CN104605463A - 一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂 - Google Patents

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郭娜
赵星辰
孟日增
李晓旭
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刘宗慧
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本发明公开了一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂，是利用微量稀释法药物敏感性实验和棋盘式微量稀释实验，受试菌包括：9株金黄色葡萄球菌食品分离株，9株单增李斯特菌食品分离株，以及2株对照用质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 29213，单增李斯特菌ATCC 19115，测定紫苏油对尼生素抗菌活性的影响，实验结果证明紫苏油具有增强尼生素抗革兰氏阳性菌活性的作用。尼生素是从乳酸链球菌发酵产物中提制的一种多肽抗菌素类物质，其本身易被人体消化道中的一些蛋白酶所降解，并且对食品的色、香、味等无不良影响，紫苏富含α-亚麻酸，具有抗氧化、抗衰老、抗血栓和心血管疾病防治、抗癌作用、抗过敏和抗炎作用。高尼生素和紫苏油做为食品防腐剂，可降低了高尼生素的添加量，安全可靠，并具有保健作用。

Description

一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂
技术领域
本发明属生物医药领域，具体涉及一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂及一种食品防腐添加剂。
背景技术
单增李斯特菌及金黄色葡萄球菌均是一种人畜共患病的病原菌，在自然界中的广泛存在的革兰氏阳性菌。当牲畜感染单增李斯特菌后，通过食物链最后导致人类的感染；人类受感染后可导致胃肠炎、败血症、脑膜炎、流产，对孕妇、婴儿、老年人及免疫力低下者更容易发生。金黄色葡萄球菌具有分布广、致病力强、感染率和死亡率高等特点，可引起皮肤感染到严重的败血症等一系列复杂的临床症状，同时也是重要的食源性致病菌，金黄色葡萄球菌引起的食物中毒是世界性的公共卫生问题。
为防止革兰氏阳性菌对食品的污染，延长食品的货架期，人们希望的是使用天然食品防腐剂来取代化学防腐剂抑制这些革兰氏阳性菌，特别是单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌。尼生素是从乳酸链球菌发酵产物中提制的一种多肽抗菌素类物质，其本身易被人体消化道中的一些蛋白酶所降解，并且对食品的色、香、味等无不良影响，是一种世界公认的安全的天然生物性食品防腐剂和抗菌剂。随着尼生素应用的快速增加和普及，尼生素也许会像抗生素一样在自然界中产生相应的耐药性菌株，从而影响和限制尼生素的使用。因此寻找尼生素抗革兰氏阳性菌增效剂，为新型食品防腐剂的研究开发奠定基础。
紫苏为唇形科一年生草本植物。紫苏又名赤苏、苏子或白苏，在我国各地均有分布。从紫苏的干燥成熟果实中提取所得植物油即是紫苏油。经气相色谱-质谱联用法检测鉴定，紫苏油主要含有软脂酸、亚油酸、α-亚麻酸、硬脂酸、花生一烯酸和花生酸。其中不饱和脂肪酸含量达90 %，而α-亚麻酸含量达50%~62%。有研究表明，紫苏是目前最富含α-亚麻酸的重要植物资源之一。紫苏油已报道。
本发明采用紫苏油作为一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂，为新型食品防腐剂的研究开发奠定基础。
发明内容：
本发明的目的是提供一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂。
一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂，它是从紫苏果实中提取的植物油，即紫苏油。
所述的革兰氏阳性菌阳性菌为金黄色葡萄球菌或单增李斯特菌。
一种防腐剂，它包括：高尼生素和紫苏油；
所述的高尼生素和紫苏油，它们的重量份为高尼生素0.5-8, 紫苏油125-250。
一种防腐剂做为食品防腐添加剂的应用。
本发明提供一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂，是利用微量稀释法药物敏感性实验和棋盘式微量稀释实验，受试菌包括：9株金黄色葡萄球菌食品分离株，9株单增李斯特菌食品分离株，以及2株对照用质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 29213，单增李斯特菌ATCC 19115，测定紫苏油对尼生素抗菌活性的影响，实验结果证明紫苏油具有增强尼生素抗革兰氏阳性菌活性的作用。尼生素是从乳酸链球菌发酵产物中提制的一种多肽抗菌素类物质，其本身易被人体消化道中的一些蛋白酶所降解，并且对食品的色、香、味等无不良影响，紫苏富含α-亚麻酸，具有抗氧化、抗衰老、抗血栓和心血管疾病防治、抗癌作用、抗过敏和抗炎作用。高尼生素和紫苏油做为食品防腐剂，可降低了高尼生素的添加量，安全，并具有保健作用。
具体实施方式
实施例1
微量稀释法药物敏感性实验：用Muller-Hinton肉汤（MHB）培养基将紫苏油贮存液进行倍比稀释。将稀释好的药物加入96孔板，每孔100 μL。将过夜培养的取金黄色葡萄球菌菌液用MHB培养基适当稀释后，用分光光度计测OD600值，稀释至OD600为0.4（相当于5×108 CFU/mL），并进一步稀释至浓度为106 CFU/mL。每孔加100 μL菌悬液，以MHB作阴性对照，不加药物的菌悬液为阳性对照。混合均匀后放37℃温箱静置培养，24 h后观察结果。能抑制细菌生长的最低浓度为菌株的MIC值，将每孔的细菌吹打均匀后倒入MHA平板，不长菌的最低浓度为MBC值，试验重复3次，取中位数为最终值。值得注意的是，单增李斯特菌的培养基为脑心浸液肉汤（BHI），其OD600为0.4为1×108 CFU/mL。其结果如表1、表2。
实施例2
棋盘式微量稀释实验：将联用的两种药物至于96孔微量板上，以二维棋盘的纵向（B-H，尼生素）和横向（2-12，紫苏油）两个方向分别进行倍比稀释，即根据所测定的两药单用时对受试菌株的MIC，将紫苏油配制成4×MIC、2×MIC、1×MIC、1/2×MIC、1/4×MIC、1/8×MIC、1/16×MIC、1/32×MIC、1/64×MIC、1/128×MIC、1/256×MIC的浓度，尼生素配制成4×MIC、2×MIC、1×MIC、1/2×MIC、1/4×MIC、1/8×MIC、1/16×MIC的浓度，每孔50 μL按照顺序依次加入各孔中，最后再加入105 CFU/mL的工作菌液100 μL，考察每一种药物联用时的MIC，并通过计算部分抑菌浓度指数（the fractional inhibitory concentration index,FICI）来判断两药物体外相互作用。金黄色葡萄球菌菌株的FICI值由以下公式计算：
FICI=FICA+FICB=CA comb/MICA alone+CB comb/MICB alone
其中，MICA alone和MICB alone分别是化合物A和B单用时的MIC值，CA comb和CB comb为两药联用时达到相同药效（等效位点）时各自的浓度。FICI值都判定标准如下：FICI≤0.5，表明两种化合物之间存在协同作用；0.5＜FICI≤4表明两种化合物之间无相关作用；FICI＞4表明两种化合物之间存在拮抗作用。其结果如表3、4。
结果描述：
表1：通过表1，可看出当两者联合作用时，其对金黄色葡萄球菌MIC值明显减低。
表2：通过表2，可看出当两者联合作用时，其对单增李斯特菌MIC值明显减低。
表3：通过表3，可看出当紫苏油与尼生素联合作用时，其FICI值均小于0.5，两者对金黄色葡萄球菌具有协同抗菌作用。
表4：通过表4，可看出当紫苏油与尼生素联合作用时，其FICI值均小于0.5，两者对单增李斯特菌具有协同抗菌作用。

Claims (5)

1.一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂，它是从紫苏果实中提取的植物油，即紫苏油。
2.根据权利要求1所述的一种提高尼生素抗革兰氏阳性菌作用的增效剂，其特征在于：所述的革兰氏阳性菌阳性菌为金黄色葡萄球菌或单增李斯特菌。
3.一种防腐剂，它包括：高尼生素和紫苏油。
4.根据权利要求3所述的一种防腐剂，其特征在于：所述的高尼生素和紫苏油，它们的重量份为高尼生素0.5-8, 紫苏油125-250。
5.权利要求3所述的一种防腐剂做为食品防腐添加剂的应用。
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