CN104535631A - 一种电化学测量方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于电化学测量技术领域,公开了一种降低电化学测试条中还原性干扰物影响的电化学测量方法。本发明所述电化学测量方法为分别测量目标分析物所产生的电流信号I1和还原性干扰物产生的干扰电流信号I2,由目标分析物所产生的电流信号I1和还原性干扰物产生的干扰电流信号I2计算出相应的校正系数k,用校正系数k校正目标分析物所产生的电流信号,得到与目标分析物真实浓度相对应的真实校正电流值Ic;其中Ic=I1/k。本发明所述测量方法可有效减小还原性干扰物对测量结果的影响,不仅适用于降低检测氧化电流时的正干扰,而且可有效消除检测还原电流时负干扰,测量准确度高,抗干扰能力强,适用范围广。
Description
技术领域
本发明属于电化学测量技术领域,具体涉及一种电化学测量方法,尤其是涉及一种降低电化学测试条中还原性干扰物影响的电化学测量方法。
背景技术
以电化学酶安培生物传感器为原理的电化学测量系统常用于各种即时检测(POCT)产品,如已商品化的血糖、血酮、血脂和血肌酐电化学测量仪。电化学测量系统通过检测目标分析物的酶催化氧化或还原电流实现对目标分析物的快速定量测定。如血糖(或血酮)电化学测量仪常采用氧化酶(或脱氢酶-辅酶)与氧化型电子介体组成酶反应系统,在正电位下检测葡萄糖(或β-羟丁酸)分子所产生的酶催化氧化电流信号,而血脂(或血肌酐)电化学测量仪常采用脂酶(或水解酶)-氧化酶-过氧化物酶以及还原型电子介体组成酶偶联反应系统,在负电位下检测胆固醇(或肌酐)分子所产生的酶催化还原电流信号。当所测量的电流信号仅依赖于目标分析物的浓度时,可实现血液中待测分子的精确定量检测。
通常目标分子在工作电极表面产生酶促反应电流信号的过程中,血液中存在的多种内源或外源的还原性干扰物,如扑热息痛、抗坏血酸、胆红素、多巴胺、龙胆酸、左旋多巴、甲基多巴和尿酸等,它们亦会参与电流信号的发生过程,对测量结果造成正干扰或负干扰。检测氧化电流信号时(如血糖或血酮电化学测量仪),还原性干扰物可在电极表面被直接电氧化(如扑热息痛)或被氧化型电子介体氧化(如抗坏血酸),故所测氧化电流为目标分子产生的真实电流和干扰物产生的干扰电流的累加,导致测量结果为正偏差。检测还原电流信号时(如血脂或血肌酐电化学测量仪),还原性干扰物可与过氧化氢发生酶(过氧化物酶)促氧化还原反应,减少与还原性电子介体发生酶促氧化还原反应的过氧化氢含量,导致测得的真实还原电流降低,测量结果产生负偏差,其中以抗坏血酸的负干扰最为严重。因此,降低或消除还原性干扰物对测量结果的影响,提高电化学测量仪检测疾病标志物的准确度,对相关疾病的精确诊断和治疗至关重要。
目前,降低或消除电化学测试条中还原性干扰物影响的方法主要有以下几种:(1)在工作电极表面覆盖一层带负电的高分子薄膜(如磺化氟代聚合物Nafion),利用静电排斥原理阻碍各种带负电的干扰物(如抗坏血酸和尿酸)到达电极表面发生电氧化;(2)在工作电极顶部修饰一层尺寸选择薄膜,利用薄膜的尺寸选择效应排除部分大分子量的干扰物在工作电极发生氧化还原反应,如采用100道尔顿尺寸排阻薄膜排除分子量大于100道尔顿的干扰物;(3)采用具有低氧化还原电位的电子介体降低施加在工作电极的氧化电位,降低还原性干扰物在电极表面的电氧化程度;(4)在电化学试条中增加校正干扰的伪电极,将伪电极表面测得的干扰电流从工作电极中扣除,消除干扰。尽管上述方法已部分成功应用于电化学测试条的干扰消除,但亦存在抗干扰能力弱,试条制造复杂等缺点。此外,目前的抗干扰方法均只用于降低检测氧化电流时的正干扰,缺少有效消除检测还原电流时负干扰的方法,故发展新的可降低电化学测试条中还原性干扰物引起的正干扰或负干扰的普遍方法具有重要意义。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种降低电化学测试条中还原性干扰物影响的电化学测量方法。
为实现本发明的目的,本发明采用如下技术方案:
一种电化学测量方法,分别测量目标分析物所产生的电流信号I1和还原性干扰物产生的干扰电流信号I2,由目标分析物所产生的电流信号I1和还原性干扰物产生的干扰电流信号I2计算出相应的校正系数k,用校正系数k校正目标分析物所产生的电流信号,得到与目标分析物真实浓度相对应的真实校正电流值Ic;其中Ic=I1/k。
其中,所述校正系数k为以I1和I2为自变量的函数。
在一些实施方案中,本发明电化学测量方法以氧化电流为检测信号,所述校正系数k取值范围为1≤k≤1.5。
在一些实施方案中,本发明电化学测量方法以还原电流为检测信号,所述校正系数k取值范围为0.5≤k≤1。
在一些实施方案中,本发明电化学测量方法,所述校正系数k采用如下步骤获得:
(1)以正常人的血液为基质,配置含不同浓度目标分析物的血液测试样本,所配浓度记为L1,L2,L3,L4,L5,L6……,测量不同浓度目标分析物产生的电流信号I1和干扰物电流信号I2,获得不同浓度的目标分子所产生的真实校正电流值分别记为Ic1,Ic2,Ic3,Ic4,Ic5,Ic6……;
(2)以正常人的血液为基质,按步骤(1)所配样本浓度,配置含不同浓度目标分析物的血液测试样本,同样记为L1,L2,L3,L4,L5,L6……,向不同浓度目标分析物的血液测试样本中加入一定量的还原性干扰物,还原性干扰物浓度记为M1,测量不同浓度目标分析物产生的电流信号相应的记为I1-11,I1-21,I1-31,I1-41,I1-51,I1-61……,测量干扰物电流信号记为I2-1,则与一组(I1-11,I2-1)相对应的校正系数k1-11=I1-11/Ic1,与(I1-21,I2-1)相对应的校正系数k1-21=I1-21/Ic2,以此类推可计算得k1-31,k1-41,k1-51,k1-61……;
(3)重复步骤(2),依次改变干扰物浓度为M2,M3,M4,M5,M6……,通过测量I1和I2,则可获得不同干扰物浓度相对应的k值,分析得到k=f(I1,I2)所代表的具体函数关系式。
与现有技术相比,本发明所述电化学测量方法为分别测量目标分析物所产生的电流信号I1和还原性干扰物产生的干扰电流信号I2,由目标分析物所产生的电流信号I1和还原性干扰物产生的干扰电流信号I2计算出相应的校正系数k,用校正系数k校正目标分析物所产生的电流信号,得到与目标分析物真实浓度相对应的真实校正电流值Ic;其中Ic=I1/k。本发明所述测量方法可有效减小还原性干扰物对测量结果的影响,不仅适用于降低检测氧化电流时的正干扰,而且可有效消除检测还原电流时负干扰,测量准确度高,抗干扰能力强,适用范围广。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例中所采用的电化学测试条的结构示意图;
图2为本发明实施例中所采用的电化学测试条的结构分解图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
本发明所述电化学测量方法为在电化学测试条采用两个或多个工作电极的系统中降低还原性干扰物影响的方法。
具体的说,在本发明中,在第一和第二工作电极表面施加同向相等的工作电压,第一工作电极测量目标分析物所产生的电流信号,第二工作电极测量还原性干扰物产生的干扰电流信号,利用一定的数学逻辑算法,由第一工作电极电流信号和第二工作电极干扰电流信号计算出相应的校正系数,再用此校正系数校正第一工作电极目标分析物产生的电流信号,得到与目标分析物真实浓度相对应的真实校正电流值,从而降低还原性干扰物对目标分析物测量的影响。
在本发明中,第一工作电极测量的电流信号为目标分析物产生的测量电流信号I1,第二工作电极上为还原性干扰物产生的干扰电流信号I2,I2与还原性干扰物的总浓度相对应。测量I1时,还原性干扰物可对I1产生正或负的干扰。故第一工作电极上目标分析物产生的真实校正电流信号(Ic)与I1之间存在一定的数学逻辑关系,此数学逻辑关系可用下式1表示。
Ic=I1/k(公式1)
其中k为校正系数,可实现I1与Ic间的数学换算。
在还原性干扰物总浓度较低时,I2为测试样本背景电流,对目标分析物的测量基本无干扰,此时k=1,目标分析物真实浓度相对应的真实校正电流值Ic与第一工作电极上的测量的电流信号I1相等。
若测试样本中还原性干扰物的总浓度较高,I2较背景电流显著增大,则还原性干扰物对目标分析物的测量干扰大,此时k≠1,目标分析物真实浓度相对应的真实校正电流值Ic与第一工作电极上的测量的电流信号I1不相等,可利用合适的校正系数k和Ic=I1/k的关系式将I1换算为Ic,以减小还原性干扰物对测量的干扰。
运用Ic=I1/k的关系式进行干扰校正的关键是得出准确的校正系数k。实际测量中,还原性干扰物产生的干扰电流信号I2与干扰物浓度相对应,可反应出干扰物总浓度的大小。干扰物总浓度越高,I2越大,对Ic干扰越严重,所得I1与Ic间差值越大。理论上,对于某一组特定的I1和I2值,均有唯一的校正系数k与之相对应,从而实现I1的准确校正。因此,校正系数k为以I1和I2为自变量的函数,即k=f(I1,I2)。
在一些实施方案中,本发明电化学测量方法以氧化电流为检测信号,即还原性干扰物为正干扰,k的取值范围为1≤k≤1.5。
在一些实施方案中,本发明电化学测量方法以还原电流为检测信号,即还原性干扰物为负干扰,k的取值范围为0.5≤k≤1。
在一定的测试环境下,可通过建立实验模型,分析实验测试数据获得校正系数k与I1和I2间的具体的数学逻辑关系式。
在一些实施方案中,本发明电化学测量方法,所述校正系数k采用如下步骤获得:
(1)以正常人的血液为基质,配置含不同浓度目标分析物的血液测试样本,所配浓度记为L1,L2,L3,L4,L5,L6……,测量不同浓度目标分析物产生的电流信号I1和干扰物电流信号I2,不同浓度的目标分子所产生的真实校正电流值分别记为Ic1,Ic2,Ic3,Ic4,Ic5,Ic6……;
(2)以正常人的血液为基质,按步骤(1)所配样本浓度,配置含不同浓度目标分析物的血液测试样本,同样记为L1,L2,L3,L4,L5,L6……,向不同浓度目标分析物的血液测试样本中加入一定量的还原性干扰物,还原性干扰物浓度记为M1,测量不同浓度目标分析物产生的电流信号相应的记为I1-11,I1-21,I1-31,I1-41,I1-51,I1-61……,测量干扰物电流信号记为I2-1,则与一组(I1-11,I2-1)相对应的校正系数k1-11=I1-11/Ic1,与(I1-21,I2-1)相对应的校正系数k1-21=I1-21/Ic2,以此类推可计算得k1-31,k1-41,k1-51,k1-61……;
(3)重复步骤(2),依次改变干扰物浓度为M2,M3,M4,M5,M6……,通过测量I1和I2,则可获得不同干扰物浓度相对应的k值,分析得到k=f(I1,I2)所代表的具体函数关系式。
其中,校正系数k获得方法中步骤(1)以正常人的血液为基质检测含不同浓度目标分析物的血液测试样本所产生的电流I1,由于正常人的血液干扰物浓度较低,因此步骤(1)中第二工作电极测量干扰物电流I2应该为测试样本背景电流,对目标分析物的测量基本无干扰,此时k=1,第一工作电极上的真实校正电流值Ic与I1相等。同时可以通过检测的含不同浓度目标分析物的血液测试样本所产生的电流值I1获知不同浓度的目标分子所产生的真实校正电流值Ic1,Ic2,Ic3,Ic4,Ic5,Ic6……。
校正系数k获得方法中步骤(2)向不同浓度目标分析物的血液测试样本中加入干扰物浓度为M1还原性干扰物,由于测试样本中干扰物浓度升高,第二工作电极测量干扰物电流I2较背景电流显著增大,对目标分析物的测量干扰大,此时k≠1,因此第一工作电极上的真实校正电流值Ic与I1不相等。通过步骤(1)检测的含不同浓度目标分析物的血液测试样本所产生的电流值I1获知不同浓度的目标分析物所产生的真实校正电流值Ic1,Ic2,Ic3,Ic4,Ic5,Ic6……,与此时第一工作电极上的测量的不同浓度的目标分析物所产生的电流信号I1-11,I1-21,I1-31,I1-41,I1-51,I1-61……比较,获得相应的校正系数。如与一组(I1-11,I2-1)相对应的校正系数k1-11=I1-11/Ic1,与(I1-21,I2-1)相对应的校正系数k1-21=I1-21/Ic2,以此类推可计算得k1-31,k1-41,k1-51,k1-61……。
校正系数k获得方法中步骤(3)重复步骤(2),改变不同浓度目标分析物的血液测试样本中的干扰物浓度为M2,M3,M4,M5,M6……,获得第一工作电极上测量的不同浓度的目标分析物所产生的电流信号I1和第二工作电极上测量的还原性干扰物产生的干扰信号I2,获得更多的与每一组I1和I2相对应的k值,所得数据可如表1所示。通过相关的数学方法分析处理表1所得数据,得到k=f(I1,I2)所代表的具体函数关系式。
表1.I1和I2与校正系数k间的对应关系数据表
本领域技术人员可以理解,k=f(I1,I2)所代表的具体函数关系式与电化学测试条的具体结构和性能、目标分析物的种类以及不同的测试基质相关,本领域技术人员需要根据电化学测试条的结构和性能、目标分析物的种类以及不同的测试基质预先建立k=f(I1,I2)所代表的具体函数关系式。
在实际电化学测量过程中,可将预先建立的k=f(I1,I2)所代表的具体函数关系式程序化入测量仪表的校正码芯片,则校正码芯片的存储器中具有与一组I1和I2值相对应的特定k值。测试时,由测得的I1和I2得出准确的校正系数k,再用Ic=I1/k关系式和k值校正I1得到目标分析物的Ic,从而提高电化学测量的准确度。
为更好的说明使用本发明所述测量方法可有效消除还原性干扰物对测量结果的干扰,下面将结合实施例具体介绍本发明的特点和优势。如无特殊说明所述测量方法所采用的电化学测试条结果均如图1和图2所示。图1为电化学测试条的结构示意图,图2为电化学测试条的结构分解图。本发明所述测量方法不限于使用图1和图2所示的电化学测试条。
如图1结构示意图所示,所述电化学测试条包括板层本体100和位于板层本体100内部的电极,板层本体100的两端分别为采集端20和电接触端10。其中,采集端20用于接收流体样本,采集端20的内部设置有作为液体样品室的液腔,采集端20的两侧(即侧面进口91)和前侧(“前侧”即传感器本体100位于采集端20的端面)分别与液腔相通,采集端20的底面设置有与液腔相通的槽孔34。
如图2结构分解图所示板层本体100包括依次叠加的多层绝缘材料层,从下至上依次为第一基层200、第二基层300、第一上层400和第二上层500。其中:第一基层200的上表面设置有电极(即导电涂层),用作工作电极、参比电极以及与测试仪表相连的电接触部位,此外,第一基层200的前侧面设有槽口44。第二基层300位于采集端20的部分设置有与电极对应的通孔,以将导电涂层的一部分暴露出来,用于限定电极面积和负载化学试剂,此外,第二基层300的前侧面设有槽口54(其位置、形状和大小与第一槽口44一致);第一上层400位于采集端20的顶端设置有液腔槽口41,第二上层500和第二基层300上与液腔槽口41对应的部分与液腔槽口41构成液腔,第二上层500位于采集端20部分设有与液腔相通的排气孔74。
第一基层200上设置有三个电极(即电接触端有三个电接触点),分别为第一工作电极11,参比电极12和第二工作电极13,每个电极均与第一槽口44相连(从而与槽孔34相连),第二基层300上的通孔包括第一通孔31,第二通孔32,第三通孔33,三个通孔与三个电极一一对应(即第一通孔31对应第一工作电极11、第二通孔32对应参比电极12、第三通孔33对应第二工作电极13)。
实施例1、降低还原性干扰物对以氧化电流为检测信号的葡萄糖电化学传感器的正干扰。
第一工作电极11涂覆有葡萄糖氧化酶、氧化型电子介体(铁氰化钾)以及高分子促粘剂(羟乙基纤维素)和填充剂(乳糖),第二工作电极13和参比电极12涂覆有氧化型电子介体(铁氰化钾)以及高分子促粘剂(羟乙基纤维素)和填充剂(乳糖)。将电化学测试条与恒电位测量仪链接(CHI电化学工作站,上海辰华),在第一工作电极11和第二工作电极13上同时施加相对于参比电极12的正电压0.3V,则第一工作电极11表面测得与葡萄糖浓度相关的电流I1,第二工作电极13表面测得与还原性干扰物总浓度相关的电流I2。改变血样中葡萄糖的浓度以及干扰物的浓度,得不同I1和I2下相对应的k值,所得数据如表2所示。将表2所得数据进行三维数据拟合,可得到k=f(I1,I2)所表示的具体的函数关系式为I2≤0.36时k=1(公式2)。实际测量时,由I1和I2和公式2得出相应的校正系数k,再用k及公式1校正I1。
为了表明本发明所述电化学测量方法可显著降低还原性干扰物对测量结果的干扰,选取血液中常见的扑热息痛、抗坏血酸和尿酸,测试葡萄糖电化学传感器对上述还原型干扰物的抗干扰能力。对于正干扰,将测量结果大于10%(对于葡萄糖浓度>100mg/dl)或10mg/dl(对于葡萄糖浓度<100mg/dl)的葡萄糖输出改变定义为显著干扰,测量结果如表3所示。
表2.葡萄糖电化学传感器(氧化电流为信号)所测I1和I2值以及相对应的校正系数k值
表3.使用校正和未校正输出电流的葡萄糖电化学传感器(氧化电流为信号)对还原性干扰物的抗干扰能力
由表3结果可知,与未校正I1的测试条相比,使用本发明所述测量方法校正I1的测试条的抗干扰能力显著提高。这表明在以氧化电流为检测信号的葡糖糖电化学测试条中,使用本发明所述测量方法可有效减小还原性干扰物的影响。
实施例2、降低还原性干扰物对以还原电流为检测信号的葡萄糖电化学传感器的负干扰。
实施例2所采用的电化学测试条结构与实施例1相同。
第一工作电极11涂覆有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、还原型型电子介体(亚铁氰化钾)以及高分子促粘剂(羟乙基纤维素)和填充剂(乳糖),第二工作电极13涂覆有催化抗坏血酸产生双氧水的新型抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、还原型电子介体(亚铁氰化钾)以及高分子促粘剂(羟乙基纤维素)和填充剂(乳糖),参比电极12涂覆有还原型电子介体(亚铁氰化钾)以及高分子促粘剂(羟乙基纤维素)和填充剂(乳糖)。将电化学测试条与恒电位测量仪链接(CHI电化学工作站,上海辰华),在第一工作电极11和第二工作电极13上同时施加相对于参比电极12的负电压-0.15V,则第一工作电极11表面测得与葡萄糖浓度相关的电流I1,第二工作电极13表面测得与抗坏血酸总浓度相关的电流I2。改变血样中葡萄糖的浓度以及抗坏血酸的浓度,得到不同I1和I2下相对应的k值,所得数据如表4所示。将表4所得数据进行三维数据拟合,可得到k=f(I1,I2)所表示的具体的函数关系式为I2≤1.3时k=1(公式3)。实际测量时,由I1和I2和公式3得出相应的校正系数k,再用k及公式1校正I1。
对于负干扰,将测量结果大于-10%(对于葡萄糖浓度>100mg/dl)或-10mg/dl(对于葡萄糖浓度<100mg/dl)的葡萄糖输出改变定义为显著干扰。结果如表5所示。
表4.葡萄糖电化学传感器(还原电流为信号)所测I1和I2值以及相对应的校正系数k值
表5使用校正和未校正输出电流的葡萄糖电化学传感器(还原电流为信号)对抗坏血酸的抗干扰能力
由表5结果可知,与未校正I1的测试条相比,使用本发明所述测量方法校正I1的测试条对抗坏血酸的抗干扰能力显著提高。这表明在以还原电流为检测信号的葡萄糖电化学测试条中,使用本发明所述测量方法可有效减小抗坏血酸的负干扰。
实施例3、降低还原性干扰物对以还原电流为检测信号的血脂电化学传感器的负干扰
实施例3所采用的电化学测试条结构与实施例1相同。
第一工作电极11涂覆有胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、还原型电子介体(亚铁氰化钾)以及高分子促粘剂(羟乙基纤维素)和填充剂(乳糖),第二工作电极13涂覆有催化抗坏血酸产生双氧水的新型抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、还原型电子介体(亚铁氰化钾)以及高分子促粘剂(羟乙基纤维素)和填充剂(乳糖),参比电极12涂覆有还原型电子介体(亚铁氰化钾)以及高分子促粘剂(羟乙基纤维素)和填充剂(乳糖)。将电化学测试条与恒电位测量仪链接(CHI电化学工作站,上海辰华),在第一工作电极11和第二工作电极13上同时施加相对于参比电极12的负电压-0.15V,则第一工作电极11表面测得与胆固醇浓度相关的电流I1,第二工作电极13表面测得与抗坏血酸总浓度相关的电流I2。改变血样中胆固醇的浓度以及抗坏血酸的浓度,得不同I1和I2下相对应的k值,所得数据如表6所示。将表6所得数据进行三维数据拟合,可得到k=f(I1,I2)所表示的具体的函数关系式为I2≤1.5时k=1(公式4)。实际测量时,由I1和I2和公式4得出相应的校正系数k,再用k及公式1校正I1。
对于负干扰,将测量结果大于-10%(对于胆固醇浓度>200mg/dl)或-20mg/dl(对于胆固醇浓度<200mg/dl)的胆固醇输出改变定义为显著干扰。结果如表7所示。
表6.血脂电化学传感器(还原电流为信号)所测I1和I2值以及相对应的校正系数k值
表7.使用校正和未校正输出电流的血脂电化学传感器(还原电流为信号)对抗坏血酸的抗干扰能力
由表7结果可知,与未校正I1的测试条相比,使用本发明所述测量方法校正I1的测试条对抗坏血酸的抗干扰能力显著提高。这表明在以还原电流为检测信号的血脂电化学测试条中,使用本发明所述测量方法亦可有效减小抗坏血酸的负干扰。表明本发明所述测量方法也适用于其它分析物的检测。
Claims (5)
1.一种电化学测量方法,分别测量目标分析物所产生的电流信号I1和还原性干扰物产生的干扰电流信号I2,由目标分析物所产生的电流信号I1和还原性干扰物产生的干扰电流信号I2计算出相应的校正系数k,用校正系数k校正目标分析物所产生的电流信号,得到与目标分析物真实浓度相对应的真实校正电流值Ic;其中Ic=I1/k。
2.根据权利要求1所述电化学测量方法,所述校正系数k为以I1和I2为自变量的函数。
3.根据权利要求1所述电化学测量方法,以氧化电流为检测信号,所述校正系数k取值范围为1≤k≤1.5。
4.根据权利要求1所述电化学测量方法,以还原电流为检测信号,所述校正系数k取值范围为0.5≤k≤1。
5.根据权利要求1所述电化学测量方法,所述校正系数k采用如下步骤获得:
(1)以正常人的血液为基质,配置含不同浓度目标分析物的血液测试样本,所配浓度记为L1,L2,L3,L4,L5,L6……,测量不同浓度目标分析物产生的电流信号I1和干扰物电流信号I2,获得不同浓度的目标分子所产生的真实校正电流值分别记为Ic1,Ic2,Ic3,Ic4,Ic5,Ic6……;
(2)以正常人的血液为基质,按步骤(1)所配样本浓度,配置含不同浓度目标分析物的血液测试样本,同样记为L1,L2,L3,L4,L5,L6……,向不同浓度目标分析物的血液测试样本中加入一定量的还原性干扰物,还原性干扰物浓度记为M1,测量不同浓度目标分析物产生的电流信号相应的记为I1-11,I1-21,I1-31,I1-41,I1-51,I1-61……,测量干扰物电流信号记为I2-1,则与一组(I1-11,I2-1)相对应的校正系数k1-11=I1-11/Ic1,与(I1-21,I2-1)相对应的校正系数k1-21=I1-21/Ic2,以此类推可计算得k1-31,k1-41,k1-51,k1-61……;
(3)重复步骤(2),依次改变干扰物浓度为M2,M3,M4,M5,M6……,通过测量I1和I2,则可获得不同干扰物浓度相对应的k值,分析得到k=f(I1,I2)所代表的具体函数关系式。
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