CN104604790A - 一种隧道中繁殖大鲵的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种隧道中繁殖大鲵的方法，主要步骤包括：温度调节，光照调节，水流调节，饵料投喂，配置精子培养液及受精卵孵化。应用本发明方法，可实现雌雄大鲵性腺发育同步成熟，受精率大于90%，孵化率大于70%。
Description
技术领域
本项发明涉及大鲵人工繁殖方法，适用于水产养殖领域。
背景技术
中国大鲵，俗称“娃娃鱼”，是我国特有的一种经济价值很高野生珍稀动物，为国家二级保护动物，是研究生物进化、生物多样性、性别决定分子机制等研究的好材料，对于科学研究具有巨大潜在贡献，被称为“活化石”。 1975年7月1日，大鲵被列入国际濒危物种贸易公约（CITES）附录I，禁止其国际贸易。1988年12月10日国务院公布的《国家重点保护野生动物名录》将大鲵列为国家Ⅱ级保护动物。此外，大鲵还被IUCN物种保护红色名录列为极危物种。
大鲵的资源保护、增殖和利用是当前水产研究的热点，也是农业产业化重点开发的品种之一。上个世纪70年代末至90年代初，湖南省的阳爱生、湖北省的肖汉兵等就进行了大鲵人工繁殖技术的研究试验。大鲵人工繁殖采用注射脑垂体、LRH-A、HCG和高效催产合剂，均能使大鲵产卵，授精后即可孵化出幼苗，但未能突破大鲵苗种批量繁殖。近年来，浙江省的沈宝泉、上海水产大学乔志刚、广东省的黄俊海等单位和个人在大鲵人工繁殖试验研究中，又取得了一些进步，其中浙江的沈宝泉2004年用2000尾亲本人工繁殖出大鲵幼苗12000尾，大鲵亲本与子代繁殖率达1：18.5，这可算是我国近年来大鲵繁殖数量上一个大突破。从我国大鲵人工繁殖试验研究的结果来看，大鲵总体繁殖率只有5%-10%，性成熟的亲体只有5%-20%，这就是说，亲体平均每尾只繁殖出幼苗5-30尾。然而，亲体（个体重5-10公斤）怀卵量为500-1000粒/尾，每尾雌性亲体按理论值计算可繁殖出幼苗960尾。那么，100尾亲体按80%的性成熟率计算，可产苗38400尾。上述沈宝泉用2000尾亲体，理论上可产苗768000尾，实际上现在大鲵繁殖出的幼苗也只有12000尾，占理论繁殖的1.04%，问题的关键是可供繁殖的性成熟亲体数量太少，也就是说，亲体性成熟率太低。现在的大鲵人工繁殖试验中，都把人工催产、催产药物和催产剂量为重点研究课题，还有人将大鲵生殖生理学的机理及性腺发育成熟机制作为重点研究内容。虽然这些研究对大鲵人工繁殖技术起着重要作用，但仍然没有解决繁殖率低的关键问题。如果大鲵性腺发育未成熟，即使拥有再高明、很成熟的催产技术，其结果依然是无济于事。主要的问题是性成熟的亲体数量少，也就是说，亲体性成熟率低。若亲体性成熟率高，十几尾雌性亲体就可以繁殖出上万尾幼苗。大鲵人工繁殖催产药物也就是用脑垂体、LRH-A、HCG及高效催产合剂。其中用LRH-A、HCG这两种激素催产，其催产率可达96%。催产剂量并不在于大小，LRH-A 0.2-50ug/kg、HCG10-1000Iu/kg对雌雄催产，其催产率达96%。
当前存在的问题是卵产的不少，雄性挤出的精液很有活力的精子又不多，结果其总的受精率低下。因为无论是雄鲵或雌鲵，只有其性腺在适当成熟时期注入催产素才能顺利完成“生理成熟”完成精卵结合受精大业。也就是说人工催产早了不行，晚了也不行，而大鲵由于是野生动物，在人工环境下，是一个从不适应到适应的过程，且通过生产实践证明，野生大鲵的生长与发育，最显著的特点是个体差异比较大，这就带来大鲵性腺发育成熟的时间不同步，存在早晚的差别。一般采取分批进行催产，基本处于“模糊”概念，是处于乱点鸳鸯谱的盲目状态，只能以多取胜的作法，所以大部分的卵质量不高，故而受精率低下。
从技术层面来分析，目前我国大鲵的人工繁育技术状况是①繁殖率偏低，即亲本与苗的比较高者为1：20左右，一般在1：5～10，有的甚至为1：5以下；②产卵数与受精卵之比偏低，一般仅为10：1，也就是说受精卵仅占总产卵数的1/10。③随之而来的孵化率也低，这是总的状况。因此，可以说，目前大鲵人工繁殖的技术水平是不高的，还有很大的发展与提升空间。显而易见，大鲵的人工繁殖仍存在严重的技术瓶颈，制约着大鲵养殖业的发展。有的单位单纯凭借经济实力到处搜集野生资源，最多一个场蓄积亲本5000－6000尾，将采用以多取胜的战术，严重耗损可贵的野生大鲵资源来换取苗种，不求技术进步。有的单位一年人工繁殖下来，弄死的野生大鲵竟达200～300尾。如此的代价太高，对野生大鲵资源保护而言，严格讲是一种技术犯罪行为，很值得引起社会各界的关切与认真思考。
发明内容
（1）调控亲鲵不同培育阶段的温度、光照、水流和饵料种类等，使雌雄个体性腺发育同步成熟。
（2）配置精子培养液,采用湿法授精，受精率大于90%。
（3）精准调控的水温和水流，孵化出苗率大于70%。
附图说明
图1是本发明的大鲵孵化筐及孵化图
图2是本发明的大鲵孵化池图
孵化池水深30㎝，保持微流水状态。人工授精完成后，将受精卵徐徐倒入池内，6小时内不要触动。6小时后将卵子小心移入直径20㎝、深10㎝的塑料筐内，塑料筐浮于水面，卵子吸水膨胀，当卵堆接近水面时及时分篮，每筐可容200枚卵子。孵化过程中每隔6小时需用羽毛轻轻翻动卵子一次，直至胚胎能自行运动旋转。及时剔除未受精的卵。
具体实施方式
诱导大鲵雌、雄性腺发育同步成熟
大鲵发育成熟的机理是：下丘脑、垂体、性腺轴之间的互动平衡。它受激素正反馈双向调节，从而促使性腺释放激素或者孕酮，促性腺激素和类固醇激素等的合成与释放，以促进精卵母细胞发育成熟，这是大鲵性腺发育成熟的内因。外因则是温度、光照、生物链、水中元素、藻相、pH值与大鲵的互动关系，它决定了大鲵亲体雌、雄性腺发育是否同步。因此，亲体培育应该是雌、雄单独饲养，以便调控各种不同的温度、光照、水流和营养调控等，促进亲体性腺发育同步，这样才能提高大鲵人工繁殖率。
温度调节：大鲵在5-8℃水温中冬眠45天左右。大鲵的性腺发育具有周期性，一般一年为一个性周期。卵子发育虽然在一年中大多数时期同时存在不同时相的卵母细胞，但在性腺成熟前只是部分细胞继续发育。其它细胞发育停滞，成熟产卵后，卵巢经过退化过程而后恢复形成冬季卵巢形态。大鲵卵子成熟还必须要经过休眠期，冬眠有促进雌性大鲵性生殖细胞发育成熟的效能。
从春季开始对雄大鲵池适当加入一定流量的暗泉水或井水以人为提高雄大鲵池水温1～2℃，能加快雄大鲵性腺发育进度，从而解决雄大鲵性成熟比雌大鲵迟的难题，使雌雄大鲵能同步进入繁殖期。也可适当降低雌大鲵池水温，延缓雌大鲵性腺发育进程，以达到雌雄大鲵性腺发育同步成熟的作用。
光照调节：光照为Lux50～100，光照对于大鲵性腺成熟具有重要的生理促进作用，从春季开始要根据月相变化规律给大鲵补充一定强度的自然光照。
水流调节：雌雄大鲵在繁殖季节需要流水声和水流的刺激，雄大鲵从春季开始要逐步加大水量以促进性腺发育与雌性大鲵同步化。
亲鲵饵料投喂调控：通过控制亲鲵食物的品种和数量起到调节性腺发育速率的作用。雄鲵要多喂溪蟹，少喂高脂肪类饵料，雌鲵临产前一个月投喂一定数量的青蛙，可提高卵带质量。
配置精子培养液和采用湿法授精
精子活力低下常与精子尾部形态异常有关，即精子体部和尾部形态的改变与精子活动力及前向运动力之间具有相关性，也就是精子轴丝缺失是精子活力低下的主要原因。从生殖内分泌学和内分泌学神经学来诠释，精子活力低下是生精机制发育不良，精液中的果糖、VA、VC、VE及精胺酸等物质含量低下所致，也就是缺乏生精Cnot7蛋白，亦是性神经内分泌系统功能减退。精子培养液在其它动物的人工繁殖中广泛使用，国内其它单位也使用了这一技术，但不同配方的培养液效果差别很大。由于大鲵卵子外包胶鞘（卵带），使用普通的人工授精方法授精率并不稳定。
本研究成果找到了合理的精子培养液配方（主要成分0.2%生理盐水，0.0005%果糖，少许VA、VC、VE及精胺酸）提供精子活力，采用湿法人工授精操作，受精率稳定在95%以上，很好地解决了受精率低这一难题。具体方法：雌娃娃鱼开始产卵时，按雌娃娃鱼数量的1/3挑选雄娃娃鱼挤出微量精液镜检，若精子发育良好、活力强、畸形少则留用，否则淘汰另选雄娃娃鱼。雌娃娃鱼产卵完毕，收集卵带放入干净瓷盆，一人将雄娃娃鱼用毛巾包住头部后抱起对着瓷盆，一人轻挤雄娃娃鱼腹部，让精液流在卵上，每盆卵用4～5ml精子即可，然后加入精子培养液提高精子活力，再加入适量的清水，用羽毛辅助搅拌均匀，静置5分钟后加水漂洗2遍，即可进行人工孵化。
精准调控水温和水流，孵化出苗率大于70%
大鲵受精卵的孵化对水质、水流和水温要求极高，而且在自然状态下雄鱼有背卵孵化的特性，说明卵在孵化过程中必须经常翻动。孵化用水来自山谷暗泉，水温18℃左右，利用水头压力跌水增氧。水流通过恒温冷柜进入孵化池，以控制昼夜水温变幅不超过1℃。孵化池水深30㎝，始终保持微弱的流水状态。
人工授精完成后，将受精卵徐徐倒入池内，6小时内不要触动。6小时后将卵子小心移入直径20㎝、深10㎝的塑料滤篮内，塑料滤篮用泡沫浮子浮于水面上，卵子逐渐吸水膨胀，当卵堆接近水面时要及时分篮，如此最终每个篮可容200枚卵子。孵化过程中每隔1～6小时需用羽毛轻轻翻动卵子一次，当胚胎能自行运动旋转后就不需人工翻卵了。对于未受精的和发育不良、坏死的胚胎要及时剔除，以防感染正常胚胎。
Claims (7)
1. 一种隧道中繁殖大鲵的方法，包括以下步骤：
（1）温度调节；
（2）光照调节；
（3）水流调节；
（4）饵料投喂；
（5）配置精子培养液；
（6）受精卵孵化。
2. 根据权利要求1所述的隧道中繁殖大鲵的方法，其特征在于，其中步骤（1）所述的温度调节方法：大鲵冬眠水温保持5-8℃，进入春季后加入适量暗泉水或井水使雄大鲵池水温提高1～2℃，促进雌雄大鲵性腺同步发育。
3. 根据权利要求1所述的隧道中繁殖大鲵的方法，其特征在于，其中步骤（2）所述的光照调节方法：从春季开始保持光照强度50 Lux～100 Lux。
4. 根据权利要求1所述的隧道中繁殖大鲵的方法，其特征在于，其中步骤（3）所述的水流调节方法：从春季开始逐步加大池水交换量，日交换量10%，以刺激大鲵性腺发育。
5. 根据权利要求1所述的隧道中繁殖大鲵的方法，其特征在于，其中步骤（4）所述的饵料投喂方法：雄鲵多喂溪蟹，少喂高脂肪类饵料；雌鲵临产前一个月投喂一定数量的青蛙。
6. 根据权利要求1所述的隧道中繁殖大鲵的方法，其特征在于，其中步骤（5）所述的精子培养液配方：0.2%生理盐水，0.0005%果糖， VA、VC、VE及精胺酸合计0.0001%。
7. 根据权利要求1所述的隧道中繁殖大鲵的方法，其特征在于，其中步骤（6）所述的受精卵孵化方法：水流通过恒温冷柜进入孵化池，以控制昼夜水温变幅不超过1℃，孵化池水深30㎝，保持微弱的流水状态，6小时后将卵子移入孵化筐，每隔6小时用羽毛轻轻翻动卵子1次，直至胚胎能自行运动旋转。
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