CN104586750B - 一种膜包被的紫杉醇纳米药物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
一种膜包被的紫杉醇纳米药物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。所述紫杉醇抗肿瘤药物为膜包被的紫杉醇纳米颗粒，通过结合气溶胶雾化技术和络合物自发成膜包被技术制备而成，以提高紫杉醇在水中的溶解度及稳定性，从而增强抗肿瘤效果的方法。本发明的膜包被的紫杉醇纳米药物在水中具有良好的稳定性，并且对多种肿瘤细胞具有良好的抑制效果。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种膜包被的紫杉醇(PTX-C)纳米药物及其制备方法和用途。
背景技术
紫杉醇(PTX)最早是从太平洋红豆杉的树皮中提取的一种四环二萜类化合物，是继阿霉素和顺铂之后的一种广泛使用的抗癌药物，主要应用于乳腺癌和卵巢癌的治疗，同时也对肺癌、大肠癌、脑癌、黑色素瘤等有良好疗效。然而，PTX在水中溶解性极小，临床应用则需要助溶剂对PTX进行溶解后实现注射。目前上市的紫杉醇制剂有两种：PTX注射液和紫杉醇白蛋白纳米粒(ABI-007)注射剂。
PTX注射液是以聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇(体积比1：1)为助溶剂实现PTX的溶解，用于静脉注射，而聚氧乙烯蓖麻油在体内会导致不同程度的过敏反应、神经毒性、骨髓抑制等，因此，给药前需要进行脱敏处理等，过程繁杂。ABI-007注射剂是以人血白蛋白作为药物载体与稳定剂的新型PTX药物，其具有疗效好、毒性低以及无需抗过敏处理等优点，然而价格昂贵，患者的经济负担较重。因此，设计有效、无副作用且成本较低的PTX新制剂具有重要的临床价值。
由于多酚类分子对金属离子具有很强的螯合能力，加之金属-多酚络合物网络结构的可调控性、选择透过性、高机械强度、热稳定性以及pH值响应等特性，近些年，金属-多酚络合物膜受到了广泛研究。由于金属-多酚络合物膜可轻易实现对材料界面的包被，而且本身具有一系列优点，还是一类极具优势的膜材料。目前对金属-多酚络合物膜的研究主要集中在材料领域，但在生物制药领域鲜见报道。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种膜包被的PTX纳米药物。本发明所述膜包被的PTX纳米药物在水中具有良好的稳定性，并对多种肿瘤细胞具有高效的抑制效果。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种新型紫杉醇纳米药物，所述药物为膜包被的紫杉醇纳米颗粒。该膜包被的紫杉醇纳米药物在水中具有良好的稳定性，并且对多种肿瘤细胞具有良好的抑制效果。
作为优选，所述膜为金属离子-多酚分子络合物膜。
优选地，所述PTX与金属离子和多酚分子之和的质量比为1:40-1:5，例如为1:7、1:11、1:18、1:25、1:36等。
优选地，所述金属离子与多酚分子的摩尔比为1:5-5:1，例如为1:4、1:1、2:1、3.5:1等。
优选地，所述金属离子为镁、钙、锶、钡、铝、锡、钒、锰、铁、钴、镍、铜、锌、锆、钼、钽等中的1种或2种以上的混合；
优选地，所述多酚分子为儿茶素、儿茶酚、表儿茶素、没食子酸、鞣酸、鞣花酸、表儿茶素没食子酸等中的1种或2种以上的混合。
本发明用到的紫杉醇，英文名Paclitaxel，别名泰素，紫素，特素，化学名称5β,20-环氧-1,2α,4,7β,10β,13α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮-4,10-二乙酸酯-2-苯甲酸酯-13[(2’R，3’S)-N-苯甲酰-3-苯基异丝氨酸酯]，分子量为853.92，分子式为C47H51NO14。
本发明的目的之二在于提供一种紫杉醇纳米药物的制备方法，包括将紫杉醇的有机溶液通过气溶胶发生器雾化，进行纳米化处理，然后向紫杉醇纳米颗粒分散液中加入金属离子与多酚分子混合制得。本发明提供的制备方法同样适用于本发明所述的紫杉醇纳米药物。
作为优选技术方案，所述方法包括以下步骤：
1)将PTX溶解于有机溶剂中；
2)将步骤1)得到的PTX的有机溶液进行雾化处理，得到的雾化产物通入超纯水中，得到PTX分散液；
3)向步骤2)得到的PTX分散液中加入金属离子与多酚分子，混合得到所述的膜包被的紫杉醇纳米药物。
本发明的膜包被的PTX纳米药物，通过利用雾化气溶胶发生法，将溶解于有机溶剂中的PTX溶液雾化为纳米级雾滴，随后将该雾滴通入超纯水中，由于PTX分子的疏水特性，纳米雾滴中的PTX继而析出成为紫杉醇纳米颗粒。随后，向含有紫杉醇纳米颗粒的水溶液中加入金属离子和多酚分子，金属离子和多酚分子通过配位作用在紫杉醇纳米颗粒表面组装成膜，将颗粒包被，从而得到膜包被的PTX(PTX-C)纳米颗粒。
采用本发明提供的制备方法获得的PTX-C纳米颗粒具有在水体系中良好的分散稳定性，高的药物使用效率以及长时间持续释放药物等特点。本发明在利用成本低、无副作用的原料的前提下克服了PTX抗癌药物在水中分散性差而导致的药物利用率低的技术瓶颈，与单纯的PTX药物相比，提高了抗肿瘤的效果。
作为优选，所述有机溶剂为PTX分子的良溶剂，优选为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、氯仿、丙酮、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜中的1种或2种以上的混合。
优选地，所述PTX溶于有机溶剂中的浓度为1-10000μg/mL，例如为3μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、150μg/mL、360μg/mL、1000μg/mL、3000μg/mL、6000μg/mL、9500μg/mL等，上述浓度范围既可保证PTX的充分溶解，还可使制得的纳米颗粒大小适合，易于溶解。
作为优选，所述雾化处理通过雾化气溶胶发生器(Atomizer Aerosol GeneratorATM 220)，在0.1Bar-2.5Bar的气压下进行。所用气体为惰性气体如氮气、氩气等。
其中PTX-C分散液中PTX-C的浓度可通过如下方法测得：将PTX-C分散液，进行冷冻干燥，干燥样品溶于定量的乙醇溶剂中，利用高效液相色谱(HPLC)测定得到的PTX-C分散液中的PTX浓度。
作为优选，为控制纳米颗粒的包被率，保证纳米颗粒基本全被膜包被，所述PTX与(金属离子和多酚分子之和)的质量比为1:40-1:5，例如为1:7、1:11、1:18、1:25、1:36等。
优选地，根据金属离子与多酚分子的配位比，所述金属离子与多酚分子的摩尔比为1:5-5:1，例如为1:4、1:1、2:1、3.5:1等。
优选地，所述金属离子为镁、钙、锶、钡、铝、锡、钒、锰、铁、钴、镍、铜、锌、锆、钼、钽等中的1种或2种以上的混合。
优选地，所述多酚分子为儿茶素、儿茶酚、表儿茶素、没食子酸、鞣酸、鞣花酸、表儿茶素没食子酸等中的1种或2种以上的混合。
优选地，所述混合为剧烈涡旋或超声。
本发明的目的之一还在于提供所述膜包被的PTX纳米药物在抗肿瘤中的应用。
优选地，所述肿瘤为乳腺癌、肝癌、肺癌或宫颈癌细胞中的1种或2种以上的结合。
优选地，所述癌细胞为SK-BR-3、MCF-7、HeLa、HepG2、A549或PC-3肿瘤细胞的1种或2种以上的结合。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明的PTX-C纳米颗粒具有提高PTX在水溶液中稳定性的能力，PTX-C纳米颗粒在水中分散性很好，粒径分布在100-300nm左右，对多种肿瘤均有良好的抑制效果。
本发明的制备方法利用成本低、无副作用的原料的前提下克服了PTX抗癌药物在水中分散性差而导致的药物利用率低的技术瓶颈，与单纯的PTX药物相比，提高了抗肿瘤的效果。
附图说明
图1为实施例1所制备的PTX-C纳米颗粒的扫描电子显微镜(SEM)照片；
图2为实施例1所制备的PTX-C纳米颗粒的动态光散射实验结果图；
图3为实施例1所制备PTX-C纳米颗粒对SK-BR-3细胞活力影响的实验结果图；
图4为实施例1所制备PTX-C纳米颗粒对HepG2细胞活力影响的实验结果图；
图5为实施例1所制备PTX-C纳米颗粒对MCF-7细胞活力影响的实验结果图；
图6为实施例1所制备PTX-C纳米颗粒对HeLa细胞活力影响的实验结果图；
图7为实施例1所制备PTX-C纳米颗粒对A549细胞活力影响的实验结果图；
图8为实施例1所制备PTX-C纳米颗粒对PC-3细胞活力影响的实验结果图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
除非特别指明，以下实施例中所用的人源肿瘤细胞系SK-BR-3、MCF-7、HepG2、HeLa、A549和PC-3均购自中国医学科学院。
除非特别指明，以下实施例中所用水溶液的溶剂均为无菌超纯水溶液。
除非特别指明，以下实施例中所用的试剂均为分析纯试剂。
制备实施例：膜包被的紫杉醇纳米药物制备
1)将1-10mg PTX固体溶解于50mL的乙醇中，得到浓度为20-200μg/mL的PTX乙醇溶液；
2)将上述溶有PTX的乙醇溶液置于雾化气溶胶发生器中，在0.1Bar-2.5Bar的气压下对溶液进行雾化处理，并将得到的雾化产物通入超纯水中，收集得到PTX分散液；
3)随后，取2mLPTX分散液，进行冷冻干燥，干燥的样品溶于乙醇中，进行HPLC测试，得到PTX分散液中的PTX浓度；
4)取含有100μg溶质的步骤2)中所述的PTX分散液，按金属离子与多酚分子的摩尔比为1:5-5:1，向其中加入多酚分子和金属离子，剧烈涡旋混合3min，得到PTX-C纳米颗粒。
制备实施例1-1
1)将5mg PTX固体溶解于50mL的乙醇中，得到浓度为100μg/mL的PTX乙醇溶液；
2)将上述溶有PTX的乙醇溶液置于雾化气溶胶发生器中，在0.5Bar气压下对溶液进行雾化处理，并将得到的雾化产物通入超纯水中，收集得到PTX分散液；
3)随后，取2mLPTX分散液，进行冷冻干燥，干燥的样品溶于乙醇中，进行HPLC测试，得到PTX分散液中的PTX浓度；
4)取含有100μg溶质的步骤2)中所述的PTX分散液，向其中加入0.8mg儿茶酚和1.0mg氯化钙，剧烈涡旋混合3min，得到PTX-C纳米颗粒。
扫描电子显微镜可以直观地反映纳米粒子的形貌特点，图1为实施例1所制备的PTX-C纳米颗粒的扫描电子显微镜(SEM)照片。从图中可以看出，制备得到的PTX-C纳米颗粒为100～300nm大小的颗粒状纳米药物。图1的插图为单个PTX-C的放大图像，反映了纳米颗粒表面包被了一层络合物膜。
动态光散射可以反映溶液中粒子的粒径大小，如图2所示，PTX-C纳米颗粒的粒径分布在100～300nm之间。
制备实施例1-2
1)将500mg PTX固体溶解于50mL的乙醇中，得到浓度为10000μg/mL的PTX乙醇溶液；
2)将上述溶有PTX的乙醇溶液置于雾化气溶胶发生器中，在1Bar气压下对溶液进行雾化处理，并将得到的雾化产物通入超纯水中，收集得到PTX分散液；
3)随后，取2mLPTX分散液，进行冷冻干燥，干燥的样品溶于乙醇中，进行HPLC测试，得到PTX分散液中的PTX浓度；
4)取含有100μg溶质的步骤2)中所述的PTX分散液，向其中加入3.00mg鞣花酸和0.25mg氯化锰，剧烈涡旋混合3min，得到PTX-C纳米颗粒。
扫描电子显微镜观察，制备得到的PTX-C为100～300nm大小的颗粒状纳米药物，纳米颗粒表面包被了一层络合物膜。
动态光散射反映出PTX-C纳米颗粒的粒径分布在100～300nm之间。
制备实施例1-3
1)将0.05mg PTX固体溶解于50mL的乙醇中，得到浓度为1μg/mL的PTX乙醇溶液；
2)将上述溶有PTX的乙醇溶液置于雾化气溶胶发生器中，在1.5Bar气压下对溶液进行雾化处理，并将得到的雾化产物通入超纯水中，收集得到PTX分散液；
3)随后，取2mLPTX分散液，进行冷冻干燥，干燥的样品溶于乙醇中，进行HPLC测试，得到PTX分散液中的PTX浓度；
4)取含有100μg溶质的步骤2)中所述的PTX分散液，向其中加入0.06mg没食子酸和0.5mg七水硫酸锌，剧烈涡旋混合3min，得到PTX-C纳米颗粒。
扫描电子显微镜观察，制备得到的PTX-C纳米颗粒为100～300nm大小的颗粒状纳米药物，纳米颗粒表面包被了一层络合物膜。
动态光散射反映出PTX-C的粒径分布在100～300nm之间。
下面使用制备实施例1-1制备的药物进行如下实验。
实施例2：紫杉醇纳米颗粒对SK-BR-3细胞增殖毒性的检测实验
以SK-BR-3细胞作为研究乳腺癌细胞系的模型体系。收集对数生长期的SK-BR-3细胞，将细胞重悬至RPMI-1640完全培养基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)中，终浓度为4×104个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200μL上述细胞悬液(8×103个细胞/孔)，置37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养24h，将完全培养基分别换成200μL含有不同浓度的PTX、ABI-007和PTX-C纳米颗粒，使PTX的最终浓度分别为0.00098μg/mL、0.00195μg/mL、0.0039μg/mL、0.0078μg/mL、0.0156μg/mL和0.0312μg/mL，以RPMI-1640完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，置细胞培养箱内继续培养4h后，小心弃去上清液，每孔加入150μLDMSO，振荡5min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M200，TECAN，瑞士)测定在570nm处的OD值，计算细胞存活率(细胞存活率(％)＝OD药物/OD对照×100％)。
实验中，向SK-BR-3细胞中加入0.0078μg/mL、0.0156μg/mL和0.0312μg/mL的PTX-C分别与加入相同浓度的PTX、ABI-007相比，细胞的存活率显著降低。在浓度为0.0312μg/mL时，PTX-C的细胞存活率仅为19.3％，如图3所示。由三次重复实验的结果拟合得出PTX、ABI-007和PTX-C对SK-BR-3细胞的半数抑制浓度分别为0.0175μg/mL、0.0140μg/mL和0.0099μg/mL，说明络合物膜包被的PTX比单纯的PTX药物以及ABI-007的肿瘤抑制效果都要好。
实施例3：紫杉醇纳米颗粒对HepG2细胞增殖毒性的检测实验
以HepG2细胞作为研究肝癌细胞系的模型体系。收集对数生长期的HepG2细胞，将细胞重悬至MEM完全培养基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)中，终浓度为4×104个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200μL上述细胞悬液(8×103个细胞/孔)，置37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养24h，将完全培养基分别换成200μL含有不同浓度的PTX、ABI-007和PTX-C，使PTX的最终浓度分别为0.00098μg/mL、0.00195μg/mL、0.0039μg/mL、0.0078μg/mL、0.0156μg/mL和0.0312μg/mL，以MEM完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，置细胞培养箱内继续培养4h后，小心弃去上清液，每孔加入150μL DMSO，振荡5min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M200，TECAN，瑞士)测定在570nm处的OD值，计算细胞存活率(细胞存活率(％)＝OD药物/OD对照×100％)。
实验中，向HepG2细胞中加入0.0039μg/mL、0.0078μg/mL和0.0156μg/mLPTX-C，分别与加入相同浓度的PTX、ABI-007相比，细胞的存活率显著降低。在浓度为0.0312μg/mL时，PTX-C的细胞存活率仅为20.9％，如图4所示。由三次重复实验的结果拟合得出PTX、ABI-007和PTX-C对HepG2细胞的半数抑制浓度分别为0.0138μg/mL、0.0210μg/mL和0.0066μg/mL，说明络合物膜包被的PTX比单纯的PTX药物以及ABI-007的肿瘤抑制效果都要好。
实施例4：紫杉醇纳米颗粒对MCF-7细胞增殖毒性的检测实验
以MCF-7细胞作为研究乳腺癌细胞系的另一模型体系。收集对数生长期的MCF-7细胞，将细胞重悬至DMEM完全培养基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)中，终浓度为4×104个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200μL上述细胞悬液(8×103个细胞/孔)，置37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养24h，将完全培养基分别换成200μL含有不同浓度的PTX、ABI-007和PTX-C，使PTX的最终浓度分别为0.00098μg/mL、0.00195μg/mL、0.0039μg/mL、0.0078μg/mL、0.0156μg/mL和0.0312μg/mL，以DMEM完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，置细胞培养箱内继续培养4h后，小心弃去上清液，每孔加入150μL DMSO，振荡5min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M200，TECAN，瑞士)测定在570nm处的OD值，计算细胞存活率(细胞存活率(％)＝OD药物/OD对照×100％)。
实验中，向MCF-7细胞中加入0.0039μg/mL、0.0078μg/mL和0.0156μg/mLPTX-C，分别与加入相同浓度的PTX、ABI-007相比，细胞的存活率显著降低。在浓度为0.0312μg/mL时，PTX-C的细胞存活率仅为27.2％，如图5所示。由三次重复实验的结果拟合得出PTX、ABI-007、PTX-C对MCF-7细胞的半数抑制浓度分别为0.0079μg/mL、0.0167μg/mL和0.0077μg/mL，说明对于MCF-7细胞，络合物膜包被的PTX比ABI-007的肿瘤抑制效果要好，与单纯的PTX药物肿瘤抑制效果基本相当。
实施例5：紫杉醇纳米颗粒对HeLa细胞增殖毒性的检测实验
以HeLa细胞作为研究宫颈癌细胞系的模型体系。收集对数生长期的HeLa细胞，将细胞重悬至RPMI-1640完全培养基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)中，终浓度为2.5×104个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200μL上述细胞悬液(5×103个细胞/孔)，置37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养24h，将完全培养基分别换成200μL含有不同浓度的PTX、ABI-007和PTX-C，使PTX的最终浓度分别为0.00098μg/mL、0.00195μg/mL、0.0039μg/mL、0.0078μg/mL、0.0156μg/mL和0.0312μg/mL，以RPMI-1640完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，置细胞培养箱内继续培养4h后，小心弃去上清液，每孔加入150μL DMSO，振荡5min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M200，TECAN，瑞士)测定在570nm处的OD值，计算细胞存活率(细胞存活率(％)＝OD药物/OD对照×100％)。
实验中，向HeLa细胞中加入0.00195μg/mL、0.0039μg/mL、0.0078μg/mL、0.0156μg/mL和0.0312μg/mL的PTX-C，与加入相同浓度的PTX一样，细胞的存活率显著降低。在浓度为0.0312μg/mL时，PTX-C的细胞存活率仅为15.2％，如图6所示。由三次重复实验的结果拟合得出PTX、ABI-007和PTX-C对HeLa细胞的半数抑制浓度分别为0.0073μg/mL、0.0169μg/mL和0.0090μg/mL，说明对于HeLa细胞，络合物膜包被的PTX比ABI-007的肿瘤抑制效果要好，与单纯的PTX药物肿瘤抑制效果基本相当。
实施例6：紫杉醇纳米颗粒对A549细胞增殖毒性的检测实验
以A549细胞作为研究肺癌细胞系的模型体系。收集对数生长期的A549细胞，将细胞重悬至F12完全培养基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)中，终浓度为4×104个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200μL上述细胞悬液(8×103个细胞/孔)，置37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养24h，将完全培养基分别换成200μL含有不同浓度的PTX、ABI-007和PTX-C，使PTX的最终浓度分别为0.00098μg/mL、0.00195μg/mL、0.0039μg/mL、0.0078μg/mL、0.0156μg/mL和0.0312μg/mL，以F12完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，置细胞培养箱内继续培养4h后，小心弃去上清液，每孔加入150μL DMSO，振荡5min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M200，TECAN，瑞士)测定在570nm处的OD值，计算细胞存活率(细胞存活率(％)＝OD药物/OD对照×100％)。
实验中，向A549细胞中加入0.00195μg/mL、0.0039μg/mL、0.0078μg/mL、0.0156μg/mL和0.0312μg/mL PTX-C，分别与加入相同浓度的PTX、ABI-007相比，细胞的存活率显著降低。在浓度为0.0312μg/mL时，PTX-C的细胞存活率仅为23.1％，如图7所示。由三次重复实验的结果拟合得出PTX、ABI-007和PTX-C对A549细胞的半数抑制浓度分别为0.0055μg/mL、0.0086μg/mL和0.0031μg/mL，说明对于A549细胞，络合物膜包被的PTX比单纯的PTX药物以及ABI-007的肿瘤抑制效果都要好。
实施例7：紫杉醇纳米颗粒对PC-3细胞增殖毒性的检测实验
以PC-3细胞作为研究前列腺癌细胞系的的模型体系。收集对数生长期的PC-3细胞，将细胞重悬至F12K完全培养基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)中，终浓度为4×104个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200μL上述细胞悬液(8×103个细胞/孔)，置37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养24h，将完全培养基分别换成200μL含有不同浓度的PTX、ABI-007和PTX-C，使PTX的最终浓度分别为0.00098μg/mL、0.00195μg/mL、0.0039μg/mL、0.0078μg/mL、0.0156μg/mL和0.0312μg/mL，以F12K完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，置细胞培养箱内继续培养4h后，小心弃去上清液，每孔加入150μL DMSO，振荡5min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M200，TECAN，瑞士)测定在570nm处的OD值，计算细胞存活率(细胞存活率(％)＝OD药物/OD对照×100％)。
实验中，向PC-3细胞中加入0.0156μg/mL和0.0312μg/mL PTX-C，分别与加入相同浓度的PTX相比，细胞的存活率显著降低。在浓度为0.0312μg/mL时，PTX-C的细胞存活率仅为41.9％，如图8所示。由三次重复实验的结果拟合得出PTX、ABI-007和PTX-C对PC-3细胞的半数抑制浓度分别为0.0297μg/mL、0.0192μg/mL和0.0171μg/mL，说明对于PC-3细胞，络合物膜包被的PTX比单纯的PTX药物的肿瘤抑制效果要好，与ABI-007药物的肿瘤抑制效果基本相当。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (19)
1.一种紫杉醇纳米药物，其特征在于，所述药物为膜包被的紫杉醇纳米颗粒；所述膜为金属离子-多酚分子络合物膜；所述紫杉醇纳米药物的制备方法，包括将紫杉醇的有机溶液通过气溶胶发生器雾化，进行纳米化处理，然后向紫杉醇纳米颗粒分散液中加入金属离子与多酚分子混合制得。
2.根据权利要求1所述的紫杉醇纳米药物，其特征在于，所述PTX与金属离子和多酚分子之和的质量比为1:40-1:5。
3.根据权利要求1所述的紫杉醇纳米药物，其特征在于，所述金属离子与多酚分子的摩尔比为1:5-5:1。
4.根据权利要求1所述的紫杉醇纳米药物，其特征在于，所述金属离子为镁、钙、锶、钡、铝、锡、钒、锰、铁、钴、镍、铜、锌、锆、钼、钽中的1种或2种以上的混合。
5.根据权利要求1所述的紫杉醇纳米药物，其特征在于，所述多酚分子为儿茶素、儿茶酚、表儿茶素、没食子酸、鞣酸、鞣花酸、表儿茶素没食子酸中的1种或2种以上的混合。
6.一种紫杉醇纳米药物的制备方法，包括将紫杉醇的有机溶液通过气溶胶发生器雾化，进行纳米化处理，然后向紫杉醇纳米颗粒分散液中加入金属离子与多酚分子混合制得。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将PTX溶解于有机溶剂中；
2)将步骤1)得到的PTX的有机溶液进行雾化处理，得到的雾化产物通入超纯水中，得到PTX分散液；
3)向步骤2)得到的PTX分散液中加入金属离子与多酚分子，混合得到所述的膜包被的紫杉醇纳米药物。
8.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为PTX分子的良溶剂。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、氯仿、丙酮、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜中的1种或2种以上的混合。
10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述PTX溶于有机溶剂中的浓度为1-10000μg/mL。
11.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述雾化通过雾化气溶胶发生器，在0.1Bar-2.5Bar的气压下进行。
12.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述PTX与金属离子和多酚分子之和的质量比为1:40-1:5。
13.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述金属离子与多酚分子的摩尔比为1:5-5:1。
14.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述金属离子为镁、钙、锶、钡、铝、锡、钒、锰、铁、钴、镍、铜、锌、锆、钼、钽中的1种或2种以上的混合。
15.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述多酚分子为儿茶素、儿茶酚、表儿茶素、没食子酸、鞣酸、鞣花酸、表儿茶素没食子酸中的1种或2种以上的混合。
16.根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于，所述混合为剧烈涡旋或超声。
17.权利要求1-5任一项所述膜包被的PTX纳米药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
18.根据权利要求17所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为乳腺癌、肝癌、肺癌或宫颈癌细胞中的1种或2种以上的结合。
19.根据权利要求17所述的应用，其特征在于，所述肿瘤癌细胞为SK-BR-3、MCF-7、HeLa、HepG2、A549或PC-3肿瘤细胞的1种或2种以上的结合。
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