CN104548118A - 抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，由泊洛沙姆三嵌段共聚物制得的末端抗体化的泊洛沙姆两亲性聚合物，即抗体-泊洛沙姆，并且公开了抗体-泊洛沙姆的制备方法和应用。本发明既具有抗体或其有效片段作为靶向分子的定向输运功能，又具有泊洛沙姆的亲水亲油的两亲性和温度敏感的性质。本发明所得的抗体-泊洛沙姆共聚物主要应用于多肽、蛋白、基因及生物显像物质等药物输运载体系统，既可单独作为载体应用，也可掺杂修饰于脂质体、脂质微纳气泡、水凝胶、纳米凝胶、纳米粒、胶束等药物系统中。本发明制得的抗体化泊洛沙姆不影响抗体活性，制备方法简单、易于操作，便于其在医药递送系统中的应用。

Description

抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种抗体共价修饰的末端抗体化泊洛沙姆两亲性聚合物的制备方法及其在药物输运系统中的应用。

背景技术

药物的靶向输运技术因载体具有定向或定点递释的功能，具有减毒增效的优点，而受到广大科学工作者的特别青睐。例如，免疫脂质体的研究，通过单克隆抗体或其片段修饰脂质体，借助其表面修饰的抗体与靶细胞表面过度表达或特有的标识物结合，从而使药物浓集于靶器官、靶组织或靶细胞内，减少其在正常组织中的蓄积，达到增效减毒的作用。

抗体或其片段修饰载体代表了靶向载体输运技术的主流方向。抗体或其片段修饰载体的制备方法，除了将二者进行简单的物理混合孵育以外，主要是利用了共价修饰手段，即抗体或其片段共价修饰到连接材料上，然后带有抗体或片段的连接材料嵌入或掺杂到药物载体内部。例如抗体修饰长循环脂质体，是将抗体共价连接磷脂材料，后嵌入到已经制备好的长循环脂质体中从而制得。

泊洛沙姆是一类由聚氧乙烯(PEO)和聚氧丙烯(PPO)组成的PEO-PPO-PEO非离子型三嵌段共聚物，其结构式为：HO-(CH₂CH₂O)_y-(CHCH₃CH₂O)_x-(CH₂CH₂O)_y-H，商品名为Pluronic、LutrolF(BASF，Germany)及Poloxamer(ICI)，中文译名为普流罗尼克或泊洛沙姆。

泊洛沙姆系列含有30多种不同高聚物，均具有表面活性。泊洛沙姆无生理活性、无溶血性、对皮肤无刺激性、毒性小，作为药用辅料可充当乳化剂、增溶剂、吸收促进剂、缓释材料等，应用到溶液剂、乳剂、栓剂、软膏、注射剂以及脂质体等新型给药系统中。

因泊洛沙姆具有广泛应用的前景，又因泊洛沙姆末端羟基的活性基团，泊洛沙姆的修饰衍生化研究一直受到人们关注，如利用羟基末端和难溶性羧酸类药物共价偶联，增加难溶性药物的应用前景；又如将泊洛沙姆末端氨基化和肝素等糖胺聚糖成分结合，作为抗凝血药物载体或生长因子缓控释载体。

目前，国际上尚未报导抗体化泊洛沙姆两亲性聚合物这一结构分子，特别是将泊洛沙姆末端马来酰亚胺化，进而同巯基化抗体进行结合的制备方法尚未报导。将泊洛沙姆末端抗体化修饰，以此为连接材料，利用泊洛沙姆的疏水嵌段孵育掺入到载体材料疏水部位中，从而使载体具有靶向功能。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种抗体化泊洛沙姆两亲性共聚物及其制备方法和应用，将泊洛沙姆共聚物末端马来酰亚胺化，进而同巯基化抗体进行共价结合，得到抗体化泊洛沙姆，可应用于在载体材料中，使载体既具有抗体的靶向功能，又具有泊洛沙姆分子的两亲性特点。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，由泊洛沙姆共聚物的两末端或单末端经抗体衍生化而制成，结构通式为抗体-泊洛沙姆共聚物，所述泊洛沙姆共聚物是由聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段形成的具有羟基末端的共聚物。

可用于与抗体共价连接的材料是多种多样的，主要是含有活性基团的天然材料或合成材料，如末端羧基化的聚乙二醇磷脂、羟基末端的聚合物类等，而泊洛沙姆共聚物则是具有羟基末端的共聚物，具两亲性，也易衍生化。将泊洛沙姆共聚物的末端进行抗体化修饰，并作为连接材料，利用泊洛沙姆共聚物的疏水嵌段将抗体孵育掺入到载体材料疏水部位中，从而使载体具有靶向功能。

进一步的，在本发明中，所述泊洛沙姆共聚物的结构通式为HO-(CH₂CH₂O)_y-(CHCH₃CH₂O)_x-(CH₂CH₂O)_y-H，所述x和y表示相应嵌段的聚合度，x＝25～30，y＝75～85。在泊洛沙姆系列中，Poloxamer 188(Pluronic F68，x＝25～30且y＝75～85)，因其较高的安全性得到美国FDA批准。

进一步的，在本发明中，所述抗体为单克隆抗体，包括完整的单克隆抗体和单克隆抗体的片段。

一种抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法，包括以下步骤：

4-1)加入使抗体巯基化的试剂使所述抗体巯基化；

4-2)将所述泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化，得到具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物；

4-3)将步骤4-1)和步骤4-2)所得的产物混合孵育，纯化，即得抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物。

抗体共价修饰载体材料的手段有许多，例如利用抗体内源的氨基，与含有羧基的连接材料，在EDC/NHS催化下进行生成酰胺键的反应；但是由于抗体含有较多数量的氨基，如采用这种方法进行连接，可能引发抗体各个部位产生随机性交联，不利于抗体中抗原结合位点的暴露，有可能降低抗原结合位点的活性。而采用巯基修饰抗体可限制抗体中被修饰部位的数量，增加修饰后抗原结合活性的保留几率。

为了利用抗体的巯基，本发明将泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化，使抗体通过巯基和马来酰亚胺基形成共价键结合到泊洛沙姆材料上。

进一步的，在本发明中，所述步骤4-1)中，抗体巯基化的方法包括在抗体上加入外源性巯基化试剂使抗体巯基化，或利用还原试剂将抗体的内源性二硫键打开产生巯基使抗体巯基化。由于抗体自身缺乏巯基或巯基不足，需要通过对其自身的二硫键进行还原或通过硫醇化试剂制备产生巯基，而后通过形成巯醚键或二硫键使抗体偶联到脂质体上。

进一步的，在本发明中，所述使抗体巯基化的试剂包括Traut’s试剂、3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、琥珀酰亚胺-S-乙酰基硫代乙酸酯、琥珀酰亚胺基乙酰硫代丙酸酯和S-乙酰巯基丁二酸酐。

进一步的，在本发明中，所述步骤4-1)中将抗体巯基化的处理方法是：取抗体或抗体片段适量加入Traut’s试剂，混合均匀，氮气保护下室温反应2小时，4℃下通过透析方法除去多余的Traut’s试剂，收集透析袋内的抗体溶液，浓缩蛋白。Traut’s试剂作为使抗体巯基化的有效试剂，在pH7-9的条件下与伯胺反应，在巯基基团上添加短间隔末梢，可以作为巯基特异性交联或标记的靶点应用。

进一步的，在本发明中，所述步骤4-2)中泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化的方法是：

8-1)将所述泊洛沙姆的羟基末端进行氨基衍生化，得到具有氨基化末端的氨基化泊洛沙姆共聚物；

8-2)将所述氨基化泊洛沙姆共聚物与马来酸酐混合反应，氨基化末端经马来酰亚胺衍生化，得到具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物。

进一步的，在本发明中，所述泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化的具体操作步骤是：

9-1)将对甲磺酰氯或磺酰氯溶于二氯甲烷中，慢慢滴加到含有三乙醇胺的泊洛沙姆和二氯甲烷混合溶液中，冰水浴反应2～10时，然后将含有乙二胺的二氯甲烷溶液缓慢滴加至反应物中，反应持续6～24小时，反应物通过冷乙醚沉淀，再经二氯甲烷溶解和冷乙醚沉淀，收集后进行真空干燥，即得氨基化泊洛沙姆共聚物；

9-2)称取所述氨基化泊洛沙姆共聚物和马来酸酐，一同溶于冰醋酸中，常温反应12h，反应液用乙醚沉淀后得白色沉淀，真空干燥，得中间产物(红外谱图见附图2)；

9-3)将所述中间产物溶于乙酸酐，反应液中加入乙酸钠，在90℃下加热，将反应液用二氯甲烷清洗，收集有机相，再使用冷乙醚沉淀；将得到的沉淀物溶于氯化钠水溶液，调节pH到4.0～7.5，再用二氯甲烷清洗，收集有机相，冷乙醚沉淀；抽滤并真空干燥，即得具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物。

进一步的，在本发明中，抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物在包括基因、多肽、蛋白以及显像物质的输运载体系统制备的药物中应用，作为抗体高分子前药或载体材料中应用，或掺杂修饰脂质体、脂质微纳气泡、水凝胶、纳米凝胶、纳米粒和胶束的药物输运载体系统中应用。

有益效果：本发明的有益效果为：本发明公开的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，既具有抗体作为靶向分子的定向输运功能，又具有泊洛沙姆的亲水亲油的两亲性和温度敏感的性质，扩大了泊洛沙姆的应用范围；本发明可以应用于多肽、蛋白、基因及生物显像物质等药物输运载体系统，既可作为抗体前药起到抗体药物纳米化效果，也可单独作为载体应用，并可掺杂修饰于脂质体、脂质微纳气泡、水凝胶、纳米凝胶、纳米粒、胶束等药物输运载体系统中；此外，抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法是利用抗体的巯基化和泊洛沙姆的马来酰亚胺化，很大程度上保留了抗体的活性，制备方法简单、易于操作，便于其在医药和显像试剂递送系统中的应用。

附图说明

附图1是本发明中提及的泊洛沙姆188的红外谱图；

附图2是本发明马来酰亚胺化泊洛沙姆188和中间产物(B)的红外谱图。

具体实施方式

一种抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，由泊洛沙姆共聚物的两末端或单末端经抗体衍生化而制成，结构通式为抗体-泊洛沙姆共聚物，泊洛沙姆共聚物是由聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段形成的具有羟基末端的共聚物，泊洛沙姆共聚物的结构通式为HO-(CH₂CH₂O)_y-(CHCH₃CH₂O)_x-(CH₂CH₂O)_y-H，其中，x和y表示相应嵌段的聚合度，优选x＝25～30，y＝75～85。

抗体为单克隆抗体，可以使完整的单克隆抗体，也可以是单克隆抗体的片段。

抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法，包括以下步骤：

4-1)加入使抗体巯基化的试剂使所述抗体巯基化；

4-2)将泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化，得到具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物；

4-3)将步骤4-1)和步骤4-2)所得的产物混合，在中性pH值下反应过夜，用SEPHAROSE CL-4B纯化，即得抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物。

步骤4-1)中，抗体巯基化的方法包括在抗体上加入外源性巯基化试剂使抗体巯基化，或利用还原试剂将抗体的内源性二硫键打开产生巯基使抗体巯基化。

优选的，使抗体巯基化的试剂包括2-亚氨基硫烷盐酸盐(Traut’s试剂)、3-(2-吡啶二巯基)、丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)、琥珀酰亚胺-S-乙酰基硫代乙酸酯(SATA)、琥珀酰亚胺基乙酰硫代丙酸酯(SATP)和S-乙酰巯基丁二酸酐(SAMSA)。

优选的，步骤4-1)中将抗体巯基化的处理方法是：取抗体或抗体片段适量加入Traut’s试剂(即2-Iminothiolane·HCl)，混合均匀，氮气保护下室温反应2小时，4℃下通过透析方法除去多余的Traut’s试剂，收集透析袋内的抗体溶液，通过冻干或超滤离心方法浓缩蛋白；

步骤4-2)中泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化的方法是：

8-1)将泊洛沙姆的羟基末端进行氨基衍生化，得到具有氨基化末端的氨基化泊洛沙姆共聚物；

8-2)将氨基化泊洛沙姆共聚物与马来酸酐混合反应，氨基化末端经马来酰亚胺衍生化，得到具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物。

泊洛沙姆共聚物的两末端或单末端进行马来酰亚胺衍生化的具体反应过程为：

或

泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化的具体操作步骤是：

9-1)将对甲磺酰氯或磺酰氯溶于二氯甲烷中，慢慢滴加到含有三乙醇胺的泊洛沙姆和二氯甲烷混合溶液中，冰水浴反应2-10小时，然后将含有乙二胺的二氯甲烷溶液缓慢滴加至反应物中，反应持续6-24小时，反应物通过冷乙醚沉淀，再经二氯甲烷溶解和冷乙醚沉淀三次，收集后进行真空干燥，即得氨基化泊洛沙姆共聚物(A)；

9-2)称取氨基化泊洛沙姆共聚物(A)和马来酸酐，一同溶于冰醋酸中，常温反应12h，反应液用乙醚沉淀后得白色沉淀，真空干燥，得中间产物(B)；

9-3)将中间产物(B)溶于乙酸酐，反应液中加入乙酸钠，在90℃下加热，将反应液用二氯甲烷清洗三次，收集有机相，再使用冷乙醚沉淀；将得到的沉淀物溶于氯化钠水溶液，调节pH到4.0～7.5，再用二氯甲烷清洗三次，收集有机相，冷乙醚沉淀；抽滤并真空干燥，即得具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物(C)。

抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物在包括基因、多肽、蛋白以及显像物质的输运载体系统制备的药物中应用，作为抗体高分子前药或载体材料中应用，或掺杂修饰脂质体、脂质微纳气泡、水凝胶、纳米凝胶、纳米粒和胶束的药物输运载体系统中应用。

下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。

实施例1  马来酰亚胺化泊洛沙姆188的制备

1.1  泊洛沙姆188的氨基化

取1g对甲磺酰氯溶于10mL二氯甲烷中，慢慢滴加到含有31μL三乙醇胺和2g泊洛沙姆的10mL二氯甲烷溶液中，冰水浴反应4小时，然后将含有乙二胺的二氯甲烷溶液缓慢滴加至反应物中，反应持续12小时，反应物通过冷乙醚沉淀和二氯甲烷溶解，重复三次，收集并真空干燥即得氨基化泊洛沙姆188；

1.2  氨基化泊洛沙姆188的马来酰亚胺化

称取260mg氨基化泊洛沙姆188和30mg马来酸酐，将其一同溶于冰醋酸中，常温下搅拌反应12h，反应液用冷乙醚沉淀后得白色沉淀，真空干燥后，得中间产物(B)，将中间产物(B)溶于乙酸酐，再加入乙酸钠，在90℃下加热30分钟，反应液用二氯甲烷萃取洗三次，收集有机相；再使用冷乙醚沉淀，将得到的产物溶于氯化钠水溶液，调pH到6.0，用二氯甲烷清洗三次，收集有机相，冷乙醚沉淀；抽滤真空干燥即得具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆188产物(C)。

对比附图1，泊洛沙姆188在1600～1800cm^-1无特征峰；采用附图2的红外谱图表征，发现中间产物(B)在1571cm^-1出现-NH-峰，1629cm^-1出现为-C＝C-峰，1722cm^-1和1694cm^-1为羰基峰；产物(C)的红外图谱检测结果在波长在1733cm^-1出现了一个峰，中间产物(B)的两个羰基峰消失；1571cm^-1的氮氢峰消失，以上证明了酰胺成环，证明有马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物生成。

实施例2  泊洛沙姆化的CD20单克隆抗体制备与应用

取anti-CD20 mAb(市售制剂商品名：美罗华)适量加入Traut’s试剂，混合均匀，氮气保护下室温反应2小时，过Sephadex G25(pH8 BB，5mM EDTA)，收集巯基化抗体部位，4℃保存，巯基化抗体浓度和巯基化程度分别采用BCA和Ellman法测定。按一定比例加入到马来酰亚胺化泊洛沙姆188水溶液中，放置过夜，加入适量β巯基乙醇封闭没有反应的马来酰亚胺化泊洛沙姆188，用COMW＝3500透析袋，在4℃下，用pH8的BB透析液透析，每隔8h换液，除去多余的β巯基乙醇，透析两天，收集透析袋内泊洛沙姆化CD20单克隆抗体。

该抗体共价修饰到泊洛沙姆188嵌段共聚物上，在水溶液中为纳米胶束形式，可以将泊洛沙姆化CD20单克隆抗体与泊洛沙姆188进行掺杂混合，根据需要调节泊洛沙姆化CD20单克隆抗体含量，进行淋巴瘤的治疗。

实施例3  Anti-CD33 mAb修饰载增强型绿色荧光蛋白基因脂质体的制备

3.1  抗体巯基化的制备

取CD33单克隆抗体(Clone No.2C6B7)适量加入Traut’s试剂(抗体与Traut’s试剂摩尔比为1:200)，混合均匀，氮气保护下室温反应2小时，通过透析方法4℃下除去多余Traut’s试剂，每次足量透析液(pH7.4 PBS，5mM EDTA)，磁力小心低速搅拌，6～8h换透析液，共两次，巯基化抗体浓度和巯基化程度分别采用BCA和Ellman’s试剂法测定，收集透析袋内液体，4℃保存。

3.2  载增强型绿色荧光蛋白质粒脂质体的制备

称取蛋黄磷脂80mg、胆固醇10mg和十八胺5mg，溶于氯仿，50℃减压下缓慢蒸除氯仿，继续减压旋蒸3h，加入10mL 0.2Mol/L pH7.4的PBS，孵育1h，探针超声(功率750W，脉冲2s，间歇2s，振幅20％)有效时间6min，过0.45μm膜和0.22μm膜各一次，收集过滤液，即得制备的阳离子脂质体。

按照Axygen质粒提取试剂盒说明提取纯化pEGFP质粒，测定浓度，备用；将质粒与上述制得阳离子脂质体按一定比例混合，室温温育15min，形成脂质体-DNA复合物。

3.3  anti-CD33 mAb修饰的载增强型绿色荧光蛋白质粒脂质体的制备

取实施例1制备的马来酰亚胺化泊洛沙姆188共12mg，加入到步骤3.2制得的脂质体-DNA复合物，孵育过夜，加入适量步骤3.1制得的巯基化抗体，反应过夜，加入适量β巯基乙醇封闭没有反应的马来酰亚胺化泊洛沙姆188，通过SEPHAROSE CL-4B纯化收集脂质体部分，即得CD33 mAb修饰的脂质体。

该脂质体具有靶向细胞表面CD33抗原和一定的长循环功能，具有靶向转染绿色荧光蛋白基因的功能。

实施例4  Trastuzmab单克隆抗体F(ab’)₂段修饰载紫杉醇药物的泊洛沙姆脂质体

4.1  抗体片段的获取

参照PIERCE公司ImmumoPureF(ab’)₂制备试剂盒说明书，利用胃蛋白酶酶切获取抗体片段，所获抗体片段为Trastuzmab单克隆抗体F(ab’)₂段。

4.2  载紫杉醇药物的马来酰亚胺化泊洛沙姆修饰脂质体的制备

分别称取蛋黄磷脂、氢化大豆磷脂、胆固醇和紫杉醇(摩尔比按100:100:80:6)，溶于氯仿，减压下缓慢蒸除氯仿，继续减压旋蒸3h，加入10mL 0.02M pH7.0的Tris-HCl缓冲液，孵育1h，探针超声(功率750W，脉冲2s，间歇2s，振幅20％)有效时间6min，过0.45μm膜和0.22μm膜各一次，收集过滤液，即得紫杉醇普通脂质体；加入适量马来酰亚胺化泊洛沙姆188和泊洛沙姆188的混合物，4℃下放置过夜，用Sepharoas 4B凝胶柱洗脱纯化，洗脱液为0.02M pH7.0的Tris-HCl缓冲液，收集载紫杉醇药物的马来酰亚胺化泊洛沙姆修饰脂质体。

4.3  F(ab’)₂段修饰载紫杉醇药物的泊洛沙姆脂质体

将单抗段加入到含有马来酰亚胺化的脂质体的HEPES缓冲盐溶液，每1mL缓冲液加0.3g抗体片段，加入NaOH溶液调pH到中性，N₂保护下，室温反应过夜，加入2mM的β-巯基乙醇以封闭未结合抗体的马来酰亚胺末端，封闭时间为30min，通过Sepharoas4B凝胶柱用Hank’s平衡盐溶液洗脱去除过量封闭剂和抗体片段；收集所得免疫脂质体，过0.22μm无菌滤膜除菌，即得。

实施例5  Anti-VEGF-泊洛沙姆共聚物掺杂载药原位水凝胶用于肿瘤术后填充

5.1  按实施例3中步骤3.1的方法，将anti-VEGF单克隆抗体巯基化，按实施例1的方法将泊洛沙姆188的末端马来酰亚胺化；将巯基化抗体和马来酰亚胺化泊洛沙姆188按照摩尔比为2:15混合，孵育过夜。

5.2  取含12mg泊洛沙姆188和适量上述制得抗体-泊洛沙姆共聚物的水溶液10mL，磁力搅拌下缓慢滴加含紫杉醇药物适量的乙醇溶液，混合后用去离子水透析，除去乙醇，透析液过0.45和0.22μm的滤膜，即得载药胶束溶液。冷冻干燥后，4℃保存。

5.3  取上述步骤5.2制备的载药冻干粉，用7mL注射用水复溶，加入18mg泊洛沙姆407，于4℃下保存，直至泊洛沙姆407彻底溶解，即得均一载药水凝胶。

本水凝胶载药量达1mg/mL，药物被包裹在泊洛沙姆188和泊洛沙姆407以及抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物三者形成的疏水核心内。此水凝胶为泊洛沙姆407和泊洛沙姆188共混物，可在37℃下，1min迅速变化为凝胶态。本水凝胶可以利用抗体的靶向作用，通过凝胶周围细胞的靶向摄取，凝胶中载药泊洛沙姆单元可以缓慢解离而有效入胞，达到控制释放和靶向杀灭残余病灶的效果。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，其特征在于：由泊洛沙姆共聚物的两末端或单末端经抗体衍生化而制成，结构通式为抗体-泊洛沙姆共聚物，所述泊洛沙姆共聚物是由聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段形成的具有羟基末端的共聚物。

2.根据权利要求1所述的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，其特征在于：所述泊洛沙姆共聚物的结构通式为HO-(CH₂CH₂O)_y-(CHCH₃CH₂O)_x-(CH₂CH₂O)_y-H，所述x和y表示相应嵌段的聚合度，x＝25～30，y＝75～85。

3.根据权利要求1所述的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物，其特征在于：所述抗体为单克隆抗体，包括完整的单克隆抗体和单克隆抗体的片段。

4.根据权利要求1至3任一所述的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

4-1)加入使抗体巯基化的试剂使所述抗体巯基化；

4-2)将所述泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化，得到具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物；

4-3)将步骤4-1)和步骤4-2)所得的产物混合孵育，纯化，即得抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物。

5.根据权利要求4所述的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法，其特征在于：所述步骤4-1)中，抗体巯基化的方法包括在抗体上加入外源性巯基化试剂使抗体巯基化，或利用还原试剂将抗体的内源性二硫键打开产生巯基使抗体巯基化。

6.根据权利要求4所述的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法，其特征在于：所述使抗体巯基化的试剂包括Traut’s试剂、3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯、琥珀酰亚胺-S-乙酰基硫代乙酸酯、琥珀酰亚胺基乙酰硫代丙酸酯和S-乙酰巯基丁二酸酐中任一种。

7.根据权利要求4至6任一所述的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法，其特征在于：所述步骤4-1)中将抗体巯基化的处理方法是：取抗体或抗体片段适量加入Traut’s试剂，混合均匀，氮气保护下室温反应2小时，4℃下通过透析方法除去多余的Traut’s试剂，收集透析袋内的抗体溶液，浓缩蛋白。

8.根据权利要求4所述的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法，其特征在于：所述步骤4-2)中泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化的方法是：

8-1)将所述泊洛沙姆的羟基末端进行氨基衍生化，得到具有氨基化末端的氨基化泊洛沙姆共聚物；

8-2)将所述氨基化泊洛沙姆共聚物与马来酸酐混合反应，氨基化末端经马来酰亚胺衍生化，得到具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物。

9.根据权利要求4或8所述的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物的制备方法，其特征在于：所述泊洛沙姆共聚物的羟基末端进行马来酰亚胺衍生化的具体操作步骤是：

9-1)将对甲磺酰氯或磺酰氯溶于二氯甲烷中，慢慢滴加到含有三乙醇胺的泊洛沙姆和二氯甲烷混合溶液中，冰水浴反应2～10时，然后将含有乙二胺的二氯甲烷溶液缓慢滴加至反应物中，反应持续6～24小时，反应物通过冷乙醚沉淀，再经二氯甲烷溶解和冷乙醚沉淀，收集后进行真空干燥，即得氨基化泊洛沙姆共聚物；

9-2)称取所述氨基化泊洛沙姆共聚物和马来酸酐，一同溶于冰醋酸中，常温反应12h，反应液用乙醚沉淀后得白色沉淀，真空干燥，得中间产物；

9-3)将所述中间产物溶于乙酸酐，反应液中加入乙酸钠，在90℃下加热，将反应液用二氯甲烷清洗，收集有机相，再使用冷乙醚沉淀；将得到的沉淀物溶于氯化钠水溶液，调节pH到4.0～7.5，再用二氯甲烷清洗，收集有机相，冷乙醚沉淀；抽滤并真空干燥，即得具有马来酰亚胺末端的马来酰亚胺化泊洛沙姆共聚物。

10.根据权利要求1至3任一所述的抗体共价修饰的泊洛沙姆共聚物在包括基因、多肽、蛋白以及显像物质的输运载体系统制备的药物中应用，作为抗体高分子前药或载体材料中应用，或掺杂修饰脂质体、脂质微纳气泡、水凝胶、纳米凝胶、纳米粒和胶束的药物输运载体系统中应用。