CN104530197B - 沙柳中提取的保水肽及其在化妆品中的应用 - Google Patents
沙柳中提取的保水肽及其在化妆品中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明从沙柳中提取的多肽具有较好的保水作用，同时具有较好的清除自由基的作用，可以用于制备化妆品，用于皮肤的保湿以及防止衰老，具有较好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体涉及保水肽及其用于化妆品中的用途。
背景技术
现代生活及工作环境引发肌肤提前老化，空调、环境污染、季节转换带来的温度变化与压力，以及皮肤衰老、代谢减缓等因素都会造成肌肤水分流失，令肌肤粗糙、黯哑、形成干纹、引发诸多肌肤问题。 缺水引起的肌肤问题绝不是干燥那么简单，几乎每种肌肤问题都与水分补充和保持有关。水分是美丽肌肤的第一要素，美白、防晒、控油等是在补水保湿的基础上完成。任何季节、年龄、肤质、肌肤问题，都可在水的抚慰和滋润中实现完美。在现在生活中，保湿化妆品的出现就是为了解决以上问题应运而生的产品，比如化妆水作为基础护理三步曲中“承前启后”的关键角色是日常美容护肤必不可少的用品。它可用来清洁洁面产品在肌肤的残留能够调节肌肤的酸碱平衡，使皮肤处于吸收营养的最佳状态，迅速为肌肤补充水分和营养并且扫除油光收敛毛孔。因此，如能开发安全环保、功能完善的化妆水以及其他的保湿化妆品将具有广阔的市场前景。
沙柳属灌木或小乔木，较耐旱，喜水湿；抗风沙，耐一定盐碱，耐严寒和酷热；喜适度沙压，越压越旺，但不耐风蚀；繁殖容易，萌蘖力强。沙柳形如火炬，具有干旱旱不死、牛羊啃不死、刀斧砍不死、沙土埋不死、水涝淹不死的“五不死”特性。沙柳属于速生，多年生灌木，成活率高，适应性强，抗旱耐贫瘠。其中在如此干旱的环境下生存体内必然存在较好的保湿活性多肽从而维持体内的水分平衡。因此，申请人对该植物的小分子多肽进行了研究，意外的发现了多种小分子多肽就有较好的保水活性。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是，提供一种提高肌肤水嫩润泽感、对肌肤进行深层保湿、营养肌肤、抗衰老的保湿肽以及由该肽制备得到的化妆品。为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种抗衰老和保湿多肽，其氨基酸序列为：SEQ ID NO：1-12所示。
所述的序列具体为：
SL01：SEQ ID NO:1:GGRFPSEQCQSRAA；
SL09：SEQ ID NO:2:SSRFPSEQCASTPPR；
SL13：SEQ ID NO:3:GSRFDSEDCAQSRSRG；
SL17：SEQ ID NO:4:ARRFVMFRCQSRAATI；
SL22：SEQ ID NO:5:SGRCPQELSQSRAS；
SL26：SEQ ID NO:6:RGRTPSELVQSRASMV；
SL32：SEQ ID NO:7:TGGFPTEQCMSRSAGL；
SL35：SEQ ID NO:8:CRVGRFPVEVCPSRAI；
SL37：SEQ ID NO:9:DSWGCFPSERCSSATL；
SL41：SEQ ID NO:10:YGRFPTEACRSRAQT；
SL43：SEQ ID NO:11:PSGSFTSENTQSRDA；
SL46：SEQ ID NO:12:KTGRDSPEQCNSRAES；
SL48：SEQ ID NO:13：LPLP。
本发明提供了所述多肽的提取方法如下。取沙柳叶片经PBS洗涤后粉碎 ,采用有机酸、醇提取 ,丙酮沉淀. 使用胰蛋白酶和碱性蛋白酶进行酶解1h，高温灭酶20min，沉淀物用相对分子质量为 8000 的透析袋透析 72 h 后冷冻干燥 ,得沙柳多肽粗提物。 按常规方法将 Sep hadex G250 装柱 ,将多肽粗提物溶于缓冲液中配成质量浓度 10 mg / mL的溶液 ,进行凝胶柱分离 ,得到二十个洗脱峰 ,分别收集冻干。
本发明通过一些的实验证实了13个多肽具有较好的保水活性，能够广泛用于化妆品领域。
本发明通过实验，证实了所述的多肽具有较好的祛斑效果，同样可以广泛用于化妆品领域，特别哈是美白产品。
针对本发明的多肽，在其中的一个或多个位点进行的突变也在本发明的保护范围内，其效果也是可以预期的。
具体实施方式
实施例1 多肽的制备
取沙柳叶片经PBS洗涤后粉碎 ,采用有机酸、醇提取 ,丙酮沉淀. 使用胰蛋白酶和碱性蛋白酶进行酶解1h，高温灭酶20min，沉淀物用相对分子质量为 8000 的透析袋透析72 h 后冷冻干燥 ,得沙柳多肽粗提物。 按常规方法将 Sep hadex G250 装柱 ,将多肽粗提物溶于缓冲液中配成质量浓度 10 mg / mL 的溶液 ,进行凝胶柱分离 ,得到48个洗脱峰 ,分别收集冻干。将样品，通过测序，获得相应的氨基酸序列。
实施例2 多肽保湿性试验
取48个样品肽，通过质谱获得其相应的氨基酸序列。通过化学合成的方法，批量合成得到人工合成肽。将48个多肽进行保湿实验，将多肽分别按照本领域常规的方法制备成为面膜，基质为羧甲基纤维、海藻酸钠、聚乙二醇。为了更好的模拟皮肤的实际情况， 实验中选用在玻璃板上面贴一层医用透气胶带， 胶带为 0. 9 cm ×5. 5 cm， 样品取 0. 2g， 相当于 40 mg /cm2。实验中选用在干燥器中放置 CaCl2 饱和溶液来控制湿度为31%，温度保持在25 ℃， 将面膜均匀涂敷在医用透气胶带表面， 放进干燥器一定时间后称量，计算保湿率以两种市售面膜作为对照， 分别命名为对照面膜 1 和对照面膜2保湿率 =Mt/M0× 100%。式中Mt为放置t h 后样品的质量， g; M0 为放置前样品的质量， g。设置t的时间为12h，选取试验结果较好的一些肽得到的试验结果如下：
| 样本 | 保湿率 |
| 没有加肽的基本面膜 | 60% |
| 含有SL01的肽的面膜 | 95% |
| 含有SL09的肽的面膜 | 96% |
| 含有SL13的肽的面膜 | 94% |
| 含有SL17的肽的面膜 | 94% |
| 含有SL22的肽的面膜 | 92% |
| 含有S26的肽的面膜 | 93% |
| 含有SL32的肽的面膜 | 94% |
| 含有SL35的肽的面膜 | 91% |
| 含有SL37的肽的面膜 | 90% |
| 含有SL41的肽的面膜 | 92% |
| 含有SL43的肽的面膜 | 91% |
| 含有SL46的肽的面膜 | 93% |
| 含有SL48的肽的面膜 | 64% |
| 对照面膜1 | 73% |
| 对照面膜2 | 76% |
实施例3 多肽对超氧阴离子的清除作用:
利用邻苯三酚自氧化体系测定多肽对超氧阴离子的清除作用取50 mmol /L 的Tris － HCl 缓冲液3 mL( pH = 8. 2， 含有2 mmol /L 的Na2 EDTA) ， 加入1 mL 待检样品， 于25 ℃保温 10 min， 然后加入 25 ℃预温的5 mmol /L的邻苯三酚0. 3 mL( 预先用10 mmol /L 的盐酸配制) ， 精确反应 4 min， 用 0. 5 mL 浓盐酸终止反应， 测定其在320 nm 下的吸光度 以10 mmol /L 的盐酸作为空白调零， 按如下公式计算清除率:
清除率 =A对照 － ( A样品 － A样品空白)/A对照× 100%
式中 A对照为未加待检样品的邻苯三酚反应体系的吸光度; A样品为加入待检样品后的邻苯三酚反应体系的吸光度; A样品空白为加入待检样品后的无邻苯三酚的反应体系的吸光度。结果见下表。
实施例4 多肽对羟自由基的清除作用:
在一系列 50 mL 具塞试管中加入 0. 8 mL 的HAc- NaAc 缓冲溶液( pH = 5.0) ， 1. 0 mL 的孔雀绿溶液( 1 × 10-4mol /L) ， 2. 2 mL 的 EDTA-Fe2 +溶液( 2 ×10-2mol /L) ， 1. 4 mL 的 H2 O2 溶液 ( 体积分数为0. 3%) ， 用去离子水稀释到10 mL并摇匀， 放置45 min后， 在617 nm 下测定其吸光度Ab， 同时测定不加H2 O2时体系在617nm 下的吸光度 A0， 则羟自由基的产生量 A = A0 － Ab ，A 越大， 表示生成的羟自由基越多上述体系中加入 H2 O2 之前放入1 mL 待测样品，测定其吸光度 As， 则羟自由基清除率可按下式计算:
清除率 =( As－ As0 ) － Ab/（A0 － Ab）× 100%
式中As0为加入待测样品后未加H2 O2 的反应体系的吸光度。结果如下表所示：
| 样本 | 超氧阴离子的清除率 | 羟自由基的清除率 |
| 含有SL01的肽 | 50% | 72% |
| 含有SL09的肽 | 53% | 76% |
| 含有SL13的肽 | 54% | 72% |
| 含有SL17的肽 | 55% | 74% |
| 含有SL22的肽 | 53% | 72% |
| 含有SL26的肽 | 56% | 69% |
| 含有SL32的肽 | 52% | 78% |
| 含有SL35的肽 | 50% | 75% |
| 含有SL37的肽 | 52% | 73% |
| 含有SL41的肽 | 50% | 77% |
| 含有SL43的肽 | 53% | 76% |
| 含有SL46的肽 | 52% | 74% |
| 含有SL48的肽 | 10% | 21% |
| 空白对照（超纯水） | 2% | 1% |
实施例5 多肽的稳定性:
将多肽以及实施例2得到的面膜进行耐热、耐寒和离心实验， 结果表明该面膜体系未出现分层现象， 具有良好的稳定性。多肽经过检测同样也具有较好的稳定性，在42摄氏度的条件下放置3天，经过电泳检测，没有明显的损失。
序列表
〈110〉马淑娟
〈120〉沙柳中提取的保水肽及其在化妆品中的应用
〈160〉13
〈210〉1
〈211〉14
〈212〉PRT
〈400〉SL01
GGRFPSEQCQSRAA；
〈210〉2
〈211〉15
〈212〉PRT
〈400〉SL09
SSRFPSEQCASTPPR；
〈210〉3
〈211〉16
〈212〉PRT
〈400〉SL13
GSRFDSEDCAQSRSRG；
〈210〉4
〈211〉16
〈212〉PRT
〈400〉SL17
ARRFVMFRCQSRAATI；
〈210〉5
〈211〉14
〈212〉PRT
〈400〉SL22
SGRCPQELSQSRAS；
〈210〉6
〈211〉16
〈212〉PRT
〈400〉SL26
RGRTPSELVQSRASMV；
〈210〉7
〈211〉16
〈212〉PRT
〈400〉SL32
TGGFPTEQCMSRSAGL；
〈210〉8
〈211〉16
〈212〉PRT
〈400〉SL35
CRVGRFPVEVCPSRAI；
〈210〉9
〈211〉16
〈212〉PRT
〈400〉SL37
DSWGCFPSERCSSATL；
〈210〉10
〈211〉15
〈212〉PRT
〈400〉SL41
YGRFPTEACRSRAQT；
〈210〉11
〈211〉15
〈212〉PRT
〈400〉SL43
PSGSFTSENTQSRDA；
〈210〉12
〈211〉16
〈212〉PRT
〈400〉SL46
KTGRDSPEQCNSRAES；
〈210〉13
〈211〉4
〈212〉PRT
〈400〉SL48
LPLP；
Claims (4)
1.一种生物活性多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种化妆品，其包含权利要求1所述的多肽。
3.一种面膜，其包含权利要求1所述的多肽。
4.权利要求1所述的肽在制备保湿类化妆品中的应用。
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