CN104587465A - 一种抗病毒的利巴韦林-抗体偶联物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种具有抗病毒功效的利巴韦林-抗体偶联物及其制备方法，本发明偶联物由利巴韦林、连接基和抗病毒抗体组成。本发明抗病毒利巴韦林-抗体偶联物在常温下能够保持较长时间稳定，无明显毒副作用。本发明偶联物相比于现有技术具有显著进步，其不仅提高了利巴韦林的抗流感流感病毒作用，同时没有溶血副作用，具有减毒增效的意外效果。

Description

一种抗病毒的利巴韦林-抗体偶联物及其制备方法

技术领域

本发明涉及本发明涉及抗病毒药物，尤其涉及抗病毒的利巴韦林-抗体偶联物及其制备方法。

背景技术

利巴韦林的化学名为1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4，-三氮唑-3-羧酰胺，其结构式为

利巴韦林属于广谱核苷类抗病毒药物，为广谱抗病毒药，用于流感(流感病毒A和B引起的)、腺病毒肺炎、甲型肝炎、疱疹、麻疹等，有防治作用；对流行性出血热有效。

利巴韦林在上世纪年代首次上市，经过40多年临床应用，证明其为有效的抗病毒药物，但在实践中也发现该药物的毒副作用也很明显，长期或大剂量使用可导致严重溶血性贫血，在儿童中使用风险尤其明显。这在相当程度上限制了其应用。因此，本领域中仍然需要开发无溶血副作用的利巴韦林药物。本发明人意外地发现，本发明利巴韦林偶联物未发生利巴韦林的红细胞破坏的作用，从而消除了利巴韦林致贫血的副作用，扩大了利巴韦林安全使用的范围，从而完成了本发明。同时，与利巴韦林相比，本发明偶联物的抗病毒疗效更高。本发明利巴韦林偶联物在常温下能够保持较长时间稳定，证明本发明制备方法稳定可靠。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利巴韦林-抗体偶联物，由利巴韦林、连接基和抗病毒抗体组成，其中连接基选自羰基、琥珀酰基或甲酸酯基，连接基优选琥珀酰基；抗体选自抗流感病毒抗体或抗乙型肝炎病毒抗体；抗体选自小鼠、大鼠、兔或人源单克隆抗体，包括但不限于抗HA1抗体、抗H2抗体、抗N1抗体、抗M1抗体，优选小鼠单克隆抗体。本发明的利巴韦林有市售，例如可从广东星湖肇庆生物科技股份公司购得。形成连接基的化学试剂有市售，例如可从Sigma公司购得。抗病毒单克隆抗体有市售，例如可从北京博菲康生物技术有限公司购得，或可按照本领域中标准单克隆抗体制备方法制得。

本发明的另一个目的在于还提供利巴韦林-抗体偶联物的制备方法，该方法为使利巴韦林与羧酸反应，将得到的中间体用适当羧酸酯活化，然后在中性环境下，使活化的中间体与抗病毒抗体反应，通过分子筛过滤，即得抗病毒利巴韦林-抗体偶联物。

本发明还提供巴韦林-抗体偶联物的制剂，此类制剂包括但不限于喷雾剂、注射剂。

本发明的利巴韦林-抗体偶联物相比于现有技术具有显著进步，主要表现在其不仅增强了利巴韦林的抗病毒作用，同时没有溶血副作用，具有显著的减毒增效意外效果。

有益效果

1.体外试验

用纯净水将本发明利巴韦林-抗病毒抗体偶联物配制为0.8％口服液。取10ml试管2支，各加入新配制的2％兔血生理盐水混悬液2.0ml，第一管加生理盐水2.0ml作为对照管，第二管加供本发明利巴韦林-抗病毒抗体偶联物口服液2.0ml，摇匀，置37℃静置，观察1小时。第1支试管和第2支试管中血红细胞形成沉淀，上清液呈无色透明。表明无溶血情况发生。

2.体内试验

在深圳市第二人民医院呼吸科进行体内试验。选取红细胞水平正常的20名甲型流感病毒感染患者，随机分为2组，每组10人，甲组给予利巴韦林颗粒剂，每天3次，每次给予含0.15g利巴韦林的利巴韦林颗粒剂，连续给药7天；乙组给予含0.15g利巴韦林-抗H3N2抗体偶联物的口服液，每天3次，连续给药7天。结果，甲组7名患者8名患者痊愈，9名红细胞计数低于正常值；乙组患者痊愈8名，所有10患者的红细胞计数均处于正常水平。

上述实验充分证明本发明利巴韦林-抗体偶联物与利巴韦林制剂相比，不仅具有良好的抗病毒治疗效果，同时无溶血副作用，克服了现有利巴韦林制剂的溶血缺陷，具有显著的减毒增效的作用。。

具体实施方式

下面通过具体实施例进一步说明本发明的技术方案，这些实施例仅对本发明作进一步说明和补充，本发明不限于这些实施例。

实施例1

利巴韦林偶联物的制备

在室温下，使0.1mol利巴韦林与0.2mol琥珀酸在无水吡啶中反应2小时，过滤，将残渣溶于甲醇，使残渣的甲醇液通过聚酰胺柱，用甲醇洗脱，收集第12份-第26份洗脱液，合并洗脱液，在40℃下真空蒸发，除去甲醇，将残渣在40℃真空干燥12小时，得到3.8g利巴韦林-琥珀酸半酯。取1.5g利巴韦林-琥珀酸半酯，溶于无水四氢呋喃，在-10℃下，滴加15ml氯甲酸异丁酯，搅拌1小时，升温至室温，加三乙胺调pH至7.2，加入0.005g鼠源抗H3N2流感病毒抗体，摇匀，将反应物在室温下保持3小时，然后通过分子筛PD-10过滤，收集产物，在5℃下真空干燥，即得本发明利巴韦林-琥珀酰基-抗H3N2流感病毒抗体偶联物。

实施例2

利巴韦林偶联物喷雾剂的制备

取前述利巴韦林-琥珀酰基-抗H3N2流感病毒抗体偶联物5g，加入适量双蒸蒸馏水溶解，再加入适量山梨酸钾搅拌直至完全溶解，加双蒸水至1000ml，滤过，分装至压力容器，充入四氟乙烷，即得本发明抗流感利巴韦林偶联物喷雾剂。

实施例3

利巴韦林偶联物注射剂的制备

取上述利巴韦林偶联物0.5g，加入适量硫酸氢钠及双蒸蒸馏水溶解，加适量尼泊金乙酯调节pH至7.4，加双蒸水至1000ml，通过0.45μm滤膜过滤，检验，分装，即得本发明抗流感利巴韦林偶联物注射剂。

Claims (9)

1.一种抗病毒的利巴韦林-抗体偶联物，由利巴韦林、连接基和抗病毒抗体组成，其中所述连接基选自羰基、琥珀酰基或甲酸酯基，所述抗体为抗病毒抗体。

2.如权利要求1所述的利巴韦林-抗体偶联物，其中所述连接基为琥珀酰基。

3.如权利要求1所述的利巴韦林-抗体偶联物，其中所述抗体为抗流感病毒抗体。

4.如权利要求3所述的利巴韦林-抗体偶联物，其中所述抗流感病毒抗体选自小鼠、大鼠、兔或人源单克隆抗体。

5.如权利要求4所述的利巴韦林-抗体偶联物，其中所述抗体为鼠源单克隆抗体。

6.如权利要求1所述的利巴韦林-抗体偶联物的制备方法，所述方法为将利巴韦林与羧酸反应，然后加入适当羧酸酯将形成的羧酸基团活化，再加入抗病毒抗体反应，通过分子筛过滤，即得抗病毒利巴韦林-抗体偶联物。

7.如权利要求6所述的利巴韦林-抗体偶联物的制备方法，所述方法为：使利巴韦林与琥珀酸反应，反应物通过聚酰胺柱，用甲醇洗脱，收集产物流份，回收甲醇，得到利巴韦林-琥珀酸半酯，然后在低温下，将所述半酯加入氯甲酸异丁酯，反应完成后，用适当胺碱将反应物溶液pH调至中性，在室温下原位加入鼠源抗H3N2流感病毒抗体，反应完成后，反应物通过分子筛过滤，收集产物，即得本发明抗流感利巴韦林-抗体偶联物。

8.如权利要求5所述的利巴韦林-抗体偶联物的制剂，所述制剂为注射剂。

9.如权利要求5所述的利巴韦林-抗体偶联物的制剂，所述制剂为喷雾剂。