CN104558037B - 一种具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂及其制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂及其制备和应用。所述的两亲性抗癌光敏剂的制备为ZnP与BD、4-碘苯酚在四(三苯基膦)合钯和CuI作用下，制得中间体BD-ZnP-OH；然后该中间体与二碘代三缩四乙二醇在碳酸钾作用下反应，制得中间体BD-ZnP-I；最后此中间体与三苯基膦制得两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P。通过光谱学分析，测得该光敏剂具有非常大的双光子吸收截面，达到1725GM，同时也具有非常高的单线态氧量子产率49％。最后，通过在HeLa、A549、MCF-17和HK-1四种肿瘤细胞中的体外光动力试验结果表明，该产品具有非常好的肿瘤细胞透过性和光诱导下的肿瘤细胞杀伤力。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，特别涉及一种具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂及其制备和应用。
背景技术
恶性肿瘤是危害人类生命及健康的第一杀手。光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)是一种基于光敏剂、激发光和单线态氧的微创肿瘤疗法。PDT具有微创性、毒副作用小、靶向性高等优点，在恶性肿瘤的治疗中取得了令人瞩目的成就，在我国及欧美日等许多国家，已经成为一种治疗肿瘤的重要手段。其中光敏剂是光动力治疗的核心，光敏剂的光动力活性、光吸收特性和靶向特性决定了其在临床治疗中的实用性和适用范围，而光敏剂的分子结构、能带结构、电子结构是决定光敏剂光动力活性的关键因素。卟啉类衍生物由于结构稳定，生物相容性好，单线态氧量子产率高，是一种公认的优良光敏剂。目前临床使用的光敏剂如美国的Photofrin、德国的Photosan、我国的癌卟啉、癌光啉和光卟啉等，都是卟啉的衍生物。然而这些目前临床上采用的卟啉类光敏剂仍然面临着敏化光波长短【最大吸收波长在400～450nm左右，由于人体组织对波长小于650nm光具有较强的吸收和多重散射作用，因此严重制约了此类光敏剂的应用范围(DettyM.R.,GibsonS.L.,WagnerS.J.,J.Med.Chem.,2004,47,3897-3915)】、生物相容性和肿瘤靶向性差等严重问题，因此亟需开发新一代光敏剂。
近年来，人们发展了一种通过双光子激发光敏剂来产生单线态氧的新方法。双光子吸收(two-photonabsorption,TPA)是一个非线性光学过程，即分子同时吸收两个光子由基态到达高能激发态的过程，其吸收效率用双光子吸收截面δ表示。相较于单光子吸收，双光子吸收的优点包括[S.Wecksler,A.Mikhailovsky,P.C.Ford,J.Am.Chem.Soc.,2004,126,13566-13567.]：(I)双光子吸收的波长大于650nm，对肿瘤组织的穿透力强；(ii)材料的双光子吸收过程中，电子跃迁几率与辐照光强的平方成正比，此过程具有高度的三维空间选择性，因脱离焦点后吸收迅速消失，可有效避免目前临床用光敏剂的滞后光毒性；(iii)在生物体系中双光子吸收的背景极其弱，用于肿瘤成像，信噪比增强[S.Huang,A.A.Heikal,W.W.Webb,Biophys.J.,2002,82,2811-2825.]。目前，人们对以卟啉作为双光子光动力治疗药物的可行性研究进行了大量工作，包括临床测试[Khurana,H.A.Collins,A.Karotkl,H.L.Anderson,D.T.Cramb,B.C.Wilson,Photochem.Photobiol.,2007,83,1441-1448.]、新型卟啉类光敏剂[J.Arnbjerg,A.Jimenez-Banzo,M.J.Paterson,S.Nonell,J.I.Borrell,O.Christiansen,P.R.Ogilby,J.Am.Chem.Soc.,2007,129,5188-5199.]以及卟啉类共轭体[M.A.Oar,W.A.Dichtel,J.M.Serin,J.M.J.Frechet,J.E.Rogers,J.E.Slagle,P.A.Fleitz,L.S.Tan,T.Y.Ohulchanskyy,P.N.Prasad,Chem.Mater.,2006,18,3682-3692.]等。尽管双光子PDT已在血管性疾病的治疗中获得了成功的初步应用，但研发具有较高双光子吸收截面的新型光敏剂和高功率的飞秒光源仍是重要的研究课题。因此开发具有大双光子吸收截面的新型光敏剂具有重要意义。
另外，光敏剂能否被肿瘤细胞高效吸收是影响光敏剂光敏效率的重要因素。研究发现，亲脂性光敏剂易于被肿瘤组织摄取，亲水性光敏剂则有利于光敏剂在体内的转运，但光敏剂的细胞穿透能力减弱，肿瘤细胞摄取率下降，而布局合理的两亲性结构则表现出更强的穿透细胞膜的能力，易被肿瘤细胞吸收，表现出较好的PDT活性[Bonnett,Chem.Soc.Rev.,1995,24,19-33.]。
因此，本发明设计开发的新型具有较大双子吸收截面的两亲性卟啉类化合物具有重要的意义和应用前景。
发明内容
为了克服现有临床上卟啉类光敏剂双光子吸收效率低、生物相容性和肿瘤靶向性差等问题，本发明的首要目的是提供一种具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂。该光敏剂可用于抗癌光动力治疗。该光敏剂具有较大双光子吸收截面和肿瘤细胞摄取率。
本发明的另一目的在于提供上述两亲性抗癌光敏剂的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述两亲性抗癌光敏剂的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂，其结构式如式Ⅰ所示：
所述的具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂的制备方法(合成路线图如图1所示)，包括如下步骤：
(1)氮气保护下，将反应原料ZnP、BD、4-碘苯酚和催化剂四(三苯基膦)合钯(Pd(PPh3)4)、碘化亚铜(CuI)溶于干燥的四氢呋喃与三乙胺的混合溶剂中，加热反应至反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH，如式II所示：
(2)氮气保护下，将步骤(1)得到的紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH、二碘代三缩四乙二醇(I-PEG-I)(图1中所示)和碳酸钾(K2CO3)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加热反应至反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-I，如式III所示：
(3)氮气保护下，将步骤(2)得到的紫色卟啉中间体BD-ZnP-I和三苯基膦混合，加热反应至反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P，如式I所示。
其中，步骤(1)中所述的BD：ZnP：4-碘苯酚的摩尔比优选为1：2：1～1：3：1；更优选为按照摩尔比1:2:1进行反应得到；
步骤(1)中所述的原料ZnP与催化剂四(三苯基膦)合钯(Pd(PPh3)4)的摩尔比优选为1：(0.05～0.1)；
步骤(1)中所述的催化剂四(三苯基膦)合钯(Pd(PPh3)4)与碘化亚铜(CuI)的摩尔比优选为1：(2～3)，更优选为按照摩尔比1:2进行反应得到；
步骤(1)中所述的四氢呋喃与三乙胺的混合溶剂优选按照四氢呋喃与三乙胺的体积比1：(1～5)混合得到；更优选为按照体积比1:1进行混合得到；
步骤(1)中所述的加热反应的温度优选为45～65℃。
所述的反应终止，优选用薄板层析(TLC)法、气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)或液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)等检测，更优选为用TLC法检测。
步骤(2)中所述的紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH、二碘代三缩四乙二醇(I-PEG-I)的摩尔比优选为1：(5～20)；更优选为1：(5～10)；
步骤(2)中所述的紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH、碳酸钾的摩尔比优选为1：(10～50)；更优选为按照摩尔比1:(10～20)进行反应得到；
步骤(2)中所述的加热反应的温度优选为65～95℃；更优选为65～85℃；
步骤(3)中所述的三苯基膦即作溶剂又做反应物，无明确比关系。
步骤(3)中所述的加热反应的温度优选为95～125℃。
所述的具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂在制备作为肿瘤的光动力治疗用的光敏剂药物中的应用。
本发明相对于现有技术，具有以下有优点及效果：
本发明所述的新型两亲性抗癌光敏剂具有非常大双光子吸收截面，利用飞秒开孔Z扫描技术测定为1725GM。同时，通过光谱学分析表明，该新型两亲性抗癌光敏剂，在激发光作用下，可有效产生单线态氧和红色荧光，通过参比法确认其单线态氧量子产率为0.49。通过荧光共聚焦显微成像分析，该荧光探针具有较好的肿瘤细胞渗透性和双光子细胞成像效果。利用MTT实验表明，在光照作用下，该新型两亲性抗癌光敏剂对人宫颈癌细胞HeLa、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-17和人鼻咽癌细胞HK-1具有较强的杀伤能力。
附图说明
图1是本发明所述的两亲性抗癌光敏剂的制备合成路线图。
图2是实施例1得到的两亲性抗癌光敏剂的核磁共振氢谱图。
图3是实施例1得到的两亲性抗癌光敏剂的高分辨质谱图。
图4是实施例4中对实施例1得到的两亲性抗癌光敏剂的Z-Scan归一化透过率拟合曲线图。
图5是实施例5中对实施例1得到的两亲性抗癌光敏剂的紫外-可见吸收和发射图(图5A)和在光作用下单线态氧的磷光发射图(图5B)。
图6是实施例6中对实施例1得到的两亲性抗癌光敏剂在肿瘤细胞中的双光子细胞成像图；其中，图6A为人宫颈癌细胞HeLa、图6B为人肺癌细胞A549、图6C为乳腺癌细胞MCF-17、图6D为人鼻咽癌细胞HK-1。
图7是实施例8中对实施例1得到的两亲性抗癌光敏剂在人鼻咽癌细胞HK-1中的双光子光动力治疗效果图；其中，图7A未加药，图7B加入了实施例1得到的两亲性抗癌光敏剂。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
合成路线图1和实施例中卟啉原料ZnP和BD分别按文献报道方法合成【ZnP:E.Dahlstedt,H.A.Collins,M.Balaz,M.K.Kuimova,M.Khurana,B.C.Wilson,D.Phillips,H.L.Anderson,Org.Biomol.Chem.,2009,7,897；BD:S.Mula,A.K.Ray,M.Banerjee,T.Chaudhuri,K.Dasgupta,S.Chattopadhyay,J.Org.Chem.,2008,73,2146.】。
实施例1
(1)氮气保护下，将499.1mg(0.5mmol)ZnP、102.0mg(0.25mmol)BD、55.0mg(0.25mmol)4-碘苯酚和催化剂28.9mg(0.025mmol)四(三苯基膦)合钯(Pd(PPh3)4)，9.5mg(0.05mmol)碘化亚铜(CuI)溶于干燥的四氢呋喃与三乙胺的混合溶剂(体积比1:1)20mL中，升温至45℃，TLC检测反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH，产率46％。
表征数据：1HNMR(CDCl3/5％d5-Pyridine):δ3.31(s,6H),3.48(q,J＝4.40Hz,4H),3.62(q,J＝4.92Hz,4H),3.68(t,J＝4.12Hz,4H),3.77(t,J＝3.28Hz,4H),3.95(t,J＝4.48Hz,4H),4.34(t,J＝4.44Hz,4H),6.61(dd,J＝1.44Hz,J＝2.60Hz,2H),7.08(m,4H),7.34(m,2H),7.61(m,2H),7.75(m,6H),7.89(d,J＝6.48Hz,2H),8.15(d,J＝8.20Hz,2H),8.87(d,J＝4.56Hz,2H),8.92(d,J＝4.56Hz,2H),9.70(t,J＝4.40Hz,4H),11.57(s,1H)；19FNMR(CDCl3):δ-144.74(q,J＝30.12Hz)；MALDI-TOFMS:calcd.for[M+]1256.4766,found1255.3923；
结构式如式II所示：
(2)氮气保护下，将步骤(1)得到的紫色卟啉中间体62.5mg(0.05mmol)BD-ZnP-OH、103.5mg(0.25mmol)二碘代三缩四乙二醇(I-PEG-I)(图1中所示)和69mg(0.5mmol)碳酸钾(K2CO3)溶于5mL无水DMF中，升温至65℃，TLC检测反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-I，产率85％。
表征数据：1HNMR(CDCl3):δ2.46(d,J＝15.28Hz,6H),2.62(m,4H),2.85(m,4H),2.98(m,2H),3.30(m,13H),3.50(m,6H),3.59(q,J＝4.32Hz,2H),3.74(m,4H),3.90(q,J＝5.16Hz,2H),4.24(q,J＝6.20Hz,4H),6.59(dd,J＝1.60Hz,J＝2.52Hz,2H),6.82(q,J＝4.48Hz,4H),7.07(d,J＝4.08Hz,2H),7.28(s,1H),7.63(m,2H),7.76(m,6H),7.87(dd,J＝6.08Hz,J＝2.08Hz,2H),7.98(s,2H),8.13(dd,J＝1.64Hz,J＝6.56Hz,2H),8.90(m,4H),9.68(m,4H)；19FNMR(CDCl3):δ-144.83(q,J＝30.12Hz)；MALDI-TOFMS:calcd.for[M+]1542.5835,found1541.4041。
结构式如式III所示：
(3)氮气保护下，将步骤(2)得到的紫色卟啉中间体61.3mg(0.04mmol)BD-ZnP-I和500mg三苯基膦混合，升温至95℃，TLC检测反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色目标两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P，产率96％。
表征数据：1HNMR(图2，CDCl3):δ2.42(d,J＝13.00Hz,6H),2.59(d,J＝14.04Hz,4H),2.83(m,4H),3.16(d,J＝15.00Hz,6H),3.29(m,6H),3.47(m,6H),3.63(m,10H),3.99(s,2H),4.25(d,J＝3.28Hz,4H),6.60(d,J＝2.56Hz,2H),6.80(d,J＝7.32Hz,2H),7.08(d,J＝4.04Hz,2H),7.28(d,J＝7.8Hz,2H),7.54(m,6H),7.62(m,12H),7.76(m,8H),7.98(S,2H),8.12(dd,J＝1.6Hz,J＝6.52Hz,2H),8.90(m,4H),9.66(m,4H)；31PNMR(CDCl3):δ25.15；19FNMR(CDCl3):δ-144.83(q,J＝30.12Hz)；MALDI-TOFMS(图3):calcd.for[M+]1676.5819,found1676.5762。
结构式如式I所示：
实施例2
(1)氮气保护下，将499.1mg(0.5mmol)ZnP、102.0mg(0.25mmol)BD、55.0mg(0.25mmol)4-碘苯酚和催化剂57.8mg(0.05mmol)四(三苯基膦)合钯(Pd(PPh3)4)，19.0mg(0.1mmol)碘化亚铜(CuI)溶于干燥的四氢呋喃与三乙胺的混合溶剂(体积比1:1)20mL中，升温至45℃，TLC检测反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH，产率48％。
(2)氮气保护下，将步骤(1)得到的紫色卟啉中间体62.5mg(0.05mmol)BD-ZnP-OH、207.0mg(0.5mmol)二碘代三缩四乙二醇(I-PEG-I)(图1中所示)和138mg(1mmol)碳酸钾(K2CO3)溶于5mL无水DMF中，升温至65℃，TLC检测反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-I，产率86％。
(3)氮气保护下，将步骤(2)得到的紫色卟啉中间体61.3mg(0.04mmol)BD-ZnP-I和500mg三苯基膦混合，升温至100℃，TLC检测反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色目标两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P，产率94％。
实施例3
(1)氮气保护下，将499.1mg(0.5mmol)ZnP、102.0mg(0.25mmol)BD、55.0mg(0.25mmol)4-碘苯酚和催化剂57.8mg(0.05mmol)四(三苯基膦)合钯(Pd(PPh3)4)，19.0mg(0.1mmol)碘化亚铜(CuI)溶于干燥的四氢呋喃与三乙胺的混合溶剂(体积比1:1)20mL中，升温至65℃，TLC检测反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH，产率42％。
(2)氮气保护下，将步骤(1)得到的紫色卟啉中间体62.5mg(0.05mmol)BD-ZnP-OH、103.5mg(0.25mmol)二碘代三缩四乙二醇(I-PEG-I)(图1中所示)和69mg(0.5mmol)碳酸钾(K2CO3)溶于5mL无水DMF中，升温至85℃，TLC检测反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-I，产率81％。
(3)氮气保护下，将步骤(2)得到的紫色卟啉中间体61.3mg(0.04mmol)BD-ZnP-I和500mg三苯基膦混合，升温至125℃，TLC检测反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色目标两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P，产率88％。
实施例4
实施例1中得到的两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P在水相介质中双光子吸收截面的测定：配制BD-ZnP-P浓度为1mM的生物缓冲液HEPES(HEPES购自生工生物工程(上海)股份有限公司，配方：1.19gHEPES溶解在4mL蒸馏水中，加0.5M的NaOH水溶液调节至PH为7.4，然后用蒸馏水定容至50mL，于4℃保存)。利用飞秒开孔Z扫描技术，在800纳米脉冲飞秒激光照射下，测定1mMBD-ZnP-P的归一化透过率拟合曲线图(图4所示)。再通过公式计算【K.S.Kim,J.M.Lim,A.Osuka,D.Kim,J.Photochem.Photobiol.C:Photochem.Rev.,2008,9,13-28.】，测得BD-ZnP-P的双光子吸收截面为1725GM。
实施例5
实施例1中得到的两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P单线态氧量子产率的测定：配制BD-ZnP-P浓度为0.1μM的氯仿溶液和同样浓度的四苯基卟啉(H2TPP)标准品溶液，通过测定单线态氧的磷光发射光谱(如图5B所示)。再利用参比法【标准品H2TPP的单线态氧量子产率为0.55】测得BD-ZnP-P的单线态氧量子产率为0.49。实施例1得到的两亲性抗癌光敏剂的紫外-可见吸收和发射图，如图5A所示。
实施例6
实施例1中得到的两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P的体外双光子细胞成像试验：配制BD-ZnP-P浓度为1mM水溶液。将此药品分别加入至处于对数生长期的人宫颈癌细胞HeLa、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-17和人鼻咽癌细胞HK-1(均购自上海复蒙基因生物科技有限公司)的培养板中至最终浓度为1μM，于37℃，湿度5％(v/v)的CO2气体中培养2h，置于双光子激光共聚焦显微镜下，在890nm飞秒激光照射下，收集细胞成像图像(如图6所示，其中，图6A为HeLa，图6B为A549，图6B为MCF-17，图6B为HK-1)，结果表明，本发明所涉及的两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P可以被肿瘤细胞良好的摄取，并具有良好的双光子细胞成像效果。
实施例7
实施例1中得到的两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P的体外肿瘤细胞的光动力治疗试验：在96孔培养板中接种人宫颈癌细胞HeLa、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-17和人鼻咽癌细胞HK-1，于37℃，湿度5％(v/v)的CO2气体细胞培养箱中分别培养24h，再加入1mM的BD-ZnP-P水溶液，至最终浓度均为1μM，再将细胞置于暗处培养6h，再将培养液置换成新鲜干净的培养液后置于室温下光照。光照条件为持续2h的100W的卤钨灯光，光经过一个水槽冷却和一块650nm波长的滤光片，光剂量依次为(0、1、2、4、8)J·cm-2。经光照后，细胞置于细胞培养箱中放置24小时，细胞抑制率用MTT法测定，四种肿瘤细胞的IC50分别为1.8、3.5、2.1、4.6J·cm-2。结果表明，本发明涉及的两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P具有非常良好的肿瘤细胞光毒性。
实施例8
实施例1中得到的两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P的体外肿瘤细胞的双光子光动力治疗试验：在A、B两组培养板中分别接种人鼻咽癌细胞HK-1，于37℃，湿度5％(v/v)的CO2气体细胞培养箱中分别培养24h。在B组中加入1mM的BD-ZnP-P水溶液，至最终浓度为1μM，并将两组细胞置于暗处培养6h。取出细胞，将A、B两组培养液置换成新鲜干净的培养液后，用890nm飞秒激光照射5min。之后，再将两组细胞置于暗处培养6h，观察细胞状态。结果表明，如图7所示，没有光敏剂组A组，细胞状态良好。而加入光敏剂BD-ZnP-P的B组，细胞开始失去细胞完整性，大量坏死。结果表明，本发明涉及的两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P具有非常良好的肿瘤细胞双光子治疗效果。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂，其特征在于：其结构式如式Ⅰ所示：
2.权利要求1所述的具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)氮气保护下，将反应原料ZnP、BD、4-碘苯酚和四(三苯基膦)合钯、碘化亚铜溶于干燥的四氢呋喃与三乙胺的混合溶剂中，加热反应至反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH，如式II所示：
(2)氮气保护下，将步骤(1)得到的紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH、二碘代三缩四乙二醇和碳酸钾溶于无水DMF中，加热反应至反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色卟啉中间体BD-ZnP-I，如式III所示：
(3)氮气保护下，将步骤(2)得到的紫色卟啉中间体BD-ZnP-I和三苯基膦混合，加热反应至反应终止，除去溶剂得粗产品，粗产品用硅胶色谱柱分离得紫色两亲性抗癌光敏剂BD-ZnP-P；
步骤(1)中所述的ZnP的结构式如下式所示：
步骤(1)中所述的BD的结构式如下式所示：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的BD：ZnP：4-碘苯酚的摩尔比为1：2：1～1：3：1。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的原料ZnP与四(三苯基膦)合钯的摩尔比为1：(0.05～0.1)。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的四(三苯基膦)合钯与碘化亚铜的摩尔比为1：(2～3)。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH与二碘代三缩四乙二醇的摩尔比为1：(5～20)。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的紫色卟啉中间体BD-ZnP-OH与碳酸钾的摩尔比为1：(10～50)。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的四氢呋喃与三乙胺的混合溶剂按照四氢呋喃与三乙胺的体积比1：(1～5)混合得到。
9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的加热反应的温度为45～65℃；
步骤(2)中所述的加热反应的温度为65～95℃；
步骤(3)中所述的加热反应的温度为95～125℃。
10.权利要求1所述的具有大双光子吸收截面的两亲性抗癌光敏剂在制备作为肿瘤的光动力治疗用的光敏剂药物中的应用。
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| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160601 |