编码C3的核酸的启动子对于本领域技术人员来说是已知的，并且包括例如组成型或诱导型启动子。在本领域中已知许多组成型和诱导型启动子。当在本文中使用时，“可操作连接”意味着启动子和/或其他调控元件相对于编码C3的核酸定位在载体中，以便指导或调控所述核酸的表达。可以使用常规方法(例如电穿孔、基于脂质的递送系统、纳米粒子递送系统和基于病毒的递送系统)将这样的核酸分子导入到宿主细胞(例如大肠杆菌、酵母)中，并且可以将所述宿主细胞与试验化合物相接触。本文中所描述的载体也可以包括例如编码可选择标志物(例如抗生素抗性基因)的序列。
评估试验化合物是否抑制C3的表达的方法在本领域中是公知的。例如，可以使用RT-PCR或RNA印迹方法来确定存在和不存在试验化合物的情况下C3mRNA的量。此外，可用于评估试验化合物是否抑制C3的活性或活化的方法，在本领域中是已知的。
制造重组宿主细胞(例如重组哺乳动物宿主细胞)的方法在本文中进行了讨论，并且在本领域中是公知的。此外，在本文中描述的筛选方法中，事实上可以将任何类型的化合物用作试验化合物。试验化合物可以包括例如并且不限于核酸、肽类、蛋白质、非肽类化合物、合成的化合物、肽模拟物、抗体、小分子、发酵产物或提取物(例如细胞提取物、植物提取物或动物组织提取物)。
根据本公开，可以使用本领域技术内的常规分子生物学、微生物学、生物化学和重组DNA技术。这样的技术在文献中充分解释。本发明的发现将在下面的实施例中进一步描述，所述实施例不限制在权利要求书中描述的主题内容的方法和组合物的范围。
实施例
实施例1—缺少C3的小鼠受到保护以对抗牙龈卟啉单胞菌诱导的骨丧 失
将CS7BL/6野生型(WT)小鼠或C3缺陷的(C3-/-)小鼠用牙龈卟啉单胞菌(Pg)口腔感染或不感染，并使用去肉的下颌骨评估牙周骨丧失的诱导(图1A)。从同一小鼠剖出6颗下颌臼齿周围的颊侧和舌侧龈并进行处理用于实时PCR，以测定所标出的细胞因子的mRNA表达水平(针对GAPDH mRNA进行归一化，并表示成相对于假感染的WT组的诱导倍数)(图1B)。进行类似的实验，其中将龈匀浆，并使用可溶性提取物，使用Luminex-100技术来测定细胞因子水平(图1C)。
发现相对于野生型对照，缺少中心补体组分C3的小鼠(C3-/-小鼠)受到保护以对抗牙龈卟啉单胞菌诱导的骨丧失(图1)。骨丧失的抑制(图1A)与炎性和骨再吸收细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-17)在mRNA(图1B)和蛋白质(图1C)水平上的表达降低相关。这些数据合在一起暗示C3与破坏性牙周炎症相关。
实施例2—在正常或补体缺陷的小鼠中牙龈卟啉单胞菌在牙周膜中的定 植和影响
将野生型(WT)小鼠或缺陷C3或C5aR的小鼠用牙龈卟啉单胞菌(Pg)或仅用媒介(假感染)口腔接种，并在7天后处死。使用ISPg1基因(牙龈卟啉单胞菌)或16S rRNA基因(总细菌)的定量实时PCR，测定牙周组织中牙龈卟啉单胞菌和总细菌的数量。
尽管牙龈卟啉单胞菌不能在CSaR缺陷(C5ar-/-)小鼠的牙周膜定植，但是它可以定植于C3-/-小鼠的牙周膜并引起总细菌计数的增加，在野生型小鼠中也是如此(图2)。与图1中示出的数据合在一起，这些发现表明，尽管生态失调对于炎性骨丧失来说是必需的，但它本身不够充分。相反，生态失调的微生物群需要C3的存在来诱导最大炎症和骨丧失。
实施例3—C3 -/- 小鼠受到保护以对抗结扎诱导的牙周骨丧失
通过使用绑在下颌第二臼齿(L)周围的5-0丝质结扎线来诱导骨丧失；将每只小鼠中的对侧臼齿留下不结扎，作为基线对照(UC或WT)。
这产生了不依赖于牙龈卟啉单胞菌的牙周炎模型，引起细菌的局部大量积累和快速的炎性骨丧失。在这种模型中，根据骨丧失(图3A)和所标出的细胞因子的mRNA表达(图3B)，C3-/-小鼠受到保护。因此，C3深度参与炎性骨丧失，表明C3抑制剂(例如坎普他汀)可以在牙周炎中发现治疗性应用。
实施例4—非人类灵长动物研究
食蟹猴的免疫系统和牙周解剖学与人类非常相似，并且在这种NHP模型中结扎诱导的牙周炎显示出与在人类牙周炎中观察到的最为相似的细菌学、免疫组织学和临床特点。因此，与其他广泛使用的临床前动物模型例如啮齿动物模型相比，食蟹猴模型对于药物在人类牙周炎中的效能具有相当高的预测性。此外，结扎诱导的牙周炎的食蟹猴模型允许以不能在人类中进行的方式进行疾病的纵向研究。
对于口腔自身对照实验设计来说，将丝质结扎线置于口腔两半上的下颌后牙(第二前臼齿和第一臼齿)周围，所述口腔自身对照实验设计即一侧用活性药物(Cp40，坎普他汀的目前的先导形式)处理，另一侧用无活性类似物(对照)处理。因此，每只动物用作其自身的对照。使用两只动物进行为期6周的初始研究。与对照处理相比，用坎普他汀处理导致临床炎症和骨丧失的减少(图4)，以及龈沟液(GCF)中促炎性细胞因子的水平降低和骨活检组织样本中破骨细胞数量的减少(图5)。重要的是，在用Cp40处理的位点中骨丧失的减少(通过放射自显影，由更大的骨骼高度即CEJ-ABC距离所揭示；图4E)不仅与破骨细胞生成的减少(图5G)相一致，而且与关键的破骨细胞生成因子RANKL的GCF水平的降低(图5E)相一致。此外，在研究过程中，在Cp40处理的位点中，与对照位点相比，RANKL的天然抑制剂骨保护素(OPG)的GCF水平维持在较高水平上(图5F)。
在第二项NHP研究中，通过将结扎线置于同两只动物加上另外两只动物(总共4只猴)的下颌后牙周围(即下颚中)，来诱导结扎诱导的牙周炎。获得的结果(图6、7和8)证实了原始研究的结果。此外，4只动物的存在允许进行统计分析的可能性。对于某些临床参数(PPD和GI，图6A和B)和大多数细胞因子应答(图7)来说，Cp40的保护效果达到统计学显著性。重要的是，Cp40引起骨丧失的显著抑制(图8C)，这与它对调控破骨细胞生成的分子的影响(与对照处理相比RANKL降低并且OPG水平提高；分别为图7H和I)相一致。
这是对于任何疾病来说，第一次显示补体抑制能够抑制在NHP中引起破骨细胞生成和骨丧失的炎性过程。此外，这些数据强烈地支持Cp40在人类牙周炎中的治疗潜力。
其他实施方式
应该理解，尽管在本文中已结合许多不同方面对主题方法和组合物进行了描述，但上面对各个不同方面的描述打算用于说明而不是限制主题方法和组合物的范围。其他方面、优点和修改在权利要求书的范围之内。
公开了可用于、可以联合用于、可用于制备所公开的方法或组合物，或者是所公开的方法或组合物的产物的方法和组合物。这些和其他材料在本文中公开，并且应该理解，这些方法和组合物的组合、子集、相互作用、组等，也被公开。也就是说，尽管可能没有明确地公开对这些组合物和方法的每种各不相同的个体和集合的组合和排列的具体指称，但它们每个都在本文中被具体考虑并描述。例如，如果特定主题组合物或特定方法被公开并讨论，并且讨论了许多组合物或方法，则所述组合物和方法的每个和所有组合和排列都被具体地考虑到，除非特别指明不是如此。同样地，它们的任何子集或组合也被具体地考虑到并公开。

Claims (10)

1.一种在个体中治疗或预防牙周炎或与牙周炎相关的疾病的方法，所述方法包括：
向所述个体给药抑制或阻断C3的表达、活性或活化的化合物。
2.权利要求1的方法，其中所述化合物选自坎普他汀、坎普他汀类似物、补体受体1相关基因/蛋白y(Crry)和补体活化阻断剂-2。
3.权利要求1的方法，其中所述化合物是针对C3的抗体。
4.权利要求1的方法，其中所述化合物是C3的肽模拟物拮抗剂。
5.权利要求1的方法，其中所述与牙周炎相关的疾病选自动脉粥样硬化、糖尿病、骨质疏松症和早产。
6.一种在个体中减少牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)的量和/或减轻由牙龈卟啉单胞菌引起的炎症的方法，所述方法包括：
向所述个体给药抑制或阻断C3的表达、活性或活化的化合物。
7.权利要求6的方法，其中所述化合物选自坎普他汀、坎普他汀类似物、补体受体1相关基因/蛋白y(Crry)和补体活化阻断剂-2。
8.一种筛选用于治疗或预防牙周炎或与牙周炎相关的疾病的化合物的方法，所述方法包括：
将细胞在牙龈卟啉单胞菌存在的条件下与试验化合物相接触；并且
评估所述细胞的C3的表达、活性或活化，
其中在试验化合物存在的条件下C3的表达、活性或活化的降低是能用于治疗或预防牙周炎或与牙周炎相关的疾病的试验化合物的征兆。
9.权利要求8的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
10.权利要求8的方法，其中所述细胞是包含编码C3的外源核酸的重组细胞。
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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