CN104586921B - 一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法 - Google Patents

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Abstract

一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，包括以下步骤：将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；采用紫外线（UV‑B）辐射，依辐射剂量计算公式计算连续照射时间，照射0～400 min，采用醋酸纤维素膜滤去紫外灯（UV‑B）中的少量短波紫外线（UV‑C）；处理结束后放置于室温下，遮光保存后取出，依照药典方法煮至无白心，干燥，进行土贝母有效成分的抽样测定。与传统处理方法相比，有效增加了还原糖、土贝母苷甲、大黄素的含量及其抗氧化活性，提高了药材质量，具有可实施性强，方便易行、效果良好、有效避免产地限制的优点。

Description

一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法
技术领域
本发明属于药用植物产地加工技术领域，具体涉及一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法。
背景技术
土贝母为葫芦科Cucurbitaceae植物土贝母Bolbostemma paniculatum (Maxim.)Franquet的干燥块茎，含有糖类、皂苷和蒽醌等成分，具有显著的抗病毒、抗肿瘤等活性。土贝母肉质多汁，目前产区多使用以下4种方法对其进行前处理，一种按照药典所记载的采挖后“洗净，掰开，煮至无白心，取出，晒干”；第二种为“洗净，掰开，放蒸笼中蒸透，取出，晒干。”除此之外，将新鲜土贝母鲜品置烘箱内烘烤至干燥或置于通风干燥处自然晾干也是常用的前处理方法。土贝母鲜品在加工之前，其生理作用依然活跃，块茎中的氧化酶、水解酶等并未丧失活性，会影响其中有效成分的含量，但经过以上处理后，其相关酶活性丧失，有效成分含量有所降低，大大影响药材质量。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，在不改变药用植物原产地、种植方式及炮制加工等方法的情况下，在传统的蒸、煮、烘干、阴干等产地加工之前对土贝母新鲜块茎增加UV-B辐射，以提高其还原糖、土贝母苷甲、大黄素的含量及其抗氧化活性，为土贝母产地加工过程中提高药材质量提供方法，具有方便易行、效果良好、有效避免产地限制等特点。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，包括以下步骤：
1）将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；
2）采用0～100 kJ/m2剂量紫外线（UV-B）辐射，依辐射剂量计算公式计算连续照射时间，照射0～400 min；
3）采用0.13 mm厚度的醋酸纤维素膜滤去紫外灯（UV-B）中的少量短波紫外线（UV-C）；
4）处理结束后放置于室温下（18～25℃），遮光保存0～20天后取出，依照药典方法煮至无白心，0～100℃干燥；
5）进行还原糖含量、土贝母苷甲含量、大黄素含量及其抗氧化活性的抽样测定。
所述的紫外线（UV-B）辐射剂量为20 kJ/m2或40 kJ/m2或80 kJ/m2或100 kJ/m2。
所述的照射时间为72 min或142 min或282 min或353 min。
所述的遮光保存时间为0天或5天或10天或15天或20天，保存温度为20℃。
所述的干燥温度为80℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
经本发明的处理方法处理后，采用高剂量（100 kJ/m2）UV-B辐射的土贝母与未处理土贝母相比，土贝母中还原糖含量升高60.17%，大黄素含量升高209.60%（p<0.001），土贝母苷甲含量增加15.02～40.04% (p<0.01)。采用1,6-双(二苯基膦基)己烷（DPPH）法、铁氰化钾还原法考察了土贝母乙醇提取物经紫外线（UV-B）辐射后其还原能力及清除DPPH自由基能力，处理过土贝母的抗氧化活性高于未处理土贝母，与传统处理方法相比，有效增加了还原糖、土贝母苷甲、大黄素的含量及其抗氧化活性，提高了药材质量，为土贝母的产地加工提供了有效的技术方法，具有可实施性强，方便易行、效果良好、有效避免产地限制的特点。
具体实施方式
以下结合具体实施对本发明作进一步的详细说明;
根据实验发现，100 kJ/m2的紫外辐射对土贝母块茎中有效成分及其抗氧化活性的影响最大，因此本具体实施方式以100 kJ/m2的紫外辐射为实施例作以下描述；
实施例1
一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，包括以下步骤：
1）将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；
2）采用100 kJ/m2剂量紫外线（UV-B）辐射；根据辐射剂量计算公式连续照射353min；
3）采用0.13 mm厚度的醋酸纤维素膜滤去紫外（UV-B）灯中的少量短波紫外线(UV-C)；
4）处理结束后放置于20℃下，不经过储存，依照药典方法煮至无白心，80℃干燥。
5）进行还原糖含量、土贝母苷甲含量、大黄素含量及其抗氧化活性的测定。
①还原糖含量测定
参照《植物生理学实验指导》（邹奇，2001）中还原糖含量测定方法，对土贝母样品中的还原糖含量进行测定。以吸光度为纵坐标，葡萄糖质量为横坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程：y=0.2076x-0.0002，r=0.9995。
②土贝母苷甲含量测定
制备2 mg/mL土贝母苷甲的甲醇对照品溶液。取土贝母药材粉末（过三号筛）约1g，75%乙醇水浴回流提取2次，每次60 min，制备供试品溶液。色谱条件：流动相：乙腈-0.1%磷酸水（30: 70），波长：210 nm，流速：0.8 mL/min，进样量：10μl。
③大黄素含量测定
制备0.1 mg/mL大黄素的甲醇对照品溶液。精密称定药材粉末（过三号筛）约1 g，95%乙醇超声提取2次，每次30 min，制备供试品溶液。色谱条件：流动相：甲醇-0.1%磷酸水（75:25），波长：254 nm，流速：1 mL/min，进样量：10μl。
④抗氧化活性测定
（1）清除1,6-双(二苯基膦基)己烷（DPPH）自由基能力
取1.0 ml待测溶液与3.0 mL1,6-双(二苯基膦基)己烷（DPPH）乙醇溶液（0.1 mM，0.4 mg/mL）依次加入具塞试管中，混合均匀，室温静置20 min，在517 nm波长处测定吸光值，以维生素C（VC）为阳性对照。DPPH清除率(%)=[l-（As一Ab)/A0]/100，其中As为样品吸光值，Ab为样品本底吸光值，A0为未辐射组阴性对照值。
（2）还原能力的测定
取1 mL待测液，分别加入2.5 mL磷酸盐缓冲液(0.2 M，pH 6.6)及2.5 mL1%(w/v)的铁氰化钾溶液，混合均匀。混合物在50℃水浴中保持20 min，然后加入2.5 mL10%(w/v)的TCA终止反应，3000 r/min离心10 min，取上清液2.0 mL，依次加入2.0 mL蒸馏水和0.5mL0.1%(w/v)的三氯化铁（FeCl3）溶液，混匀后于700 nm处测定吸光值，以维生素C（VC）为阳性对照。
实施例2
一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，包括以下步骤：
1）将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；
2）采用100 kJ/m2剂量紫外线（UV-B）辐射；根据辐射剂量计算公式连续照射353min；
3）采用0.13 mm厚度的醋酸纤维素膜滤去紫外（UV-B）灯中的少量短波紫外线(UV-C)；
4）处理结束后放置于20℃下，遮光保存5天后取出，依照药典方法煮至无白心，80℃干燥。
5）进行还原糖含量、土贝母苷甲含量、大黄素含量及其抗氧化活性的测定，同实施例1步骤5.
实施例3
一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，包括以下步骤：
1）将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；
2）采用100 kJ/m2剂量紫外线（UV-B）辐射；根据辐射剂量计算公式连续照射353min；
3）采用0.13 mm厚度的醋酸纤维素膜滤去紫外线（UV-B）灯中的少量短波紫外线(UV-C)；
4）处理结束后放置于20℃下，遮光保存10天后取出，依照药典方法煮至无白心，80℃干燥。
5）进行还原糖含量、土贝母苷甲含量、大黄素含量及其抗氧化活性的测定，同实施例1步骤5.
实施例4
一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，包括以下步骤：
1）将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；
2）采用100 kJ/m2剂量紫外线（UV-B）辐射；根据辐射剂量计算公式连续照射353min；
3）采用0.13 mm厚度的醋酸纤维素膜滤去紫外线（UV-B）灯中的少量短波紫外线(UV-C)；
4）处理结束后放置于20℃下，遮光保存15天后取出，依照药典方法煮至无白心，80℃干燥。
5）进行还原糖含量、土贝母苷甲含量、大黄素含量及其抗氧化活性的测定，同实施例1步骤5。
实施例5
一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，包括以下步骤：
1）将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；
2）采用100 kJ/m2剂量紫外线（UV-B）辐射；根据辐射剂量计算公式连续照射353min；
3）采用0.13 mm厚度的醋酸纤维素膜滤去紫外线（UV-B）灯中的少量短波紫外线(UV-C)；
4）处理结束后放置于20℃下，遮光保存20天后取出，依照药典方法煮至无白心，80℃干燥。
5）进行还原糖含量、土贝母苷甲含量、大黄素含量及其抗氧化活性的测定，同实施例1步骤5。
根据实施例1-5的处理方法所述，经土贝母苷甲含量、大黄素含量、抗氧化活性的测定得出下述数据，见表1。
综上所述，采用100 kJ/m2紫外线（UV-B）辐射后不经过储存，土贝母中还原糖含量为最大3.84%；储存5天时大黄素含量最高，为0.73 mg/g；储存10天时土贝母苷甲含量增至最大20.35mg/g；采用1,6-双(二苯基膦基)己烷(DPPH)法及铁氰化钾还原法考察了土贝母乙醇提取物经紫外线（UV-B）辐射后其清除DPPH自由基及还原能力的变化，结果显示处理组抗氧化活性均高于未处理组。以上结果表明，本发明的处理方法在提高土贝母新鲜块茎中有效成分含量及抗氧化活性方面有良好的效果。

Claims (6)

1.一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；
2）采用20～100 kJ/m2剂量紫外线UV-B辐射，依辐射剂量计算公式计算连续照射时间，照射72～400 min；
3）采用0.13 mm厚度的醋酸纤维素膜滤去紫外灯UV-B中的少量短波紫外线UV-C；
4）处理结束后放置室温18～25℃下，遮光保存0～20天后取出，依照药典方法煮至无白心，并干燥，干燥温度80℃；
5）进行还原糖含量、土贝母苷甲含量、大黄素含量及其抗氧化活性的抽样测定。
2.根据权利要求1所述的一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，其特征在于，所述的紫外线UV-B辐射剂量为100 kJ/m2。
3.根据权利要求1所述的一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，其特征在于，所述的照射时间为353 min。
4.根据权利要求1所述的一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，其特征在于，所述的遮光保存时间为0天或5天或10天或15天或20天，保存温度为室温。
5.根据权利要求1所述的一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；
2）采用100 kJ/m2剂量紫外线辐射；根据辐射剂量计算公式连续照射353 min；
3）采用0.13 mm厚度的醋酸纤维素膜滤去紫外UV-B灯中的少量短波紫外线UV-C；
4）处理结束后放置室温下，遮光保存5天后取出，依照药典方法煮至无白心，并干燥，干燥温度80℃；
5）进行还原糖含量、土贝母苷甲含量、大黄素含量及其抗氧化活性的测定。
6.根据权利要求1所述的一种提高土贝母中有效成分含量及抗氧化活性的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将土贝母新鲜块茎洗净、分瓣，晾去外表水分；
2）采用100kJ/m2剂量紫外线UV-B辐射；根据辐射剂量计算公式连续照射353 min；
3）采用0.13 mm厚度的醋酸纤维素膜滤去紫外UV-B灯中的少量短波紫外线UV-C；
4）处理结束后放置于20℃下，遮光保存10天后取出，依照药典方法煮至无白心，并干燥，干燥温度80℃；
5）进行还原糖含量、土贝母苷甲含量、大黄素含量及其抗氧化活性的测定。
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